DEHP对神经生长因子表达影响的体内实验

目的为了探讨DEHP对SPF级昆明纯系雄性小鼠组织中NGF表达的诱导作用,以小鼠肺组织中肥大细胞为实验材料。方法通过RT-PCR实验,检验了肺组织中神经生长因子(NGF)中mRNA表达水平,结果显示:经125 mg/kg DEHP染毒组染毒两周的小鼠,肺组织中NGF mRNA相对表达水平与空白组相比无明显变化。同时250mg/kg DEHP染毒组的小鼠肺组织中NGF mRNA相对表达水平与空白组相比有极显著上调(P<0.01)。结果表明DEHP有可能是通过NGF途径引发哮喘。结论     

Connexin43磷酸化调节与细胞间隙连接通讯功能

细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)对于细胞增殖、分化、内环境稳定及机体新陈代谢、生长发育等生理过程起重要作用.细胞间隙连接是由细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)六聚体形成的跨膜通道结构,细胞间隙连接蛋白是构成细胞间隙连接的蛋白大家族,在人类组织中已经有超过20种细胞间隙连接蛋白被鉴定,connexin43(Cx43) 则是该蛋白家族中组织分布最广、研究最多的一个重要成员,主要表达在心肌、肺、平滑肌、晶状体、成纤维细胞、星形细胞等多种组织     

工频磁场对星形胶质细胞间隙连接通讯功能的影响

目的　探讨工频磁场 (PFMF)是否有促癌或协同促癌作用。方法　利用荧光光漂白后再恢复法观察漂白细胞荧光强度的恢复以判断经间隙连接的细胞间通讯 ,以相对荧光强度恢复速率(CFIRR)作为对细胞间隙连接通讯 (GJIC)作用的评价指标 ,研究不同磁场强度单独作用或协同佛波酯(TPA)对星形胶质细胞GJIC功能的影响。结果　 3ng/mlTPA作用 1h时CFIRR的中位数 (Md)值为4 .53 % /min ,空白对照组为 9.74% /min ,两组的差异有显著性 (H =1 2 .0 84,P <0 .0 0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 4h时CFIRR的Md 分别 8.2 5、6 .68% /min ,与空白对照组比较 ,差异无显著性 (H =32 .61 7,P >0 .0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 3h ,再与TPA共同作用 1h时CFIRR的Md 分别为 3 .32、2 .85% /min ,与TPA组比较 ,差异无显著性 (H =2 .589,P >0 .0 5)。结论　 0～ 1 .6mT的 50Hz磁场单独作用不能抑制星形胶质细胞GJIC功能 ;协同TPA ,不能增强TPA对星形胶质细胞GJIC的抑制作用 ;但是磁场对星形胶质细胞GJIC的抑制作用随着磁场强度增强呈递增趋势     

DEHP对大鼠睾丸氧化应激和血清睾酮水平影响

目的 探讨邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）对青春期雄性大鼠睾丸及性激素的影响及潜在机制。方法 18日龄SD大鼠24只,按体重随机分为4组（对照组、低、中、高剂量DEHP组）,每组6只。DEHP染毒剂量分别为250、500和750 mg/kg,经口连续染毒30 d;颈部脱臼处死,收集血清,分离睾丸组织;测定血清睾酮、黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）等性激素水平及睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛和5α-还原酶（5α-R）活性。结果 DEHP处理组,大鼠睾丸和附睾脏器系数降低,睾丸曲精小管管腔缩小,结构坍塌,部分细胞膜破裂,细胞排列紊乱;与对照组比较,高剂量DEHP组大鼠血清睾酮和LH水平[分别为（115.04±14.21） pg/mL、（23.42±3.12） mIU/mL]降低,中、高剂量DEHP组大鼠血清FSH水平[分别为（5.49±0.42）、（4.63±0.51） IU/L]下降,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,高剂量DEHP组大鼠睾丸组织中GSH-Px和SOD活力[分别为（728.3±95.3）、（835.8±151.2） U/mg pro]降低,而中、高剂量DEHP组大鼠睾丸组织中丙二醛含量[分别为（79.6±13.9）、（90.6±4.0） nmol/mg pro]和5α-R2活性[分别为（415.9±112.7）、（415.9±147.8） IU/mg pro]升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 DEHP暴露后,大鼠睾丸发生氧化应激,并通过诱导5α-R2活性降低血清睾酮水平。     

邻苯二甲酸二乙基己基酯对大鼠睾丸细胞DNA损伤和睾丸组织氧化应激影响

目的 探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对大鼠睾丸细胞DNA的损伤和睾丸组织氧化应激的作用.方法 雄性Wistar大鼠25只,随机分为5组,每组5只,通过灌胃的方法摄入DEHP,4个染毒组剂量分别为1 500、3 000、4 500、6000mg·kg-1 ·d-1,1个阴性对照组.用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠睾丸细胞DNA的损伤,睾丸组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)的水平以及睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果 各染毒组和阴性对照组大鼠睾丸细胞DNA损伤率分别为29.0％、71.0％、89.0％、95.0％和15.0％,各染毒组睾丸细胞DNA损伤程度与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),且大鼠睾丸细胞DNA损伤率与染毒剂量之间呈剂量-反应关系(r =0.930,P＜0.01);各染毒组大鼠睾丸组织的ROS、MDA的水平均较阴性对照组显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而GSH-Px、SOD的活力又较阴性对照组明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 DEHP可造成大鼠睾丸组织明显的氧化应激并引起睾丸细胞DNA的损伤.     

DEHP对大鼠脂质过氧化反应的影响

目的：探讨DEHP对大鼠脂质过氧化反应的影响。方法：通过对不同剂量DEHP染毒大鼠的血液,肝组织匀浆,线粒体匀浆中GSH－Px,GST,SOD,MDA指标的测定,结果：随着DEHP染毒剂量的增加,大鼠血中,组织中的GSH－Px,GST,SOD活性降低,MAD含量增加,尤其是大剂量组,差异均有显著性（P＜0．05,P＜0．01）,结论：DEHP可明显增加大鼠体内的脂质过氧化反应。     

DEHP对CHO细胞凋亡基因和癌基因表达水平的影响

目的探讨DEHP对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞毒性和凋亡基因癌基因表达水平的影响。方法不同剂量DEHP对CHO细胞进行染毒24 h和48 h,应用CCK8试剂盒测定DEHP对CHO细胞的半数抑制浓度IC50,荧光定量PCR检测凋亡基因(Bcl-2、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)表达水平改变。结果DEHP染毒CHO细胞24 h的IC50为612μM,染毒48 h的IC50为336μM。DEHP较高剂量(150μM和300μM)染毒条件下,凋亡基因Bcl-2表达水平比对照组显著降低,300μM DEHP染毒时caspase-8和caspase-9表达水平比对照组显著增加;150μM和300μM DEHP染毒条件下c-fos表达水平增加;300μM DEHP染毒条件下k-ras基因表达水平升高;p53表达水平无明显变化。结论 DEHP可通过激活caspase通路引起CHO细胞凋亡,也引起癌基因表达水平升高。     

DEHP对妊娠大鼠胚胎着床及胚胎发育影响

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)在体内对雌性大鼠妊娠早期胚胎着床及妊娠中晚期胚胎发育的影响。方法大鼠妊娠早期(1~6 d)灌胃给予5,25,50 mg/kg DEHP,妊娠14 d处死孕鼠剖腹检测DEHP对胚胎着床情况的影响;大鼠妊娠中晚期(7~20 d)给予5,25,50 mg/kg DEHP,妊娠末期处死后剖腹检查胚胎畸形和胎盘发育情况。结果妊娠早期25、50 mg/kg DEHP干预后,胚胎着床数(10.02±2.75)、(8.77±3.03)只较对照组(14.01±3.01)只降低;妊娠中晚期25、50 mg/kg DEHP干预后,胚胎数(9.68±1.95)、(5.86±2.11)只较对照组(12.98±1.46)只减少,活胎数(8.29±2.02),(5.86±2.21)只较对照组(12.13±2.06)只减少,胚胎重量(4.92±0.97),(4.78±1.12)g较对照组(6.05±1.36)g降低,胎盘重量(0.93±0.09)、(0.85±0.08)g较对照组(1.12±0.12)g降低。结论 DEHP可在妊娠早期影响胚胎着床,并在妊娠中晚期影响胚胎及胎盘发育,造成胚胎丢失...     

丙烯腈对中国仓鼠肺细胞细胞活力和间隙连接通讯功能的影响

目的：探讨丙烯腈（ACN）对中国仓鼠肺细胞（CHL）细胞活力及细胞间隙连接通讯（GJIC）功能的影响。方法：镜下观察细胞形态学改变,采用MTT法测定细胞生长半数抑制浓度（IC50）,应用荧光染料示踪技术观测ACN对CHL细胞GJIC的影响。结果ACN染毒12和24h,细胞生长IC50分别为435．73和251．09μg/ml。低剂量组（12．5和25．0μg/ml）细胞形态与对照组相比无明显改变,较高剂量组（50．0－200．0μg/ml）细胞轻度受损（0－Ⅰ级）,高剂量组（800．0μg/ml）细胞明显受损（Ⅲ级）。ACN原形在无明显细胞毒辣性剂量（10．0－50．0μg/ml）时即可抑制GJIC,并呈持续抑制作用,存在剂量－效应和时间－0效应关系。ACN经代谢活化后,可加重对细胞GJIC的抑制作用和细胞受损程度,但在染毒12h后停止接触,该作用在一定程度上可逆转,牛磺酸作为一种重要的抗氧化剂,预处理细胞（牛磺酸剂为10和20mmol/L)可明显抑制ACN对细胞GJIC的下调作用。结论ACN在较高剂时对CHL人有毒性作用,但在无明显细胞损伤剂量时即明显抑制细胞GJIC功能,该抑作用停止接触ACN或有抗氧化剂存在可逆转,提示氧化应激在ACN所致细胞GJIC功能下调中具有重要作用。     

239 调节细胞间隙连接通讯的毒理学意义

本文阐述了细胞间隙连接通讯的生理功能及其异常与癌症的发生，化学物质的毒作用机制以及细胞凋亡的关系，并对调节细胞间隙连接通讯的毒理学意义进行了讨论。     

几种植物雌激素对细胞间隙连接通讯的影响

目的 了解植物雌激素对细胞的细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。方法 用荧光漂白后恢复技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察典型的植物雌激素(槲皮素、染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)对正常人皮肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)GJIC的影响。结果 不同种类的植物雌激素在不同浓度下对GJIC的影响不完全相同。槲皮素在0．1—10．0μmoly/L浓度下对HaCaT细胞的GJIC功能无明显影响。染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂在0．1—10．0μmob/L浓度下,能不同程度地抑制GJIC功能,荧光恢复率为31．77％-37．06％,显著低于溶剂对照组(44．74％)。结论 除黄酮类槲皮素外,常见的植物雌激素(染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)在人体可能达到的血清浓度下,对HaCaT细胞的GJIC功能都有不同程度的抑制,提示在一定条件下可能有促癌作用。因此,将其用作药品或保健食品时应该慎重。     

工频磁场对细胞缝隙连接通讯功能的影响

为了探讨极低频（ＥＬＦ）磁场可能存有的促癌作用或协同促癌作用，观察了５０Ｈｚ磁场对ＣＨＬ细胞间缝隙连接通讯（ＧＪＩＣ）功能的影响。利用离子电渗注射法将荧光染料引入细胞内，以５分钟后的荧光偶合细胞（ＤＣＣ）数作为ＧＪＩＣ功能的指标。研究了不同浓度的十四酰基咐拜醇酯（ＴＰＡ）、不同强度的工频磁场及工频磁场与ＴＰＡ（５ｎｇ／ｍｌ）共同作用对ＣＨＬ细胞ＧＪＩＣ的影响。结果表明，ＴＰＡ对ＧＪＩＣ的抑制具有浓度依赖关系，ＴＰＡ抑制ＣＨＬ细胞ＧＪＩＣ的阈浓度在１～５ｎｇ／ｍｌ之间；ＣＨＬ细胞经０.８０ｍＴ的工频磁场暴露２４小时后的ＤＣＣ数降至６．０８±１．５９，与空白对照组（９．８４±２．２７）比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；０．２０，０．４０，０．８０ｍＴ强度的工频磁场与５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ共同作用后的ＤＣＣ数分别降至５．５２±１．５３，５．００±１．２２，４．００±１．２９，与单用５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ组（６．３８±１．３９）比较，差异也有显著性（Ｐ＜０．０５）。说明一定强度的工频磁场具有抑制或协同抑制ＧＪＩＣ的作用，提示其可能存有促癌或协同促癌作用。     

甲基丙烯酸环氧丙酯对细胞间隙连接通讯的影响

为探讨甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）诱导细胞转化的机理,选用划痕染料示踪技术（ＳＬＤＴ０初步研究了ＧＭＡ对人胚肺成纤维细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）的影响。用０．;５,２．５和５．０ｍｇ／Ｌ的ＧＭＡ给细胞染毒１２ｈ,经划痕导入荧光黄染料并测定各组细胞中该荧光染料向其相邻细胞扩散的程度。结果表明,在染毒剂量及时间范围内,ＧＭＡ对人胚肺成纤维细胞ＧＪＩＣ产生较强的抑制作用,呈良好的剂量－效应关系。     

细胞间隙连接通讯调节机制研究进展

细胞间隙连接通讯(GJIC)在细胞的增殖、分化和维持细胞稳态等生理过程中起着非常重要的调控作用。GJIC由连接蛋白(Cx)构成,许多外源性化学物质均可通过作用于Cx而影响GJIC的功能。该文结合近年来研究进展,综述了GJIC的缓慢调节和快速调节机制,并对目前存在的问题和未来研究的方向进行了展望。     

无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。方法 采用细胞划痕染料标记示踪技术,以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标,观察亚砷酸和砷酸对原代培养的人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。结果 亚砷酸可显抑制人皮肤成纤维细胞间荧光黄染料的扩散,在0．005-5．0μmol／L浓度范围内有明显的剂量依赖关系。砷酸也可明显抑制荧光黄染料在人皮肤成纤维细胞间的扩散,但剂量依赖关系不明显。进一步的研究发现,亚砷酸可显增高人皮肤成纤维细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C的活性,其中对胞膜蛋白激酶C活性的作用更为明显。结论 无机砷可显抑制人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯,提示它们在癌症发生的促长阶段扮演重要角色。无机砷对细胞缝隙连接通讯的抑制可能与其引起细胞内蛋白激酶C的异常活化有关。     

Astaxanthin diminishes gap junctional intercellular communication in primary human fibroblasts

Astaxanthin is a carotenoid found in plants and algae; it provides the color of marine seafood such as salmon, lobster, or shrimp. Carotenoids are antioxidants and exhibit other biological functions, including effects on gap junctional communication important for homeostasis, growth control, and development of cells. Cancer cells have an impaired gap junctional intercellular communication. The objective of the present study was to determine the effects of astaxanthin and canthaxanthin on gap junctional intercellular communication in vitro. Primary human skin fibroblasts were exposed to carotenoids from 0.001 to 10 micromol/L, and gap junctional communication was measured with a dye transfer assay. After incubation with canthaxanthin for 24 and 72 h, intercellular communication increased, whereas it was strongly diminished by astaxanthin at levels > 0.1 micromol/L. Inhibition was reversed when astaxanthin was withdrawn. Western blot analysis showed that after exposure to canthaxanthin, the amount of the gap junction protein connexin43 was increased. Incubation with astaxanthin led to a change in the phosphorylation pattern of connexin43, shifting from higher to lower phosphorylation states. We suggest that astaxanthin affects channel function by changing the phosphorylation pattern of connexin43.     

毫米波对人角质形成细胞缝隙连接通讯功能的影响

目的　研究低功率毫米波对人皮肤角质形成细胞 (HaCaT)缝隙连接通讯 (GJIC)的影响。方法　采用荧光淬灭后恢复技术 ,用激光共聚焦显微镜检测频率为 30 16GHz、功率密度分别为1 0和 3 5mW/cm2 毫米波辐照对细胞缝隙连接通讯功能的影响。结果　 12 氧 14 酰佛波酯 (TPA)5 μg/L可抑制细胞GJIC功能 ,激光淬灭后平均荧光恢复率由正常对照的 (5 5± 17) %降至 (34±13) % ,差异有非常显著性。功率密度为 1 0和 3 5mW /cm2 毫米波单独辐照不改变细胞GJIC功能 ,其平均荧光恢复率分别为 (5 2± 16 ) %和 (5 0± 17) % ;当毫米波与TPA联合作用时 ,TPA诱导的细胞GJIC功能抑制被削弱 ,其中 1 0mW /cm2 毫米波使TPA诱导的细胞GJIC功能抑制部分恢复 ,其平均荧光恢复率为 (47± 16 ) % ,差异有非常显著性 ;而 3 5mW /cm2 毫米波使细胞GJIC功能完全恢复至正常对照水平 ,其平均荧光恢复率为 (5 0± 16 ) % ,差异有非常显著性。结论　毫米波辐照可消除或减小TPA诱导的细胞GJIC功能抑制。     

甲基对硫磷对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯和孕酮分泌的影响

目的 探索甲基对硫磷(methyl parathion,MP)对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯(gapjunctional intercellularcommunication,GJIC)和孕酮分泌的影响.方法 体外培养5周龄SPF级BALB/c小鼠黄体细胞,分别设MP暴露组(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的MP处理3h)和GJIC促进剂——1 μmol/L异丙肾上腺素预处理组及蛋白激酶A(PKA)专一抑制剂——10 μmol/L H89预处理组与蛋白激酶C(PKC)专一抑制剂——10 μmol/L恩扎妥林预处理组(预处理5 min,0.8 mmol/L MP处理3h).采用ELISA法检测培养液中孕酮含量,划痕标记染料转移法测定贴壁细胞的GJIC.结果 高浓度(0.2～1.6 mmol/L)MP可明显抑制小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌(P＜0.05);异丙肾上腺素、H89和恩扎妥林均能缓解MP对体外小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌的抑制作用(P＜0.05).结论 MP可通过抑制小鼠黄体细胞的GJIC导致孕酮分泌受抑制,而PKA与PKC参与该过程.     

镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞毒性和细胞间隙连接通讯的影响

目的探讨镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞（CHL）毒性和细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法以CHL细胞为靶细胞，采用噻唑蓝（MTT）颜色反应法，检测2份镍冶炼烟尘对CHL细胞的毒性作用。采用划痕标记染料示踪技术（scrape-loading and dye transfer，SLOT）检测镍冶炼烟尘对CHL细胞GJIC的影响。结果2份受试物各剂量组在作用6、12h时，CHL细胞增殖情况与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），作用36h时，所有剂量组细胞存活率均降低，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），并呈现剂量-反应和时间-反应的关系。2份受试物作用CHL细胞36h时IC50分别为21．36、23．07μg／ml。镍冶炼烟尘在25．00、50．00、100．00μg/／ml时，荧光黄（LY）由伤沿列传向邻近细胞的列数减少，与溶剂对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01），细胞间隙连接通讯能力降低。结论镍冶炼烟尘对体外培养的CHL细胞可产生毒性作用。抑制细胞生长。一定浓度的镍冶炼烟尘能够抑制CHL细胞的GJIC。