蛋白激酶C在体外反搏保护缺血心肌中作用的实验研究

目的:探讨体外反搏保护缺血心肌的机制。方法:采用冠状动脉结扎法复制犬急性心肌缺血模型,检测缺血及外加反搏时缺血心肌肾素活性、血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)水平和血管紧张素转换酶(ACE)活性以及心肌细胞总、胞浆、胞膜蛋白激酶(PKC)活性,分析ANG Ⅱ与PKC之间的关系。结果:缺血能激活缺血区心肌肾素(0.97±0.19 vs 3.21±0.67)、ACE(13.7±5.2 vs 33.9±7.9)和ANGⅡ(20±3 vs 154±19),ECP能抑制三者(2.36±0.59,23.3±7.4,107±19)。缺血组细胞总、胞膜PKC活性明显高于假手术组(5.80±0.85 vs 7.76±0.92.3.43±0.76 vs6.59±1.06),胞浆PKC活性则明显低于假手术组(2.37±0.39 vs 1.16±0.29)。体外反搏对细胞总PKC无明显影响(7.15±0.64),使胞浆PKC恢复正常(2.67±0.52),对胞膜PKC(4.47±0.31)有一定抑制作用。ANGⅡ水平与胞膜PKC活性密切相关(r=0.873)。结论:体外反搏对缺血心肌局部肾素-血管紧张素系统有抑制作用,使PKC从胞浆移至胞膜,且ANGⅡ水平与胞膜PKC活性密切相关。提示体外反搏治疗心肌缺血时局部ANGⅡ可能通过PKC这一信号转导途径起作用。     

碘缺乏对大鼠仔鼠海马蛋白激酶C活性的影响

目的研究碘缺乏、甲状腺功能减退对仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)活性的影响。方法分别选用低碘饲料及他巴唑诱导建立低碘及甲减大鼠动物模型,在生后第30 d时收集低碘组、甲状腺功能减退组及对照组大鼠仔鼠海马组织,测定海马细胞浆、细胞膜PKC活性。结果生后30 d低碘组和甲状腺功能减退组仔鼠海马胞液PKC活性(24.876±13.732),(26.342±7.303)pmol/(min.mg)略低于对照组(36.776±15.711)pmol/(min.mg),而胞膜PKC活性(33.221±18.341),(30.178±10.443)pmol/(min.mg)稍高于对照组(20.560±6.312)pmol/(min.mg),低碘组、甲状腺功能减退组仔鼠海马胞膜PKC活性与胞浆PKC活性比值(1.187±0.432,1.414±0.394)较对照组(0.649±0.294)升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论低碘、甲状腺功能减退可引起仔鼠海马胞浆PKC向胞膜的转运,可能是低碘、甲减引起海马损害导致学习记忆功能减退的机制之一。     

蛋白激酶C在人子宫平滑肌正常细胞与肌瘤细胞中活性变化的研究

目的：通过比较人子宫平滑肌细胞（human myometrium cell,HMC)及其肌瘤细胞（human myometrium myona cell,HMMC)的细胞浆和细胞膜中蛋白激酶C（protein kinaseC,PKC)活性的异同,探讨PKC在肿瘤发生中的作用。方法：同位素放射结合实验TAKAI法。结果：基础状态下,HMC胞膜PKC比活性高于胞浆PKC比活性;HMMC胞膜PKC比活性高于胞浆PKC比活性;且HMMC的PKC总活性高HMC,乙酰胆碱（acetylcholine,Ach)可使HMC及HMMC的胞膜PKC比活性升高、胞浆PKC比活性轻度下降、总活必增加;佛波酯（TPA）则可使二者的胞膜PKC比活性升高、胞浆PKC比活性升胞浆PKC比活性下降、总活性基本不变;阿托品（atropin,Atr)使Ach升高的PKC总活性降低;1-（5-异喹啉磺酰基）-2-甲基哌嗪（H7）抑制TPA对PKC活性的诱导,结论：HMMC胞浆、胞膜和总的PKC活性均高于HMC,提示PKC在肿瘤发生中起作用;PKC对激动剂反应性不同,提示对PKC活化机制不同。     

糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C同工酶表达模式

目的 :探讨糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C(PKC)活性变化及其同工酶表达特性。方法 :采用渗透休克法获取正常及链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜血管。原位PKC催化活性分析法测定两组大鼠视网膜血管PKC活性 ,α、β、γ、δ、ε、ζ-PKC同工酶表达水平则采用Westernblot法。结果 :病程 2月时糖尿病大鼠视网膜血管PKC活性为 346± 18.1PmolesPimin-1·mgprotein-1(单位下同 )较正常对照组 131± 10 .5显著为高 (P <0 .0 5 )。α、β、δ、ζ -PKC分布于正常和糖尿病大鼠血管细胞浆、膜部 ,而γ、ε则无信号 ,α、β、ζ同工酶在糖尿病大鼠视网膜血管膜部较正常对照大鼠显著为高 (P <0 .0 5 ) ,尤以α、β为著 ,光密度 (OD)值分别为对照的 2 82 %± 32 %、340 %± 2 6 %、187%± 14 %。而糖尿病大鼠视网膜血管浆部α、β、ζ -PKC同工酶表达则较对照组显著为低 (P <0 .0 5 ) ,其OD值分别为对照的 71%± 11%、6 3%± 8%、84 %± 6 %。但δ -PKC浆部则较对照组显著增高 ,其OD值为正常对照之 2 0 8%± 13% ,但膜部δ -PKC与正常对照相比较无显著性差异。结论 :糖尿病视网膜病变 (DR)靶组织———视网膜血管中PKC显著激活 ,呈α、β、ζ同工酶从胞浆至胞膜 ,而δ -PKC则从胞膜至胞浆移位激活特征。     

逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌组织蛋白激酶C活性变化的实验研究

目的了解逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的变化.方法建立DI大鼠模型,原代培养逼尿肌稳定(DS)及DI大鼠逼尿肌细胞,分别检测这两种细胞胞浆和胞膜PKC活性.结果DS、DI组大鼠逼尿肌培养细胞胞浆PKC活性分别为(5.10±0.67 )、(5.15±0.41)pmol·min-1·mgprotein-1,两者差异无统计学意义(P＞0.05.胞膜PKC活性分别为(1.21±0.17 )、(1.92±0.24)pmol·min-1·mgprotein-1,DS大鼠较DI大鼠显著降低(P＜0.01).结论DI大鼠逼尿肌细胞胞膜PKC发生了由胞浆向胞膜的转运激活.     

蛋白激酶C、粘附分子CD44变构体在非小细胞性肺癌中定量表达及作用的研究

目的研究蛋白激酶C(PKC)、粘附分子CD44变构体CD44V3-10在非小细胞性肺癌(NSCLC)中定量表达及在肺癌发生及转移中的作用。方法根据放射免疫结合法,用[r-32P]标记的ATP掺入外源性底物测定PKC的活性;应用免疫组织化学Envision二步染色法测定肺癌组织CD44V3-10的表达。结果肺癌组织细胞胞膜及胞浆中PKC活性分别为(4.56±0.27)nmol/(mg·pr/min),(2.01±0.12)nmol/(mg·pr/min),显著高于正常肺组织(P<0.01)。低分化、未分化肺癌的PKC总活性分别为(6.72±0.14)nmol/(mg·pr·/min)、(6.98±0.17)nmol/(mg·pr/min);CD443-10定量表达IOD值分别为(368.2±25.4)、(389.8±24.8),都显著高于高分化、中分化肺癌(P<0.01);有转移肺癌PKC总活性(6.86±0.15)nmol/(mg·pr/min)、CD44V3-10定量表达IOD值(387.6±25.6)都显著高于无转移肺癌(P<0.01)。结论肺癌组织中存在PKC异常活化现象;PKC活化上调了CD44V3-10的表达,共同促进了肺癌的发生及转移。     

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的影响

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的作用及其机制.方法:用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽(methionine enkep-halin,MENK)及抗δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性,并采用放射免疫分析法测定其三磷酸肌醇(IP3)的含量.结果:MENK可升高细胞胞浆及胞膜PKA的活性,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗.MENK对PKC影响呈双向反应,0.1μmol/L MENK可以升高胞浆PKC活性,但却明显降低胞膜PKC活性;MENK浓度为10μmol/L时PKC活性的改变则与此相反;1μmol/L的MENK可明显降低胞浆及胞膜PKC活性,抗体可拮抗这种下调作用.MENK可降低细胞内IP3的含量,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗.结论:MENK在与δ阿片受体结合后,可以通过多种信号转导系统来调节细胞功能,从而产生不同的生物效应.     

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的影响

目的探讨甲硫氨酸脑啡肽对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的作用及其机制.方法用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽(methionine enkep-halin,MENK)及抗δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性,并采用放射免疫分析法测定其三磷酸肌醇(IP3)的含量.结果MENK可升高细胞胞浆及胞膜PKA的活性,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗.MENK对PKC影响呈双向反应,0.1μmol/L MENK可以升高胞浆PKC活性,但却明显降低胞膜PKC活性;MENK浓度为10μmol/L时PKC活性的改变则与此相反;1μmol/L的MENK可明显降低胞浆及胞膜PKC活性,抗体可拮抗这种下调作用.MENK可降低细胞内IP3的含量,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗.结论MENK在与δ阿片受体结合后,可以通过多种信号转导系统来调节细胞功能,从而产生不同的生物效应.     

老年冠心病患者血小板蛋白激酶C、蛋白激酶C抑制剂及红细胞蛋白激酶C活性变化的研究

目的 研究蛋白激酶C(PKC)在冠心病的发生、发展中的作用。方法 测定87例心绞痛(AP)患者、91例急性心肌梗死(AMI)患者、90名健康对照(HC)者的血小板胞膜、胞浆PKC、胞浆PKC抑制剂(PKCI)活性和红细胞胞膜、胞浆PKC活性。结果 AP组和AMI组血小板胞膜中PKC活性明显高于HC组，其中AP组与HC组比较，增高62．6％(P＜0．01)；AMI组与HC组比较，增高41．2％(P＜0．01)；AP组与AMI组比较，增高14．2％(P＜0．05)。AP组和AMI组血小板胞浆中PKC活性明显低于HC组。其中AP组与HC组比较，下降36．6％(P＜0．01)；AMI组与HC组比较，下降23．9％(P＜0．01)；AP组与AMI组比较，下降16．7％(P＜0．05)。AP组和AMI组血小板胞浆中PKCI活性明显低于HC组。其中AP组较HC组下降52．9％(P＜0．01)，AMI组较HC组下降26．0％(P＜0．01)。AP组及AMI组红细胞胞膜中PKC活性明显高于HC组。其中AP组与HC组比较，增高33．6％(P＜0．01)；AMI组与HC组比较，增高31．8％(P＜0．01)。AP组及AMI组红细胞胞浆中PKC活性明显低于HC组，AP组较HC组降低27．2％(P＜0．01)，AMI组与HC组比较，降低21．9％(P＜0．01)。结论 PKC可能参与冠心病的发病机制。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性作用的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)活性的影响,来探讨氯沙坦(Losartan)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制.方法大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病对照组(D组)和糖尿病氯沙坦治疗组(DL组).于24周后,筛洗肾小球,提取肾小球胞浆和胞膜蛋白,利用[γ-32P]ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性;同时测量血、尿肌酐和计算内生肌酐清除率(Ccr).结果D组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量分别与C组相比明显升高,氯沙坦治疗后,DL组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量均明显低于D组(P＜0.05).结论AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏病变有部分保护作用,其机制可能是部分通过下调肾脏PKC活性.     

激活蛋白激酶A信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用及机制。方法利用PKA特异性激活剂双丁酰环化腺苷酸(dbcAMP)0.5、1.0和2.0 mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24、48和72 h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测SW579细胞的生长活性;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h后PKA、成熟促进因子(message processing fac-tor,MPF)的活性;免疫印迹法(Western blotting法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h CDC25B-pS323(celldivision cycle 25B-pS323)磷酸化水平。结果 MTT法结果显示,在dbcAMP作用下,SW579细胞活力呈逐渐下降趋势,随dbcAMP剂量的增加和作用时间的延长,其作用越明显。ELISA法显示,dbcAMP使PKA活性升高而使MPF活性下降。未加dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(32.5±2.49)nmol/L和(115.5±7.53)ng/L;dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(436.33±12.85)nmol/L和(22.87±2.57)ng/L,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting显示,dbcAMP能够使CDC25B-pS323磷酸化水平上调。未加dbcAMP组和dbcAMP组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用dbcAMP激活PKA信号通路,可以抑制甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖,其抑制作用可能与PKA/CDC25B/MPF信号通路的调控有关。     

蛋白激酶C活性与电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性与X线电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系.方法PKC调节剂PMA和SP预处理HepG2细胞,分辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组;32P掺入法检测细胞的PKC活性,Varian2100直线加速器辐射细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果6Gy X线辐射诱导HepG2细胞凋亡率是21.9%,辐射后细胞PKC活性是辐射前的2.79倍.辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组的PKC活性分别为1.07、3.86、051、0.48 pmol/(min·μg),细胞凋亡率分别为21.9%、5.73%、31.70%和32.83%.结论辐射可以引起HepG2细胞凋亡,PKC活性增加/降低对辐射诱导的凋亡起抑制/促进作用,提示PKC可能参与了细胞凋亡保护机制.     

培养大鼠皮层神经元缺氧损伤与蛋白激酶活化关系的研究

目的检测神经元缺氧后膜性PKA(蛋白激酶A)和PKC(蛋白激酶C)活性变化,以及它们的特异性抑制剂对神经元凋亡率的影响.方法建立培养的神经元"缺血"模型,然后用不同浓度的特异性PKA抑制剂Rp-cAMP和特异性PKC抑制剂Calphostin C预孵育培养神经元再进行"缺血"实验,用放射酶分析法测定神经元缺氧后的膜性蛋白激酶活性,各组缺氧神经元的凋亡百分率由TUNEL荧光试剂盒测定.结果随着神经元缺氧时间的延长,神经元膜性PKA和PKC活性均增加;随着Calphostin C浓度的增加,细胞凋亡率显著增加;相反随着Rp-cAMP浓度的增加,细胞凋亡百分率显著减少.结论①PKA和PKC信号转导通路均参与了缺氧神经元损伤;②缺氧后培养神经元PKA和PKC对凋亡的调控功能相反,提示在培养的缺氧神经元中PKA和PKC信号转导属于单相控制系统,可能二者在细胞中的比例决定着缺氧神经元的存亡.     

大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞系体外增殖和细胞周期的影响

目的观察大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖及细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法分别采用台盼蓝拒染法、流式细胞术,在不同条件下测定大豆黄酮对细胞增殖抑制率及细胞周期分布的影响。蛋白激酶C(PKC)活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞的体外增殖,作用24h可使MCF-7细胞的细胞周期阻滞于G2/M期和S期。细胞内PKC活性分析表明:大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为13.27μmol/L。结论大豆黄酮可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖,其作用机制可能与细胞周期G2/M期和S期阻滞及抑制PKC的活性有关。     

甘油二酯激酶ζ在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达

目的研究肝癌组织和人肝癌细胞系中甘油二酯激酶ζ(diacylglycerol kinase,DGKζ)和蛋白激酶C(PKC)的表达及意义。方法应用免疫组织化学和细胞化学法检测DGKζ和PKC在60例肝癌与癌旁组织、10例正常肝组织和体外培养的正常人肝细胞系、癌旁肝细胞系和人肝癌细胞系的表达情况,对肝癌组织中DGKζ和PKC的表达进行相关性分析。结果 DGKζ在正常肝组织呈阴性表达,在癌旁组织肝细胞胞质和肝癌细胞的细胞膜上有阳性表达;肝癌组织中DGKζ的阳性率为86.7%(52/60),显著高于癌旁组织(40/60,χ2=6.708,P=0.010)和正常肝组织(阴性,χ2=33.704,P<0.000 1)。PKC表达在正常肝细胞的胞质和胞核、癌旁组织肝细胞的细胞膜和肝癌组织的胞质或胞膜;肝癌组织中PKC的阳性率为71.7%(43/60),与癌旁组织61.7%(37/60,χ2=1.350,P=0.245)和正常组织100.0%(10/10,χ2=3.742,P=0.104)相比无统计学差异,癌旁组织中PKC的阳性率显著低于正常肝组织(χ2=5.709,P=0.025)。肝癌组织中DGKζ与PKC的表达呈正相关(r=0.296,P=0.022);DGKζ和PKC均主要表达在三种细胞系肝细胞的胞质。结论 DGKζ主要在肝癌组织被激活,可能有抑制肝癌细胞增殖的作用。     

EFFECT OF PHORBOL ESTER ON cAMP-DEPENDENT PROTEIN KINASE ACTIVITY IN CARDIOMYOCYTES

Cardiomyocytes isolated from neonatal rats were treated with phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA) ranging from 10^-11 to 10^-7mol/L for 20 min,causing cytosol protein kinase A (PKA) activity to decrease while particulate PKA activity increase in a concentration-dependent manner.The change of PKA activity induced by PMA was abolished completely by pretreatment of polymyxin B or depletion of protein kinase C (PKC).Type Ⅱ PKA activity in particulate fraction was enhanced remarkably,while that of type I PKA was not altered when the cells were treated with 100 nmol/L PMA.The results suggested that subcellular distribution and activity of PKA in cardiomyocytes may be regulated by PKC.     

醛糖还原酶抑制剂对糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶C活性的影响

目的 研究糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶C活性的变化及醛糖还原酶抑制剂Sorbinil对它的影响。方法 采用腹腔内注射STZ法制作糖尿病大鼠模型，将大鼠分为模型组、Sorbinil组、糖适平＋洛汀新组和正常对照组。8周后处死大鼠，分离肾小球，分别测定各组肾小球细胞浆和细胞膜PKC活性。结果 糖尿病模型组细胞浆PKC活性显著降低，细胞膜PKC活性显著升高。用两组西药治疗后，洛汀新＋糖适平组无明显改善．而Sorbinil组可显著提高细胞浆PKC活性、降低细胞膜PKC活性。结论 Sorbinil可通过改善多元醇代谢而降低PKC活性，同时，亦或存在其它途径如直接对PKC的抑制作用等等。Sorbinil通过调节多元醇代谢等途径间接或直接降低PKC活性，是其治疗糖尿病肾病的作用机制之一。     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

蛋白激酶A和蛋白激酶C对大鼠背根神经节神经元P2X3受体介导的内向电流的调节作用

目的 探讨蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)对分离培养的背根神经节(DRG)神经元ATP受体P2X3功能的调节作用.方法 分离培养大鼠DRG神经元,给予外源性ATP诱导出瞬时型内向电流,通过全细胞膜片钳记录的方法观察P2X3和P2X2/3受体特异性阻断剂TNP-ATP对这一电流的影响,在此基础上观察PKA和PKC激动剂对ATP诱导的瞬时型内向电流的调节作用.结果 在分离培养的DRG神经元上,ATP诱导的瞬时型电流可以被TNP-ATP抑制,其抑制效应呈剂量依赖性,半数有效剂量(IC50)为(21.7±7.6)nmol/L.PKA激动剂forskolin(1 μmol/L)和PKC激动剂PMA(1 μmol/L)均可以快速、可逆地抑制ATP诱导的瞬时型电流.结论 在大鼠分离培养的DRG神经元,PKA和PKC可能通过磷酸化调节抑制P2X3受体的功能,从而抑制ATP诱导的瞬时型内向电流,提示蛋白激酶对P2X3受体的调节作用可能参与痛觉的形成.     

The signal transduction pathway in the proliferation of airway smooth muscle cells induced by urotensin Ⅱ

Background Human urotensin Ⅱ (UⅡ) is the most potent mammalian vasoconstrictor identified so far. Our previous study showed that UⅡ is a potent mitogen of airway smooth muscle cells (ASMC) inducing ASMC proliferation in a dose-dependent manner. The signal transduction pathway of UⅡ mitogenic effect remains to be clarified. This study was conducted to investigate the signal transduction pathway in the proliferation of ASMC induced by UⅡ. Methods In primary cultures of rat ASMCs, activities of protein kinase C (PKC), mitogen-activated protein kinase (MAPK) and calcineurin (CaN) induced by UⅡ were measured. The effect of CaN on PKC and MAPK was studied by adding cyclosporin A (CsA), a specific inhibitor of CaN. Using H7 and PD98059, inhibitors of PKC and MAPK, respectively, to study the effect of PKC and MAPK on CaN. The cytosolic free calcium concentration induced by UⅡ was measured using Fura-2/AM. Results UⅡ 10-7 mol/L stimulated ASMC PKC and MAPK activities by 44% and 24% (P&lt;0.01), respectively, after incubating for 20 minutes. It increased CaN activity in a time-dependent manner, being 1.68 times as that of control for 24 hours (P&lt;0.01). It promoted the cytosolic free calcium concentration increase of 18% (P&lt;0.01). CsA 10-6 mol/L and H7 50 μmol/L inhibited UⅡ-stimulated CaN activity by 45% (P&lt;0.01) and 21% (P&lt;0.05), respectively, while PD98059 50 μmol/L had no effect on CaN activity (P&gt;0.05). CsA 10-6 mol/L inhibited UⅡ-stimulated PKC activity by 14% (P&lt;0.05), while having no effect on MAPK activity (P&gt;0.05). Conclusions UⅡ increases cytosolic free calcium concentration and activates PKC, MAPK and CaN. The signal transduction pathway between PKC and CaN has cross-talk.