高血压脑出血急性期肝阳化风证与恢复期阴虚风动证的蛋白质组学比较研究

目的 动态观察高血压脑出血患者急性期肝阳化风证(简称肝阳化风证)、恢复期阴虚风动证(简称阴虚风动证)外周血单个核细胞的蛋白质差异表达变化,分析脑出血不同发病阶段不同中医证型的蛋白质表达规律,探讨脑出血肝阳化风证、阴虚风动证的本质内涵.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑出血急性期肝阳化风证(发病3d)、恢复期阴虚风动证(发病3月)、健康对照组(简称对照组)外周血单个核细胞蛋白质,采用考马斯亮蓝染色,PDQuest软件对三组2-DE图谱进行差异分析,选取差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质.结果 获得了重复性较好的高血压脑出血肝阳化风证、阴虚风动证2-DE图谱;质谱初步鉴定出3个差异表达蛋白,分别为肌动蛋白、假想蛋白、纤维蛋白原α链前体,其中肌动蛋白在脑出血肝阳化风证组、阴虚风动证均较对照组表达下调,而阴虚风动证组又较肝阳化风证组表达下调;纤维蛋白原α链前体在脑出血肝阳化风证组表达上调,而阴虚风动组表达下调.结论 高血压脑出血急性期肝阳化风证与恢复期阴虚风动证存在差异蛋白的表达,其中肌动蛋白与纤维蛋白原α链前体可能与脑出血肝阳化风证、阴虚风证动的发展密切相关..     

大定风珠治疗脑出血恢复期阴虚动风证证效关系的蛋白质组学研究

目的 通过鉴定并分析脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）恢复期阴虚动风证患者大定风珠对证、镇肝熄风汤非对证治疗与健康对照组比较外周血单个核细胞（peripheralblood mononuclear cells,PBMCs）差异表达的蛋白质,从方证对应的角度寻找脑出血恢复期阴虚动风证的证效关系蛋白质,并探讨脑出血恢复期阴虚动风证的本质内涵.方法 分离对照组、脑出血恢复期阴虚动风组、脑出血恢复期阴虚动风对证治疗及非对证治疗组外周血单个核细胞,利用双向凝胶电泳技术建立各组的PBMCs 蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0 软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS 质谱仪获得肽质量指纹图谱,用Mascot 软件搜索数据库鉴定部分差异表达蛋白质.结果 经双向凝胶电泳和图像分析,筛选出的24 个差异表达蛋白质点中共有12 个得到鉴定,其中脑出血恢复期阴虚风动证组与健康对照组比较,5 个蛋白表达上调,4 个蛋白表达下调,1 个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证大定风珠对证治疗组与健康对照组比较,7 个蛋白表达无明显差异,2 个蛋白表达下调,2 个蛋白表达上调,1 个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证镇肝熄风汤非对证治疗组与健康对照组比较,6 个蛋白表达下调,3 个蛋白表达上调,1 个蛋白表达缺失.结论 初步鉴定了脑出血恢复期阴虚动风证对证与非对证治疗方证效应的相关蛋白,这些蛋白功能涉及应激、细胞代谢、细胞迁移、信号转导、细胞骨架等;大定风珠对证治疗则能有效地调节多个异常表达的蛋白,非对证治疗则使蛋白表达明显异常,体现了中医辨证论治、方证相应的科学性.     

鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱的建立

目的：建立人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱,初步分析其蛋白质表达情况。方法：采用双向凝胶电泳（2-DE）分离人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2总蛋白,银染显色,Image Master图象分析系统分析,从胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析获取肽质量指纹图谱（PMF）,Mascot软件搜索MSDB和SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果：获得重复性和分辨率较好的CNE-2双向凝胶电泳图谱;质谱分析了78个蛋白质点,获取77张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了48个蛋白质。结论：建立了人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为人鼻咽癌蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据。     

平肝潜阳方对偏头痛肝阳上亢证大鼠血淋巴细胞 蛋白质表达的影响

目的：探讨平肝潜阳方对偏头痛肝阳上亢证大鼠作用的分子机制。方法：用电刺激SD大鼠三叉神经节的方法并灌服附子汤复制偏头痛肝阳上亢证模型, 采用平肝潜阳方中药进行干预。运用双向凝胶电泳技术分离偏头痛肝阳上亢证大鼠血淋巴细胞的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,搜索数据库鉴定蛋白质。结果：平肝潜阳方能够明显改善偏头痛大鼠的头痛等症状,得到分辨率及重复性较好的正常大鼠、偏头痛肝阳上亢证大鼠、中药治疗大鼠血淋巴细胞的双向凝胶电泳图谱;共得到13肽质量指纹图谱,2个无质谱结果,搜索到具有统计学意义的蛋白质11个,包括乙醇脱氢酶3,糖原磷酸化酶,ATP合酶D链,膜联蛋白-3,泛素,中性粒细胞防御素4前体,黑素瘤相关性E2抗原,热休克蛋白-27,膜联蛋白-A1,硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅱ,谷胱甘肽合成转移酶片断。结论：平肝潜阳方治疗后的偏头痛肝阳上亢证大鼠血淋巴细胞蛋白质的表达与治疗前比较有差异,所鉴定的11个蛋白质可能与平肝潜阳方的作用机制有关。     

特发性间质性肺炎蛋白质组学的初步研究

目的 应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据。方法 收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果 建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等。结论 建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础。 【关键词】 特发性间质性肺炎 蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助电离解析飞行时间质谱     

肝阳化风证实验诊断指标的初步研究

为探讨肝阳化风证的实验诊断指标,选择ＣＴ、ＮＥＥ、Ｆ及Ｔ３进行检测,并与阴虚风动证、气虚血瘀证及健康人组进行对照,结果显示：肝阳化风证血ＮＥ、Ｅ及Ｆ含量显著升高,而Ｔ３明显降低;ＣＴ扫描结果显示;脑出血以肝阳下多见、脑梗塞以阴虚风动证常见,服出血部位及脑梗塞部位均以基底节区为主,两证型无明显差异。认为烃上指标可作为肝阳化风证诊断参考指标。     

肝阳化风证病理生理学基础的进一步研究

对肝风内动证三亚型(肝阳化风证,气虚血瘀证及阴虚风动证)进行不同层次多指标实验研究。结果发现：肝阳化风证的脑梗塞,脑出血患者的指标变化相似,显示了本证的特点,如：外周交感肾上腺髓质机能亢进,机体处于低T3综合征,调节血管平滑肌舒缩机能的活性物质的显著变化,炎症介质释放增加等。气虚血瘀证与阴虚风动证的指标测定值近似,异常程度较轻。     

肝阳化风证病理生理学基础的进一步研究

对肝风内动证三亚型 (肝阳化风证 ,气虚血瘀证及阴虚风动证 )进行不同层次多指标实验研究。结果发现 :肝阳化风证的脑梗塞 ,脑出血患者的指标变化相似 ,显示了本证的特点 ,如 :外周交感肾上腺髓质机能亢进 ,机体处于低T3综合征 ,调节血管平滑肌舒缩机能的活性物质的显著变化 ,炎症介质释放增加等。气虚血瘀证与阴虚风动证的指标测定值近似 ,异常程度较轻。     

特发性间质性肺炎蛋白质组学初步研究

目的应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据。方法收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等。结论建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础。     

血清蛋白双向凝胶电泳-质谱分析诊断早期肺腺癌的临床研究

目的分析肺腺癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质,从而寻找肺腺癌早期特异性的诊断指标。方法用固相IPG梯度双向凝胶电泳分离肺腺癌患者及正常人血清总蛋白,用PDQuest凝胶图像软件分析,以识别差异蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF—MS）分析获得肽质量指纹图,然后利用Mascot查询软件搜寻数据库鉴定蛋白质。结果①获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。②经PDQuest7．1软件匹配分析,共筛选出22个差异的蛋白点,对7个差异蛋白点进行胶内原位酶解-质谱指纹图分析,获得了7张肽质量指纹图谱,查询数据库鉴定出1个蛋白质-血清淀粉样蛋白A（SAA）。结论①固相pH梯度双向凝胶电泳分离血清总蛋白获得了重复性较好的双向电泳凝胶图谱。②肺腺癌患者血清和正常人血清的蛋白质组表达存在明显差异,这些差异蛋白点为进一步建立人肺癌的2-DE数据库奠定了基础。③SAA蛋白很可能是肺癌的一个潜在标志物。     

脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱的建立及分析

目的:建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白质双向电泳图谱,观察脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质差异表达情况。方法:采用反复冻融法抽提血清蛋白质,以优化的双向电泳技术分离血清蛋白质,建立脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质双向电泳图谱,并采用二维电泳图谱专用软件对所得结果进行图谱分析。采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对两组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果:通过双向电泳,建立血清蛋白质双向电泳图谱,选取具有明显差异的蛋白点21个进行质谱鉴定,共鉴定出8种蛋白质。结论:通过蛋白质组技术快速建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白表达图谱及质谱分析,可为进一步研究其发病机制及治疗手段提供实验基础。     

多囊卵巢综合征患者血清蛋白质双向凝胶电泳技术条件优化

目的探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者外周静脉血血清蛋白质的双向凝胶电泳条件优化。方法对去除血清中的高丰度蛋白与否、不同蛋白质上样量、固相pH梯度（IPG）胶条的pH值范围、水化上样液体积、水化时间进行双向电泳实验结果比较。结果将去除高丰度蛋白血清样品中300μg蛋白质溶解于终体积为400μl水化上样液,水化14h,应用pH4～7的IPG胶条和浓度12％的SDS—PAGE凝胶进行双向电泳,得到图象清晰,蛋白斑点数为369个蛋白质二维图谱。结论优化了PCOS血清双向凝胶电泳的条件,得到分辨率较好的PCOS血清的蛋白图谱,创造了进一步开展PCOS血清蛋白质组图谱分析条件。     

健康人和乙肝患者血清蛋白质双向电泳图谱比较

比较健康人和乙肝患者血清中蛋白质双向电泳图谱的差异。方法通过双向电泳技术对健康人和乙肝患者血清中蛋白质进行双向电泳分离,并对这2种血清蛋白质双向电泳图谱进行对比。结果从健康人和乙肝患者血清中共得到8个显著的差异点。其中在乙肝患者血清中表达量上调有5个点,表达量下调有1个点,乙肝患者血清中新出现2个点。结论健康人和乙肝患者血清蛋白质双向电泳图谱有一定的差异,这些差异点可为进一步筛选乙肝患者血清中具有医学价值的蛋白质提供新的途径。     

喉鳞形细胞癌比较蛋白质组的初步研究

目的:研究喉癌及癌旁喉正常黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质,考马斯亮蓝染色显色、ImageMaster 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.取差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定.结果:获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,并找出在喉癌和癌旁喉正常黏膜组织差异表达的33种蛋白质.其中有22种蛋白质在喉癌组织中表达上凋,11种蛋白质表达明显下调.随机取10个在喉癌组织中表达上调的蛋白点进行质谱指纹图分析,查询数据库初步鉴定出了8个蛋白质.结论:本研究建立了分辨率和重复性较强的喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,差异表达的蛋白质可能成为潜在的诊断喉癌的肿瘤标志物和治疗靶分子,对探讨喉癌的发生机制有重要意义.     

吗啡耐受大鼠脊髓蛋白质组双向电泳图谱的建立与差异蛋白鉴定

目的：建立吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织蛋白质组双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图 谱,比较分析吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织中蛋白质组的变化和差异表达,鉴定出差异表达的蛋白质点并进行验证。 方法：将16只鞘内置管雄性SD大鼠随机分为吗啡耐受组(MT组,n=8)和生理盐水组(NS组,n=8),取其腰段脊髓组织 蛋白以固相pH梯度等电聚焦(immobilized pH gradients isoelectric focusing,IPGIEF)为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯 酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)为第二向进行2-DE,应用PDQuest分析 软件对考马斯亮蓝染色的2-DE图谱进行图像分析,对差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并利用Mascot查询软件搜索Swiss- Prot数据库进行生物信息学分析。采用蛋白质印迹法验证部分差异蛋白。结果：MT组和NS组大鼠脊髓组织2-DE图谱 中各分离出约1 000个清晰的蛋白质点,其中明显差异表达的蛋白有36个。采用MALDI-TOF-MS分析,并利用Mascot查 询软件搜索Swiss-Prot数据库,共搜索到14个蛋白质,与NS组比较,MT组中表达下调的蛋白质点有2个,表达上调的 蛋白点有12个。采用蛋白质印迹法对其中的NADH脱氢酶及伽玛烯醇化酶蛋白质点进行验证,结果与蛋白质组学结 果一致。结论：初步建立了吗啡耐受大鼠脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱,证明吗啡耐受可以引起脊髓中多种蛋白 质的表达改变。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的：建立血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术。方法：对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果：建立了稳定的2-DE技术。结论：已建立的血清蛋白质2-DE技术，将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

鼻息肉的2-DE图谱建立和蛋白质组学分析

目的:建立鼻息肉及鼻黏膜双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)图谱,鉴定差异表达蛋白质。方法:收集鼻息肉及鼻黏膜样本各7例,采用固相pH梯度2-DE,凝胶银染,扫描图像,ImageMaster2-DE软件比较分析等方法,识别差异表达蛋白质,通过质谱分析得到相应肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),采用PeptIdent软件查询Swiss-Protand TreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了鼻息肉和鼻黏膜蛋白质的2-DE图谱。鼻息肉和鼻黏膜3块凝胶的平均蛋白质点数分别为825±78和936±62;平均匹配点数为682±96和821±78,匹配百分率为82.7%和87.7%;同一鼻息肉的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(IEF)方向偏差为(1.06±0.14)mm,在SDS-PAGE方向偏差为(1.45±0.21)mm。比较分析两种组织各7例样本的2-DE图谱,鼻息肉和鼻黏膜蛋白质点数为1458个和1617个,平均匹配点数为1026个。质谱分析差异蛋白质点40个,获取34张PMF,查询数据库鉴定出蛋白质24个。结论:建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉及鼻黏膜2-DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的蛋白质。     

两种大肠癌转移性细胞株双向电泳图谱的初步分析

目的 初步分析大肠癌转移过程中差异表达的蛋白质,为阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 以一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480为实验对象,利用双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE),建立并优化两种细胞株的蛋白表达图谱;之后利用Melanieш软件分析与大肠癌转移相关的差异表达蛋白点。结果 两种细胞株的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性;采用了非线性pH3-10及重叠窄范围的固相pH梯度胶条,提高了2-DE图谱的分辨率;初步选择11个差异表达蛋白点。结论 非线性及重叠窄范围的固相pH梯度胶条可改善2-DE中蛋白分离的效果,初步分离的差异蛋白点为进一步鉴定大肠癌转移相关蛋白及建立大肠癌转移性细胞株的2-DE数据库奠定了基础。