三种试剂盒与放射配体法检测谷氨酸脱羧酶抗体的比较

目的为合理选择谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）检测试剂盒及准确判定结果提供依据.方法采用2种酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒和1种免疫放射（IRMA）试剂盒检测88例已经放射配体（RLA）法核实抗体滴度的血清标本,对比各试剂盒检测结果与RLA法的一致性并选择一致性较好的试剂盒;与RLA法同时检测140例门诊连续就诊糖尿病患者的血清标本,确定经该试剂盒筛查后需采用RLA法复查标本的浓度范围.结果①3种试剂盒与RLA法检测结果一致性为Medizym试剂盒（75%）＞RSR试剂盒（73.9%）＞Biomerica试剂盒（62.5%）,Kappa值分别为Medizym试剂盒（0.408,中度）＞RSR试剂盒（0.405,中度）＞Biomerica试剂盒（0.185,较差）;②3种试剂盒受试者工作特征（ROC）曲线下面积：Medizym试剂盒（0.812）＞RSR试剂盒（0.727）＞Biomerica试剂盒（0.666）;③3种试剂盒检测结果与RLA法相关性为RSR试剂盒（r=0.992）＞Medizym试剂盒（r=0.791）＞Biomerica试剂盒（r=-0.055）;④RSR试剂盒检测标本浓度为0.25～0.99 U/ml者需进一步采用RLA法复查.结论RSR和Medizym试剂盒检测GAD-Ab效果较好.RSR试剂盒检测GAD-Ab浓度值为0.25～0.99 U/ml时,建议采用RLA法复查.     

四种乙型肝炎病毒表面抗体试剂盒检测人乙型肝炎病毒表面抗体效果比较

目的分析商品化试剂盒检测人乙型肝炎病毒（乙肝）表面抗体（抗-HBs）之间的差异。方法本院实验标本252份,分别用雅培I2000定量试剂盒、罗氏e601定量试剂盒、安图Auto Lumo A2000定量检测试剂盒和国内主流酶联免疫法定性试剂盒（上海科华）检测人乙肝表面抗体,以假定金标准对各厂家的阴、阳性结果进行比对分析,并对3个定量检测系统进行量值相关性分析。结果 4种乙肝表面抗体试剂与假定金标准相比,灵敏度和特异性都达到了93%以上,其中安图和罗氏的灵敏度和特异性最高,达到了98%以上;罗氏试剂盒的跃登指数（灵敏度＋特异性-100%）最高,为99.3%;与金标准比较,3种化学发光试剂盒检测结果无统计学差异（P〉0.05）,而酶联免疫法定性试剂盒检测结果有统计学差异（P〈0.05）。结论主流乙肝表面抗体试剂盒在检验乙肝表面抗体时均存在一定的假阳性或假阴性,量值相关性较好,不影响临床应用分析。     

固相血球吸附试验检测流行性出血热患者血清IgM抗体

流行性出血热(EHF)病毒具有凝集鸽、鹅等动物血球的特性。目前据此已建立了血凝试验和血凝抑制试验。为了研究早期快速诊断EHF的问题,我们综合血凝试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种诊断方法的优点,设计了一种新的固相血球吸附试验(Sold-phase absorbanceof red cells,简称SPARC),用于EHF患者血清特异性IgM抗体检测。SPARC的主要步骤:取羊抗人u链的IgG抗体(5μg/ml)包被96孔聚氯乙烯(PVC)U形软板,100μl/孔,4℃过夜。在各孔内加入被检血清和对照血清,100μl/孔,37℃保温2h。然后每孔加入32U/50μl的EHF病毒血凝素25μl,37℃反应2h。上述每次     

心肌肌钙蛋白Ⅰ检测对诊断急性心肌梗死的价值

目的:比较心肌肌钙蛋白Ⅰ(CTnI)与肌酸激酶同工酶(CK-MB)诊断急性心肌梗死(AMI)的临床应用价值.方法:采用免疫放射分析法定量检测25例AMI和22例不稳定性心绞痛(UA)病人血清中CTnI和CK-MB,然后对两组病人检测CTnI和CK-MB的结果进行比较.结果:CTnI正常参考值按试剂盒说明定为＜0.1ng/ml,≥0.1ng/ml定为阳性(+).CK-MB正常参考值按试剂盒说明定为＜25U/l,≥25U/l为阳性(+).25例AMI病人CTnI均为阳性,CK-MB16例阳性,9例阴性(P＜0.01).22例UA病人CTnI仅一例阳性,其余阴性,CK-MB 5例阳性,17例阴性,(P＜0.05),CTnI诊断AMI的敏感性高于CK-MB(分别为100%和64.0%),CTnI诊断AMI的特异性高于CK-MB(分别为95.5%和77.3%).结论:检测CTnI对于AMI的诊断具有较高敏感性和特异性,是一种心肌损伤的特异性血清指标,具有较好的临床应用价值.     

新疆地区牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

本次研究主要是采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒对采自新疆不同地区的800份血清进行了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)血清抗体检测,共检出抗体阳性血清694份,最高阳性率为99%,最低为55%,平均为86.6%,通过数据来看,近几年有过流产史的牛血清BVDV抗体阳性率普遍偏高。感染牛没有明显的年龄差别。该病已在新疆地区普遍存在,且又不断增强的趋势。     

15种呼吸道病原体的实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立15种呼吸道常见病原体的实时荧光定量PCR检测方法,用于新兵发热病因的快速检测.方法 根据生物信息学分析结果选定15种常见呼吸道病原体的检测靶基因,建立实时荧光定量PCR方法.采用15种病原体的培养物和正常人的基因组对检测方法的敏感性和特异性进行测试,并对健康和发热新兵各50例的咽拭子进行检测.结果 所建立的荧光定量PCR方法的有效检测线性范围为1×102～1×109拷贝/ml,最低检测限为5～50拷贝/ml,敏感性和特异性均较高.在50例发热新兵咽拭子中,24.0%嗜肺军团菌阳性,30.0%乙型流感病毒阳性,24.0%肺炎支原体阳性,8.0%甲型流感病毒阳性,对照组上述病原的阳性率依次为20.0%、6.0%(P<0.05)、22.0%和0.0%,而腺病毒、麻疹病毒、SARS相关冠状病毒、人冠状病毒、流行性腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒H5N1、风疹病毒、猪链球菌、肺炎衣原体和肺炎链球菌均阴性.18例(36%)流感病毒感染者急性期血清IgM和IgG阳性率分别为88.9%(16/18)和72.2%(13/18),在恢复期则分别为16.8%(3/18)和100%(18/18).健康新兵的两次血清抗体检测无临床意义.在咽拭子嗜肺军团菌及肺炎支原体阳性个体,发热期和恢复期血清抗体阳性率分别为8.3%和8.3%、&3%和16.7%.结论 成功建立可同时进行15种呼吸道病原体早期诊断的实时荧光定量PCR方法,该方法检测结果表明此次新兵营集训新兵发热病因以流感病毒感染为主.     

水痘－带状疱疹病毒快速微量中和试验的建立与初步应用

目的：建立水痘－带状疱疹病毒（ VZV）的快速微量中和试验筛查技术,用于高免原料血浆的筛选和VZV特异性免疫球蛋白（ VZIG）的制备。方法参考美国FDA批准的VZIG制品,设立原料血浆筛选滴度的下限;通过病毒滴度优化,设立快速微量中和试验筛查体系中的病毒使用滴度;建立筛选体系并引入VZIG国际标准品作为质量控制,对1∶2～1∶256倍比稀释的各滴度的单人份和混合原料血浆进行测定,同时利用抗VZV中和抗体ELISA检测试剂盒VaccZyme复核快速微量中和筛选结果,对其灵敏度进行分析。结果快速微量中和筛选试验中原料血浆的最低筛选下限为1∶16（VZV中和抗体滴度不低于0．4 U／ml）;筛选体系病毒使用滴度为1500 PFU／ml;20份单采血浆中有8人份的滴度≥1∶16,混合血浆中无符合筛选标准的样本;ELISA的复核结果与快速微量中和试验呈良好的直线关系（r＝0．89524,P＜0．0001）。结论快速微量中和试验的灵敏性、通量和可操作性等,适于VZV高免原料血浆的筛选,解决了VZIG制备中原料血浆筛选的关键技术问题。     

HIV阳性室内质控血清制备及其稳定性观察

ＨＩＶ抗体阳性室内质控血清检测光密度 (ＯＤ)值及ＯＤ/ＣＯ值 :取本实验室制备的ＨＩＶ抗体阳性室内质控血清 ,ＥＬＩＳＡ法批内重复检测 30次 ,其ＯＤ/ＣＯ均值为 2 8,标准差为 0 2 1,变异系数为 7 14%。批间重复检测 ,每天重复测定 3次 ,连续测定 2 0天 ,其ＯＤ/ＣＯ均为 2 78,标准差 0 2 3,变异系数为 8 2 7%。应用硫柳汞和叠氮钠作为ＨＩＶ阳性血清防腐剂对效价的影响 :将本实验室制备的ＨＩＶ阳性室内质控血清分别为0 1%硫柳汞和 0 1%叠氮钠防腐 ,分别重复测定 2 0次 ,其结果用硫柳汞防腐的ＨＩＶ抗体阳性室内质控血清ＯＤ/Ｃ…     

吖啶酯标记抗体应用于结核病人抗体水平的测定

本文采用吖啶酯标记羊抗人 IgG 抗体,建立了人血清中 IgG 的测定方法。该标记方法条件温和,简便易行,其标准曲线范围为7.5～125ng IgG/ml。批内及批间变异系数分别为7.1%及9.9%。应用于结核病人血清中抗体水平的测定结果良好。15名正常献血人员及20名结核病患者血清中抗体水平分别为57±24.7及165±129μg/ml。统计学处理指出两组差别非常显著。     

2023年哈密市兽医系统实验室检测能力比对结果分析

【目的】为准确评价哈密市区/县兽医实验室检测能力，积极促进动物疫病预防控制机构提升检测能力水平和提高检测工作质量。【方法】2023年哈密市动物疫病预防控制中心结合区/县级兽医部门实际工作，组织开展了哈密市兽医实验室检测人员能力比对工作，完成禽流感H7亚型抗体血凝抑制试验、口蹄疫病毒A型抗体液相阻断ELISA检测试验、动物布鲁菌病抗体检测试验和非洲猪瘟病毒核酸检测试验比对。【结果】3个区/县级兽疫实验室6名检测人员全员参加，区/县实验室检测结果平均正确率分别为97.91%、97.22%、100%。【结论】大部分区/县兽医实验室具备相应的检测能力，但在实验室建设、检测人员能力水平和信息管理系统的应用上存在一定差距。     

生物样品中蓖麻毒素的双夹心酶联免疫定量检测方法及应用

目的建立定量检测生物样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法并研究毒素在大鼠体内的分布。方法利用抗蓖麻毒素的单克隆抗体（MAb）3D74和辣根过氧化物酶（HRP）标记的小鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体4C13,建立了定量检测血清和组织样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法,并对方法学进行了必要的验证。结果建立的双抗夹心ELlSA方法检测纽织中蓖麻毒素的浓度范围为1．25～320-g／ml,最低定量限为2．5ngy／ml,日内和日间精密度分另Ij小于3．5％和9％。将该方法应用于蓖麻毒素组织分布的定量测定,结果显示,大鼠静脉染毒后毒素可以在心、肝、脾、肺、肾、肠和脂肪等组织分布,以脾脏的分布为最高,其次为肝脏,染毒后0．5和2h脾与血清的比值分别为3．9和7．2。在脑和肌肉中未检出毒素。结论建立的双夹心ELISA方法简便、灵敏,可以用于定量检测血清和组织等生物样品中的毒素含量,为蓖麻毒素的毒物代谢动力学研究及毒素中毒的快速检测提供了技术支撑。     

白细胞介素2与狂犬疫苗联合免疫小鼠的抗体动态观察

组织培养制备的狂犬病毒灭活疫苗与重组白细胞介素２同时免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠，检测不同时间的鼠血清中抗狂犬病毒ＩｇＧ抗体和中和抗体效价。结果显示，在白细胞介素２的作用下，抗体产生的时间提前，抗体效价提高（Ｐ＜０．０１），ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠比较，前者的抗体效价更高（Ｐ＜０．０１）。说明白细胞介素２可以提高小鼠的体液免疫反应。     

乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。     

无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的价值评价

目的：评价无偿献血者梅毒抗体筛检方法与试剂的筛检价值。方法：以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)法，厦门新创梅毒抗体ELISA1诊断试剂盒(ELISA1)及北京金豪梅毒抗体ELISA诊断试剂盒(ELISA2)对评价标本作盲法筛检，以卫生部临床检验中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。用四格表法评价真实性与可靠性指标，并对二种ELISA试剂盒的Cut-off值的合理性进行评价。结果：TRUST法、ELISA1及ELISA2试剂盒的灵敏度分别为68．2％，95．5％，100．0％，特异度分别为77．8％，94．4％，94．4％，约登指数分别为0．46，0．900．94，重复试验符合率分别为90．0％，100．0％，100．0％，二种ELISA试剂盒的Cut-off值较合理。结论：ELISA试剂盒的灵敏度、特异度及重复试验符合率要远高于TRUST法。尽管TRUST法的灵敏度与特异度较低，在无偿献血者的粗筛快检中可降低血液报废率，因而在无偿献血中的仍有很高价值，如果将ELISA试剂盒的灵敏度与特异度加以提高，将会具有更大的临床应用价值。     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

人可溶性OX40L蛋白ELISA检测试剂盒的研制及其在自身免疫性疾病诊断中的应用

目的研制特异性检测人可溶性OX40L蛋白（sOX40L）的ELISA试剂盒,探讨其在自身免疫性疾病临床诊断中的应用。方法利用两株识别不同抗原表位的鼠抗人OX40L单克隆抗体1G1和4C12分别作为包被抗体和检测抗体,采用双抗体酶联免疫夹心法研制特异性检测人sOX40L的ELISA方法,并对其稳定性、精确性和特异性进行分析。结果①建立的检测人sOX40L酶联免疫试剂盒在抗原浓度为3.91～250ng/ml范围内有良好的线性关系,并具有良好的稳定性、较高的准确性和特异性。②利用该ELISA方法检测到sOX40L蛋白在肾病综合征和Graves’病患者血清中表达水平均显著高于健康对照组。结论成功建立了检测人sOX40L蛋白的ELISA试剂盒,应用该方法检测到sOX40L在多种自身免疫病患者血清中异常高表达。该试剂盒在OX40L分子基础研究以及自身免疫病的临床诊断方面具有潜在的应用价值。     

新型重组人源抗狂犬病毒糖蛋白单链抗体的制备及活性分析

目的：利用大肠杆菌表达新型人源抗狂犬病毒糖蛋白单链抗体ScFv,并验证其活性。方法：采用基因融合获得ScFv基因,构建重组表达质粒pET-22b（＋）-ScFv,转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导获得高效表达。结果：Western印迹显示目的蛋白表达正确,表达产物以包涵体形式存在,经Ni-NTA柱纯化和体外复性,获得纯度达90%的ScFv蛋白。ELISA结果显示在PBS及人血清中ScFv的结合稳定性有所提高,流式细胞术证明目的蛋白能靶向结合狂犬病毒,通过中和效价测定实验测得ScFv的中和效价为40 U/mg。结论：成功利用原核表达系统实现了对人源抗GPRV ScFv的表达,并且具有一定的中和活性。     

A rapid solid-phase extraction and HPLC/DAD procedure for the simultaneous determination and quantification of different benzodiazepines in serum,blood and post-mortem blood

Summary A rapid and quantitative method for the determination of benzodiazepines using high-performance liquid chromatography (HPLC) with diode-array detection (DAD) is reported. The drugs were extracted from serum, blood or post-mortem blood using C₁₈ extraction columns. Brotizolam was used as internal standard. Experiments with spiked serum/blood samples resulted in recoveries between 75% and 94% for all investigated benzodiazepines. Excellent linearity was obtained over the concentration range 5–1500 ng benzodiazepine/ml. The limit of detection was approximately 2 ng/ml. The detection of low therapeutic serum levels of highly potent benzodiazepines is also possible.      

A型肉毒毒素胶体金免疫层析法检测试纸条的研制

目的：研制一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员的胶体金免疫层析法(immuno-chromatographic assay,ICA)试纸技术，用于检测食物、患者呕吐物或粪便以及血清和土壤中的肉毒毒素(botulinum toxin)。方法：采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒、标记A型肉毒毒素的多克隆抗体，制成免疫层析检测试纸条。待测样中的A型肉毒毒素与试纸条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维膜移动，并与膜上的抗体结合形成肉眼可视红色带。结果：肉毒毒素ICA试纸条可以特异性检测A、B和E型肉毒毒素。检测中国兰州生物制品研究所注射用A型肉毒毒素标准品，灵敏度可达2U／ml。与金黄色葡萄球菌肠毒素等抗原无交叉反应。结论：A型肉毒毒素ICA试纸条具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点，适用于专业和非专业人士，实用性较强。