压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：探讨双重聚合酶链反应(PCR)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重PCR反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经PCR法鉴定为MRSA。结论：应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。     

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA，并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌，MRCNS)的敏感性、特异性分别为94．4％(89．5％)、92．4％(73．7％)。在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标，则敏感性、特异性分别为91．7％、95.5％。在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标，特异性提高到97．9％．结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA，又可免去常规生化鉴定，具快速、特异性强的优点。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

院内外环境分离金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）耐药基因及毒素基因,了解其分布情况。方法采用多重聚合酶链反应（multiplex polymeras chain reaction,PCR）技术分别检测耐药基因mecA、femA与毒素基因TSST、PVL。结果 83株金黄色葡萄球菌,仅3株（3.61%）菌检出mecA基因,22株菌（26.50%）检出femA基因,15株菌（18.07%）同时检出mecA与femA基因。医院样本检出12株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA）,3株甲氧西林耐药凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant and coagulasenegative Staphylococcus aureus,MRCNS）。83株分离自医院及环境样本SA,2株分离自咽拭子的样本检出TSST基因,检出率4.54%（2/44）;1株分离自血液的样本检出PVL基因,检出率2.27%（1/44）,其余菌株未检出毒素基因。结论院内样本中,部分菌株携带mecA基因,环境样本未发现携带mecA菌株,两者存在差异。83株SA菌,毒素基因携带率较低。检测耐药、毒素基因携带率,为临床治疗及院内感染控制,食物中毒溯源提供依据。     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。     

耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的比较

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为金标准，比较头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的优缺点。方法对临床分离的70株葡萄球菌（其中金黄色葡萄球菌40株，凝固酶阴性的葡萄球菌30株）分别用PCR法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准KB（Kirby Bauer）法进行。结果经PCR法检测mecA基因，耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的发生率分别为75．0％（30／40）和80．0％（24／30）；头孢西丁纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为93．3％、95．9％；90．0％和100％；苯唑西林纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为90．00%、87．5％；90．0％和83．3％；乳胶凝集法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为100．0%、100．0％；100．0％和100．0％。与PCR结果比较，3种方法所获得的结果经统计学分析，差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法是成批检测的理想方法；乳胶凝集法检测快速，结果可靠，但检测成本高；实验室应选择合适的方法，以提高MRS的检出率。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

MecA、femB基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的了解mecA、femB多重聚合酶链反应（PCR）法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出效率。方法对临床分离的71株非重复的金黄色葡萄球菌,采用多重PCR进行检测。结果 mecA、femB多重聚合酶链反应对MRSA的检测的特异性为100%,敏感性为97.87%。结论 mecA、femB多重PCR法可以对临床分离的金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药作出判断,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的 比较头孢西丁纸片扩散法与传统的苯唑西林纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测的效率.方法 收集66株葡萄球菌,分别采用苯唑西林琼脂平板筛选试验、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法来检测MRS,结果以苯唑西林琼脂平板筛选结果为对照,分别比较头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法的特异性和敏感性. 结果 66株葡萄球菌中,37株金黄色葡萄球菌经苯唑西林琼脂平板筛选判定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的有15株,29株凝固酶阴性的葡萄球菌有24株判定为耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS).与苯唑西林琼脂平板筛选法比较,头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,而苯唑西林纸片扩散法其敏感性和特异性分别为93%(14/15)和91%(20/22);头孢西丁纸片扩散法检测MRCNS的敏感性和特异性均为100%,而苯唑西林纸片扩散法其敏感性和特异性分别为96%(23/24)和40%(2/5).结论 头孢西丁纸片扩散法对MRS检出优于苯唑西林纸片扩散法.     

几种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的对三种检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法以PCR检测金黄色葡萄球茵甲氧西林决定因子A（mecA）为金标准,按临床实验室标准化委员会（CLSI）操作规程用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法对临床分离的155株金黄色葡萄球菌进行检测。结果155株金黄色葡萄球菌经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为61．9％（96／155）;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100％;苯唑西林纸片扩散法的敏感性为95．8％,特异性为91．5％;苯唑西林琼脂稀释法的敏感性为100％,特异性为98．3％;头孢西丁纸片扩散法优于苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林琼脂稀释法。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便、敏感性高、特异性好、结果可靠,可作为医院微生物实验室日常工作中检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。     

纸片法与MIC法检测MRS的比较

目的通过头孢西丁（FOX）纸片法与苯唑西林（OX）纸片法、肉汤稀释法（MIC）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）方法比较,对FOX纸片法的可靠性和临床实用性进行评估。方法用FOX与OX纸片扩散法与MIC法检测本院临床送检标本中分离的葡萄球菌共120株。结果3种方法检测46株金黄色葡萄球菌的MRS结果均为30株,符合率为100%;检测凝固酶阴性葡萄球菌MRSMIC法的结果特异性为50%,OX纸片法特异性为62.5%。结论3种方法检测金黄色葡萄球菌的MRS结果相符合;检测凝固酶阴性葡萄球菌MRS的结果MIC法和OX纸片法特异性均低,建议用FOX纸片法代替或更正对MRS的检测结果。     

感染性葡萄球菌的分布及耐药性分析

目的了解2009年新乡市中心血站感染标本中葡萄球菌的分布及耐药性。方法从住院和门诊就诊患者各类感染标本中分离出葡萄球菌506株,用VITEK-32型全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,用琼脂纸片扩散（K-B）法进行药敏试验。结果感染标本中检出的葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌占52.4%,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为54.3%,住院患者的金黄色葡萄球菌中MRSA占64.3%,门诊患者的MRSA占20.6%,尿标本的金黄色葡萄球菌中MRSA检出率最高（83.3%）。凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）检出率为85.6%,住院患者CNS中MRCNS占90.8%,门诊患者MRCNS占62.2%,来自血液标本的CNS中MRCNS检出率最高（90.0%）。CNS的分布以表皮葡萄球菌为主（46.5%）。MRSA对-内酰胺类,喹诺酮类,大环内酯类,氨基糖苷类和四环素有很高的耐药率,均达80.0%以上。MRCNS除氯霉素及利福平外,对所测抗菌药物耐药率均在50.0%以上。结论标本来源不同,葡萄球菌的分布也不同。葡萄球菌耐药率有所上升,对不同抗菌药物耐药性有较大差异。     

本院ICU病区葡萄球菌感染状况及分布现状

目的了解我院重症监护病区(ICU)的葡萄球菌的感染状况及分布,以指导临床预防及治疗用药。方法对86株分离自ICU病区葡萄球菌标本分布和药物敏感性进行检测分析。结果葡萄球菌呼吸道感染占64%,居首位。86株葡萄球菌中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)34株,耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS)43株,甲氧西林敏感凝固酶阴性的葡萄球菌(HSCNS)9株,无甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)。MRS表现为多重耐药。结论葡萄球菌特别是MRS的感染在重症监护病区医院获得性感染中占较重要的地位。临床应严格掌握抗菌药物应用指征,预防MRS的产生。     

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性.方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性.结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112).头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%.结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法.     

耐甲氧西林葡萄球菌药性分析

耐甲氧西林葡萄球菌是引起医院内感染的重要致病菌。为了解该菌的耐药情况，进而为临床预防与治疗提供依据，我们对不葡萄球菌进行了耐甲氧西林及耐其它１４种常用抗生素和产β－内酰胺酶的测定。结果：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率为５６％，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌检出率为４７．６％；耐甲氧西林敏感葡萄球菌对１４种常用抗生素的耐药性及多重耐性均高于甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌；产β－内酰胺酶最高的是耐甲氧西     

葡萄球菌的耐药性分析

目的分析葡萄球菌（包括MRS和MSS株）的耐药性,为临床合理选择抗生素提供依据。方法药敏试验及耐甲氧西林葡萄球菌的检测均采用琼脂扩散法（K—B法）,操作及结果判断均按NCCLS（2002）标准执行。结果金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的分离率分别占41．3％和72．1％;MRSA和MRSCON株的检出率分别为45．0％和75．0％;MRSA株对喹诺酮类的耐药性（21．0％-57．0％）明显低于MRSCON株（81．2％～89．6％）;除万古霉素、替考拉宁、呋喃妥因、阿米卡星和部分青霉素类外,MRSA和MRSCON株的耐药性显著高于MSSA和MSSCON株〈P〈0．05）;未发现耐万古霉素和替考拉宁菌株。结论由MRS菌株引起的严重感染首选万古霉素和替考拉宁治疗,发现耐万古霉素和替考拉宁菌株的实验室要根据NCCLS的有关规定修订药敏报告,并且及时切断传播途径,降低细菌的耐药性和医院感染。     

肺结核感染金黄色葡萄球菌的基因分型及耐药研究

目的通过对肺结核患者分离出的金黄色葡萄球菌进行基因谱型和药敏检测研究,了解肺结核并发金黄色葡萄球菌的院内流行状况。方法对,晦床分离出的30株金黄色葡萄球菌进行药敏试验和SCCmec基因盒的多重PCR检测。结果药敏结果显示30株金黄色葡萄球菌对青霉素和甲氧西林的耐药率最高。甲氧西林的耐药率达到62．8％。MecA阳性菌株SCCmec的分型显示均为Ⅱ型或Ⅲ型,且所占比例相近,未见Ⅰ型和Ⅳ型。结论肺结核患者并发金黄色葡萄球菌耐药性普遍,MecA基因介导的MRSA在分离菌株分型以Ⅱ型或Ⅲ型为主。