黄芩素通过ERK/ELK-1/Snail信号通路抑制食管鳞癌细胞转移的机制

研究黄芩素对人食管鳞癌转移的影响及可能的作用机制。采用划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验分别考察黄芩素对食管鳞癌细胞(EC9706和KYSE30)迁移和侵袭能力的影响;使用KYSE30细胞构建裸鼠肺转移模型考察黄芩素在体内对食管鳞癌转移的影响。本文中动物福利和实验过程均遵循河南大学动物伦理委员会的规定。使用Western blot法检测黄芩素对食管鳞癌细胞中ERK/ELK-1/Snail信号通路相关蛋白表达的影响。实验结果显示:黄芩素能够显著地降低EC9706和KYSE30细胞的迁移和侵袭能力;黄芩素在体内对食管鳞癌转移也具有很强抑制作用;分子机制研究发现,黄芩素显著地降低ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,T202/Y204)和ELK-1(ETS-domain containing protein-1,S383)的磷酸化,下调果蝇蜗牛同源蛋白(Snail)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,同时促进上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达;使用ERK1/2抑制剂U0126或siRNA能够显著地增强黄芩素对以上蛋白的调节作用。综上所述,黄芩素可能通过调节ERK/ELK-1/Snail信号通路抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭和转移。     

miR-25对食管癌EC109细胞侵袭和迁移能力的 影响及临床意义

目的 探索 miR-25 对食管癌侵袭和迁移能力的影响以及作为食管癌诊断生物标志物的潜力。方法 （1）荧光定量PCR（qPCR）检测54例早期食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-25表达水平。（2）人食管癌细胞EC109 分为miR-25 mimic组、NC mimic组、miR-25 inhibitor组和NC inhibitor组。转染相应序列后,qPCR检测miR-25转染 效率。Transwell实验检测过表达或敲低miR-25对EC109细胞侵袭和迁移的影响。Targetscan数据库预测miR-25的 靶基因,选定靶基因盐诱导激酶1（SIK1）基因。Western blot 和双荧光素酶报告实验鉴定miR-25与SIK1的靶向关 系。（3）EC109 细胞分为 pcDNA 3.1 组、SIK1 过表达组和 miR-25+SIK1 过表达组。Transwell 实验检测 miR-25 靶向 SIK1对EC109细胞侵袭和迁移能力的影响。（4）提取食管癌患者（54例）和健康对照者（54例）的血浆外泌体,比较2 组血浆外泌体中miR-25的相对表达量,分析食管癌患者癌组织和血浆外泌体中miR-25的相关性。结果 （1）食管 癌组织中 miR-25 相对表达水平高于癌旁组织。（2）过表达 miR-25 后,EC109 细胞侵袭和迁移能力增强,而敲低 miR-25 表达后,细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot 结果显示,过表达 miR-25 后,SIK1 蛋白表达下降;反之, 敲低miR-25后SIK1蛋白表达升高。（3）Transwell实验显示,与pcDNA 3.1组相比,SIK1过表达组EC109细胞侵袭和 迁移的细胞数量减少,而miR-25和SIK1联合作用后,EC109侵袭和迁移的细胞数量较SIK1过表达组增多。（4）食管 癌血浆外泌体样本中miR-25的表达量高于健康对照,且miR-25在食管癌组织中的表达与血浆外泌体中的相对表达 量呈正相关。结论 miR-25可能通过靶向调控SIK1来促进食管癌细胞的侵袭和迁移,且miR-25有作为食管癌早 期诊断生物标志物的潜力。     

靶向METCAM/MUC18的siRNA调节肝癌细胞迁移、侵袭的实验研究

目的　研究靶向METCAM/MUC18 的siRNA 在肝癌细胞迁移、侵袭中的作用。方法　培养肝癌细胞株HepG2 并转染MUC18 的siRNA 和阴性对照（NC）的siRNA，转染siRNA 后检测细胞的迁移和侵袭数目、MMPs 及上皮间质转化标志基因的mRNA 表达量。结果　MUC18-siRNA 组HepG2 细胞中MUC18 的mRNA 表达量显著低于NC-siRNA 组；转染siRNA 后12 h、24 h，MUC18-siRNA 组HepG2 细胞的迁移数目和侵袭数目均显著低于NC-siRNA 组；转染siRNA 后24 h，MUC18-siRNA 组HepG2 细胞MMP8、MMP9、MMP14、N-cadherin、Vimentin 的mRNA 表达量均显著低于NC-siRNA 组，E-cadherin 的mRNA 表达量显著高于NC-siRNA 组。结论　靶向METCAM/MUC18 的siRNA 能够通过抑制MMPs 表达和上皮间质转化来抑制肝癌细胞的迁移、侵袭过程。     

STAT3-siRNA对人甲状腺癌SW579细胞株增殖侵袭的影响

目的研究小干扰RNA-siRNA对人甲状腺癌SW579细胞STAT3表达及细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法将STAT3-siRNA转染给人甲状腺癌SW579细胞来沉默STAT3的表达。用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blotting测定STAT3mRNA和蛋白的表达。用甲基噻唑基四唑（MTT）来分析STAT3STAT3-siRNA对癌细胞的生长抑制作用。通过RT-PCR检测MMP2和MMP9mR-NA的表达,Transwell侵袭小室实验研究癌细胞的体外侵袭能力。结果STAT3-siRNA能有效而稳定地抑制甲状腺癌SW579中STAT3的表达,下调STAT3可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长,在转染后24、48、72h,转染STAT3特异性的siRNA组生长抑制率显著高于对照组。siRNA沉默STAT3基因后,肿瘤细胞的体外侵袭能力明显下降。结论下调STAT3可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长和侵袭能力,STAT3特异性siRNA作为一种治疗肿瘤的新途径值得进一步研究。     

靶向MMP-9的siRNA抑制人类SGC7901胃腺癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-9)siRNA对胃腺痛细胞系SGC7901中MMP-9表达的影响以及siRNA干扰后对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用.方法:设计合成针对MMP-9的siRNA,采用oligofectamine转染SGC7901胃腺癌细胞,分别采用实时定量聚合酶链反应(realtime PCR)和蛋白印迹法分别检测转染细胞后MMP-9mRNA及蛋白的表达.Matrgel 3D生长实验和Transwell实验检测细胞侵袭情况,Matrgel 2D生长实验和划痕实验检测细胞迁移情况.结果:realtime PCR和蛋白印迹法显示转染MMP-9 siRNA后细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达较空白组和对照组明显降低.RNA干扰MMP-9基因后SGC7901细胞的侵袭和迁移能力也有明显下降.结论:靶向MMP-9的siRNA不仅能特异性的降低MMP-9 mRNA及蛋白的表达,且能抑制人SGC7901胃腺癌细胞的侵袭和迁移.     

白藜芦醇对食管癌细胞的影响

目的 观察白藜芦醇对食管癌细胞KYSE150的抑制及侵袭性能的影响。方法 体外培养食管癌细胞KYSE150,用甲基噻唑蓝（MTT）法观察评价白藜芦醇对KYSE150的毒性,了解药物对细胞的抑制作用与时间、浓度的关系,并计算最高抑制率时间的IC50值;用Transwell侵袭小室观察KYSE150在不同实验条件下的侵袭能力变化。结果 MTT实验表明,白藜芦醇在0.16-100μg/mL浓度范围内对KYSE150的生长抑制作用具有浓度依赖性,24h抑制率达高峰。24h白藜芦醇对KYSE150的半数致死剂量：IC50=0.76μg/mL;白藜芦醇组与对照组相比,肿瘤细胞的侵袭能力下降,差异具有统计学意义。结论 白藜芦醇对食管癌细胞KYSE150具有抑制作用,降低肿瘤细胞的侵袭性。     

甲氟奎对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的 研究甲氟奎对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制.方法 运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)法检测甲氟奎(5、10、15、30μmol/L)对食管鳞癌细胞KYSE140的增殖的调控,筛选最适浓度30μmol/L;用β连环素(β-catenin)信号通路激活剂Wnt3a或二甲基亚砜(DMSO)与30μmol/L甲氟奎共处理KYSE140细胞48 h.Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中β-catenin、周期素依赖激酶抑制剂p21、增殖细胞核抗原(PC-NA)、神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏素(E-cadherin)的蛋白表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中β-catenin的表达.结果 甲氟奎可呈浓度依赖性抑制食管鳞癌细胞KYSE140的增殖,最适浓度为15μmol/L;在24、48和72 h时对照组细胞吸光度分别为(0.21±0.02)、(0.52±0.04)、(1.19±0.10),15μmol/L甲氟奎组细胞吸光度分别为(0.21±0.01)、(0.34±0.03)、(0.68±0.06);对照组迁移和侵袭细胞数分别为(120±8)个、(80±6)个,甲氟奎组迁移和侵袭细胞数分别为(62±5)个、(45±4)个,甲氟奎可明显的抑制KYSE140细胞的增殖、迁移和侵袭,上调p21、E-cadherin,下调PCNA、N-cadherin;最重要的是,甲氟奎可明显的抑制β-catenin信号通路的关键基因β-catenin的表达,且激活β-catenin信号通路可逆转甲氟奎对KYSE140细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制.结论 甲氟奎可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制与抑制β-catenin信号通路的活性相关,将可为甲氟奎治疗食管鳞癌提供更充分的依据.     

沉默KLF4表达对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响

目的 筛选有效沉默KLF4基因表达的siRNA,观察KLF4基因沉默对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响.方法 设计并化学合成针对人KLF4基因的3对siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3),转染人肝星状细胞HSC-LX2,以转染非特异siRNA作为阴性对照.采用实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)和Western blot方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默KLF4效果最好的1个siRNA,将其转染入HSC-LX2后,用MTT法检测KLF4沉默对HSC-LX2增殖的影响.采用ELISA法检测细胞培养上清中的转化生长因子1(transforming growth factor,TGF-1)、白介素1(interleukin-1,IL-1)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达情况.结果 Real-time RT-PCR和western blot均显示siRNA3沉默效果最好.故后续试验均采用siRNA3沉默KLF4的表达.MTT实验结果 显示,在转染siRNA3,12 h、24 h和48 h后,细胞活力出现明显下降.ELISA结果 显示,转染siRNA3,48 h以后,TGF-β1、TNF-α、IL-1β表达量也明显降低.结论 siRNA3可有效沉默KLF4基因表达,KLF4基因沉默可以抑制HSC-LX2的增殖,影响其生物学行为,使细胞中的促进胶原表达的三种细胞因子TGF-1、TNF-α以及IL-1表达量下降.     

罗哌卡因对食管鳞癌细胞FAK/ERK通路及细胞学行为的影响

摘要：目的:观察罗哌卡因对人食管鳞状癌细胞（KYSE150）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养KYSE150细胞,随机分为对照组、罗哌卡因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(10,20,50μg·ml-1)。采用噻唑蓝（MTT）法检测罗哌卡因对KYSE150细胞的增殖抑制作用;划痕实验检测各组KYSE150细胞迁移能力变化情况; Transwell法检测各组KYSE150细胞的侵袭能力; Annexin V-FITC/PI双染法检测各组KYSE150细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹分析法检测黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK（p-FAK）、信号调节激酶（ERK）、磷酸化ERK （p-ERK）蛋白表达情况。结果:与对照组相比,罗哌卡因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组KYSE150细胞存活率依次降低（P<0.05）,并呈剂量依赖性（P<0.05）;与对照组相比,罗哌卡因Ⅰ组KYSE150细胞愈合率、侵袭数量、凋亡率、p-FAK和p-ERK蛋白表达量差异均无统计学差异（P>0.05）;与对照组及罗哌卡因Ⅰ组相比,罗哌卡因Ⅱ、Ⅲ组KYSE150细胞愈合率、侵袭数量、p-FAK和p-ERK蛋白表达量依次降低（P<0.05）,KYSE150细胞凋亡率依次升高（P<0.05）;各组KYSE150细胞中FAK和ERK蛋白表达量差异无统计学意义（P>0.05）。结论:罗哌卡因可能通过下调p-FAK/pERK蛋白表达水平从而影响人食管鳞状癌细胞迁移、侵袭和凋亡行为。     

抑制Bmi-1基因表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的利用小干扰RNA技术沉默Bmi-1基因的表达,探讨其对人鼻咽癌CNE-1生物学行为的影响。方法设计并化学合成了针对Bmi-1的小干扰RNA,转染具有高转移性的CNE-1细胞,利用qRT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达水平。体外通过Transwell小室、Matrigel胶模型﹑流式细胞术,观察Bmi-1被沉默后对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响。结果 qRT-PCR和Western结果显示,Bmi-1-siRNA转染组Bmi-1基因的表达水平被有效抑制。与对照组相比,Bmi-1-siRNA转染组的细胞侵袭迁移力明显下降,细胞被阻滞在S期。结论抑制Bmi-1基因的表达可有效降低CNE-1细胞侵袭迁移的能力。     

Krüppel 样因子4 在神经母细胞瘤中的表达及其与细胞 增殖和侵袭的关系

目的观察Krüppel样因子4(KLF4)在神经母细胞瘤中的表达及其对神经母细胞瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法RT-PCR和免疫组织化学法检测神经母细胞瘤组织及癌旁组织中KLF4的表达。采用电穿孔转染法将KLF4 siRNA转入神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中,MTT检测KLF4对神经母细胞瘤SK-N-MC细胞增殖的影响,Boyden小室检测KLF4对神经母细胞瘤SK-N-MC细胞侵袭的影响。结果与癌旁组织相比,神经母细胞瘤组织中KLF4表达水平显著降低,并随病理分期的升高而降低(P<0.05)。转染KLF4 siRNA可显著下调神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中KLF4的表达,而KLF4表达下调可显著促进SK-N-MC细胞的增殖和迁移(P<0.01)。结论KLF4可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖和侵袭,KLF4低表达可能与神经母细胞瘤的发生和发展密切相关。     

MACC1基因下调对胃腺癌细胞的生长抑制作用

目的研究下调MACC1 表达对胃腺癌细胞株MGC-803 生长作用的影响。方法设计并合成RNAi 干扰片段,脂质体介导MACC1-siRNA1（MACC1-siRNA1 组）和MACC1-siRNA2（MACC1-siRNA2 组）转染MGC-803 细胞,同时设非特异性干扰片段为对照组。应用qRT-PCR 检测转染后各组MACC1 的mRNA 表达,噻唑蓝比色实验、平板克隆形成实验和流式细胞周期实验检测RNAi 转染后MGC-803 细胞增殖能力的变化,Western blot 检测转染后MACC1、P21、CDK4、CCND1 和c-myc 蛋白的表达,并进行比较分析。结果与对照组相比,MACC1-siRNA1 组和MACC1-siRNA2 组MACC1 表达在mRNA 及蛋白水平下降,细胞的增殖速度变慢,单克隆形成数量减少,细胞周期中G1 期细胞的比例显著升高,P21 的表达增加,MACC1、CDK4、CCND1 和c-myc 的表达减少。结论下调 MACC1 能使MGC-803 细胞的细胞周期进程受阻,抑制细胞的增殖,MACC1 可以作为治疗胃癌的有效靶点。     

敲减microRNA-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肾细胞癌增殖和转移

目的探究miR-27a在肾细胞癌(RCC)增殖与转移中的作用及其机制。方法RT-qPCR检测RCC癌组织、癌旁组织、RCC细胞(Caki-1、786-O和ACHN)和正常肾小管上皮细胞(HK2)中miR-27a表达。将miR-27a inhibitor转入786-O和ACHN细胞,CCK-8实验检测细胞增殖;集落形成实验检测细胞集落形成;伤口愈合实验和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭;Western blot和免疫荧光检测β-catenin表达。采用LiCl(Wnt/β-catenin信号激动剂)处理已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞后,检测细胞增殖、侵袭与迁移。结果RCC癌组织中miR-27a表达量明显高于癌旁组织,并随分期进展而增加。与HK2细胞相比,RCC细胞中miR-27a表达均升高。转染miR-27a inhibitor后,786-O和ACHN细胞的集落形成、细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。miR-27a inhibitor降低ACHN细胞中β-catenin的表达,LiCl能促进已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结论miR-27a在RCC癌组织及RCC细胞中高表达,敲减miR-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制RCC细胞增殖和转移。     

RNA干扰对乳腺癌细胞骨桥蛋白基因表达抑制的研究

目的应用RNA干扰术靶向降低乳腺癌MCF-7细胞中骨桥蛋白基因（OPN）的表达水平,研究OPN基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭性等生物学行为的影响。方法将设计合成的骨桥蛋白OPN序列特异性小分子干扰RNA（siRNA）,转染乳腺癌细胞株MCF-7,用逆转录PCR和蛋白印记杂交测OPN mRNA及蛋白水平的表达,通过生长曲线、克隆形成实验来检测细胞增殖及侵袭性情况的变化。结果OPN特异性siRNA转染后,骨桥蛋白mRNA及蛋白水平均明显下降,比色法显示转染组72h吸光度值为（0．21±0．06）与空白对照组（1．18土0．05）相比较明显受到抑制。转染组细胞克隆形成数为3．8个,较空白对照组（7．3个）及阴性对照组（7．1个）明显下降（P〈0．05）。结论乳腺癌MCF-7细胞中,针对OPN合成的siRNA能够有效地抑制骨桥蛋白的表达,从而显著抑制细胞的增殖和侵袭能力。     

长链非编码RNA UCA1对人下咽鳞状细胞癌FaDu 细胞增殖、侵袭、凋亡及周期的影响

摘要：目的探讨长链非编码RNA尿路上皮癌抗原1（lncRNA UCA1）对人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞增殖、侵袭、凋亡及周期的影响。方法向FaDu细胞转染UCA1-siRNA（si-UCA1组），以转染阴性干扰RNA为阴性对照组（si-NC组），以未转染组为空白对照组（Control组），通过实时荧光定量PCR确定UCA1-siRNA的干扰效果；通过CCK-8实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术分别检测UCA1-siRNA对FaDu细胞增殖、侵袭以及细胞周期的影响；Western blot实验检测UCA1-siRNA对FaDu细胞增殖、凋亡及周期相关因子Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase 9、cyclin D1和PCNA蛋白表达的影响。结果si-UCA1可有效下调FaDu细胞中UCA1的表达，与Control组及si-NC组相比，si-UCA1组FaDu细胞增殖及侵袭能力显著降低，G1期细胞比例显著升高，S期及G2期细胞比例显著下降，凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase 9表达水平显著升高，Bcl-2表达水平显著下调，细胞周期、增殖相关蛋白cyclin D1、PCNA表达水平显著降低（P＜0.05）。结论下调lncRNA UCA1的表达可抑制下咽鳞状细胞癌FaDu细胞增殖、侵袭能力，阻滞细胞周期，并可促进FaDu细胞凋亡。     

RNAi沉默核因子-B亚单位p65表达抑制胃癌细胞侵袭

目的采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术敲除胃癌细胞核因子-kappa B（nucle-ar factor-B,NF-B）亚单位p65后,观察其对细胞增殖和侵袭力的影响。方法采用p65小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染胃癌细胞后,采用Western Blot检测细胞p65蛋白,分别采用软琼脂集落培养试验和Ttanswell检测癌细胞增殖和侵袭能力。结果 siRNA转染组细胞p65蛋白明显被抑制,且呈浓度依赖性。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性。结论针对NF-B重要亚单位的p65siRNA可抑制胃癌细胞侵袭。研究发现,NF-B途径的激活是胃癌等肿瘤细胞生存的重要机制之一。     

钙激活的氯离子通道 A4通过抑制 JAK激酶 2/信号转导及转录激活蛋白 3信号通路对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨钙激活的氯离子通道A4(CLCA4)对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3(JAK2/STAT3)信号通路的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测正常人食管鳞状上皮细胞与人食管癌细胞中CLCA4的表达;将合成的CLCA4过表达载体及其对照分别转染至食管癌细胞Eca109,分别记作CLCA4过表达(pcDNA-CLCA4)组、CLCA4阴性对照(pcDNA-NC)组,并将未转染的细胞作为阴性对照(NC)组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;细胞迁移实验(Transwell)检测细胞迁移及侵袭能力.JAK2/STAT3信号通路激活剂p-JAK2多肽对细胞增殖、迁移及侵袭的影响.Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cy-clinD1)、依赖性激酶抑制因子(P21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、JAK2、STAT3、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)的表达水平.结果 与Het-1A相比,人食管癌细胞KYSE170、Eca109、TE10中CLCA4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);与pcDNA-NC组比较,pcDNA-CLCA4组细胞存活率显著降低[(52.16±11.41)％比(99.57±13.49)％,P<0.05],迁移细胞数[(56.47±10.03)％比(112.49±13.52)％]与侵袭细胞数[(63.43±9.87)％比(123.47±16.58)％]减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3的表达水平降低(P<0.05),P21的表达水平升高(P<0.05);激活JAK2/STAT3信号通路可逆转CLCA4过表达对Eca109细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 CL-CA4过表达可抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关.     

薯莨提取物通过 KTN1反义 RNA 1对食管癌细胞生物行为的影响

目的研究薯莨提取物是否影响食管癌细胞的生物学行为。方法自 2019年 1月至 2020年 1月,采用( 10、20和 30 mg/L)浓度的薯莨提取物处理食管癌 Eca109细胞,分别记为薯莨 -L组、薯莨 -M组、薯莨 -H组,另以未加薯莨提取物的 Eca109细胞作为对照组。细胞计数试剂盒 8(CCK-8)测定细胞增殖,克隆形成实验分析细胞克隆能力,蛋白质印迹法检测周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)、上皮钙黏素( E-cadherin)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)蛋白表达, Transwell分析细胞迁移、侵袭,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测长链非编码 RNA(lncRNA)KTN1反义 RNA 1(KTN1-AS1)表达。在 Eca109细胞中转染 KTN1-AS1小干扰 RNA(si-KTN1-AS1),或转染 KTN1-AS1过表达质粒( pcDNA3.1-KTN1-AS1)并使用薯莨提取物处理,观察其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与对照组相比,薯莨 -L组、薯莨 -M组、薯莨 -H组 Eca109细胞的抑制率［( 1.06±0.21)%比( 19.25±1.68)%比( 38.57±3.69)%比( 62.14±6.06)%］、 P21、E-cadherin蛋白水平明显提高,细胞的克隆形成数、迁移细胞数［( 142.00±11.59)比( 121.00±11.07)比( 94.00±9.26)比( 73.00±7.15)］、侵袭细胞数［( 81.00±8.03)比( 67.00±6.21)比( 50.00±5.04)比(37.00±3.56)］、 MMP-2蛋白表达量、 KTN1-AS1表达量显著减少( P<0.05)均呈浓度依赖性。抑制 KTN1-AS1明显增加 Eca109细胞的抑制率［(1.04±0.17)%比( 47.81±4.55)%］、 E-cadherin、P21蛋白表显著降低迁移细胞数［(144.00±13.52)比达量,(85.00±8.51)］、侵袭细胞数［(80.00±8.11)比( 47.00±4.36)］、克隆形成数和 MMP-2蛋白水平( P<0.05)。过表达 KTN1-AS1能减弱薯莨提取物对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论薯莨提取物通过下调食管癌细胞中 KTN1-AS1的表达,发挥抑制细胞增殖、迁移和侵袭的作用。     

小干扰RNA 抑制Pokemon表达对肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109 增殖的影响

目的：探讨Pokemon特异性小干扰RNA对肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109 增殖的影响.方法：瞬时转染Pokemon特异性小干扰RNA至肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109,RT-PCR、Western Blot技术检测转染后细胞中Pokemon的mRNA和蛋白表达水平,检测细胞的增殖及细胞周期变化.结果：与空白组和阴性对照组相比,瞬时转染Pokemon小干扰RNA后,肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109中Pokemon的mRNA水平均下降至25%～35%,蛋白水平亦明显下降.细胞增殖能力在培养24,48,72 h均显著降低（P＜0.05）.细胞周期分析显示转染Pokemon小干扰RNA后S期的比例显著高于siRNA阴性对照组（A549细胞：55.7%±2.5% vs 42.7%±0.6%,P＜0.01;EC109细胞：67.7%±2.5% vs 52.0%±2.0%,P＜0.01）.G1期的比例显著低于siRNA阴性对照组（A549细胞：33.0%±2.0% vs 45.3%±1.5%,P＜0.01;EC109细胞：30.7%±1.2% vs 44.0%±1.7%,P＜0.01）.两种细胞均阻滞于S期.结论：Pokemon小干扰RNA可抑制肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109 的增殖.