同一个体食管贲门双原发癌组织Survivin和E-cadherin的蛋白表达

目的:探讨同一个体食管贲门双原发癌组织中Survivin和E-cadherin蛋白变化特征及其意义.方法:采用组织病理学方法和免疫组化ABC法,分析15例食管贲门双原发癌患者食管鳞癌(SCC)和贲门腺癌(GCA)组织Survivin和E-cadherin蛋白的表达状况.结果:15例食管贲门双原发癌患者SCC和GCA组织均出现不同程度的Survivin蛋白的阳性表达和E-cadherin蛋白的异常表达,Survivin在SCC组织中免疫阳性率为71%(10/14),在GCA组织中为33%(5/15);E-cadherin在SCC组织中免疫异常表达率为93%(13/14),在GCA组织中为93%(14/15).Survivin蛋白在食管贲门双原发癌SCC和GCA组织中一致性表达率为58%(8/14);E-cadherin蛋白一致性表达率为86%(12/14).结论:食管癌和贲门癌可能具有相似的发病因素和分子机制.     

河北省食管癌高发区贲门腺癌Syk基因甲基化状态研究

目的:研究胃贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk) 基因启动子甲基化及其蛋白表达情况.方法:采用改进的甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和免疫组织化学SP法检测GCA组织及相应癌旁正常组织中Syk基因的DNA甲基化和蛋白表达情况. 结果:47例GCA组织中Syk基因启动子的甲基化发生率为31.9%(15/47),显著高于癌旁正常组织(0/47)(P<0.001);Ⅲ、Ⅳ期贲门癌患者中Syk基因甲基化发生率(35.7%)高于Ⅰ、Ⅱ期 (26.3%),低分化腺癌组的甲基化发生率(37.0%)高于高、中分化组 (25.0%),但差异均无统计学意义.47例GCA组织中Syk蛋白的表达率为17.0%(8/47),与相应癌旁正常组织的Syk蛋白表达率(74.4%,35/47)相比差异有统计学意义(P<0.001);Ⅲ、Ⅳ期患者的Sky蛋白表达率(10.7%)低于Ⅰ、Ⅱ期患者的蛋白表达率(26.3%),低分化腺癌组的蛋白表达率(11.1%)低于高、中分化腺癌组的蛋白表达率(25.0%),但差异均无统计学意义.结论:Syk基因启动子区甲基化导致的基因沉默可能是GCA发生的机制之一,可作为反映GCA生物学行为的检测指标.     

贲门腺癌中RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达的关系

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中RASSF1A基因的甲基化状态及其与cyclin D1蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(mothylation-specific PCR,MSP)方法和免疫组织化学SP法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A基因甲基化情况和cyclin D1蛋白表达情况.结果:92例贲门腺癌组织中有54例RASSF1A发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001).Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).92例贲门腺癌组织中有72例(78.3%)cyclin D1蛋白表达阳性,与相应癌旁正常组织比较,cyclin D1在贲门癌组织中的表达显著升高(P<0.001);且随肿瘤分化程度的降低,cyclin D1的阳性表达率明显升高(P<0.05).RASSF1A基因在贲门腺癌中的高甲基化与cyclin D1蛋白表达之间有明显的相关性(P<0.05).结论:RASSF1A基因启动子区的高甲基化以及cyclin D1蛋白的过表达可能参与了贲门腺癌的发生发展过程.     

NGAL基因表达上调与大肠肿瘤发生的关系研究

目的:研究大肠腺瘤-腺癌序列过程中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的变化及相互关系,以阐明其在大肠癌发生发展中的作用.方法:采用组织芯片与免疫组织化学SP法检测94例瘤旁/癌旁组织、92例腺瘤(其中管状腺瘤36例,管状绒毛状腺瘤47例,绒毛状腺瘤9例)、54例腺瘤伴不典型增生或癌变及60例腺癌中NGAL和MMP-9蛋白的表达情况.结果:在大肠腺癌、腺瘤伴不典型增生或癌变、腺瘤、瘤旁/癌旁组织中,NGAL蛋白表达的阳性率分别为55%(33/60)、37%(20/54)、23%(21/92)和2%(2/94),MMP-9蛋白表达的阳性率分别为74%(44/60)、44%(24/54)、25%(23/92)、6%(6/94),NGAL和MMP-9蛋白的表达在腺瘤、腺瘤伴不典型增生或癌变肠腺癌组织中显著高于瘤旁/癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.01),并且在正常肠黏膜→腺瘤→腺瘤伴不典型增生或癌变→腺癌这一过程中两者的表达逐渐增高,差异具有统计学意义(P<0.01),然而二者在腺瘤组中管状腺瘤、管状绒毛状腺瘤、绒毛状腺瘤三者之间的表达差异无统计学意义(P>0.05).NGAL与MMP-9蛋白的表达在整个序列过程中(正常肠黏膜组、腺瘤组、腺瘤伴不典型增生或癌变组、腺癌组)呈显著正相关(rs=0.622,P<0.01).结论:NGAL蛋白和MMP-9蛋白表达的上调可能在大肠腺瘤-腺癌序列的发展过程中发挥一定作用,二者的异常表达可能参与大肠腺癌的发生.     

人端粒酶催化亚单位和c-myc蛋白在胃癌及癌前病变中的表达及意义

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT) 和c-myc蛋白在胃癌和胃癌前病变中的表达及意义.方法: 应用免疫组织化学技术检测71例慢性胃炎和胃癌中hTERT和c-myc蛋白的表达,其中慢性胃炎伴萎缩者18例,伴肠化生者16例,伴中、重度不典型增生者16例,胃癌21例.结果: hTERT 和 c-myc蛋白的表达率在胃癌组织中均高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在不典型增生组织中均显著高于肠化生、萎缩性胃炎组织(P<0.05);在肠化生组织中均显著高于萎缩性胃炎组织(P<0.05).hTERT蛋白表达率在c-myc蛋白阳性患者中显著高于c-myc蛋白阴性患者(P<0.01).结论: hTERT与c-myc蛋白在胃癌发生发展过程中,均可能发挥重要作用,对胃癌的发生、发展起促进作用,c-myc表达增加可能是胃黏膜上皮细胞端粒酶激活的重要机制之一.     

食管鳞癌及贲门腺癌中分泌型卷曲相关蛋白4基因启动子区甲基化状态的联合检测

目的:检测食管鳞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)和贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中分泌型卷曲相关蛋白4(secreted frizzled related protein 4, SFRP4)的基因甲基化状态,探讨其与食管鳞癌和贲门腺癌发生的关系.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及RT-PCR的方法检测49例食管鳞癌及58例贲门腺癌中SFRP4基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学法检测Wnt通路中心因子β-catenin蛋白的表达情况,并分析其与临床病理参数间的关系.结果: 在食管鳞癌及贲门腺癌中,SFRP4基因的甲基化率分别为42.6%(21/49)和72.4%(42/58),均明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01).在贲门腺癌中SFRP4基因的高甲基化与肿瘤患者的临床分期相关,与病理分级无关;而在食管鳞癌中,该基因的甲基化与各临床病理指标均无关(P>0.05).SFRP4基因在食管鳞癌及贲门腺癌中mRNA阳性表达率分别为69.3%(34/49)和44.8%(26/58),均明显低于癌旁非肿瘤组织(P<0.05),且肿瘤组织中mRNA表达与该基因的甲基化状态明显相关(P<0.01).通路中心因子β-catenin蛋白在食管鳞癌及贲门腺癌中的异质表达率分别为65.3%(32/49)和86.2%(50/58),均明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01),且其异质表达与SFRP4基因的甲基化状态相关(P<0.05).结论:SFRP4基因的高甲基化状态可能是引起贲门癌及食管癌发生的共同分子机制之一,并有可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路发挥作用. 检测SFRP4基因甲基化状态对于贲门腺癌的预后评估有一定参考价值.     

长链非编码RNA XLOC_002319在贲门腺癌中的表达及其甲基化状态

[目的]检测贲门腺癌(GCA)中长链非编码RNA XLOC_002319(lncRNA XLOC_002319)的表达及其甲基化状态,探讨XLOC _002319在贲门腺癌发生发展中的作用.[方法]分别应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)以及甲基化特异性PCR(MSP)检测贲门腺癌组织、癌旁不典型增生组织及癌旁正常组织中XLOC_ 002319的表达和甲基化状态.[结果]XLOC_002319在贲门腺癌组织和癌旁不典型增生组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P＜0.01),并且在贲门腺癌组织中XLOC_ 002319的表达与组织学分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P＜0.05).贲门腺癌组织中XLOC _002319的启动子区甲基化率(61.54％)和癌旁不典型增生组织甲基化率(54.84％)显著高于癌旁正常组织(17.95％)(P＜0.01),并且贲门腺癌组织中XLOC_002319的启动子区甲基化率与组织学分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P＜0.05).发生XLOC_002319甲基化的贲门腺癌组织中XLOC_002319的表达显著低于未发生甲基化的贲门腺癌组织(0.217±0.074 vs 0.253±0.060,P＜0.05).[结论]XLOC_002319在贲门腺癌中的异常低表达可能与贲门腺癌的发生密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一.     

贲门腺癌中TSP1启动子区高甲基化与TGF-β1表达的相关性分析

目的:探讨贲门腺癌中凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)基因的甲基化状态及其与转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织的TSP1基因甲基化、mRNA和蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测对应组织中TGF-β1蛋白表达情况.结果: 96例贲门腺癌组织中有34例发生了TSP1基因甲基化,甲基化发生率为35.4%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001).Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中TSP1基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).贲门腺癌组织中TSP1 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05),且与其甲基化状态之间有明显相关性.TGF-β1蛋白在贲门癌腺组织中的表达明显升高,96例贲门癌腺组织中有50例(52.1%)表达阳性,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.001);且随肿瘤分期的升高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高(P<0.05).TSP1基因在贲门腺癌中的高甲基化与TGF-β1蛋白表达之间有明显的相关性(P<0.05).结论:TSP1基因启动子区高甲基化和TGF-β1蛋白过表达可能参与了贲门腺癌的发生、发展过程,TSP1基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一.     

Expression of CDX2 and villin in gastric cardiac intestinal metaplasia and the relation with gastric cardiac carcinogenesis

Objective: To determine whether CDX2 and villin protein expression are associated with intestinal metaplasia(IM) in gastric cardiac mucosa and to explore the relationship with evolution of gastric cardiac adenocarcinoma(GCA). Methods: We studied 143 gastric cardiac biopsy or resection specimens from Henan province China,including 25 cardiac gastritis specimens with IM, 65 dysplasia specimens with IM and 35 gastric cardiacadenocarcinoma specimens and stained them for CDX2 and villin by the immunohistochemical SP method.15 normal gastric cardiac biopsy specimens were also collected as control. Results: (1) Normal gastric mucosapresented no CDX2 and villin expression. The positive rates of CDX2 protein in cardiac gastritis with IM,dysplasia with IM, and carcinoma tissues were 84.0% (21/25), 66.7% (32/48) and 36.4% (20/55), respectively.While the positive rates of villin protein in cardiac gastritis with IM, dysplasia with IM, and carcinoma tissueswere 76.0% (19/25), 70.8% (34/48) and 45.5% (25/55), respectively.There were significant differences among thethree groups for both CDX2 and villin (P<0.01). Spearman’s rank correlation coefficient(rho) showed a closecorrelation between the two proteins (r=0.843, P<0.01) and both were positively related with tumor differentiation(both P<0.05), but not associated with age, sex, invasion and metastasis of lymph node (P>0.05). Conclusion: Ourresults suggest that ectopic expression of CDX2 and villin may be involved in early-stage IM and tumorigenesisin gastric cardia and the expression of villin may be regulated by CDX2.     

河南林州地区贲门癌和癌旁组织中p16基因启动子甲基化及蛋白表达

目的探讨贲门癌变过程中p16基因启动子区甲基化和p16蛋白表达变化特征和规律及其相互关系。方法采用甲基化特异PCR（MSP）及免疫组化方法,检测林州地区32例贲门癌患者癌组织、癌旁不典型增生组织和正常组织p16基因启动子区甲基化状态及蛋白表达情况。结果p16基因在癌组织中表达缺失18例（56%）,不典型增生组织中表达缺失8例（73%）;26例（81%）癌组织、7例（64%）不典型增生组织和18例（67%）正常组织发生了p16基因启动子区的甲基化。贲门癌组织中p16基因甲基化与表达缺失一致率为56%。差异无统计学意义,P〉0.05。结论p16蛋白表达缺失可能是贲门癌变过程中的重要分子事件,p16基因启动子区甲基化可能是导致其蛋白表达缺失的机制之一。     

Caveolin-1在胃癌组织中的表达及临床生物学意义

背景与目的:Caveolin-1作为候选抑癌基因,在多种肿瘤均有异常表达。本研究探讨Caveolin-1在非癌胃粘膜、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织以及胃癌细胞系MGC803和BGC823的表达特点。方法:采用冰冻组织微阵列的免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色,在完全相同的实验条件下检测56例胃癌及29例非癌粘膜、11例肠上皮化生、7例异型增生组织中Caveolin-1的表达状况,及其与胃癌的临床病理分期、淋巴结转移、Lauren分型及组织学分型的关系。Westernblot和RT-PCR法检测胃癌及相应癌旁组织与MGC-803和BGC-823细胞中Caveolin-1蛋白和RNA的表达情况。结果:免疫组化结果显示,Caveolin-1在非癌胃粘膜、肠上皮化生、异型增生和胃癌中的阳性率分别为86.2%(25/29)、81.8%(9/11)、57.1%(4/7)、17.9%(10/56);胃癌与其它各组间的阳性率有显著性差异(P<0.05)。进展期胃癌的Caveolin-1阳性率(16.0%)低于早期胃癌(33.3%),但无统计学意义(P>0.05)。弥漫型胃癌的阳性率(7.0%)明显低于肠型胃癌(26.9%,P<0.05)。有淋巴结转移的胃癌Caveolin-1阳性率(9.7%)低于无淋巴结转移(31.8%,P<0.05)。Westernblot及RT-PCR结果显示,胃癌组织和相应非癌胃粘膜组织中Caveolin-1的表达无显著性差异,但MGC-803和BGC-823细胞中Caveolin-1表达     

PTCH在胃黏膜肠上皮化生、不典型增生和胃癌中的表达

目的 探讨Hedgehog信号传导通路的PTCH与胃癌的分化程度、侵袭、临床分期及其发生、发展的关系.方法 采用免疫组织化学法(ABC法)和RT-PCR法检测42份胃癌组织、20份肠上皮化生组织、15份不典型增生组织、7份正常胃组织中PTCH的表达.结果 PTCH基因在正常胃组织、肠上皮化生组织、不典型增生组织、胃癌组织中的表达分别为0、10.0%、40.0%、78.6%,差异有统计学意义(P＜0.05),在正常组织中不表达,在肠上皮化生组织中轻度表达,不典型增生组织以中度表达为主,而胃癌组织多呈过度表达.结论 PTCH与胃癌的分化程度、侵袭、临床分期有关,其表达对判断预后有一定价值.PTCH可能参与了胃癌的发生.     

胃癌及癌前病变细胞凋亡与Caspase-9，Bax表达的关系

目的：探讨细胞凋亡基因Caspase-9和Bax在胃癌前病变和胃癌发展中的作用。方法：应用免疫组化S—P法检测Caspase-9和Bax在57例胃癌及48例非癌胃黏膜组织的表达,用原位末端标记法（TUNEL法）检测相应胃组织细胞凋亡。结果：Caspase-9蛋白在非癌胃黏膜组（慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生）阳性表达率分别为100．00％、86．67％、50．00％、42．85％,呈逐渐下降趋势。慢性浅表性胃炎组中Caspase-9蛋白阳性表达率与肠上皮化生、不典型性增生有显著性差异（P〈0．05）,肠上皮化生组Caspase-9蛋白阳性表达率高于不典型增生组,但无统计学差异（P〉0．05）。Bax蛋白在48例非癌胃组织中的阳性表达率分别为：慢性浅表性胃炎100．00％、慢性萎缩性胃炎80．00％、肠上皮化生56．25％、不典型增生57．14％,呈逐渐下降趋势,其中慢性浅表性胃炎组Bax蛋白阳性表达率与肠上皮化生、不典型增生有显著性差异（P〈0．05）。慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠匕皮化生、不典型增生、胃癌组织中,AI值（细胞凋亡指数）分别为（14．72±2．68）％、（10．02±2．34）％、（7．55±2．80）％、（6．09±2．35）％、（3．26±1．23）％,呈逐渐下降趋势,有显著性差异（P〈0．05）。结论：Caspase-9和Bax可能参与胃癌癌前病变的形成,促进胃癌的发生。     

癌基因ras产物P^21蛋白在胃癌及癌前病变的表达

应用流式细胞术结合细胞免疫荧光技术对胃癌、非典型增生、肠化生、浅表性胃炎及正常胃粘膜组织进行了ras基因产物P~(21)蛋白的定量及定性研究.P~(21)含量及P~(12)阳性细胞百分率以胃癌最高,非典型增生及肠化生P~(12)表达也增高,均与浅表性胃炎及正常胃粘膜有显著差异(P<0.001).提示胃癌前病变时ras基因已经开始活化,其蛋白产物P~(12)过度表达.     

Abundant expression of the intestinal protein villin in Barrett's metaplasia and esophageal adenocarcinomas

Villin is a cytoskeletal protein that is involved in the formation of brush-border microvilli in normal small intestine and colon epithelium. This protein is present in Barrett's metaplasia but is reported not to be expressed in Barrett's adenocarcinoma. In this study, we analyzed villin protein expression in Barrett's metaplasia and in both Barrett's adenocarcinomas and tumors of the gastric cardia. Immunohistochemical analysis was used to evaluate the expression and cellular localization of the villin protein in 21 cases of Barrett's metaplasia, 30 cases of Barrett's adenocarcinoma, 16 cases of gastric cardia adenocarcinoma, and eight cases of adenocarcinoma of the distal esophagus. Southern, northern, and western blot analyses were used to evaluate the potential mechanisms for regulation of villin protein expression. Villin protein expression was observed in 21 of 21 cases (100%) of intestinal-type Barrett's metaplasia and in 28 of 30 cases (93%) of Barrett's adenocarcinoma and was thus highly expressed in these tumors. Northern blot analysis demonstrated villin mRNA (3.5 and 2.7 kb) in both villin-positive Barrett's metaplasia and adenocarcinomas. Western blot analysis with the antibody used for immunohistochemical analysis confirmed the presence of a single villin protein band of 95 kDa. Abundant villin expression also was present in both adenocarcinoma of the gastric cardia (13 of 16 cases; 81%) and distal esophageal adenocarcinomas of unknown origin (six of eight cases; 75%). The intestinal brush-border enzyme sucrase isomaltase was found to be present in only 22 of 46 cases (48%) of the adenocarcinomas that expressed villin. We concluded that the protein villin is highly expressed in Barrett's adenocarcinomas and is well maintained in these and other esophageal tumors. Mol. Carcinog. 22:182–189, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.     

贲门腺癌中Smad4基因甲基化状态分析

目的：探讨贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中Smad4（mothers against decapentaplegic homolog4）基因启动子区及第1外显子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之间的相关性。方法：取110例贲门腺癌组织及相应癌旁组织,分别采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）方法检测Smad4基因的甲基化情况,RT-PCR方法检测Smad4 mRNA水平,免疫组织化学法检测Smad4和TGF-β1的蛋白表达情况。结果：贲门腺癌组织Smad4基因启动子甲基化率为5.5%（6/110）,Smad4基因第1外显子5′非翻译区的甲基化率为24.5%（27/110）,相应癌旁正常黏膜均未检测到此两个位点的甲基化,癌组Smad4基因甲基化率显著高于癌旁正常组织（P〈0.05）,且贲门腺癌中Smad4基因5′非翻译区发生甲基化的比率显并高于启动子区（P〈0.01）。贲门腺癌组织中Smad4 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P〈0.05）,其甲基化与蛋白表达之间呈负相关。TGF-β1在贲门癌组织中的表达（65.5%）明显高于相应癌旁组织（15.5%）（P〈0.01）,且随肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高（P〈0.05）。Smad4蛋白和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关。结论：在贲门腺癌发生发展过程中Smad4基因第1外显子的5′非翻译区比启动子区更易发生高甲基化而导致基因沉默,Smad4甲基化及TGF-β1的过表达可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

食管和贲门癌组织中肿瘤抑制基因maspin的表达

 采用免疫组织化学（ABC）法检测食管癌高发区55例食管和贲门癌组织中肿瘤抑制基因maspin的表达。结果表明,食管癌组织中maspin免疫阳性表达率为10%（3/30）,免疫阳性反应主要位于癌组织的细胞浆中;贲门癌组织中maspin免疫阳性表达率为24%（6/25）,免疫阳性反应主要位于癌组织的细胞核中。提示：肿瘤抑制基因maspin可能在食管和贲门癌变过程中起一定的作用。