应用组织芯片技术对外阴尖锐湿疣和鳞状细胞癌关系的研究

为探讨外阴尖锐湿疣和鳞状细胞癌之间的关系 ,使用组织芯片和免疫组织化学技术观察 2 2 7例外阴尖锐湿疣和 2 1例外阴鳞状细胞癌 HPV16/ 18、p5 3、PCNA的表达 ,并进行了分析。结果显示 ,HPV16/ 18阳性外阴尖锐湿疣 p5 3、PCNA的阳性指数、吸光度与 HPV16/ 18阴性者差异有显著性 ,与鳞状细胞癌也有显著差异 ;HPV16/ 18阳性外阴尖锐湿疣的 PCNA表达率与鳞状细胞癌无显著差异。     

食管鳞状细胞癌组织上皮间质转化因子和E-钙黏蛋白的表达及临床病理意义

目的探讨上皮间质转化因子(Twist)和E-钙黏蛋白(E-cd)在食管鳞状细胞癌组织及正常食管鳞状上皮黏膜中的表达及其与食管鳞状细胞癌各临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测10例正常食管鳞状上皮及58例食管鳞状细胞癌石蜡切片中Twist和E-cd的表达情况;分析正常食管鳞状上皮组织及食管鳞状细胞癌组织中二者的表达与食管鳞状细胞癌患者年龄、临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系及二者表达的关系。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。结果食管正常鳞状上皮组织中Twist的阳性表达率为10%,食管鳞状细胞癌组织中Twist的表达则明显增强(53%,31/58),二者差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ～Ⅳ期中,食管鳞状细胞癌Twist的阳性表达率为73%(11/15)、53%(10/19)和42%(10/24),差异有统计学意义(P=0.011)。Ⅲ、Ⅳ期食管鳞状细胞癌中Twist的阳性表达率显著低于Ⅰ期、Ⅱ期食管鳞状细胞癌。有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌Twist的阳性表达率分别为69%(18/26)和41%(13/32),差异有统计学意义(P=0.015)。E-cd在正常食管鳞状上皮组织中的正常表达率为90%,食管鳞状细胞癌组织的正常表达率仅为28%(16/58),二者差异有统计学意义(P<0.01)。72%(42/58)的食管鳞状细胞癌组织中检测出的E-cd细胞质和(或)核表达,视为细胞膜表达降低。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中食管鳞状细胞癌,E-cd的膜表达降低率分别为55%(11/20)、72%(13/18)和90%(18/20),差异有统计学意义(P=0.005)。Ⅲ级食管鳞状细胞癌中E-cd的膜表达降低率显著高于Ⅰ、Ⅱ级。有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌中E-cd的膜表达降低率分别为77%(20/26)和69%(22/32),差异有统计学意义(P=0.019)。结论 Twist的表达与食管鳞状细胞癌的临床分期和淋巴结转移相关,E-cd的膜表达降低与食管鳞状细胞癌的低分化和淋巴结转移相关。食管鳞状细胞癌中Twist和E-cd的表达呈负相关。     

Yes相关蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在口腔鳞状细胞癌中的表达情况及其与p53表达的关系。方法采用免疫组织化学法对29例高分化、19例中分化、12例低分化口腔鳞状细胞癌组织及10例正常口腔黏膜组织的YAP及p53蛋白表达情况进行检测。结果与正常口腔黏膜组织(20.0%)相比,YAP在口腔鳞状细胞癌(83.3%)中的表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。YAP的表达与口腔鳞状细胞癌的年龄、性别、发病部位、淋巴结转移等临床病理特征无关(P>0.05)。p53在口腔鳞状细胞癌组织中阳性率为71.7%(43/60)。口腔鳞癌中YAP与p53的表达呈正相关(r=0.343,P<0.05)。结论 YAP在口腔鳞状细胞癌中表达明显增高,且与p53表达相关,二者共同参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展。     

p53与PTEN基因在喉鳞癌中的表达及意义

目的 探讨p53与PTEN的联合表达与人喉鳞状细胞癌(LSCC)的发生、发展及预后的关系.方法 应用免疫组化SP方法检测60例LSCC组织及20例癌旁组织中p53和PTEN蛋白表达.结果 (1)在LSCC组织中,p53蛋白表达阳性率为51.2%(31/60),在癌旁组织中,其阳性率为零(0/20).(2)PTEN在LSCC组织中的表达缺失率为30%(18/60),显著低于癌旁组织中的5%(1/20)(P＜0.05).(3)p53在Ⅰ～Ⅱ期喉癌组织中的表达阳性率为35.7%(10/28),显著低于Ⅲ～Ⅳ期喉癌组织的62.5%(20/32)(P＜0.05);p53在无颈淋巴转移组表达阳性率为38.7%(19/49),显著低于有颈淋巴转移组的81.8%(9/11)(P＜0.05).(4)PTEN在Ⅰ～Ⅱ期喉癌组织中的表达缺失率为17.8%(3/28),显著低于Ⅲ～Ⅳ期喉癌组织的40.6%(13/32)(P＜0.05);PTEN在无颈淋巴转移的喉癌组织中的表达缺失率为20.4%(10/49),显著低于伴颈淋巴转移的喉鳞癌组织的72.7%(8/11)(P＜0.05).LSCC组织中,PTEN表达缺失组p53阳性表达率为33.3%(6/18),显著低于PTEN蛋白表达阳性组的61.9%(26/42)(P＜0.05).结论 p53和PTEN可能在喉鳞癌的发生、发展中起重要的作用.     

异黏蛋白和p53在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的研究异黏蛋白(MTDH)和p53基因在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特点之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测78例食管鳞癌患者的食管鳞状细胞癌组织、25例上皮内瘤变和25例正常食管黏膜组织中MTDH和P53蛋白的表达情况。结果 MTDH在正常食管黏膜组织、高级别上皮内瘤变、食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为8%、64%和72%(P<0.01),MTDH与食管鳞状细胞癌的分化程度、淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05)。P53蛋白在正常食管黏膜组织、上皮内瘤变、食管鳞状细胞癌组织中的表达亦逐渐升高,分别为4%、48%、58%(P<0.01)。P53蛋白与食管鳞状细胞癌组织分化程度差异有统计学意义(P<0.05),有淋巴结转移食管癌患者P53蛋白阳性率高于无淋巴结转移者(65%、47%),但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。MTDH和P53蛋白的表达与患者年龄、性别、浸润深度无关。结论 MTDH和P53蛋白的过度表达与食管鳞状细胞癌的发生、发展密切相关,在食管癌的侵袭和转移过程中发挥了重要作用,可作为预测食管癌预后的重要指标。     

HPV DNA和E6/E7 mRNA检测对宫颈病变诊断价值比较研究

目的评价高危HPVE6/E7mRNA在宫颈病变中的临床价值。方法将70例低度宫颈病变(慢性宫颈炎),子宫颈上皮内瘤变(CINI级)和78例高级别宫颈病变(包括CINⅡ级CINⅢ级和宫颈浸润性癌)分为两组。低度宫颈病变为对照组,高级别宫颈癌组为实验组。分别进行HPV DNA分型和HPV E6/E7 mRNA检测。结果低度子宫颈病变和高度子宫颈病变的阳性率分别为14.2%和79.5%。HPV DNA分型检测结果,低度子宫颈病变和高度子宫颈病变的阳性率分别为35.7%和85.7%。高风险HPV E6/E7 mRNA检测特异性,阳性预测值,阴性预测值(85.8%,86.1%,83.5%)显着高于(64.3%,70.5%,71.4%),差异有统计学意义。结论高危HPV E6/E7 mRNA检测有效降低了临床诊断中的过度检查和过度治疗的机会,避免了患者因高频重复感染引起的经济负担和精神压力。     

胃印戒细胞癌组织中p53和HER-2表达及其临床意义

目的研究p53和HER-2在胃印戒细胞癌中的表达及其临床意义。方法用免疫组化方法分析60例胃印戒细胞癌p53和HER-2的表达及其与临床病理的关系。结果 p53和HER-2蛋白在胃印戒细胞癌中的表达率分别为48.33%(29/60)和23.33%(14/60)。p53和HER-2的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05),而与年龄、肿瘤部位无相关(P>0.05)。结论 p53和HER-2蛋白表达可能与胃印戒细胞的生长及淋巴结转移相关。     

HPV16、18E6蛋白表达在宫颈癌组织中的意义

目的评价HPV16、18早期蛋白E9表达在宫颈癌组织中的应用价值。方法采用SP免疫组化染色法,检测50例宫颈鳞状细胞癌,40例慢性宫颈炎及40例正常宫颈组织中HPV16、18E6蛋白表达。结果癌组中E6的阳性率为68%(34/50),慢性宫颈炎中5%(2/40),正常宫颈组织中均为阴性,良恶性组HPV16、18E6的阳性率差异有显著意义(P<0.05)。结论HPV16、18E6感染与本地区宫颈癌病因学密切相关,E6单抗可作为预测HPV16、18感染及判断早期宫颈癌的标记之一。     

高危型HPV感染宫颈病变中E6/E7 mRNA的表达水平

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)E6/E7 m RNA检测对高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染宫颈病变筛查的临床价值。方法选择265例HR-HPV感染者,其中100例病理结果为正常宫颈/慢性炎症(对照组),88例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级,33例CINⅡ级,28例CINⅢ级,16例宫颈癌患者的宫颈脱落细胞标本,采用支链DNA(b-DNA)技术检测HPV E6/E7 m RNA的表达情况。结果 CINⅡ级(81.82%)、CINⅢ级(89.29%)、宫颈癌组(100.00%)的HPV E6/E7 m RNA阳性率高于对照组(20.00%)和CINⅠ级(35.23%),差异有统计学意义,其余各组间比较差异无统计学意义;CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈癌组的HPV E6/E7 m RNA表达量也高于对照组和CINⅠ级,差异有统计学意义,其余各组间比较差异无统计学意义;高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)和癌组的HPV E6/E7 m RNA阳性率及表达量显著高于正常、非典型鳞状细胞(ASC)和低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)组(P<0.05)。结论 HPV E6/E7 m RNA的表达可能提示了病毒的活性和病变的进展程度,可能成为筛查出高级别宫颈病变的有效指标,可以作为宫颈癌前病变筛查的辅助方法。     

膀胱移行细胞癌组织中p53、VEGF、PCNA的表达及临床意义

目的研究p53、VEGF、PCNA在膀胱移行细胞癌组织中的表达及与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期的关系。方法采用免疫组织化学SP方法检测43例膀胱移行细胞癌组织及10例正常膀胱黏膜组织中p53、VEGF、PCNA的表达。病理分级按WHO标准:G1级12例,G2级24例,G3级7例。临床分期按TNM标准,分为浅表型(Tis～T1)34例,浸润型(T2～T4)9例。结果膀胱移行细胞癌组织中p53、VEGF、PCNA阳性表达率分别为48.84%、67.44%、62.79%。正常膀胱黏膜组织中p53、VEGF、PCNA均无阳性表达。p53、VEGF与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期有明显相关性(P<0.05);PCNA与膀胱移行细胞癌病理分级有明显相关性(P<0.05),但与临床分期无相关性(P>0.05)。结论p53、VEGF、PCNA与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期、预后密切相关。p53、VEGF可以作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的重要指标,PCNA可以作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的辅助指标。     

HPV16-E6蛋白在宫颈病变组织中的表达及临床应用

目的 研究人乳头瘤病毒16型E6蛋白（human papillomavirus-16 E6 protein,HPV16-E6）在宫颈病变组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测HPV16-E6蛋白在宫颈正常组织、慢性炎症、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）、浸润癌上皮中的阳性表达情况.结果 HPV16-E6在正常宫颈、宫颈炎、CIN,宫颈癌各组中,阳性表达率分别为0.5%、38.35%、46.15%、71.11%,4组比较差异有统计学意义（χ2=27.50,P〈0.01）.经χ2分割后比较（α′=0.007143）,宫颈癌组、CIN组、宫颈炎组的阳性率显著高于正常宫颈组（P〈0.05）,宫颈癌组的阳性率显著高于宫颈炎组（P〈0.01）.HPV16-E6与年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润相关（P〈0.05）.结论 HPV16-E6与宫颈癌的启动、发生、发展及侵袭转移均密切相关.HPV疫苗对于宫颈癌的防治有广泛的应用前景.     

维生素C体外抑制宫颈癌H eLa细胞株生长及其机制的研究

目的探讨维生素C对人宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率,以间接免疫荧光法流式细胞术检测相关蛋白的表达,以TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性。结果维生素C能以浓度依赖和时间依赖方式阻滞HeLa细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。同时HPV18 E6、Bc l-2蛋白表达下调,wtp53、Bax蛋白表达上调,端粒酶活性降低。结论维生素C可抑制HeLa细胞生长,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导其凋亡;其原因在于病毒癌基因E6表达的降低,以及由此而引起的端粒酶活性的降低和细胞内蛋白表达水平的改变,包括HPV18 E6、Bc l-2蛋白表达的下调,wtp53、Bax蛋白表达的上调。     

Chemotherapy compounds in cervical cancer cells primed by reconstitution of p53 function after short interfering RNA-mediated degradation of human papillomavirus 18 E6 mRNA: opposite effect of siRNA in combination with different drugs

Constant expression of E6 and E7 mRNA by high-risk human papillomaviruses (HPV) abrogates p53 and retinoblastoma protein function, respectively, and is essential for the development of cervical cancer. Despite E6, some chemotherapy drugs can stabilize p53 in cervical cancer cells. It is not known how chemotherapy-induced p53 activation and cytotoxicity are affected when the amount of E6 mRNA is decreased before the drug treatment. In this study, HPV18-positive HeLa cervical cancer cells were transfected with short interfering RNA (siRNA) molecules targeting HPV18 E6 mRNA before treatment with carboplatin, cisplatin, doxorubicin, etoposide, gemcitabine, mitomycin, mitoxantrone, oxaliplatin, paclitaxel, and topotecan. Transfection with siRNA was followed by nuclear accumulation of p53, but the effect was transient despite continuously suppressed HPV mRNA levels. When treatment with E6 siRNA was coupled with chemotherapy, the p53 activity after treatment with carboplatin and paclitaxel was additively increased, whereas the p53 activation induced by the rest of the drugs was synergistically increased. Treatment with E6 siRNA alone moderately inhibited HeLa cell proliferation but did not induce detectable apoptosis. The combined cytotoxic effect of E6 siRNA and chemotherapy ranged from subadditive to synergistic, depending on the drug. The decrease of E6 mRNA sensitized HeLa cells, for example, to doxorubicin and gemcitabine but counteracted the cytotoxicity of cisplatin and etoposide. In conclusion, activating p53 by degrading E6 mRNA may either increase or decrease the chemosensitivity of cervical cancer cells, depending on the chemotherapy compound.     

Detection of human papillomavirus DNA, p53 and ki67 expression in penile carcinomas

Our study is aimed at evaluating the presence of p53 and Ki67 expression by immunohistochemistry in a series of 11 paraffin-embedded penile carcinomas. We also investigated the presence of Human Papillomavirus (HPV) DNA in these tumours and performed an accurate typing by DNA sequencing on positive samples. Immunohistochemistry (IHC) was performed with the anti-p53 and Ki67 mouse monoclonal antibodies. DNA extracted from small sections of each specimen was submitted to amplification with HPV specific general primers; PCR products of the proper length were purified and sequenced. IHC demonstrated nuclear accumulation of mutated p53 and Ki 67 expression in 10/11 tumour samples (90.9%). The prevalence of HPV DNA was 72.7%; the most prevalent type was HPV16. Sequencing analysis revealed the presence of HPV53 (12.5%), HPV18 (25%) and HPV16 (62.5%). Out of the p53 or Ki67 positive carcinomas the percentage of HPV positives was 80% and 70% respectively. Our results indicate that penile carcinoma is frequently associated to high risk HPV and with diffuse p53 and Ki67 expression.     

p53基因第72位密码子基因多态性与HPV16相关宫颈癌

目的探讨湖北地区汉族女性人群中p53基因第72位密码子基因多态性与HPV16相关宫颈癌发生的关系。方法随机选取经PCR检测证实HPV16阳性的宫颈病变病例228例。其中病理证实为宫颈浸润癌的156例作为宫颈癌组,宫颈上皮内瘤变或宫颈炎72例为对照组。用直接PCR法检测新鲜组织标本中p53基因第72位密码子的基因型在宫颈癌组与对照组的分布情况,分析p53codon72基因多态性与HPV16阳性宫颈癌之间的相关性。结果所有样本均成功检测出p53codon72基因型。Pro／Pro、Arg／Pro、Arg／Arg在HPV阳性宫颈癌样本中所占比例分别为22．2％、47．2％、30．6％;在对照组中的比例分别为32．7％、53．2％、14．1％。两组总构成比差异有统计学意义（P=0．010）。与其他两种基因型相比,p53codon72Arg／Arg基因型在HPV16阳性宫颈癌样本检出率明显高于在HPV16阳性宫颈上皮内瘤变及宫颈炎组中的检出率（P=0．004,OR=2．680）。结论p53codon72Arg／Arg基因型是湖北地区汉族女性发生HPV16相关宫颈癌的遗传易感因素。     

maspin和Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨maspin和Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化EnVisionTM法检测70例手术切除的原发性宫颈鳞状细胞癌组织及30例癌旁组织中maspin和Ets-1的表达.结果 maspin、Ets-1在原发性宫颈鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的阳性率差异均有统计学意义（P＜0.05）.maspin表达与肿瘤大小、组织学分级、TNM分期及增殖活性Ki-67显著相关（P＜0.05）;Ets-1表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及增殖活性Ki-67显著相关（P＜0.05）.两者在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达呈负相关（P＜0.05）.结论 maspin和Ets-1与宫颈鳞状细胞癌的临床病理指标密切相关,两者共同参与了宫颈鳞状细胞癌的发生、发展,maspin低表达和Ets-1高表达均提示预后不良.     

Molecular approaches to cervical cancer therapy

Cervical cancer is the second most common malignancy in women worldwide. Two HPV strains, HPV-16 and 18, occur in the 70% of untreated cancers. Expression of viral oncogenes E6 and E7 disrupt the cell cycle by interfering with p53 and p107(Rb). It is known that HPV infection is necessary but insufficient to cause malignancy. Furthermore, persistence of HPV-16 or 18 in women does not necessarily result in cancer. Persistence indicates the importance of other factors for malignant conversion of high-grade HPV infection. The multi-step cervical carcinogenesis process is amendable to molecular therapeutics such as therapeutic nucleic acids (TNAs). TNA-based therapies for cervical carcinoma include ribozymes, antisense oligonucleotides (AS-ODNs) and small interfering RNAs (siRNAs). In vitro experiments with TNAs successfully inhibited E6/E7 expression and caused induction of apoptosis and/or senescence in cervical carcinoma cells. Early ribozyme and AS-ODN approaches showed promise as therapeutic moieties for cervical cancer. Despite the very high in vitro efficiency of siRNA-based therapies they present the same issues that burdened clinical development of ribozymes and AS-ODNs. These issues include intracellular target accessibility, specificity and delivery. Ribozymes are useful for functional genomic studies including diagnosis. Moreover, AS-ODNs appear better suited for clinical protocols because recent advances in nucleic acid chemistry allow higher cell uptake with very low off-target effects leading to actual AS-ODNs clinical applications. By using combined treatments with multiple targets it will be possible to apply TNAs directly to the cancerous cervix to destroy viral RNA and obliterate the tumor.     

宫颈细胞癌及宫颈上皮内肿瘤组织中HPV16感染与hTERT、Ki67表达的关系

目的研究宫颈鳞状细胞癌与宫颈上皮内肿瘤组织中HPV16感染情况与h TERT和Ki67在组织中表达的关系。方法以2008年1月至2013年10月在我院进行治疗的73例妇科肿瘤患者和同期内在我院进行常规妇科检查的35例正常患者的宫颈组织为研究标本。研究采用免疫组化技术,组织芯片技术以及原位杂交方法等。结果病理宫颈组织(除CINⅠ以外)中检测出的HPV16阳性率均比正常宫颈组织高(P<0.05)。病变宫颈组织中CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宫颈浸润鳞癌的h TERT表达以及Ki67表达均高于正常宫颈组织(P<0.05)。浸润鳞癌组织中的h TERT表达量显著高于原位癌组织中的h TERT表达量(P<0.01)。浸润鳞癌、原位癌的Ki67表达量比正常宫颈组织中的Ki67表达量检测值高(P<0.05)。HPV16阳性患者h TERT表达显著高于HPV16阴性患者(P<0.01),且HPV16感染情况与h TERT表达情况呈显著正相关关系(r=0.372)。HPV16感染情况与Ki67表达也存在统计学意义(P<0.05),而HPV16感染情况与Ki67表达无相关性(r=0.092)。此外,在病理宫颈组织中h TERT表达与Ki67表达有统计学意义(P<0.05),但存在显著正相关关系(r=0.396)。结论 HPV16感染可能导致CIN的发生并逐步发展为SCC,而HPV16感染后组织中h TERT、ki67表达会发生改变,通过h TERT、ki67指标检测有助于宫颈癌癌前发现,对治疗和判断预后也有一定的作用。     

人宫颈病变组织中HPV16E7蛋白、Rb蛋白、E2F1蛋白的相关性研究

目的:探讨HPV 16E 7在各类宫颈病变中的表达及其在宫颈癌变中的作用机制。方法:采用免疫组化学方法对10例慢性宫颈炎、10例宫颈湿疣、45例宫颈上皮内瘤变、20例宫颈浸润癌及10例正常宫颈标本行HPV 16E 7、R b及E 2F 1的测定。结果:R b在宫颈癌中阳性表达率明显降低,E 2F 1则在宫颈癌及高度鳞状上皮内病变组的阳性表达率增高,且E 2F 1的阳性表达率和HPV 16E 7呈正相关。结论:HPV 16E 7与E 2F 1的直接结合,导致肿瘤发生。