Detection of hepatitis G virus RNA in hepatitis C patients and hepatitis C virus infected hemodialysis patients

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesforthedetectionofthehepatitisA--Evirusesareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost--transfusionandcommunity--acquiredhepatitiscasesremainsundefined[1],suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagents.Anewhumanhepatitisviruswasisolatedbytwoindependentgroups.ThenewvirusisprovisionallydesignatedashepatitisGvirus(HGV)[ZJorGBvirusC(GBV~C)[3'4),whichwasthoughttobetheagentofpartofthenon--A--Ehepatitispatients.Fro…     

重型病毒性肝炎的血清病原学研究

为了解重型病毒性肝炎（重肝）的病原分型及其与预后的关系，应用酶联免疫法对120例重肝患者进行了甲型肝炎病毒抗体（抗-HAV）IgM、HBV标志（HBVM）、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）的检测。结果显示：抗HAV－IgM阳性19例（15．8％）；HBVM阳性90例（75．0％）；抗-HCV阳性29例（24．2％），其中19例合并HBV感染，单纯抗-HCV阳性6例；三型病毒标志阴性者16例（13．3％）。乙型重肝较甲型重肝、丙型重肝病死率高。慢性重肝、急性重肝较亚急性重肝预后差。HBV复制标志阳性患者预后较差。提示HBV是本地区重肝的主要病原，且预后较差。     

自身抗体在乙型病毒性肝炎和自身免疫性肝炎中的特点分析

目的 分析自身抗体在乙型病毒性肝炎及自身免疫性肝炎中的特点.方法 将血清样本分为3组:乙型病毒性肝炎组(HBV) 306例、自身免疫性肝炎组(AIH)235例和健康对照组150例,采用间接免疫荧光法和欧蒙印迹法检测血清中抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗肝肾微粒体Ⅰ型(LKM-1)抗体和抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)抗体等肝病相关自身抗体.结果 (1) HBV组和AIH组ANA检出率分别为9.1％、80.42％,明显高于健康对照组;AIH组ANA阳性率显著高于HBV组(P＜0.05).(2)HBV组ANA滴度1:100、1:320、1:1 000阳性率分别为6.2％、2.6％、0.3％,以低滴度(1:100)为主,AIH组1:100、1:320、1:1 000滴度阳性率分别为22.98％、41.28％、14.47％,以高滴度(≥1:320)为主.(3)HBV组AMA、ASMA、抗LKM-1及抗SLA/LP抗体的阳性率分别是0.3％、0.9％、0.3％和0％,AIH组的阳性率分别为36.6％、25.1％、23％和2.55％,明显高于HBV组.(4)AIH组荧光模型以核均质型和核仁型为主;HBV患者以颗粒型为主.(5)采用1999年诊断积分系统评估,28例自身抗体阳性乙肝患者中有1例评分超过16分,达到自身免疫性肝炎确诊标准(≥16分).结论 自身免疫性肝炎患者具有高滴度的自身抗体;乙型病毒性肝炎患者血清中低滴度的自身抗体不构成自身免疫性肝炎,高滴度的自身抗体要结合临床资料排除自身免疫性肝炎.     

重型乙型肝炎的病毒复制状况

为了解重型乙型肝炎时乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的复制状况，应用酶联免疫吸附实验和聚合酶链反应测定了５６例乙型肝炎病人的ＨＢＶ复制指标。慢性重型肝炎病人的ＨＢｅＡｇ和／或ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ阳性率明显低于非重型慢性肝炎（Ｐ＜０．０１），表明ＨＢＶ复制活跃不一定是重型肝炎发生的因素之一。进一步证明ＨＢＶ本身并无致肝细胞损伤作用     

A study on hepatitis D virus infection in liver tissues of patients with hepatitis B in China

Summary 2346 liver samples from 17 areas in China were investigated for intrahepatic hepatitis D antigen (HDAg) by direct enzyme-labelled technique. HDAg was detected in 167 out of 1764 samples of HBsAg positive individuals with the detection rate of 9.47%. Hepatitis D virus (HDV) infection existed in all the examined areas without any significant difference regarding HDAg detection rate. A relationship of intrahepatic HDAg to the pathologic type of the liver disease was observed. The HDAg detection rate in chronic liver diseases and severe hepatitis was higher than in other liver diseases. It suggested that HDV infection was associated with the progression and chronicity of the liver disease. Studies on the relationship between HDV infection and HBV replication showed that HBV replication might be suppressed by HDV infection. Both HDV and HBV, however, could replicate in the same hepatocyte simultaneously.     

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒与丙型肝炎病毒感染标志物的分析

了解原发性肝癌患者乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染状况,并探讨原发性肝癌与乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的关系。用酶联免疫吸附法对８２例肝癌患者、８０例肿瘤对照组和１０３例健康对照组进行了乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染标志物的检测。     

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒交叉中和抗体的检测

[摘要]目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。 方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T 细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。 结果32份HCV抗体阳性血清中,26份血清可检测出E2抗体,阳性率81.3%。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性,E2抗体水平与HCV RNA水平负相关。HCV E2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相平行。结论HCV感染可诱导保护性体液免疫应答,丙肝患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。     

不明原因肝炎患者隐匿性乙型肝炎病毒感染检测分析

目的探讨不明原因肝炎患者隐匿性乙型肝炎病毒（HBV）感染情况及隐匿性感染的机制。方法采用巢式聚合酶链反应（PCR）检测103例不明原因肝炎患者血清HBVDNA。用电化学发光免疫技术对检测出的隐匿性HBV感染者血清HBsAg进行定量测定。结果隐匿性乙型肝炎病毒感染率为17．5％。电化学发光免疫技术检测隐匿匿性HBV感染者血清HBsAg,未检出有3例,在0．05～0．1ng／ml有8例,0．1～0．5ng／ml有6例,3．5ng／ml有1例。隐匿性HBV感染者血清HBVDNA水平为10^3～10^6copies／ml。结论隐匿性HBV感染是不明原因肝炎的病因之一。隐匿性HBV感染者血清HBsAg阴性的机制主要是HBV复制和基因表达的严重抑制,以及HBV基因突变。     

庚型肝炎病毒感染对重型肝炎发病的影响

目的 探讨庚型肝炎病毒感染在重型肝炎中的发病作用。方法 采用RT－PCR及EIA法检测重型肝炎患者血清HGVRNA及抗－HGV阳性情况，并与临床肝功、预后进行比较。结果 各临床类型重肝HGV感染率无明显差别，HGV感染病例ALT升高较低，SB、A／G较高，病死率显著低于HGV（－）病例，单纯HGV感染少见。结论 庚型肝炎病毒致病务弱，其感染不但未加重肝衰竭，反有利于肝衰竭的恢复。     

非甲-非戊型肝炎患者血清自身抗体的检测及分析

目的 探讨非甲-非戊型肝炎患者血清自身抗体的存在情况及临床意义。方法 采用ELISA法筛选28例非甲-非戊型肝炎患者，用间接免疫荧光法和蛋白质印迹法分别检测所有研究对象的抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA-M2)、抗肝肾微粒体抗体(ALKM)、抗可溶性肝抗原抗体／抗肝胰抗体(ASLA／ALP)、抗肝细胞胞浆抗原1型抗体(LCIA)。结果 11例非甲-非戊型肝炎患者检出至少一种以上自身抗体，自身抗体总检出率达39．3％。未检出抗SLA／ALP及抗LCIA。经完善相关检查并结合临床特点。最终有6例患者诊断为自身免疫性肝病(自身免疫性肝炎-Ⅰ型3例、Ⅱ型1、原发性胆汁性肝硬化2例)。结论 非甲-非戊型肝炎可存在自身免疫性肝病和其他类型肝炎病毒。在非甲-非戊型肝炎患者中常规检查抗肝抗原自身抗体有助于疾病的诊断和鉴别诊断。     

慢性丙型肝炎患者混合感染庚型肝炎病毒的临床研究

目的 研究庚型肝炎病毒（HGV）混合感染对慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疗效的影响及ＨＧＶ对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应（ＲＴ－nested PCR）检测９０例ＣＨＣ患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ，比较ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组９０例ＣＨＣ患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性１８例，阳性率２０％，ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组ＣＨＣ患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平、ＨＣＶ ＲＮＡ水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。５例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性ＣＨＣ患者接受干扰素治疗过程中，ＨＧＶ ＲＮＡ均转为阴性，停止治疗后１年，３例ＨＧＶ ＲＮＡ恢复治疗前水平。结论 混合感染ＨＧＶ对ＣＨＣ的临床、病毒复制及干扰素抗ＨＣＶ疗效无明显影响。ＨＧＶ对干扰素敏感，但停药后易复发。     

庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制

目的：研究HGV和HCV的复制和表达。方法：利用HGV全长cDNA克隆(HGVqz)及HCV1a／1b嵌合体cDNA克隆分别构建表达质粒p3．1HGV和p3.1HCV并转染张氏肝细胞,以HGVqz克隆建立HGV转基因小鼠。分别应用RT—PCR、免疫组化及Western印迹分析病毒正、负链RNA,蛋白表达和剪切。结果：在转染p3.1HCV的张氏肝细胞及HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链RNA,但在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中未能检出HGV负链RNA。Western印迹在转染p3.1HCV的张氏肝细胞中检测到针对HCV NS3蛋白、相对分子质量约70000的特异性条带,在HGV转基因小鼠某些组织中检测到2条特异性条带,相对分子质量约42000和100000,分别相当于HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而,在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中检测到针对HGV E2蛋白的特异性条带,其相对分子质量约为310000,相当于HGV整个前体蛋白。结论：HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用,HGV和HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异,故两种病毒体外培养时的嗜性细胞株并不完全一致。     

Allele polymorphisms of interleukin-lO and hepatitis B,C virus infection

Background Interleukin 10 （IL-10） is an important cytokine with anti-inflammatory, anti-immune and anti-fibrotic functions. This study aimed at evaluating the relationship between allele polymorphisms in the IL-10 promoter region and hepatitis B virus （HBV） or hepatitis C virus （HCV） infection. Methods The odds ratios （ORs） of IL-10 allele distributions in patients with HBV or HCV infection were analyzed against healthy controls. All the relevant studies in PubMed were identified, and poor qualified studies were excluded. The meta-analysis software REVMAN 4.2 was applied for investigating heterogeneity among individual studies and summarizing all the studies. The publication bias was also evaluated. Results This study demonstrated a significant association between the IL-10-592 A/C polymorphism and HBV infection in the Asian population under the overall effect size of allele A versus C. In our subgroup meta-analysis, we found a significant association of IL-10-592 A/C polymorphism to HCV infection susceptibility in Asian populations, although sensitivity analysis showed that the combined result was not associated with the worldwide population. Other IL-10 allele polymorphisms were not associated with HBV or HCV infection. Conclusion IL-10-592 A/C allele might be a risk factor for HBV or HCV in Asians but not in Europeans.     

HBeAg阳性B、C基因型乙肝患者使用拉米夫定治疗的病毒抑制效应对比分析

目的探讨拉米夫定对B、C基因型乙型肝炎（乙肝）患者治疗作用。方法观察未用、使用拉米夫定治疗的慢性乙肝患者随时间延长血清病毒标志物HBV DNA水平、HBeAg血清转换率及随拉米夫定疗程延长乙肝病毒聚合酶及转录酶区酪氨酸-蛋氨酸-门冬氨酸-门冬氨酸基序（HBV YMDD）耐药变异率等的变化,对比分析拉米夫定抗病毒治疗对B、C基因型乙肝患者的病毒抑制效应。结果（1）未用拉米夫定治疗的乙肝患者, B基因型者HBV DNA水平低于C基因型者,而自发HBeAg血清转换率高于C基因型者。（2）使用拉米夫定治疗的乙肝患者,B、C基因型者之间HBV DNA水平、HBeAg血清转换率及YMDD变异率没有明显差异。（3） B、C基因型患者均随拉米夫定疗程延长HBV DNA水平下降,HBeAg血清转换率增加,但YMDD变异率也增加。结论（1）未用拉米夫定治疗的自然状况下C基因型乙肝患者携带的乙肝病毒复制能力强于B基因型患者者且不易清除。（2）使用拉米夫定疗程相同时B、C基因型患者之间拉米夫定的病毒抑制效应及HBV YMDD耐药变异率相似。（3）C基因型HBV感染的乙肝患者及早使用拉米夫定抗病毒治疗意义更大。     

有偿献血员人类免疫缺陷病毒合并乙型、丙型肝炎病毒感染及生化指标分析

目的: 探讨有偿献血员中人类免疫缺陷病毒(HIV)合并乙型、丙型肝炎病毒(HCV、HBV)感染情况及其肝、肾功能指标的变化。方法: 选取125例曾有偿献血HIV感染者,进行HCV、HBV血清学标志物及肝、肾功能各项指标检测。结果: 125例中,合并HCV感染率为92.0%,合并HBV感染率为5.6%,合并HCV感染组AST、ALT与对照组和单纯HIV感染组差异均有统计学意义。HIV合并HCV、HBV感染组及单纯HIV感染组β₂微球蛋白与对照组差异有统计学意义,合并HCV组与单纯HIV感染组β₂微球蛋白差异有统计学意义(P < 0.01)。结论: HIV合并HCV可加重HIV患者的肝脏损害,对肾功能未造成影响,β₂微球蛋白升高可能是机体免疫过度活化的表现。     

乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白阻断乙肝病毒母婴传播的临床效果

目的：探讨乙肝免疫球蛋白（HBIG）和乙肝疫苗联合阻断乙肝病毒（HBV）母婴传播的疗效。方法：选择2014年12月~2015年12月间246例HBsAg阳性孕妇为研究对象,根据随机数字表法分为观察组及对照组,均123例。对照组仅新生儿单独接种乙肝疫苗,观察组孕妇及新生儿均联合接种乙肝疫苗和HBIG。结果：对照组及观察组新生儿中出现宫内HBV感染率分别为22.76%和9.76%,一年后对照组及观察组新生儿中HBV感染率分别16.26%和1.63%,两组间差异均存在统计学意义。对照组及观察组新生儿出生时及一年后对应HBsAb阳性率分别为8.13%、76.42%和27.64%、94.31%,两组差异存在统计学意义。结论：孕妇及新生儿乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗联合应用能够有效降低HBsAg阳性情况患者所产新生儿HBV感染率,同时能使新生儿对应的HBsAb转阳率有效提高,最终使HBV的传播阻断率提高。     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.     

不同人群丙型肝炎病毒基因分型

目的 研究不同人群丙型肝炎病毒的基因分型。方法 对141例抗HCV（ ）、60例抗HCV（-）及28例正常献血员的共132份HCV-RNA阳性血清,运用限制性片段长度多态性分析（RFLP）法作酶切分型。结果 3组人群不同基因型检出率分别是1b/Ⅱ型87.18%、100%、100%;2a/Ⅲ1.71%、0、0;两者混合型（1b/2a型）11.11%、0、0。对抗HCV（ ）血清,分为ALT正常组和异常组,2组人群不同基因型检出率分别是1b/Ⅱ型93.33%、83.33%;2a/Ⅲ型0、2.78%;两者混合型7.14%、13.89%。结论 我国不同人群中HCV感染者均以HCV1b/Ⅱ型为主,今后应以HCV1b/Ⅱ型为重点,加强HCV的诊断、治疗和疫苗研制工作。     

Expression of cytokines in mouse hepatitis B virus X gene-transfected model

The expression profile in the mouse hepatitis B virus X (HBx)-transfected model was investigated in order to lay a foundation for further study on the implication of cytokines expression in hepatitis B virus (HBV) infection.Hydrodynamic injection method via the tail vein was used to establish the animal HBx-transfected model.By using microassay,the differential expression of gene in each group was analyzed,which was further confirmed by using real-time PCR and semi-quantitative PCR.Most of chemokine genes such as Ccl2,Ccl5,Ccl9,MIG and IP-10 were up-regulated in the HBx-transfected mouse model versus the control mice,which was coincided with the microarray results.Western blotting and immunohistochemistry were applied to detect the expression of MIG and IP-10 in the liver tissues.Simultaneously,ELISA was adopted to measure the content of IFN-γ in the liver tissues.DNA microassay revealed that the expression of 611 genes changed in HBx-transfected mice as compared with that in pCMV-tag2B-transfected mice,and most of the screened chemokines were up-regulated (including MIG and IP-10).Additionally,IFN-γ protein levels were increased by 20.7% (P<0.05) in pCMV-tag2B-HBx-transfected mice as compared with the untreated mice.IFN-γ protein levels were reduced by 53.9% (P<0.05) in pCMV-tag2B-transfected mice as compared with the untreated mice,which was consistent with the up-regulation of MIG and IP-10.It was suggested HBx transfection could induce the expression of MIG and IP-10 in the liver tissues,which might play the roles in HBV-related liver immunity and cytokines-mediated antiviral effect.     

深圳市乙肝疫苗免疫失败者S基因分析

目的了解乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因的变异情况。方法采用流行病学、ELISA与分子生物学方法,筛选乙肝疫苗免疫失败者。采用聚合酶链反应（PCR）、基因克隆和测序的方法,对乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因进行分析,并与HBV参考序列s基因进行比较,分析其变异情况。结果从2564份受检者中．筛选出2例（0．78％e）HBsAg（-）／HBeAg（＋）／HBcAb（＋）乙肝疫苗免疫失败者（HBsl、HBs2）,经HBVDNA荧光定量PCR检测和HBVS基因PCR扩增,结果均为阳性,为B基因型。其S基因序列与参考序列（JX429908．1）相比,同源性为98．57％,且乙肝疫苗免疫失败者s基因在第363位和第467位分别由野生型的C变为A、G变为A,HBsAg121位和156位氨基酸C和w缺失。结论乙肝疫苗免疫失败者HBVS基因上第363位和第467位碱基存在错义突变（C→A和G→A）,改变了HBsAg的结构和抗原性。