板蓝根水提物对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的探讨板蓝根水提物(water extract of Radix Isatidis,WERI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其作用机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法和流式细胞技术检测WERI对细胞增殖的影响;鸡尾酒诱导剂诱导3T3-L1前脂肪细胞,油红O染色和比色分析法观察WERI对前脂肪细胞分化及脂肪积累的影响;采用RT-PCR检测脂肪细胞的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)及CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA的表达;Western blot法检测PPARγ及C/EBPα蛋白表达。结果WERI在一定浓度范围内能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,同时细胞周期呈现G_0/G_1向S期阻滞;与空白组相比,用不同浓度的WERI处理后,3T3-L1前脂肪细胞的分化受到明显抑制,且细胞内脂滴生成量明显减少;PCR及Western blot结果显示,WERI还可以抑制脂肪细胞PPARγ和C/EBPα基因及蛋白的表达。结论 WERI具有抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖作用,并可通过下调PPARγ和C/EBPαmRNA及蛋白表达来抑制细胞成脂分化。     

小檗碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

脂肪细胞的增多是由于前脂肪细胞的不断分化引起。小檗碱是中药黄连的成分，具有改善胰岛素抵抗、降低血糖和调节血脂紊乱的作用，可用于治疗2型糖尿病，但它是否参与脂肪细胞的增殖和分化过程，目前尚不清楚。本研究通过小檗碱干预小鼠前脂肪细胞观察其对该细胞增殖和分化的影响，为肥胖的2型糖尿病的治疗提供可能的途径。     

太子参提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的 探索太子参提取物对3 T3-L1前脂肪细胞分化的影响.方法 采用超声提取法获得太子参乙醇提取物,再分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行连续萃取,用得到的太子参各溶剂萃取层作用于3 T3-L1前脂肪细胞分化模型,以罗格列酮为阳性对照药,并通过油红O染色观察其对前脂肪细胞分化过程的影响.结果 太子参乙醇提取物及各极性溶剂萃取层在0.4μg·mL-1和0.8μg·mL-1两个浓度下均能在一定程度上促进前脂肪细胞的分化过程,而且乙酸乙酯萃取层活性最强.结论 太子参乙酸乙酯萃取层具有较好的促进3 T3-L1前脂肪细胞分化的活性.     

吡格列酮衍生物CQMUHS-03对3T3-L1细胞增殖分化的影响

目的研究吡格列酮衍生物CQMUHS-03对3T3-L1细胞增殖及诱导分化的影响,为CQMUHS-03的临床应用提供理论基础。方法 (1)不同浓度药物处理细胞,于24、48、72h,MTT法检测CQMUHS-03对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。(2)建立3T3-L1细胞诱导分化模型,药物处理后经油红O染色,拍照后并测定570 nm处光密度值以确定有效药物干预浓度。(3)Western blot测定药物对PPARγ蛋白表达的影响。(4)Real-time PCR分析PPARγ基因表达。结果(1)经24、48、72 h MTT检测,1×10-6mol·L-1浓度以下的CQMUHS-03对3T3-L1细胞增殖的抑制作用弱,IC50为3.33×10-4mol·L-1,高于吡格列酮(2.91×10-4mol·L-1)。(2)油红O染色测定结果显示吡格列酮促进3T3-L1前脂肪细胞分化,而CQMUHS-03对3T3-L1前脂肪细胞的分化促进作用不明显。(3)Real-time PCR检测显示诱导分化8 d,吡格列酮组PPARγmRNA表达上调5.12倍,CQMUHS-03组PPARγmRNA表达上调2.29倍。(4)Western blot结果显示,CQMUHS-03使PPARγ的表达增高。结论吡格列酮衍生物CQMUHS-03对3T3-L1细胞抑制增殖作用弱于吡格列酮,对细胞分化无明显促进作用,能上调PPARγ基因和蛋白表达。     

3T3-L1前脂肪细胞分化过程中miRNAs基因的表达变化

目的:探讨3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中miRNAs基因的表达变化。方法:运用经典的"激素鸡尾酒"法建立3T3-L1前脂肪细胞分化模型。采用实时定量聚合酶链式反应方法检测不同时相点(0d、2h、2d、4d)细胞分化相关标志物的表达和20种miRNAs的表达变化,采用生物信息学方法对变化显著的miRNAs进行靶基因预测。结果:成功建立3T3-L1前脂肪细胞分化模型。不同时相点细胞分化相关标志物基因水平提示3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞。20种miRNAs中以miR-126、miR-214、miR-320、miR-351的表达最为显著。靶基因预测结果显示,miR-126靶基因有影响细胞增殖的转录因子Crk、代谢相关基因Irs1等;miR-214靶基因有转录因子Zbtb20、Kpna1等;miR-320靶基因有影响代谢相关基因Igf2bp3、Gxylt1等;miR-351靶基因有Myt1、Mcl1、Bmf等。结论:miR-126、miR-214、miR-320、miR-351可通过影响基因转录及细胞代谢水平,从而对3T3-L1前脂肪细胞分化发挥作用,为开发治疗肥胖等疾病的新药提供了新的研究思路。     

西红花酸对3T3-L1前脂细胞增殖和分化的影响

目的：观察西红花酸对3T3-L1前脂细胞增殖分化的影响,并探讨其影响3T3-L1细胞分化的可能作用机制。方法：培养前脂肪细胞3T3-L1,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测西红花酸对其生长活性和增殖的影响;油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度;逆转录多聚酶联反应（RT-PCR）检测腺苷酸激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）mRNA的表达;Western blot法检测p-AMPK蛋白表达水平。结果：西红花酸高、中剂量（10-5、10-6mol/L）组均可以显著抑制前脂细胞的增殖和分化（P〈0.01）,而低剂量组（10-7mol/L）也可以抑制其增殖、分化（P〈0.05）;各剂量的西红花酸都能够增加AMPK的mRNA的表达、提高p-AMPK蛋白表达水平（P〈0.05）。结论：西红花酸具有抑制前脂细胞增殖分化的作用,可能和增强AMPK的表达有关。     

中药对3T3-L1前脂肪细胞分化、增殖和凋亡影响的研究进展

3T3-L1前脂肪细胞从17—19日龄小鼠胚胎Swiss3T3细胞中分离获得,其具有单一分化潜能,可通过细胞增殖过程达到细胞生长抑制,从生长周期退出的细胞经诱导激素诱导,开始出现脂肪细胞的表型,     

Adiponutrin mRNA在分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中的表达

随着研究的深入,现已发现脂肪组织是全身较为重要的内分泌器官。脂肪产生的因子包括瘦素、脂联素、TNF-α、IL-6和Perilipin等。已经证实许多脂肪产生的蛋白在能量平衡方面有着重要的作用。Adiponutrin是新近发现的一种非分泌蛋白[1],它主要表达在脂肪组织中,包括白色脂肪组织如     

海地瓜硫酸软骨素通过Wnt信号通路抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的研究

目的 探究海地瓜硫酸软骨素(Acaudina Molpadioides chondroitin sulfate, AM-CHS)抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的分子机制。方法 采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,分别采用油红O染色和甘油三酯(Triglycerides, TG)含量测定法评价AM-CHS对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。采用RT-PCR法检测脂肪细胞中Wnt信号通路关键基因和脂肪合成关键基因mRNA的表达水平。结果 AM-CHS能够显著抑制3T3-L1细胞脂滴的形成,拮抗罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)的促分化作用,并上调Wnt信号通路中的关键受体Frz和LRP5的mRNA表达,下调分化转录因子PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c mRNA的表达,抑制脂质合成基因FAS和GPAT mRNA的表达,不影响脂质分解基因HSL和ATGL mRNA的表达。结论 AM-CHS能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,抑制成熟脂肪细胞的脂质合成,并拮抗罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)的促脂质合成作用,其作用机制与激活Wnt信号通路有关。     

胡黄连苷I、II通过调节C/EBP-PPARγ通路抑制3T3-L1脂肪前体细胞的分化和脂肪合成

目的 探讨胡黄连主要有效成分胡黄连苷I、II对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响。方法 采用MTT法检测胡黄连苷I、II对3T3-L1细胞活力的影响,确定给药浓度;使用诱导分化培养基诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,通过油红O染色法观察胡黄连苷I、II（20、40 μmol·L^-1）对细胞脂肪蓄积的影响;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测3T3-L1细胞脂肪合成相关的乙酰辅酶A羧化酶1（ACACA）、脂肪酸合酶（FASN）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1）、脂肪酸结合蛋白（FABP4）和调节脂肪合成的转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）的mRNA表达水平;Western blotting实验检测CCAAT/增强子结合蛋白β（C/EBPβ）、SCD1和PPARγ的蛋白表达。结果 浓度低于50 μmol·L^-1的胡黄连苷I、II处理不会影响细胞的存活率;与对照组比较,模型组在诱导分化后细胞形态变圆,油红O染色显示细胞中有大量脂肪蓄积（P＜0.01）;与模型组比较,胡黄连苷I、II显著减少了脂肪蓄积（P＜0.01）。与对照组比较,模型组ACACA、FASN、SCD1、FABP4、PPARγ和SREBP1的mRNA表达均显著上调（P＜0.05、0.01）;与模型组比较,胡黄连苷I、II 20、40 μmol·L^-1均显著降低了ACACA、SCD1、FASN、FABP4、SREBP1 mRNA的表达（P＜0.05、0.01）,胡黄连苷I、II仅在40 μmol·L^-1时显著抑制SREBP1 mRNA的表达（P＜0.05、0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组PPARγ、C/EBPβ和SCD1的蛋白表达显著上调（P＜0.01）;与模型组比较,胡黄连苷I、II各浓度均显著降低了SCD1蛋白的表达（P＜0.01）,胡黄连苷I 40 μmol·L^-1和胡黄连苷II 20、40 μmol·L^-1组PPARγ、C/EBPβ蛋白的表达显著降低（P＜0.05、0.01）。结论 胡黄连苷I、II均可以显著抑制3T3-L1细胞的脂肪分化,并减少脂肪蓄积,胡黄连苷I表现出更好的剂量相关性,其作用机制可能与抑制C/EBPβ-PPARγ通路有关。     

小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立

目的建立小鼠3T3-L1前脂肪细胞的培养及诱导分化为成熟脂肪细胞的方法。方法使用含10%胎牛血清（FBS）的高糖达氏修正伊氏培养基（DMEM）-F12液体培养基在体积分数5%二氧化碳（CO2）、37℃条件下常规培养3T3-L1细胞,2~3 d换液1次;诱导分化培养基Ⅰ培养2 d,诱导分化培养基Ⅱ培养2 d;基础培养基培养4~6 d,1~2 d换液1次。结果小鼠3T3-L1前脂肪细胞状态良好,成铺路石状生长,布满培养瓶底,3 d传代1次。90%以上细胞诱导分化成功,细胞呈圆形,有大量酯滴聚集,油红O染色呈橘红色。结论建立了小鼠3T3-L1前脂肪细胞的培养方法和诱导分化方法,为肥胖相关药物研究奠定了方法基础。     

Effects of 4-nonylphenol on adipogenesis in 3T3-L1 preadipocytes and C3H/10T1/2 mesenchymal stem cells

Obesogens are a subset of endocrine disruptor chemicals (EDCs) that cause obesity. The typical EDC 4-nonylphenol (4-NP) has been identified as an obesogen. However, the in vitro effects of 4-NP on adipogenesis remain unclear. In this study, 3T3-L1 preadipocytes and C3H/10T1/2 mesenchymal stem cells (MSCs) were used to investigate the influence of 4-NP on adipogenesis. The differentiation protocols for 3T3-L1 preadipocytes and C3H/10T1/2 MSCs took 8 and 12 days, respectively, beginning at Day 0. In differentiated 3T3-L1 preadipocytes, 20 μM 4-NP decreased cell viability on Days 4 and 8. Exposure to 4-NP inhibited triglyceride (TG) accumulation and adipogenic marker expression on Days 0–8, but the inhibitory effects were weaker on Days 2–8. The protein expression of pSTAT3 or STAT3 decreased on Days 0–8 and 2–8. Conversely, 4-NP promoted TG accumulation and the adipogenic marker expression in C3H/10T1/2 adipocytes. The opposing effects were attributed to physiological differences between the two cell lines. The 3T3-L1 preadipocytes are dependent on mitotic clonal expansion (MCE) to drive differentiation, while C3H/10T1/2MSCs and human preadipocytes are not. Additionally, 4-NP downregulated β-catenin expression in C3H/10T1/2 adipocytes. Accordingly, we hypothesized that 4-NP promotes adipogenesis. The role of the canonical Wnt pathway in the promotion of adipogenesis by 4-NP requires further validation. This study provides new insights into the mechanisms and appropriate risk management of 4-NP.     

小鼠前脂肪细胞3T3-L1培养与四联诱导分化方法的探讨

摘要： 目的 改进小鼠前脂肪细胞 3T3-L1 的培养并诱导分化为成熟脂肪细胞的方法。方法 使用含有 10％胎牛血清 （FBS） 的高糖型 DMEM 液体培养基常规培养小鼠前脂肪细胞, 2~3 d 换液 1 次。细胞按诱导分化方式的不同分为三联诱导组和四联诱导组。三联诱导组诱导分化培养基Ⅰ成分为常规培养基基础上加用人胰岛素 10 mg/L, 1- 甲基-3-异丁基黄嘌呤 （IBMX）0.5 mmol/L, 地塞米松 （DEX） 1.0 μmol/L; 四联诱导组诱导分化培养基Ⅰ的成分为在三联诱导组基础上加入吲哚美辛 0.1 mmol/L。2 组均诱导分化培养基Ⅰ培养 2 d, 连续诱导 2 次后换用诱导分化培养基Ⅱ, 成分为： 高糖型 DMEM 培养基含 10 %胎牛血清、 100 U/mL 青霉素和 100 mg/L 链霉素混合液, 人胰岛素 10 mg/ L。培养 2 d, 连续诱导 2 次。倒置显微镜和油红 O 染色观察诱导前及诱导后 2 组细胞的形态变化。结果 小鼠前脂肪细胞 3T3-L1 状态良好, 呈现铺路石状生长, 均匀布满培养瓶底, 2 d 传代 1 次。四联诱导组诱导分化结果优于三联诱导组。三联诱导剂诱导前脂肪细胞后, 细胞形态并未发生明显变化。四联诱导剂诱导前脂肪细胞后, 可达到 90％以上的成熟脂肪细胞。成熟的脂肪细胞呈圆形, 有大量脂滴聚集, 油红 O 染色显现橘红色。结论 在三联诱导基础上加入吲哚美辛的四联诱导法可以更好地促进脂肪前体细胞分化。     

番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。     

Anti-obesity effects of seaweeds of Jeju Island on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes and obese mice fed a high-fat diet

The seaweeds were collected from the coast of Jeju Island, South Korea. We investigated ethanol extracts from seaweed as potential antiobesity agents by testing their effect on adipogenic differentiation in 3T3-L1 cells. Among the red algae extracts tested, the Plocamium telfairiae extract (PTE) showed the highest inhibitory effect on lipogenesis in adipocytes and, thus, was selected as a potential antiobesity agent. PTE treatment significantly decreased the expression of the adipogenic-specific proteins peroxisome proliferator-activated receptor-γ, CCAAT/enhancer-binding protein-α, sterol regulatory element-binding protein 1, and fatty acid-binding protein 4 compared with that in the untreated 3T3-L1 cells. PTE also inhibited high-fat diet (HFD)-induced obesity in male C57BL/6 mice. Oral administration of PTE significantly reduced the body weight, fatty liver, amount of white adipose tissue, and levels of triglyceride and glucose in the tested animals. Taken together, these data demonstrate that PTE can be developed as a therapeutic agent for obesity.