七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法 60只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组和七叶皂苷钠组,各20只。采用线栓法建立大鼠局灶性大脑中动脉闭塞再灌注损伤模型,七叶皂苷钠组建模成功后1 h腹腔注射七叶皂苷钠（2.8 mg/kg）,假手术组和模型组腹腔注射等量生理盐水。造模后24 h,使用Longa评分评估大鼠神经功能损伤程度,使用称重法检测大鼠脑水肿程度,使用ELISA法测定大鼠损伤脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）及白细胞介素1β（IL-1β）的含量,使用TUNEL法检测损伤脑组织神经元凋亡率,使用蛋白免疫印迹法检测损伤脑组织双特异性磷酸酶1（DUSP1）、核转录因子-κB（NF-κB）p65、Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠Longa评分显著增加（P<0.01）,脑含水量显著升高（P<0.01）,损伤脑组织MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著增高（P<0.001）,损伤脑组织SOD和CAT水平显著降低（P<0.001）,损伤脑组织神经元凋亡率显著升高（P<0.01）,损伤脑组织DUSP1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,损伤脑组织NF-kB p65和Bax蛋白表达水平显著增高（P<0.05）。七叶皂苷钠显著逆转大鼠上述反应（P<0.05）。结论 七叶皂苷钠显著改善大鼠脑缺血再灌注损伤,机制可能与减轻炎症反应、氧化应激反应、神经元凋亡等有关。     

β-七叶皂甙钠对脑缺血小鼠脑组织白介素-1β、水通道蛋白-4表达及脑梗死体积和脑水肿的影响

目的观察β-七叶皂甙钠对脑缺血小鼠脑组织白介素-1β(IL-1β)、水通道蛋白4(AQP4)表达及脑梗死体积和脑水肿的影响。方法 228只小鼠随机分为假手术组(n=48)、脑缺血组(n=60)、β-七叶皂苷钠组(n=60)和生理盐水(NS)对照组(n=60);每组又分为缺血后12 h、24 h、48 h、72 h、168 h亚组。用线栓法建立大脑中动脉闭塞脑缺血模型。在脑缺血后2 h,β-七叶皂苷钠组和NS对照组分别经腹腔注射β-七叶皂苷钠和同体积NS,每隔24 h重复1次。在相应时间点对小鼠分别进行脑含水率(干/湿法)、脑梗死体积(TTC染色)、脑组织IL-1β及AQP4表达检测(酶联免疫吸附法)。结果与假手术组比较,脑缺血组与NS对照组小鼠脑含水率显著增高,脑组织IL-1β和AQP4表达显著上调(P<0.05～0.01);β-七叶皂苷钠组各时间点亚组脑含水率、脑梗死体积和脑组织IL-1β、AQP4表达明显低于脑缺血组和NS对照组(P<0.05～0.01)。结论β-七叶皂甙钠能抑制缺血性脑损伤后脑组织IL-1β和AQP4表达上调;减轻缺血性脑损害和脑水肿。     

选择性一氧化氮合成酶抑制剂对脑组织保护作用研究

目的：探讨创伤性脑损伤后脑组织中一氧化氮（NO）含量变化与脑组织病理及超微结构变化之间的关系，及选择性一氧化氮合成酶抑制剂（iNOS）1400W(N-[3-(aminomethyl)benzyl]acetamidine)对脑组织的保护作用。方法：114只大鼠随机分成正常组、假手术组、生理盐水治疗组和1400W治疗组，建立大鼠自由落体脑外伤模型，伤后18h开始分别给予生理盐水和1400W腹腔内注射，每8h一次。测定各组不同时期脑组织NO含量，同时观察脑组织病理及超微结构的改变，将结果进行比较。结果：生理盐水治疗组NO含量于伤后6h开始升高，48h达到高峰，以后逐渐下降。1400W治疗组NO含量降低，与生理盐水治疗组结果比较有统计学意义，72h后逐步恢复正常。生理盐水治疗组组织病理学检查和超微结构检查结果与NO改变同步，1400W治疗组较生理盐水治疗组明显改善。结论：NO对脑外伤后继发性损伤起着重要作用，1400W对脑外伤后脑组织有显的保护作用。     

β-七叶皂苷钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后AQP4蛋白表达的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织缺血区AQP4蛋白的表达情况及β-七叶皂苷钠的治疗作用和可能机制。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型。应用干-湿比重法、TTC染色、免疫组化SABC法分别测定脑含水量、脑梗死体积及水孔蛋白4(aquaporin4,AQP4)的表达。结果假手术组AQP4蛋白有轻微的表达,而模型组、治疗组缺血损伤后表达升高,脑含水量增高,梗死脑组织出现,给予β-七叶皂苷钠的治疗组AQP4蛋白的表达下降,脑含水量明显降低,脑梗死体积减少,且β-七叶皂苷钠中高剂量组明显优于低剂量组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注脑组织缺血区AQP4蛋白表达的上调与脑水肿的发生发展与有密切的关系,而β-七叶皂苷钠有抑制脑水肿发生的作用。     

注射用七叶皂苷钠联合脐带间充质干细胞移植改善脑梗死大鼠神经功能

背景：单纯的脐带间充质干细胞移植修复受损脑组织的作用并不十分理想。 目的：观察脐带间充质干细胞移植联合注射用七叶皂苷钠治疗大鼠脑梗死的效果。 方法：应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为对照组、细胞移植组、七叶皂苷钠+ 细胞移植组,分别尾静脉注射细胞培养液、1×1010 L-1脐带间充质干细胞悬液、尾静脉1×1010 L-1脐带间充质干细胞悬液同时经腹腔注射七叶皂苷钠 5 mg/(kg•d),连续5 d。 结果与结论：移植后1周,七叶皂苷钠+细胞移植组大鼠神经功能障碍评分低于细胞移植组及对照组(P < 0.05);七叶皂苷钠+细胞移植组大鼠脑梗死周围组织AQP9 及AQP4 mRNA的表达低于细胞移植组,却高于对照组(P < 0.05);七叶皂苷钠+细胞移植组CM-Dil阳性细胞和神经元数量多于细胞移植组及对照组(P < 0.05)。提示脐带间充质干细胞移植联合注射用七叶皂苷钠治疗大鼠脑梗死可明显改善大鼠的神经功能。     

β-七叶皂甙钠对脑出血大鼠的神经保护作用

目的探讨β-七叶皂甙钠对脑出血后血肿周围肿瘤坏死因子(TNF-α)表达及神经元凋亡的影响。方法实验大鼠随机分为假手术组、模型组、β-七叶皂甙钠治疗组,采用自体血注射法制作脑出血模型,术后2 h七叶皂甙钠组腹腔注射β-七叶皂甙钠(3.0 mg/kg),另2组给予等量生理盐水,连续用药(1次/d),给药后12 h、24 h、3 d和7 d分别用免疫组化法与TUNEL法检测肿瘤坏死因子的表达和神经元的凋亡情况。结果与假手术组比较,模型组TNF阳性细胞数以及凋亡的神经元明显增多(P<0.01);与模型组比较,七叶皂甙钠组血肿周围肿瘤坏死因子表达与神经元的凋亡明显下降(P<0.01,P<0.05)。结论β-七叶皂甙钠对脑出血后神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TNF的表达,减少神经元的凋亡有关。     

尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤早期保护作用的研究

目的探讨尼莫地平对急性脑缺血再灌注损伤的早期保护作用。方法线栓法复制大鼠急性脑缺血模型。30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术、模型、尼莫地平3组。模型组采取缺血2h再灌注2h。尼莫地平组大鼠在缺血0时刻起每小时腹腔注射给药一次,剂量为5mg/kg。各组大鼠在手术4h后实验结束后,行腹主动脉采血,同时取完整脑组织。脑组织切片进行TTC染色,并比较各组脑组织梗死面积。检测各组大鼠血清及脑组织匀浆中SOD、MDA、NO含量。结果与模型组相比,尼莫地平组大鼠脑组织梗死面积显著减少。血清生化指标显示,模型组SOD含量显著低于假手术组,给予尼莫地平治疗后,SOD含量增加明显。模型组MDA、NO含量明显高于假手术组,尼莫地平组明显降低血清中MDA、NO。结论尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤有保护作用,这种保护作用与NO和氧化应激密切相关。     

ICAM-1在大鼠弥漫性脑损伤后的脑组织水肿中的表达及其意义

目的探讨ICAM-1在大鼠弥漫性脑损伤后脑水肿中的作用。方法采用Marmarou等人的方法建立大鼠弥漫性脑损伤模型,S-P免疫组化法测定ICAM-1蛋白在外伤后不同时间脑组织中的表达,干湿重法测脑组织含水量,组织切片HE染色观测炎性细胞浸润情况。结果伤后6h,脑组织中ICAM-1蛋白表达明显升高,72h达到高峰,其后下降,7d时仍明显高于假手术对照组(P<0.05)。伤后6h、12h、24h、48h、72h和7d时,脑组织含水量亦明显高于假手术组(P<0.05),同时伤后脑组织中炎性细胞大量聚集。结论大鼠脑外伤诱导了ICAM-1蛋白的表达,ICAM-1通过介导炎性细胞的浸润可能参与了伤后脑水肿的形成过程。     

七叶皂苷钠相关作用分析

目的研究七叶皂苷钠对术后抗炎、抗渗出、抗氧化效果。方法 SD大鼠制备术后模型,分为假手术组、模型组、阳性组(地塞米松5mg/kg)、给药组(七叶皂苷钠2mg/kg),均采用尾静脉注射给药,术前给药1次,术后继续给药3d,术后1周各组进行粘连程度分级并观察组织病理变化。结果七叶皂苷钠明显减轻大鼠术后肠粘连的分级程度(P<0.05),缓解粘连组织的炎性渗出和炎症反应;可使患者术后腹痛腹胀、排便排气停止、肠梗阻的发生率明显降低(P<0.05)。结论七叶皂苷具有抗炎、抗渗出、抗氧化等多方面药理作用,临床上得到广泛应用,在神经科疾病如脑出血、脑梗死后引起的脑水肿、周围神经疾病等的治疗方面显现了良好的临床效果。     

弥漫性脑损伤神经细胞凋亡及神经生长因子干预的实验研究

目的探讨弥漫性脑损伤后神经细胞凋亡及脑组织水肿情况及神经生长因子对此的干预作用。方法采用Marmarou脑损伤模型。将Spraque—Dawley鼠40只随机分成脑损伤组,神经生长因子治疗组和生理盐水对照组。治疗组分别于致伤后10min和60rain腹腔内注射神经生长因子（30mg／kg）,对照组注射等量生理盐水,于伤后24h、48h、72h和96h断头取脑,采用原位末端标记法检测凋亡细胞,对比各时段脑水肿和神经细胞的凋亡情况。结果神经细胞从伤后24h出现细胞凋亡,48～72h达高峰,治疗组与损伤组在24h,48h,72h和96h时脑组织含水量有显著性差异（P〈0．05）,对照组与损伤组含水量无显著性差异（P〉0．05）。结论神经生长因子对脑损伤性脑水肿及神经细胞凋亡有治疗作用。     

香芹酚通过抑制脑水肿与氧化应激反应保护大鼠 颅脑损伤

目的 探讨香芹酚对大鼠颅脑损伤（TBI）的保护作用及其机制。方法 SD大鼠50只,随机分为5组:假手术组、模型组、低剂量香芹酚（10 mg/kg）组、中剂量香芹酚（20 mg/kg）组、高剂量香芹酚（40 mg/kg）组,每组10只。Feeney氏自由落体法制备TBI模型,造模后1、3、7 d采用改良神经功能损害程度评分（mNSS）评估神经功能,干湿法测定脑组织含水量;ELISA法检测氧化应激因子丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）以及化学定量法检测一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 香芹酚能显著改善大鼠TBI后神经功能,显著减轻TBI后脑水肿,显著降低损伤脑组织MDA、NO和NOS含量,显著增加损伤脑组织SOD、CAT和GSH含量。结论 香芹酚可通过减轻大鼠TBI后脑水肿、抑制氧化应激从而发挥神经保护作用。     

葛根素通过Nrf2-ARE信号通路抵抗氧化应激对创伤性脑损伤的神经保护作用

目的 探讨葛根素对创伤性脑损伤(TBI)模型大鼠的神经保护作用及脑组织红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)一抗氧化反应原件(ARE)信号通路参与的机制。方法 选择健康成年雄性大鼠体重250～300 g构建TBI模型,将大鼠分为4组:创伤组(A组)、假手术组(B组)、葛根素治疗的创伤组(C组)和葛根素治疗的假手术组(D组); 通过采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能,脑组织干湿重称量法评价脑水肿,Nissl染色,TUNEL染色评价脑损伤体积和神经元的凋亡,使用酶活试剂盒检测损伤48 h后抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性以及氧化应激产物MDA和NO的水平,最后使用western blot和RT-PCR的方法检测Nrf2-ARE信号通路及其下游分子HO-1,NQO1的表达水平。结果 TBI手术后损伤组mNSS评分明显增高(P<0.05),葛根素治疗组能够明显降低mNSS评分(P<0.05)。TBI手术后损伤组脑水肿加重及神经元凋亡增加(P<0.05),葛根素治疗组能够明显挽救脑水肿及神经元凋亡(P<0.05)。TBI手术12 h后损伤组脑内抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性增加及氧化应激产物MDA和NO的水平升高(P<0.05),葛根素治疗组能够明显降低抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性以及氧化应激产物MDA和NO的水平(P<0.05)。western blot和RT-PCR显示葛根素不改变Nrf2的翻译和表达,但是RT-PCR显示葛根素能够明显促进Nrf2-ARE信号通路下游分子HO-1,NQO1的表达。结论 葛根素可能通过Nrf2-ARE信号通路抵抗氧化应激对创伤性脑损伤发挥神经保护作用。     

Protective effects and time course of Huangqion early-stage free radical injury following brain trauma in rats

BACKGROUND: Huangqi (Astragalus mongholicus), a Chinese herb, has already been included in the "Chinese Pharmacopoeia" for the treatment of ischemic cerebrovascular disease. Secondary injury following brain injury is associated with free radical production, and Huangqi possesses the ability to ameliorate free radical-mediated injury. OBJECTIVE: This study was designed to observe the correlation between anti-free-radical properties of Huangqi and early histological changes of brain tissues following traumatic brain injury. DESIGN, TIME AND SETTING: This study, a randomized, controlled, animal experiment, was performed from May 2006 to June 2007 at the Experimental Center of Science and Technology, School of Basic Science, Liaoning Medical University, Jinzhou City, Liaoning Province, China. MATERIALS: Healthy, adult, Sprague Dawley rats of either gender were included. Huangqi injection was purchased from Heilongjiang Provincial Zhenbaodao Pharmaceutical Co., Ltd., China (National License Medical Number: Z23020781). Na -K -adenosine triphosphatase (ATPase), Ca2 -ATPase, and Mg2 -ATPase, as well as kits to measure superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) content, were purchased from Nanjing Jiancheng Biological Reagent Company, China. METHODS: Seventy-two rats were randomly divided into three groups, with 24 rats in each group: (1) sham-operated group: rats were only exposed, but not injured; (2) model group: brain focal laceration rat models were established by free-falling. These groups were intraperitoneally injected with saline, once every 10 hours; (3) Huangqi group: rats were intraperitoneally injected with 4 mL/kg Huangqi (2 g/mL), once every 10 hours, following brain focal laceration by free-falling. MAIN OUTCOME MEASURES: Ultrastructural changes in brain tissue were observed under an electron microscope 24 hours after injury. The water content of brain tissue was measured using the dry-wet weight method. In addition, the activity of ATPase and SOD, as well as MDA content, was analyzed using biochemical indicators at 4, 24, and 48 hours after injury. RESULTS: All 72 rats were included in the fmal analysis. At 4, 24, and 48 hours after injury, ATPase activity was significantly reduced in the model and Huangqi groups than in the sham-operated group (P < 0.05), and this was reduction was time-dependent. At four hours after injury, no significant difference in ATPase activity was detected between the Huangqi group and the model group (P> 0.05). At 24 and 48 hours after injury, ATPase activity in the Huangqi group gradually decreased, but remained significantly greater than that in the model group (P<0.05). At four hours after injury, when compared with the sham-operated group, the MDA content in the model group significantly increased and remained at a high level, while SOD activity significantly decreased (P<0.05). In the Huangqi group, MDA content and SOD activity did not change at four hours after injury. However, MDA content significantly decreased, and SOD activity significantly increased, at 24 and 48 hours after injury, compared with the model group (P<0.05). Moreover, at 24 and 48 hours after injury, the water content of brain tissue was significantly lower in the Huangqi group than in the model group (P<0.05). Ultrastructural examination of cerebral cortical neurons revealed severe damage in the model group, compared to the sham-operated group, while only mild injury was observed in the Huangqi group. CONCLUSION: The protective effects of Huangqi against traumatic brain injury correlates with decreasing MDA content and increasing SOD activity.     

大鼠液压脑损伤后皮层微血管改变与脑水肿的关系

目的探讨大鼠液压脑损伤后皮层微血管损伤情况及其与伤后脑水肿的关系。方法成年SD大鼠30只,随机分为正常组（n=6）、假手术组（n：6）、损伤组（n=18）,其中损伤组分为伤后6h、24h、72h三亚组,每亚组6只。利用液压冲击法建立大鼠颅脑损伤模型,显微镜下观察直接损伤侧和非直接损伤侧皮层微血管损伤隋况,CD34标记血管内皮细胞评价血管密度改变,干湿重法检测脑组织含水量的变化。结果大鼠皮层微血管损伤后6h可见血管支行迂曲、扩张、充血,伤后24h可见少量血栓形成,损伤后72h可见有较多血栓形成。损伤组CD34阳性细胞数明显低于假手术组和对照组（P〈0．05）,而脑组织含水量明显高于假手术组和对照组（P〈0．05）,而后两组无统计学差异（P〉O．05）。损伤组直接损伤侧皮层微血管损伤较非直接损伤组严重,而且伤后24h较伤后6、72h严重。结论颅脑损伤后脑微血管损伤为全脑性血管损伤,这可能是伤后脑水肿形成的机制之一。     

能量限制对大鼠创伤性脑损伤的保护作用

目的能量限制（CR）可产生脑缺血耐受作用,但详细机制尚不清楚。本研究主要探讨CR是否对脑外伤引起的脑损伤起到脑保护作用,及其作用是否与一氧化氮（NO）产生有关。方法SD大鼠分为两组：CR和自由饮食（AL）组,喂养4W后,行大鼠脑损伤模型,进行神经功能评分,并监测造模前后大鼠脑组织及血清中的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和NO的含量。结果①CR组脑组织和血清内eNOS表达和NO含量明显高于AL组（P〈0．05）;②神经功能评分显示,CR组大鼠神经功能评分明显好于AL组（P〈0．05）。结论CR可通过上调eNOS表达和促进NO合成对脑外伤引起的脑损伤起到脑保护作用。     

促红细胞生成素抑制大鼠创伤性脑水肿形成

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠创伤性脑水肿的影响及其的潜在分子机制。方法取SD大鼠90只,随机分为假手术组,创伤组和EPO组。创伤组:制作改进式Feeney's脑创伤模型;EPO组:伤后给大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素(5000 IU/kg)。伤后24 h,72 h和120 h,使用平衡木法评定各组大鼠行为学评分。伤后72 h时,检测各组大鼠脑含水量,脑组织胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的磷酸化水平、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)mRNA和蛋白表达水平。结果在伤后各时间点,EPO组大鼠神经功能障碍的行为学评分也较创伤组有明显降低(均P<0.05)。伤后脑组织含水量由假手术组的78.76%±0.65%上升至创伤组的81.26%±0.40%(P<0.01),EPO组脑含水量则降低至79.71%±0.59%(与创伤组比较P<0.01)。与假手术组比较,创伤组ERK磷酸化的水平在伤后72 h明显上升(P<0.01),EPO组伤后ERK磷酸化水平则明显低于创伤组(0.369±0.046 vs.0.815±0.127,P<0.01);AQP4 mRNA和蛋白在伤后的表达水平均较假手术组明显增高(均P<0.01),EPO组AQP4 mRNA和蛋白的表达水平较创伤组均显著下降(均P<0.01)。结论EPO可抑制大鼠脑创伤后ERK信号通路的过度激活及下游AQP4的过表达,减轻大鼠的创伤性脑水肿。     

大鼠重型颅脑损伤急性期水通道蛋白4的表达

目的探讨水通道蛋白（AQP4）在大鼠重型脑外伤急性期的表达变化及其与脑水肿间的关系。方法49只成年雄性SD大鼠,随机分为对照组及实验组（伤后4h、8h、12h、24h、5d共5组）。制作重度冲击加速性损伤模型,分别于伤后4h、8h、12h、24h、72h、5d采用干湿比重法测脑组织含水量,原子吸收分光光度法测定Na^＋、K^＋含量,Evans Blue（EB）测定法观察大鼠血-脑屏障（BBB）通透性变化,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测脑组织AQP4 mRNA表达及其变化。结果脑组织AQP4 mRNA在伤后4h开始表达上调,8h、12h依次增高,24h达到峰值（P〈0.05）,3d时仍维持较高水平,伤后5d有所降低。脑含水量、Na^＋含量的变化与AQP4 mRNA表达变化一致。经相关性分析,AQP4 mRNA的表达与脑含水量及脑EB含量均呈正相关（P〈0.05）。结论重型脑损伤急性期,AQP4 mRNA表达的变化与颅脑损伤后BBB的破坏及脑水肿的形成和发展密切相关。AQP4可能参与重型脑损伤后脑水肿的形成并起重要作用。     

大鼠急性脑缺血时尼莫地平对内皮衍生因子的影响

尼莫地平是一种钙离子拮抗剂，现巳用于急性脑缺血的治疗。本文通过观察大鼠急性脑缺血模型及假手术组循环中及脑组织内一氧化氮（NO）、内皮素（ET1）水平，并观察尼莫地平对大鼠脑缺血模型循环中及脑组织的NO、ET1水平的影响，发现模型组循环中的NO水平较假手术组有下降趋势，但无明显统计学差异（P＞0．05），ET1的水平较假手术组显著升高（P＞0．05）;脑组织中NO、ET1含量均较假手术组显著升高（P＜0．05）。尼莫地平具有显著升高急性脑缺血大鼠循环中NO，显著降低循环中ET1，显著降低脑组织中NO、ET1的水平，说明尼莫地平具有促进脑缺血时大鼠的脑部供血，保护由于脑缺血引起的脑组织损害。