大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的　了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法　用聚合酶链反 应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K B法、break point法。结果　227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产 酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号:AY675584。6株qnr 基因阳性菌株均为产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论　qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药 性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。     

质粒介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的研究

目的研究质粒介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情况及其对喹诺酮类药物耐药的作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的qnr基因进行筛选,用实验证明qnr基因可以通过质粒介导并在细菌之间传递。结果在145株大肠埃希菌和125株肺炎克雷伯菌中共检出16株细菌携带qnr基因,其中12株为大肠埃希菌,4株肺炎克雷伯菌。16株qnr基因阳性菌株均为产超广谱内酰胺酶(ESBLs)菌株且呈多重耐药性。结论共检出16株细菌携带qnr基因,其阳性率为5.9%,大肠埃希菌阳性率高于肺炎克雷伯菌。qnr基因可以通过质粒介导,从供体菌接合转移至受体菌,且qnr在接合子中较稳定。     

质粒介导的喹诺酮耐药qnr基因的检测

目的了解我院分离的革兰阴性杆菌中qnr基因的流行情况。方法PCR法对129株大肠埃希菌、29株肺炎克雷伯菌和10株阴沟肠杆菌进行qnr基因检测。对qnr基因阳性株,Ⅰ类整合酶基因扩增检测Ⅰ类整合子;KB纸片法检测对16种抗菌药的体外抗菌活性。按NCCLS表型筛选和确证试验检测产ESBLs株;琼脂稀释法检测对环丙沙星的MIC值。结果6株细菌检出qnr基因(5株大肠埃希菌和1株阴沟肠杆菌),肺炎克雷伯菌中未检出qnr基因。6株qnr基因阳性株Ⅰ类整合酶基因扩增全为阳性,仅对亚胺培南全部敏感且对多种抗菌药耐药,有2株大肠埃希菌对环丙沙星敏感。结论湖北地区存在qnr基因的流行,qnr基因阳性株多重耐药严重,应加强监控。     

基因qnr与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药水平的相关性研究

目的 研究耐药基因qnr(qnrA,qnrB和qnrS)在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌环丙沙星敏感株与耐药株中与ESBLs阳性株和阴性株中的分布状况和比较分析.方法 从2006年全国美平耐药监测网点中收集241株非重复的大肠埃希菌(122株)和肺炎克雷伯菌(119株),用琼脂对倍稀释法测定所有菌株对药物环丙沙星、头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸的MIC值.采用PCR检测所有菌株的质粒介导喹诺酮耐药基因qnr.结果 在241椿筛选出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,环丙沙星的敏感率为36.9%,耐药率为61.4%.头孢噻肟的敏感率为45.2%,耐药率为39.0%.头孢他啶的敏感率为74.3%.耐药率为19.9%.ESBLs阳性株占56.8%.qnr共检出46株,总阳性率为19.1%(46/241).其中qnrA有2株(0.8%,2/241),qnrB有25株(10.4%,25/241),qnrS有19株(7.9%,19/241).一株从痰标本分离的肺炎克雷伯菌同时检出qnrB和qnrS.在肺炎克雷伯菌中,qnr共检出39株,阳性率为32.8%(39/119);在大肠埃希菌中,qnr共检出6株,阳性率为4.9%(6/122).在环丙沙星敏感菌株中,qnr基因的阳性率为13.5%(12/89);在环丙沙星耐药菌株中,qnr基因的阳性率为21.6%(32/148).经X2检验,qnr基因在环丙沙星敏感菌株与耐药菌株检出率的差异无统计学意义(X2=2.435,P＞0.05).在ESBLs阳性的菌株中,qnr的阳性率为23.4%(32/137);在ESBLs阴性菌株中,qnr的阳性率为12.5%(13/104).经X2检验,qnr基因在ESBLs阳性株与ESBLs阴性株中检出率的差异具有统计学意义(X2=4.590,P＜0.05).结论 质柱介导喹诺酮类耐药基因qnr在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛.qnr基因与环丙沙星的耐药水平没有相关性,而与细菌是否产ESBLs有相关性.     

对头孢吡肟敏感的疑似产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌属的分子生物学特征

目的 了解初筛试验疑似产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)但确证试验未能确认,而对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属中的ESBLs和质粒介导的AmpC酶.方法 纸片扩散法检测18株细菌对常用抗菌药物的敏感性;PCR及多重PCR法检测细菌中的ESBLs和质粒AmpC酶基因;质粒转移接合试验检测耐药质粒的可传递性;细菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR法检测供体大肠埃希菌和受体E.coli J53及其接合子的同源性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌进行同源性分析.结果 18株细菌均为2005年1月至12月期间上海华山医院临床分离的菌株,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌6株,产酸克雷伯菌1株,按常规方法对细菌进行重新鉴定和药敏试验.18株细菌经美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的ESBLs初筛试验结果均为ESBLs产生可疑菌株,但确证试验未能确认;所有菌株的头孢吡肟抑菌圈直径均在18 mm以上,显示敏感.PCR检测结果显示,11株大肠埃希菌中有9株产CIT型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为CMY-2型AmpC酶,未发现TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、SFO等广谱或ESBLs;6株肺炎克雷伯菌中有5株产DHA型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为DHA-1型AmpC酶;5株产DHA-1型AmpC酶的肺炎克雷伯菌株中,4株同时伴有广谱或ESBLs:其中2株产SHV-11型广谱酶,另2株分别产CTX-M-14型ESBLs和SHV-62型ESBLs;1株产酸克雷伯菌亦单产DHA-1型AmpC酶;质粒转移接合试验结果表明,携带耐药基因的质粒可从供体菌转移至敏感细胞中;PFGE结果显示,6株肺炎克雷伯菌的谱型各不相同,而11株大肠埃希菌可分为5种谱型,其中B型包含7株细菌,这7株细菌均产生质粒介导的CMY-2型AmpC酶,并分离自外科病房,提示可能存在克隆菌株的流行传播.结论在确证试验未能确认的疑似产ESBLs中,对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌主要产生质粒介导的AmpC酶,但尚有少数菌株同时伴有产ESBLs.对同时产生ESBLs和AmpC酶的菌株,临床微生物实验室必须报告这些菌株对头孢吡肟耐药.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌qnrB基因的检测

目的:了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌株qnrB基因的存在情况及与细菌耐药的关系。方法:收集福建省福州市三家"三甲"医院临床分离的菌株,菌株药敏试验检测采用K-B法,聚合酶链反应对42株产ESBLs肺炎克雷伯菌和44株产ESBLs大肠埃希菌进行qnrB基因筛查。结果:42株产ESBLs肺炎克雷伯菌有5株检出qnrB基因,检出率为11.90%,44株产ESBLs大肠埃希菌中有7株检出qnrB基因,检出率为15.91%。检出qnrB基因的5株肺炎克雷伯菌和7株大肠埃希菌对两种喹诺酮药物均耐药。结论:在福州地区产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中存在qnrB基因,携带qnrB基因的12株细菌对左氟沙星和环丙沙星均耐药。     

儿科临床分离株中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行

目的了解质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行情况与分布特点。方法琼脂稀释法测定抗生素MIC;PCR检测喹诺酮类药物耐药基因qnrA、qnrB和qnrS及相应ESBLs和AmpC酶基因;接合试验检测qnr基因是否可通过质粒转移;肠杆菌基因间重复一致序列-聚合酶链反应（ERIC—PCR）检测qnr阳性菌株的同源性。结果702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共检出含qnr基因菌株99株（14．1％）,其中qnrA、qnrB和qnrS的检出率分别为1．1％（8株）、4．0％（28株）和9．5％（67株）,其中3株菌同时含有qnrA和qnrB,1株含qnrB和qnrS。在99株qnr阳性菌株中,有88株（88．9％）检测到至少1种bla基因。20株qnr阳性菌株通过接合试验传递成功。相对于受体菌,接合子对环丙沙星的MIC提高了2～125倍。ERIC—PCR显示99株qnr阳性菌株有不同的DNA条带,提示其可能属于不同的克隆株。结论在702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr携带率为（14．1％）,qnrS为最流行的亚型。88．9％的qnr阳性株携带1种或1种以上bla基因。     

2007年CHINET大肠埃希菌和克雷伯菌属耐药性监测

目的 了解2007年我国不同地区12所医院临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌属的耐药性.方法 采用纸片扩散法( K-B 法)对临床分离株作药敏试验.结果 共收集CHINET 细菌耐药性监测网12所医院分离的大肠埃希菌6 527株,肺炎克雷伯菌3 051株,催产克雷伯菌206株.其中儿童分离株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别占24.0%(1 566/6 527)和 17.8% (542/3 051).大肠埃希菌和克雷伯菌属产ESBLs菌株检出率分别平均为55.0%(12.3%~72.1%)和44.9%(15.4%~ 70.6% ).各医院ESBLs检出率存在一定差异.药敏结果显示,大肠埃希菌和克雷伯菌属对亚胺培南、美罗培南和头孢哌酮-舒巴坦都保持高度敏感,耐药率均低于10%.产ESBLs株对上述3种药物的耐药率也均低于20%.50%以上的产ESBLs株对庆大霉素和环丙沙星耐药.有5所医院分离出对碳青霉烯类抗生素不敏感菌株,其中肺炎克雷伯菌21株,大肠埃希菌2株,产酸克雷伯菌1株.其中20株肺炎克雷伯菌为泛耐药株,占0.7%(20/3 051).结论 大肠埃希菌和克雷伯菌属对碳青霉烯类抗生素和头孢哌酮-舒巴坦仍保持高度敏感性,不同地区的分离株中产ESBLs菌株检出率和药敏试验结果存在差异,儿童分离株中产ESBLs检出率上升值得关注.     

大肠埃希菌和克雷伯菌属超广谱β—内酰胺酶的检测

目的：通过对临床分离的大肠埃希菌、克雷伯菌属及其它肠杆菌科超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）的检测，探讨该酶介导的耐药性在临床应用中的作用。方法：收集临床分离的耐氨苄西林的大肠埃希菌和克雷伯菌属59株，按NCCLs推荐的初筛，表型确证试验，Etest法操作。结果：有21株细菌被确认为产ESBLs，占收集菌株59株的35．6％，其中确认试验与Etest均阳性的有13株，产ESBLs的大肠埃希菌的检出率为32．4％，克雷伯菌属为50％，其它肠杆菌科细菌为30．8％，结论：肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌是产超广谱β－内酰胺的主要菌株，但是其他肠杆菌科细菌的检出率有所上升，尤其是不能忽视阴沟杆菌的检测，本地区用于超广谱β－内酰胺筛选的最佳底物是头孢噻肟（CTX）。     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.