四角蛤蜊酶解肽抑制ACE活性与抗氧化活性研究

目的 评价四角蛤蜊酶解肽体外抑制ACE活性与抗氧化活性。方法 以胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟在体过程对四角蛤蜊进行酶解获得酶解肽。利用高效液相色谱法测定四角蛤蜊酶解肽的抑制ACE的活性,以Fenton法检测四角蛤蜊酶解肽对羟自由基的清除作用。结果 胰蛋白酶酶解6 h的四角蛤蜊酶解肽抑制ACE活性最佳,IC₅₀=15.06 μg/mL。胰蛋白酶酶解2 h的羟自由基清除率最高,为93.78%。结论 四角蛤蜊酶解肽具有一定的抑制ACE活性与抗氧化活性。     

大炭角菌子实体化学成分的研究

目的 研究大炭角菌Xylaria euglossa 子实体的化学成分。方法 通过硅胶、Sephadex LH-20柱色谱分离化合物,运用氢谱、碳谱、二维核磁共振（¹H-¹HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY）、高分辨质谱等光谱学方法鉴定化合物结构。结果 分离得到10个化合物,分别鉴定为炭角菌酮（1）、3, 9-二羟基-3-甲基-6, 8-二甲氧基-二氢蒽酮（2）、1-羟基-6, 8-二甲氧基-3-甲基蒽醌（3）、炭角菌内酰胺（4）、neoechinulin A（5）、5α, 8α-过氧麦角甾-6, 22-二烯-3β-醇（6）、麦角甾-4, 6, 8(14), 22-四烯-3-酮（7）、22E-麦角甾-7, 22-二烯-3β, 5α, 6β-三醇（8）、棕榈酸（9）、(2S, 2′R, 3S, 4R)-2-(2′-羟基-十八碳酰胺) 二十二碳烷-1, 3, 4-三醇（10）。结论 所有化合物均为大炭角菌中首次分离得到。其中化合物1和4为新化合物。     

干巴菌抗氧化活性研究

目的 研究干巴菌的抗氧化活性.方法 采用DPPH自由基清除法对野生食用菌干巴菌提取物的体外自由基清除作用进行研究.结果 干巴菌的乙酸乙酯和甲醇提取物活性较好,IC50 分别为 0.025,1.69 mg/mL.结论 干巴菌乙酸乙酯提取部分比芦丁(IC50 = 0.063 mg/mL)抗氧化活性强.     

墨旱莲不同提取物的体外抗氧化活性比较

目的研究墨旱莲不同提取物的体外抗氧化能力。方法采用1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基法（DPPH）、邻苯三酚法及还原Fe^3＋三种方法比较评价墨旱莲的醇提取物、水提物、水提物乙酸乙酯部位和水提物正丁醇部位的体外抗氧化活性。结果四种提取物的抗氧化活性在3种测定方法中均显示良好的抗氧化能力,在清除DPPH自由基及还原Fe^3＋能力上水提物优于醇提物,在清除氧自由基能力上醇提物优于水提物,水提物乙酸乙酯部位的抗氧化活性优于正丁醇部位。结论墨旱莲具有较强的抗氧化活性,是一种天然有效的抗氧化药物,本实验可以为墨旱莲抗氧化药效学物质基础及机理研究提供依据。     

化学发光法测定白果白蛋白的体外抗氧化活性

目的研究白果白蛋白的体外抗氧化活性、对DNA损伤的保护作用及其作用机制。方法以莲房原花青素和小牛血清蛋白为对照,分别采用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定了白果白蛋白对超氧阴离子的清除作用,硫酸铜-邻菲啉-抗坏血酸-双氧水、硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和硫酸亚铁-鲁米诺3个体系测定了白果白蛋白对羟自由基的清除作用,双氧水-鲁米诺体系测定了白果白蛋白对体外双氧水的清除作用,采用硫酸铜-邻菲啉-抗坏血酸-双氧水-脱氧核糖核酸体系测定了白果白蛋白对体外DNA损伤的保护作用。结果白果白蛋白具有较好的体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性,但在硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和双氧水-鲁米诺化学发光体系中表现出"促氧化"作用。结论采用化学发光体系衡量白果白蛋白的抗氧化活性具有选择性。     

干巴菌抗氧化活性研究

［摘要］目的　研究干巴菌的抗氧化活性．方法　采用DPPH自由基清除法对野生食用菌干巴菌提取物的体外自由基清除作用进行研究．结果　干巴菌的乙酸乙酯和甲醇提取物活性较好,IC50 分别为 0.025, 1.69 mg/mL．结论　干巴菌乙酸乙酯提取部分比芦丁（IC50 = 0.063 mg/mL）抗氧化活性强.     

具有抗氧化活性的含硒短肽的研制

【立论依据】 硒蛋白是微量元素硒发挥生物学功能的主要形式。人体中硒蛋白在抗氧化、抗肿瘤和调节免疫等方面都具有显著的作用,其中抗氧化活性是多种硒蛋白最核心的生物学功能。研制一种具有潜在应用价值的、类似于硒蛋白的抗氧化活性的含硒短肽具有重要意义。 【设计思路】 选取抗氧化活性最强的硒蛋白如硒蛋白P、谷胱甘肽过氧化物酶等,设计出3~5种含硒代半胱氨酸活性中心的硒蛋白截短型的短肽,根据硒蛋白基因表达的特殊性构建其表达载体及其哺乳动物细胞表达体系,实现此类含硒短肽的准确、高效的翻译,再通过抗氧化检测筛选出具有应用开发价值的短肽。 【实验内容】 (1)用于硒蛋白基因工程表达的哺乳动物细胞株的建立:选择在人类硒蛋白翻译过程中将编码硒代半胱氨酸密码子TGA正确解码时起着重要作用的3个反式作用因子,即SECIS 结合蛋白2(SBP2)、Sec特异延伸因子(EFSec)和核糖体蛋白L30(RPL30),将它们的编码基因分别克隆并构建为1个三基因表达载体pcDNA3.1-SBP2/Efsec/RPL30,稳定转染HepG2细胞系获得目的基因高表达的单克隆细胞株;(2)利用生物信息学的方法,筛选和设计硒蛋白截短型的短肽,并将其编码基因插入真核表达载体pcDNA4HisMaxB获得相应的重组载体;(3)利用各重组载体分别对已建立的转基因细胞株进行稳定转染,使目的基因表达并纯化获得含硒短肽;(4)利用常规的抗氧化检测方法,考察各种含硒短肽体外抗氧化活性,并筛选出最佳者用于后续研究。 【材料】 人肝癌细胞系HepG2;质粒pcDNA3.1、pcDNA4HisMaxB;各种基因工程工具酶及常规试剂;细胞培养及转染试剂;抗氧化检测试剂盒等。 【可行性】 硒蛋白复杂的翻译机制已经逐渐阐明,在原核生物细胞中利用反式作用因子提高硒蛋白表达已取得成功,为真核表达提供重要的启示,我们的设计在理论上是可行的;实验室相关技术方法及条件成熟,完全可满足本研究的要求。 【创新性】 具有抗氧化活性的硒蛋白分子量大限制了其药用价值,我们研究中将获得截短型的含硒短肽从而使其具有应用开发价值。此外,应用3个反式作用因子构建硒蛋白基因工程表达体系也是本研究的一个创新。     

苦瓜籽粗多糖的提取工艺及其体外抗氧化活性

目的: 优化苦瓜籽粗多糖的提取工艺,并对苦瓜籽粗多糖进行体外抗氧化活性研究。方法: 采用水提醇沉法提取苦瓜籽粗多糖,通过苯酚硫酸法测定多糖含量,以多糖提取率为考察指标,考察提取温度、时间、料液比以及提取次数4个因素对苦瓜籽粗多糖提取率的影响。在单因素实验基础上,进行L9（34）正交实验设计,优化苦瓜籽粗多糖的提取工艺。检测苦瓜籽粗多糖对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的清除率及总还原能力。结果： 温度是影响苦瓜籽粗多糖提取率的重要因素,确定了最佳提取工艺条件是提取温度为 90 ℃,料液比为 1 ∶30,提取时间为 2.5 h,提取 3次,苦瓜籽粗多糖的提取率为5.61%。苦瓜籽粗多糖对DPPH自由基和羟自由基的清除能力接近于维生素C,而对超氧阴离子自由基清除能力和总还原能力不及维生素C。 结论： 该优化工艺适用于苦瓜籽粗多糖的提取,高浓度苦瓜籽粗多糖具有较好的抗氧化活性。     

玄参环烯醚萜类成分的体外抗氧化活性研究

[目的]研究玄参环烯醚萜类成分的体外抗氧化活性.[方法]采用溶剂萃取法,提取玄参环烯醚萜类成分.采用分光光度法,测定玄参环烯醚萜类成分对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的清除能力,以及对H2O2诱导的小鼠血红细胞氧化溶血的抑制能力.[结果]玄参环烯醚萜类成分能显著地清除DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子,可抑制H2O2诱导的小鼠血红细胞氧化溶血.[结论]玄参环烯醚萜类成分具有较强的体外抗氧化活性.     

广金钱草多糖的提取工艺及其体外抗氧化活性研究

目的研究广金钱草多糖的水提工艺条件及其体外抗氧化活性。方法以提取温度(A)、料液比(B)、提取时间(C)为条件,建立三因素三水平的正交试验,研究广金钱草多糖的水提工艺;体外抗氧化活性的研究,是以邻二氮菲-Fe2+-H2O2体系研究多糖对羟自由基(-OH)的抑制作用,以邻苯三酚自氧化法研究多糖对超氧阴离子自由基(O-2)的抑制作用;多糖的含量测定方法采用苯酚-硫酸法。结果广金钱草多糖水提工艺的最佳条件为温度100℃,料液比为1∶20,提取时间3.5 h,提取3次。广金钱草多糖对-OH、O-2有明显的清除作用。结论从广金钱草中提取的多糖具有清除-OH、O-2的抗氧化作用。     

槲皮素-7-硫酸酯钠体外抗氧化作用

目的探讨槲皮素-7-硫酸酯钠（SQMS）的体外抗氧化活性。方法取小鼠肝组织,匀浆,体外孵育,分光光度法检测不同浓度SQMS（0.10、0.25、0.50 mmol/L）对肝组织中丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响。结果与空白组相比,不同浓度SQMS（0.10、0.25、0.50 mmol/L）均能显著降低肝组织中MDA的含量;中、高浓度SQMS（0.25、0.50 mmol/L）能显著升高肝组织T-AOC;低、中浓度SQMS（0.10、0.25 mmol/L）对肝组织SOD活力有显著升高作用。结论 SQMS具有较强的体外抗脂质过氧化作用及抗氧化能力,其抗氧化可能与提高SOD活力有关。     

盐酸格拉司琼体外抑菌作用的实验研究

目的:观察盐酸格拉司琼在体外对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌抑菌作用的影响。方法:将盐酸格拉司琼注射液用无菌生理盐水稀释至终浓度分别为0.5、0.25、0.125和0.0 625mg/mL,与大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌、和铜绿假单胞菌培养,每个实验重复三遍,所有菌株的稀释的系列测定均进行两次。结果:格拉司琼对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均有明显的抑菌作用,格拉司琼对大肠埃希菌的抑菌作用随着格拉司琼浓度的增加而增加,至0.0 625mg/mL时仍有明显的抑菌作用(P<0.05)。格拉司琼对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌作用在格拉司琼浓度为0.125mg/mL时消失。结论:格拉司琼在体外可以抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的生长,对于预防麻醉相关的感染可能有一定的临床意义。     

Comparison of cleavage activity in vitro between two ribozymes targeted against different sites of PDGF receptor β subunit

Objective: To compare the cleavage activity of ribozymes directed against 2 sites of PDGF receptorP subunit cDNA gene in vitro. Methods: The 608 bp fragment of PDGF receptor β subunit cDNA was clonedinto T-vector under the control of T7 promoter, named pPDGFR-β. Two ribozymes were designed to cleavethe CUU sequence at codon 45 and codon 252 of PDGF receptor β subunit mRNA respectively. These 2 ham-merhead ribozyme genes were cloned into vector PI. 5 between 5' -cis ribozyme and 3' -cis ribozyme to gener-ate the plasmids of pRZ1 and pRZ2. The pPDGFR-β, pRZl and pRZ2 were linearized and then transcribedwith T7 promoter in vitro. Results: The RZ1 showed high cleavage activity in vitro, but the RZ2 showed nocleavage activity under the same condition. Conclusion: The cleavage site selection is an important factor in-fluencing the cleavage activities of ribozymes.     

体外受精周期中不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响

目的：探讨常规体外受精周期中,不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响。方法：回顾性分析2008年1月至2009年12月,在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规体外受精（in vitrofertilization,IVF）过程中为预防出现卵巢过度刺激综合征或因卵泡发育迟缓,改行未成熟卵体外培养（in vitro maturation,IVM）的91例患者,按促性腺激素（gonadotropin,Gn）使用天数不同分为两组,A组使用Gn 5～7 d,共51例,B组使用Gn 8～13 d,共40例。比较两组的一般指标、Gn用量、体外成熟与胚胎发育及妊娠结局。结果：两组年龄、不孕年限、基础激素水平均差异无统计学意义（P〉0.05）。Gn使用量A组明显低于B组,但获卵数A组明显高于B组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。取卵日的雌激素以及黄体生成素水平A组明显高于B组,而孕激素水平则B组高于A组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。两组的卵子成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、种植率差异均无统计学意义（P〉0.05）。两组的移植周期率、hCG阳性率、周期取消率、临床妊娠率、多胎妊娠率、自然流产率、异位妊娠率等临床结局差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：体外受精咛ヒ浦仓芷谥校煌被男蠭VM均能获得较好的临床结局,但Gn使用后5～7 d比8～13 d可以显著减少促排卵药物的用量,增加获卵数,降低治疗费用。     

米替福新对常见皮肤癣菌体外抑菌活性的研究

目的 了解米替福新对常见皮肤癣菌的体外抑菌活性.方法 参照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)制定的M 38-A方案测定77株常见皮肤癣菌(含三属即毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属)的最低抑菌浓度(MIC).结果 米替福新对常见皮肤癣菌均有较好的抑菌作用,MIC90为1.0 μg/ml,MIC几何均数为0.617 μg/ml,MIC范围0.25～2.0 μg/ml.结论 米替福新对常见皮肤癣菌各属均有较好的抑菌作用.     

熊果酸衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性评价

目的 通过合成系列熊果酸衍生物,测试其抑制肿瘤细胞增殖活性,探讨熊果酸衍生物抑制肿瘤细胞增殖的构效关系,获得抗肿瘤活性更好的熊果酸衍生物.方法 通过乙酰化反应对熊果酸的3-位羟基进行保护后,再将其28-位羧基制备成酰氯并与氨基酸酯反应,最后再在碱性条件下水解制备得28-位羧基被修饰的熊果酸衍生物.所有熊果酸衍生物的结构通过核磁共振氢谱(1HNMR)、核磁共振碳谱(13CNMR)和高分辨质谱(HRMS)进行确认.采用MTT法测试熊果酸衍生物抑制U937、HL-60、Jurkat、K562、DU145、EC109、MDA231和SMMC7721肿瘤细胞的增殖活性.结果 仪器分析结果表明所制备的熊果酸衍生物均为设计的目标化合物.对抑制U937肿瘤细胞增殖结果表明熊果酸28-位羧基被对4-氨甲基苯甲酸、7-氨基己酸和8-氨基辛酸修饰后,在给药浓度为5.0×10-6 mol/L时对U937细胞增殖的抑制率分别达到(18.84 ±2.58)％、(43.17±4.52)％和(68.38±7.95)％,明显优于母体熊果酸母体(10.06 ±2.35)％ (P ＜0.05).对Jurkat细胞增殖的抑制率则分别达到(68.42±8.19)％、(58.36±7.99)％和(61.08±5.77)％,远高于熊果酸的(6.89±2.31)％(P＜0.05).结论 对熊果酸28-位羧基进行延长修饰,有利于提高熊果酸的抗肿瘤活性,当延长7～8个碳原子,抗肿瘤效果最好.     

乌蕨抗菌活性的实验研究

目的:研究乌蕨的抗菌作用强度,并将其与黄连、黄芩、穿心莲等进行抗菌活性比较。方法:采用二倍平皿稀释法。结果:乌蕨抗菌作用与黄连、黄芩相近,强于穿心莲。结论:乌蕨是一种具有较强抗菌活性的中草药。     

三种黏接材料的体外微渗漏研究

目的比较自酸蚀、全酸蚀黏接剂和玻璃离子水门汀在Ⅱ类洞充填修复中的边缘微渗漏。方法30颗离体上颌前磨牙随机分为三组(n=10),均于近中或远中面制备长方体型Ⅱ类洞型(4.0 mm×3.5 mm×2.5 mm),分别选用自酸蚀黏接剂 纳米树脂(自酸蚀组)、全酸蚀黏接剂 纳米树脂(全酸蚀组)和玻璃离子水门汀(玻璃离子组)进行充填修复。经200次和500次冷热循环后行0.5%碱性品红染色,体视显微镜下观测各充填修复体轴壁和龈壁的微渗漏,并进行统计学分析。结果组间比较显示,自酸蚀组微渗漏深度显著大于全酸蚀组和玻璃离子组(P<0.01)。组内比较显示,龈壁微渗漏深度显著大于轴壁(P<0.01);与冷热循环200次相比,冷热循环500次时各组轴壁和龈壁的微渗漏深度均明显增加(P<0.01)。结论在Ⅱ类洞充填修复中,自酸蚀、全酸蚀黏接剂黏接修复及玻璃离子水门汀均存在边缘微渗漏,而以自酸蚀黏接剂黏接修复及修复体龈壁的微渗漏较为明显,其程度随冷热循环次数而增加。     

青橄榄叶提取物体外抑菌活性研究

[目的]测定青橄榄叶提取物及大孔树脂AB-8不同极性洗脱产物对供试菌株的体外抑菌活性.[方法]采用96孔板微量稀释法测定青橄榄叶总提取物及不同极性洗脱产物对白色念珠菌、铜绿假单胞杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐药白色念珠菌、酿酒酵母和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC).[结果]大孔树脂水洗极性部位对白色念珠菌的MIC为20.62 g/ml,50％乙醇洗脱部分对铜绿假单胞杆菌的MIC为82.5 μg/ml,90％乙醇洗脱部分对白色念珠菌、铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐药白色念珠菌、酿酒酵母和金黄色葡萄球菌的MIC分别为41.25,20.62,20.62,10.32,165.0和2.58μg/ml.[结论]青橄榄叶洗脱产物的水、50％乙醇及90％乙醇洗脱部分对白色念珠菌、铜绿假单胞杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐药白色念珠菌、酿酒酵母和金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性,尤其是90％乙醇洗脱部位的抑菌范围广,活性强且呈现量效依赖关系.     

固公果根提取物对肠道致病菌的体外抑菌活性研究

【目的】测定固公果根提取物不同极性萃取部位对5种肠道致病菌的体外抑菌活性。【方法】采用试管稀释法测定固公果根提取物不同极性萃取部位对肠产毒性大肠埃希菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌和肠产毒素金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)。【结果】水饱和正丁醇层对受试菌株的抑菌作用最强,MIC为39～156μg/ml;乙酸乙酯萃取层抑菌活性较强,MIC为156～625μg/ml;氯仿萃取层抑菌活性较差,MIC>1 250μg/ml;水萃取层抑菌活性最差,MIC>2500μg/ml。【结论】固公果根提取物乙酸乙酯萃取层和水饱和正丁醇层对受试菌株有较好的抑菌活性。