大鼠肝细胞溶酶体膜H~+-ATP酶的组织细胞化学研究

应用对硝基苯酚磷酸(p-NPP)做底物和柠檬酸铅做捕捉剂的孵育液,对大鼠肝细胞溶酶体膜H+-ATP酶进行了组织细胞化学的研究.结果表明,用标准孵育液孵育肝组织切片时,酶的活性反应产物主要见于肝细胞内的溶酶体膜和基质中;当加入酸性磷酸酶的抑制剂氟化钠(NaF)时,溶酶体基质中的反应被抑制,而溶酶体膜上的反应仍保留;当加入N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)时,溶酶体膜上的反应产物被抑制,而基质内的反应仍存在;当同时加入NaF和NEM,或标准孵育液中不加底物p-NPP时,溶酶体膜和基质内的反应均被抑制.阳性结果提示溶酶体膜上p-NPP酶的活性可代表H+-ATP酶的细胞化学定位;溶酶体膜上H+-ATP酶是由Mg~(2+),K+激活,被NEM抑制的,不同于线粒体F_0F_1-ATP酶的一种H+-ATP酶.     

铈在溶酶体膜H~+-ATP酶电镜细胞化学中的应用

应用铈作捕捉剂的电镜细胞化学方法(简称铈法),对大鼠肝细胞溶酶体膜H~-ATP酶的活性进行了定位研究。用铈法的标准孵育液孵育肝组织切片时,酶的活性反应主要见于肝细胞的溶酶体膜和基质中;当加入NaF时,溶酶体基质内的反应被抑制;当加入N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)时,溶酶体膜上的反应被抑制;当同时加入NaF和NEM或不加底物时,溶酶体膜和基质内的反应均被抑制。     

5-碘-N(2-羟基乙基)水杨醛亚胺合铜(Ⅱ)的研究

目的 探讨5—碘—N(2—羟基乙基)水杨醛亚胺合铜(Ⅱ)类化合物的合成。方法 利用自制的5—碘水杨醛和乙醇胺反应生成5—碘—N(2—羟基乙基)水杨醛亚胺席夫碱配体与，各种铜盐反应生成四种不同的配合物。结果 合成了5—碘—N(2—羟基乙基)水杨醛亚胺合铜(Ⅱ)类化合物，并通过电子光谱、红外光谱及元素分析确定化合物的结构和组成。结论 某些席夫碱的过渡金属鳌合物具有良好的抗癌抑茵活性。我们设计合成了5—碘—N(2—羟基乙基)水杨醛亚胺合铜(Ⅱ)类化合物，以期得到良好效果。     

一种红细胞膜表面巯基的测定方法

细胞膜蛋白的巯基(包括内、外表面)有许多种生理功能,如受体反应,离子通道,酶反应中心等,尤其是细胞膜外表面的巯基更为活跃。曾有人用有机汞盐(PCMB),二硫二硝基苯甲酸(DTNB),N—乙基马来酰亚胺(NEM)等测定细胞膜巯基总量,由于这些药物易使细胞破损;或穿透细胞膜进入细胞     

三偏磷酸酶(TMPase)—电镜细胞化学的溶酶体标识酶

作为溶酶体标识酶的非特异性酸性磷酸酶(E.C.3.1.3.2)(ACPase,acid phosphata-se),以β-甘油磷酸(β-GP,β-glycero-phosphate)或磷酸—胞苷(CMP,cytidine5’-monophosphate)作反应底物,用Gomori方法已在细胞化学的领域内得到了广泛的证明与研究。三偏磷酸酶(E.C.3.6.1.2)(TMP-ase,Trimetaphosphatas)是近年来电镜细胞化学研究中颇受重视的一种无机磷酸酶,它以无机三偏磷酸作底物,已在许多组织细胞中显示出是一种可靠的溶酶体标识酶。其电镜细     

用国产透明纸(赛璐玢)做酶组织化学的半透膜技术

1967年,在酶组织化学中,McMillan最早引用半透膜技术用以显示乳酸脱氢酶,而后为MeijerLojda等改进用以显示水解酶。Meijer证实,用新鲜肝组织切片在孵育液内孵育,在孵育后一分钟内,约有10～70％的酸性磷酸酶漏失于孵育液内。这种漏失的百分率因组织而异。该作者还证明这种漏失不因用明胶、葡聚糖或PVP(聚乙烯吡咯烷酮)而加以阻止;而且一些大分子物质对某些酶活性还有抑制作用。为了避免酶的漏失,他们建立了半透膜技术,其特点为:①使用新鲜组织的恒冷箱切片,不需固定,以避免因固定所造成的酶及酶活性的丢失;②使用半透膜夹于凝胶状孵育基质和组织切片之间。对于半透膜的要求是:只允许分子量小的底物和偶联剂通过,而分子量较大的细胞内的酶分子(包括可溶性酶分子)却不会经半透膜扩散到孵育基质内,以防在孵育过程中酶的漏失。此技术的最大优点是,可以显示细胞内全部酶活性,因此,在酶组织化学中被广泛应用,但国内尚未见报道。     

溶酶体在医学上的意义

近年来对溶酶体功能的研究已远远超过细胞生物学的范围,不仅实验生物学、实验医学,甚至临床医学中的许多问题均与溶酶体的功能密切相关。 1 溶酶体的概念溶酶体是由单层单位膜包着的含有高浓度的各种酸性水解酶,并具有潜在酶反应的一组细胞器的总称。1955年,Duve等人生化分析大鼠肝细胞匀浆的梯度超速离心后的各组分,首先发现溶酶体的存在。他们注意到除了位于微粒体的酶(如葡萄糖—6—磷酸酶)及在线粒体中发现的酶(如细胞色素氧化酶)以外,还有第三类酶存在。这类酶均为水解酶。“为了实用起见,建议把这些颗粒称     

亚硒酸钠对荷Lewis肺癌小鼠癌组织和肝组织溶酶体的作用研究

用差速离心方法分离提取荷Lewis肺癌小鼠癌组织和肝组织富含溶酶体部分,并以溶酶体标志酶酸性磷酸酶(ACP)的游离酶和总酶活性比值作为观察溶酶体膜稳定性变化的指标,观察了亚硒酸钠对两种组织ACP酶活性和膜稳定性的影响。发现硒对癌组织和肝组织ACP活性的异常升高有抑制作用、稳定溶酶体膜,在癌瘤增殖前期作用明显(P<0.05)。提示这种拮抗效应与硒直接和间接的抗脂质过氧化有关。     

大鼠肝微粒体谷胱甘肽S-转移酶简易制备法对活性影响

目的 :研究大鼠肝微粒体简易制备法对微粒体谷胱甘肽巯基转移酶 (m GST)活性的影响。方法 :用聚乙二醇 6 0 0 0 (PEG 6 0 0 0 )法和钙沉淀法制备大鼠肝微粒体 ,并与巯基烷化剂 N-乙基顺丁烯二酰亚胺 (NEM)共孵育 ,分别测定不同制备法所获 m GST活性。结果 :PEG 6 0 0 0法和钙沉淀法制备的肝微粒体 ,其 m GST活性分别为0 .15 ,0 .0 8μmol· min- 1 · ml- 1 ;NEM可使其活性分别显著增加至 1.797和 2 .375倍 (P<0 .0 0 1) ;洗涤纯化后 ,分别增加至 NEM活化前的 2 .35 0和 4 .12 7倍 (P<0 .0 0 1) ;其中 NEM与微粒体共孵育最适浓度为 5～ 10 mmol/ L ,最佳激活时间为 1～ 2 min。结论 :经 PEG 6 0 0 0法和钙沉淀法高速离心制备的微粒体 ,分离制备时间短 ,方法简单易行 ;钙沉淀法制备的 m GST纯度较高     

胃粘液腺癌分泌细胞器电镜酶细胞化学研究

利用酶细胞化学方法对胃粘液腺癌细胞葡萄糖-6-磷酸酶(G6-Pase)焦磷酸硫胺素酶(TPPase)和酸性磷酸酶(AcP)进行了光、电镜 水平的定位观察。作者发现胃粘液腺癌G6Pase、TPPase反应较弱,AcP反应多明显增强;电镜下呈弱G6Pase反应的内质网常被挤至细胞周边部或夹于粘液颗粒之间,呈“点彩”状;TPPase反应除见于高尔基体扁平膜囊外,还见于一些未成熟分泌颗粒内,提示分泌颗粒的加工和分泌加速;癌细胞溶酶体数量增加,泌噬作用活跃,AcP反应明显.作者认为胃粘液腺癌分泌功能异常活跃与其畸形分化过程有关;溶酶体的大量增加为其易于转移提供了必要的形态学基础。     

吸烟对家兔巨噬细胞溶酶体酸性磷酸酶的影响

本文通过体内外实验观察了吸烟对家兔肺巨噬细胞溶酶体酸性磷酸酶的影响。结果表明:体外香烟烟雾凝聚物具有直接抑制肺巨噬细胞溶酶体酸性磷酸酶活性的作用(1mg组P<0.01),而慢性香烟烟雾吸入会导致肺巨噬细胞溶酶体酸性磷酸酶活性的升高(P<0.01)。溶酶体酸性磷酸酶释放的明显增加是引起肺损伤导致肺气肿的重要环节。     

Effect of pH, temperature and media on acid and alkaline phosphatase activity in "clinical" and "nonclinical" isolates of Bordetella bronchiseptica

Twenty-two isolates of Bordetella bronchiseptica were studied to determine the effects of pH, incubation temperature and type of media on peak acid and alkaline phosphatase activity. The pH optimum for alkaline phosphatase activity was 9.0 for all of the isolates tested. The pH optimum for acid phosphatase activity was 5.8 for 67% of the isolates and 4.8 for 33%. All of the isolates showed peak phosphatase activity at 37 degrees C. No preference was shown in 35% of the isolates between the types of media tested; however, 40% preferred tryptose broth, 20% preferred nutrient broth and 5% preferred brain-heart infusion broth. No relationship was shown between phosphatase activity and the mouse lethality of the isolates.     

氟化物对变形链球菌生长和产酸影响的体外实验研究

目的:通过研究氟化物浓度对致龋菌生长和代谢的影响,以进一步阐明氟化物的防龋机制。方法:在含有不同浓度(0～1.0%)氟化钠的培养基内培养变形链球菌标准菌株,以分光光度法检测培养前后培养基光密度值(OD值),以反映变形链球菌的生长情况;以复合玻璃pH电极法检测培养前后培养基pH的变化(△pH),以反映变形链球菌的产酸代谢情况。结果:与对照组相比,各实验组变形链球菌的生长受到明显抑制,且随着培养基内氟化钠浓度的增加,变形链球菌的数量呈浓度依赖性减少;同时随着培养基内氟化钠浓度的增加,各组培养基的pH变化也逐渐减小,当氟化钠的浓度达0.5%～1.0%时,培养前、后培养基的pH几乎未发生明显的变化。各组培养基的OD值与△pH间无明显相关性。结论:氟化钠可显著抑制致龋菌的生长及产酸代谢活动,但氟化钠可能主要通过干扰牙菌斑内致龋菌的产酸代谢活动来发挥其局部防龋作用,而其对致龋菌生长的抑制或杀灭仅起次要作用。     

Ca~(2 )与老龄化对人红细胞膜钙依赖中性蛋白酶活性的影响

观察人红细胞膜钙依赖中性蛋白酶（ｃａｌｐａｉｎ）的活性及其随年龄增长所引起的改变。用分光光度法测定酶促反应后酸溶性水解产物，比较了经含 Ｃａ２＋或 ＥＧＴＡ缓冲液溶血的红细胞膜的 ｃａｌｐａｉｎ的酶活力。结果：在有 Ｃａ２＋及ｐＨ中性条件下溶血的红细胞膜含有较多的 ｃａｌｐａｉｎ。这种细胞膜结合的酶不仅可以分解细胞膜蛋白，而且可以分解变性酪蛋白。用含ＥＧＴＡ缓冲液溶血的红细胞膜没有ｃａｌｐａｉｎ活性。老年人红细胞膜的酶活力比青年人红细胞膜的酶活力高 １．６３倍。结论： Ｃａ２＋可增强人红细胞膜， ｃａｌｐａｉｎ与红细胞的结合，其活力随年龄而增强。     

阴离子交换蛋白阻滞剂DIDS对人视网膜色素上皮细胞非特异性吞噬过程的影响

目的：探讨阴离子交换蛋白在人视网膜色素上皮（RPE）细胞非特异性吞噬过程中的作用。方法：体外培养人RPE细胞，以荧光包被的乳胶株作为吞噬标记物，建立RPE细胞吞噬模型。使用不同浓度阴离子交换蛋白阻滞剂DIDS（1、10、100、200、300、500和1 000 μmol•L^-1）预处理RPE细胞，37℃孵育6 h，利用流式细胞术定量检测RPE细胞对乳胶珠的吞噬指数。结果：经6 ｈ孵育，未加DIDS的对照组RPE细胞对乳胶株的吞噬指数为(35.1±1.6)%，加入1 μmol•L^-1 DIDS的RPE细胞吞噬指数为(34.1±2.1)%（P>0.05），加入10μmol•L^-1 DIDS的RPE细胞吞噬指数为(28.7±1.9)%，10 μmol•L^-1的DIDS显著地抑制了RPE细胞对乳胶株的吞噬作用（P<0.05），并且随着DIDS浓度的增加（100、200、300、500及1 000 μmol•L^-1），RPE细胞吞噬指数逐渐降低［吞噬指数分别为(23.0±1.2)%、(17.0±1.5)%、(12.0±1.6)%、(7.0±2.2%)及(5.0±2.5)%］，与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论：抑制阴离子交换蛋白的活性将导致人RPE细胞非特异性吞噬功能的障碍，阴离子交换蛋白可能参与人RPE细胞的非特异性吞噬过程。     

体外一氧化氮对马尔尼菲青霉菌生长的影响

马尔尼菲青霉菌现已被确认国是人类最重要的致命性真菌之一，能引真情的播散性系统性感染，机体细胞免疫是重要的防御机制，一氧化氮（ＮＯ）被认为是细胞免疫中的效应剂，在体外酸性介质中（ｐＨ４，ｐＨ５）由亚硝酸钠（ＮａＮＯ２）产生的ＮＯ大大抑制了马尔尼菲青霉菌的生长。相反，在中性介质中（ｐＨ７．４）没有ＮＯ产生，未发一上述抑制现象。     

产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究

目的：大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株(E．aerogenes EAM-Z1)，利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体5—氟尿苷(FUR)。方法：补料分批培养产气肠杆菌，发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2，摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶，通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果：葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要，又能维持培养液的pH，培养24h发酵液菌体温重为19．1g／L，以尿苷(UR)和5—氟尿嘧啶(FU)为底物，产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为56．7％；摇瓶培养基中加入3．0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶，静息细胞的酶转化率提高了10．2％；酶反应间隙流加底物UR浓度达30mmol/L时，产物FUR的浓度最高，进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论：通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌，其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。