急性髓系白血病细胞总RNA冲击的树突细胞诱导抗自身白血病的T细胞免疫

目的探讨白血病细胞RNA冲击的完全缓解期的急性髓系白血病(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)衍生的树突细胞(mRNA-DC)体外刺激自体T细胞抗白血病免疫的可行性及有效性。方法应用联合细胞因子(GM-CSF、IL-4)培养法从AML-CR患者贴壁BMMNC诱导DC,在诱导的第5天用脂质体DOTAP介导法以自体白血病细胞的总RNA冲击DC,然后以含10 ng/m l的TNF-α的培养基继续培养24 h促进其成熟,培养7 d后收获细胞,作为mRNA-DC。以流式细胞术检测DC特征性表型的表达;以MTT法测定mRNA-DC对自体T细胞的促增殖活性;将mRNA-DC与T细胞按1∶3混合,共培养7 d,收获活化的T细胞,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定分泌γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞数;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定细胞毒活性。结果14例AML-CR患者BMMNC均可在体外分化为具有特征性形态和表型的成熟DC;当刺激细胞与反应细胞比例为1∶16时,mRNA-DC可刺激自体T细胞产生明显的增殖活性[(36.84±5.68)%],与未冲击DC组[(12.20±3.16)%]比较差异具有统计学意义(P<0.05,n=9);ELISPOT分析显示分泌IFN-γ的mRNA反应性的T细胞得到明显扩增;体外活化的T细胞在效靶比为20∶1时,对自体白血病细胞显示明显的杀伤活性[(45.46±6.34)%],与未冲击的DC组[(12.32±1.32)%]及单纯IL-2组[(13.26±2.28)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05,n=5)。结论应用白血病细胞RNA冲击的DC疫苗免疫可以作为一种可行、有效的防治微量残留白血病的方法。     

急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究

为了研究急性髓细胞白血病(AML)细胞诱导成树突状细胞(DC)的方法及其DC的功能，分离25例AML患者骨髓或外周血单个核细胞，在含有细胞因子rhGM—CSF，rhIL-4，rhTNF—α的IMDM完全培养基中培养8—12天，进行细胞形态学、表型、遗传学及功能测定。结果表明：20／25例自诱导培养的第3天起，在倒置显微镜下可观察到部分细胞体积增大，形态由圆形变得不规则，可见驼峰样或细刺状胞浆突起；在第8—9天，该类细胞所占的比例达到峰值。至第12天，细胞总数及上述形态的细胞数量明显减少。诱导培养结束时收集细胞，应用流式细胞术检测11／20例诱导前后细胞表面标志的表达，结果表明诱导前细胞不表达CD1a、CD80及CD83，低表达CD86、CD54和HLA—DR；诱导后细胞CD1a、CD80、CD83、CD86、CD54及HLA—DR的表达明显上调。在同种异体混合淋巴细胞反应(Allo-MLR)中，该类细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖一对^3H-TdR的摄取能力明显高于AML细胞。FISH证实诱导生成的具有DC特征细胞的AML起源。结论：体外联合应用细胞因子可将AML细胞诱导成具有DC形态、表型及功能特征的细胞(AML—DC)。     

慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞

慢性髓系白血病（ＣＭＬ）细胞起源于ＣＭＬ多能造血干细胞,树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ,ＤＣ）是功能强大的抗原提呈细胞。ＣＭＬ细胞在ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成ＣＭＬ－ＤＣ,在自体或异体条件下均能刺激Ｔ细胞的显增殖,发挥特异性的抗ＣＭＬ细胞毒效应。     

Survivin致敏的树突状细胞疫苗激活抗白血病T细胞的实验研究

为研究survivin致敏树突状细胞（DC）疫苗对特异性T细胞的激活影响及对白血病细胞生长抑制作用，采用共聚焦显微镜及免疫沉淀-Western印迹等方法检测急性白血病细胞survivin表达；外周血单个核细胞体外培养，诱导DC细胞的形成；体外进行survivin抗原负载，制备survivin DC疫苗；survivin DC激发同基因型T细胞，用流式细胞术进一步分析T细胞表型；^3H-TdR法测定刺激指数（SI）；并用^51Cr释放法测定特异性的抗白血病CTL细胞毒活性。结果表明，检测19例初治急性白血病患survivin的表达率为84.2％；其荧光分布均在细胞胞浆内；免疫沉淀-Western印迹进一步分析证实其survivin蛋白表达；外周血单个核细胞体外诱导形成的DC细胞具有典型的DC的形态学特征；survivinDC可显刺激T细胞的活化增殖；survivin激活的T细胞中，CD4^ TH比例显较DC组高，DC激发的T细胞则以表达CD8和CD56为主；同时survivinDC显抑制白血病细胞的生长。结论：急性白血病细胞表达survivin抗原，利用survivinDC疫苗可有效地抑制白血病细胞的生长，为DC治疗白血病开辟了一条新途径。     

急性髓系白血病患者骨髓中树突状细胞亚群的定量分析

本研究探讨初诊急性髓系白血病（AML）患者骨髓中树突状细胞（dendritic cells,DC）亚群数量的变化特点。采用直接免疫荧光标记法,对30例健康志愿者和77例初诊AML患者的骨髓进行髓样Dc（myeloid DC,mDC）和浆细胞样DC（plasmacytoid DC,pDC）标记,用流式细胞仪进行检测,并用4色与传统3色两种设门方法进行分析。结果表明：与正常人骨髓中mDC与pDC的数量相比,4色设门方法分析显示,在77例初诊AML患者中：mDC数量减低、正常与增高的患者分别占74．0％（57例）、6．5％（5例）和19．5％（15例）,pDC数量减低、正常与增高的患者分别占90．9％（70例）、7．8％（6例）与1．3％（1例）;3色设门方法分析显示,mDC数量减低、正常与增高的患者分别占58．4％（45例）、19．5％（15例）和22．1％（17例）;pDC数量减低、正常与增高的患者分别占46．8％（36例）、26．0％（20例）与27．3％（21例）。两种设门方法所得结果,有统计学差异（p〈0．05）。在AML—M2、M3与M4／M5几个亚型中,4色设门方法分析显示：mDC数量减低患者所占比例分别为81．4％、100％与42．1％;pDC数量减低患者所占比例分别为88．4％、100％与89．5％。M4／M5型与M2、M3型相比,mDC数量正常或增高的患者较多,差异有统计学意义（P〈0．05）;pDC在各亚型中的数量变化无统计学差异（P〉0．05）。结论：4色设门方法比传统3色设门方法更适用于初诊AML患者骨髓中mDC与pDC数量的研究;大部分初诊AML患者表现为mDC与pDC数量的减低;M4／M5型与M2、M3型相比,mDC数量正常或增高的患者较多,而pDC在各亚型之间未见明显差别。     

慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞

慢性髓系白血病(CML)细胞起源于CML多能造血干细胞,树突状细胞(dendritic cell,DC)是功能强大的抗原提呈细胞。CML细胞在GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成CML-DC,在自体或异体条件下均能刺激T细胞的显著增殖,发挥特异性的抗CML细胞毒效应。     

慢性粒细胞白血病树突状细胞对特异性抗白血病T细胞的作用

树突状细胞（ＤＣ）是有效的抗原呈递细胞,我们从初诊慢性粒细胞白血病慢性期（ＣＭＬＣＰ）患者的外周血中培养出ＤＣ,探讨其对特异性抗白血病Ｔ细胞（ＡｎｔｉＬＢＴ）的作用。病例和方法１　病例　初诊ＣＭＬＣＰ患者１６例。均有ｔ（９;２２）染色体异常。其中男１０例,女６例。年龄３２（１８～４５）岁。分别将与其中６例患者ＨＬＡ相合的６名健康亲属作为正常对照。２　单个核细胞（ＭＮＣ）的分离制备　取肝素抗凝的外周血或骨髓２～３ｍｌ,按文献［１］分离外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）或骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮ…     

树突状细胞与慢性髓系白血病的免疫治疗

树突状细胞(DC)的生物学特性及其在免疫应答中的重要作用,使之成为当前肿瘤免疫治疗研究的热点。它是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞,可在体内外活化CD4+、CD8+T细胞,从而激发一系列的特异性免疫应答。本文就其特性及其在抗肿瘤免疫特别是抗慢性髓系白血病免疫治疗中的作用作一综述。     

急性髓细胞白血病树突状细胞的体外定向诱导及鉴定

目的 :从急性髓细胞白血病 (AML)外周血细胞诱导产生树突状细胞。方法 :将AML外周血细胞做原代培养 ,培养过程中加入GM -CSF、IL - 4和TNF -α等三种细胞因子诱导细胞向DC分化 ,并运用形态和免疫表型特点鉴定细胞。结果 :通过形态和免疫表型鉴定均证实 ,培养后多数细胞均符合DC特点 ,培养后细胞CD83和CD86共同表达的阳性率为 5 2 7% ,CD1a和HLA -DR共同表达阳性率为 17 1% ,外周血 1× 10 6个MNC经培养后可产生约 (6～ 11)× 10 4个DC。结论 :体外培养的AML患者外周血单个核细胞可诱导分化出大量DC     

细胞因子体外诱导急性髓系白血病细胞分化为树突状细胞

目的　研究细胞因子组合体外诱导急性髓系白血病 (AML)细胞分化为树突状细胞 (DC)的可行性及AML细胞衍生DC(AML DC)的生物学特性。方法　AML细胞分别在GM CSF +IL 4、GM CSF +TNF α或GM CSF +IL 4 +TNF α 3种细胞因子组合以及不含细胞因子的培养液中培养。通过细胞形态动态观察、细胞化学染色和细胞免疫表型鉴定DC。用混合淋巴细胞培养 (MLC)、FITC标记的葡聚糖摄入实验和LDH释放实验检测DC功能。RT PCR和FISH检测AML DC的特异融合基因。结果　15例AML细胞在 3种细胞因子作用下发生典型的DC形态变化。AML DC的DC相关表面分子CD1a、CD80 、CD86 、CD1 0 6 、CD83和HLA DR等较未培养或不加细胞因子培养的AML细胞表达明显上调 (P <0 0 5 )。AML DC的异基因刺激能力明显高于未培养或不加细胞因子培养的AML细胞 (P <0 .0 5 )。只有用GM CSF +IL 4培养的AML DC有吞噬能力。AML DC与未培养AML细胞致敏的疾病初发时分离的T细胞比较 ,对自体AML细胞无明显的杀伤活性。AML DC仍具有未培养AML细胞的特异融合基因。结论　体外细胞因子可诱导各型AML细胞分化为DC ,细胞因子组合不同 ,AML DC的成熟状态可有一定的差异。AML DC不但起源于AML细胞 ,而且具有正常DC的典型形态、表型和功能。AML细胞可导致自体T细胞失能     

非血缘异基因外周血造血干细胞移植治疗急性粒细胞白血病一例

目的：开展非血缘关系供者外周血造血干细胞移植（ＰＢＳＣＴ）对血液恶性肿瘤进行根治性治疗，并观察其长期造血重建和移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）及一些移植并发症。方法：选择ＨＬＡ相配非血缘关系的２６岁男性健康供者的外周血干细胞移植给１例急性粒细胞白血病第１次复发缓解后的１１岁男性患儿。预处理方案为分次全身６０Ｃｏ照射（８Ｇｙ）加环磷酰胺（１２０ｍｇ／ｋｇ）和足叶乙甙（３０ｍｇ／ｋｇ）。移植物抗宿主病预防用环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）联合氨甲喋呤（ＭＴＸ）。移植单个核细胞为８．３×１０８／ｋｇ，ＣＤ３４＋细胞为１．０７９×１０８／ｋｇ，ＣＦＵ－ＧＭ为１．０９×１０６／ｋｇ。结果：＋１０天中性粒细胞达１．３０×１０９／Ｌ，＋１８天骨髓显示造血重建，＋２３天ＤＮＡＤ１Ｓ８０显示移植物植入成功，＋１２０天受者血型由ＡＢ型转为供者血型Ａ型。＋１１天出现Ⅰ度急性ＧＶＨＤ，＋１４３天出现慢性ＧＶＨＤ，分别用甲基泼尼龙和泼尼松控制。随访３００余天，患者情况正常。结论：非血缘ＰＢＳＣＴ可以维持长期造血     

急性白血病患者第一次完全缓解期自体和异基因造血干细胞移植疗效的比较

目的　对急性白血病 (AL) (不包括急性髓系白血病M3 型 )患者第 1次完全缓解 (CR1)期自体造血干细胞移植 (auto HSCT)和异基因造血干细胞移植 (allo HSCT)的疗效进行比较。方法　AL CR1期HSCT患者 14 0例 ,其中HLA相合同胞供者allo HSCT 4 6例 ,auto HSCT 94例 ,预处理方案包括全身照射 环磷酰胺 (TBICy)、白消安 环磷酰胺 (BuCy)以及马法兰 阿糖胞苷 环磷酰胺(MAC)方案。allo HSCT组予以环孢菌素A(CsA)或联合甲氨蝶呤 (MTX)或FK5 0 6预防移植物抗宿主病 (GVHD) ,auto HSCT组自体骨髓净化 39例 ,移植后免疫治疗和 (或 )维持化疗 38例。结果　 14 0例患者移植后均获髓系造血重建 ,中位随访时间 70 0 (18～ 5 5 6 3)d ,auto HSCT组与allo HSCT组比较 :移植后 5年无白血病生存 (LFS)率 [分别为 (5 1.5± 5 .4 ) %和 (5 2 .8± 7.6 ) % ]相近 (P >0 .0 5 ) ;累积移植相关死亡率 [分别为 (14 .4± 4 .1) %和 (37.6± 7.8) % ]后者显著增高 (P <0 .0 5 ) ;累积复发率 [分别为 (5 2 .0± 5 .5 ) %和 (2 6 .3± 6 .9) % ]前者明显增加 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。auto HSCT组中自体骨髓净化和移植后治疗患者与未经相应处理患者比较 ,5年LFS率显著提高 ,分别为 (6 2 .8± 6 .8) %和 (38.4± 8.4 ) % ,P <     

老年人急性髓细胞白血病的治疗进展

老年人急性髓细胞白血病(AML)患者接受治疗后,通常耐受性差,预后不佳.对于一般状况较好、无严重脏器合并症的老年人AML患者,标准剂量诱导化疗的疗效优于小剂量化疗及支持治疗;对于接受支持治疗的患者,小剂量化疗的疗效优于强化治疗方案;而无合并症、一般状况较好的老年人AML患者,可行非清髓性预处理异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)及微移植等治疗.此外,新型药物的问世使老年人AML患者的预后得到改善.笔者拟就老年人AML的治疗进展进行综述.     

诱导化疗期定时骨髓象检查在急性髓细胞白血病预后判断中的价值

目的：分析诱导化疗期骨髓象检查结果与预后的关系。方法：对９６例原发、初治急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者，于诱导化疗第１疗程期间定时作骨髓穿刺检查。结果：化疗第７天骨髓中幼稚细胞≤０．１０的患者１个疗程完全缓解（ＣＲ）率明显高于幼稚细胞＞０．１０的患者（分别为６４．６％和４０％，Ｐ＜０．０５）。对幼稚细胞＞０．１０的患者适当延长化疗时间可提高１个疗程ＣＲ率（５０％∶２５％，但与不延长化疗组相比无统计学差异）。停化疗后ＷＢＣ降至最低时骨髓中幼稚细胞比例和预后更具显著相关性，幼稚细胞≤０．１０的患者１个疗程ＣＲ率明显高于幼稚细胞＞０．１０的病例（６６．０％∶２５．８％，Ｐ＜０．００５），而难治病例发生率显著减少（７．５％∶４５．２％，Ｐ＜０．００５）。结论：诱导化疗期定时骨髓象检查有助于估计预后、指导治疗和改善疗效。     

伴染色体t（8;21）为特征的四倍体克隆的急性白血病二例

目的：报道２例以染色体ｔ（８；２１）为特征的四倍体克隆白血病。方法：用Ｒ显带法对２例急性髓细胞白血病Ｍ２型（ＡＭＬ－Ｍ２）患者骨髓细胞染色体核型进行分析。结果：２例患者除正常细胞外，各有３个相关异常克隆：４６，ＸＹ，ｔ（８；２１）（２％）、４６，ＸＹ，ａｄｄ（７）（ｑ３１），ｔ（８；２１）（６．８％）和９２，ＸＸＹＹ，ａｄｄ（７）（ｑ３１）×２，ｔ（８；２１）×２（８０．６％），见于例１；４６，ＸＸ，ｔ（８；２１）（１３．４％）、４７，ＸＸ，＋４，ｔ（８；２１）（４６．３％）和９４，ＸＸＸＸ，＋４×２，ｔ（８；２１）×２（３９．１％），见于例２。２例化疗后均未获完全缓解且分别生存４和６个月。结论：四倍体或近四倍体克隆与Ｍ２／ｔ（８；２１）白血病有特别的联系且为其继发性改变，通常意味着预后不良。     

Cyclosporine diminishes multidrug resistance in K562/ADM cells and improves complete remission in patients with acute myeloid leukemia

This study was designed to investigate the effects of cyclosporine A (CsA) on a multidrug resistance cultured cell line, and its effect on complete remission in patients with acute myeloid leukemia (AML). A multidrug resistant K562/ADM cell line and drug-sensitive K562 cell line was used. The intracellular concentration of daunorubicin and the accumulation of Rhodamine 123 (Rh123) in the K562/ADM and K562 cells were evaluated. Clinical effects of CsA were also studied in 65 patients with AML. In the K562/ADM cells, the 50% of inhibition concentration (IC50) of daunorubicin only group was 23.0 ± 5.2 μmol/L, which was greater than in other groups co-administered with CsA (1.2 ± 4.8 μmol/L), verapamil (1.5 ± 5.4 μmol/L) or CsA + verapamil (1.4 ± 4.3 μmol/L) (all P < 0.01). The relative fluorescence intensity of Rh123 in the K562/ADM cells treated with CsA and daunorubicin was increased from 48.9% to 69.8% (P < 0.05). CsA also improved the complete remission rate in the AML patients (72.7% vs 21.9%, P < 0.01). We conclude that CsA can significantly diminish the multidrug resistance in K562/ADM cells. It also enhances the complete remission rates in patients with AML. CsA may be used as an integral part of the chemotherapy for AML.     

双次自体造血干细胞移植治疗急性髓系白血病的临床研究

目的研究双次自体外周血造血干细胞移植治疗急性髓系白血病的临床疗效。方法对该科2003年4月至2008年12月收治的42例急性髓系白血病患者行自体外周血造血干细胞移植。其中22例急性髓系白血病患者在完全缓解后行第1次自体外周血造血干细胞移植,另外20例急性髓系白血病患者在完全缓解后行第1次自体外周血造血干细胞移植后,3~4个月行第2次自体外周血造血干细胞移植。结果 42例患者均造血功能重建。其中双次自体造血干细胞移植无病生存13例(65%),复发7例(35%)。单次自体移植无病生存10例(45.5%),复发12例(54.5%)。结论双次自体移植较单次自体移植复发率低,移植相关死亡率低,无病生存率较高,可以作为没有找到合适供者或经费困难患者的较好选择。     

Optimization of the concentration of autologous serum for generation of leukemic dendritic cells from acute myeloid leukemic cells for clinical immunotherapy

Clinical application of immunotherapy for acute myeloid leukemia (AML) requires the efficient induction of dendritic cells (DCs) from AML blast cells using in vitro culture. We examined the effect of autologous serum on the properties of leukemic DCs derived from leukemic cells of AML patients by culture in AIM-V medium with GM-CSF, IL-4, TNF-alpha, and 0, 2, 5, or 10% human autologous serum. The expressions of CD80, CD83, CD86, and HLA-DR were upregulated under all culture conditions; however, 10% autologous serum induced the highest expression levels of several molecules. The capacity of leukemic DCs to stimulate allogeneic T cells increased with increasing serum concentration. Stimulation of autologous CD3(+) T cells with leukemic DCs grown in the presence of various concentrations of autologous serum resulted in induction of more IFN-gamma-secreting cells than was the case for unprimed CD3(+) T cells. Leukemic DCs cultured with 10% autologous serum induced the highest numbers of IFN-gamma-secreting cells and CD8(+)CD56(+) T cells from autologous T cells. These results suggest that culture of AML blast cells in the presence of autologous serum could be used to generate leukemic DCs for immunotherapy against AML. The highest serum concentration appeared optimal for generating the most potent leukemic DCs.