猪胰细胞膜缩胆囊肽结合蛋白的纯化

从猪胰细胞膜提取、纯化得到一种缩胆囊肽（ＣＣＫ）结合蛋白，达电泳纯。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），其亚基分子量为４３．１×１０＾－２２ｋｇ。此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ作用时显示，其与硫酸化ＣＣＫ－８、ＣＣＫ－８、硫酸化亮氨酸脑啡肽（Ｌｅｕ－ｅｎｋ）结合活性较大，而与ＣＣＫ－６、ＣＣＫ－４及Ｌｅｕ－ｅｎｋ结合活性较弱。说明ＣＣＫ羧基末端第七位上酪氨酸的硫酸     

鸡胚胆囊收缩素结合蛋白的纯化及性质

目的 研究胆囊收缩素（ＣＣＫ）酪氨酸的硫酸化的意义及胚胎中ＣＣＫ结合蛋白的性质。方法 用亲和层析法从鸡胚提取，纯化得到一种ＣＣＫ结合蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）达电泳纯。用辣根过氧化物酶标记的凝集素作点印迹法分析。结果 其亚基Ｍｒ为３４×１０＾３，此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｅｓｅ作用时显示，其与硫酸化的ＣＣＫ８、非硫酸化的ＣＣＫ８、硫经亮氨酸脑啡肽（Ｌｅ     

VD3结合蛋白的分离纯化

目的：纯化VD3结合蛋白（DBP）。方法：利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白,SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果：分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS－PAGE呈单一区带。结论：成功分离纯化出DBP。     

八肽缩胆囊素减轻大鼠局部脑缺血再灌注损伤的实验研究

缩胆囊素 (ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ ,ＣＣＫ)是脑组织中含量最丰富的神经肽之一。最近研究发现 ,急性脑血管病患者急性期血浆八肽ＣＣＫ (ＣＣＫ 8)水平明显增高 ,ＣＣＫ可拮抗谷氨酸的神经毒性作用。这些现象提示 ,ＣＣＫ在脑缺血的发病过程中可能起着重要作用 ,但至今有关ＣＣＫ和脑缺血关系的研究鲜有报道。为此 ,本实验采用大鼠局部脑缺血再灌注模型 ,观察侧脑室注射不同浓度的硫酸化ＣＣＫ 8及其非特异性受体拮抗剂丙谷胺对局部脑缺血再灌注损伤的作用 ,并对其可能机制作初步探讨。1　材料和方法1.1　动物与试剂 :健康雄性ＳＤ…     

VD_3结合蛋白的分离纯化

目的 :纯化VD3 结合蛋白 (DBP)。方法 :利用DBP的相对分子质量及电荷性质 ,分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白 ,SDS PAGE鉴定纯度 ,并进行活性分析。结果 :分离到相对分子质量为 5 80 0 0的蛋白质 ,SDS PAGE呈单一区带。结论 :成功分离纯化出DBP。     

VD3结合蛋白的分离纯化

目的纯化VD3结合蛋白(DBP)。方法利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白，SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS-PAGE呈单一区带。结论成功分离纯化出DBP。     

大鼠Myostatin蛋白成熟肽的原核表达及纯化

目的:利用谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白表达系统在大肠杆菌中表达纯化Myostatin成熟肽。方法:应用RT-PCR从大鼠的腓肠肌mRNA中逆转录扩增Myostatin成熟肽编码序列,克隆入原核表达载体pGEX-4T1中,IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,采用Western-blot用抗-GST抗体验证融合蛋白表达。融合蛋白经Glutathione-agarose色谱纯化。结果:PCR扩增的Myostatin基因序列与GenBank数据库中的序列一致;30°C,0.1mmol/LIPTG诱导16小时,GST-Myostatin融合蛋白获得优化表达,表达效率为25%;Western-blot证实融合蛋白的特异性表达。结论:成功构建融合蛋白GST-Myostatin重组基因,并在大肠杆菌中获得有效表达,为Myostatin抗体的制备及进一步研究该蛋白的功能奠定基础。     

强啡肽、γ—氨基丁酸及缩胆囊肽在脑缺血后的变化及其与DND的关系

在116只成功建立的大鼠脑缺血模型中，于缺血及再灌流各期对海马结构中Dy-nA1-13,GABA及的动态变化，缺血/灌流神经损害的病理进行研究，发现脑缺血和再灌流期这三种物质的释放增多，且大剂量纳洛有防治DND的作用。     

抗癫痫肽/GST融合表达及包涵体蛋白复性纯化

[目的]获得高纯度的谷胱甘肽硫转移酶/抗癫痫肽(GST-AEP)融合蛋白。[方法]异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组大肠杆菌DH5α表达GST-AEP融合蛋白,融合蛋白包涵体经过洗涤、变性、复性后,通过12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,凝胶薄层扫描检测其纯度,透析管进一步纯化蛋白,BCA法定量。[结果]从融合蛋白包涵体中获得了纯度达90%以上的目的蛋白,定量约0.163μg/μl。[结论]建立了有效纯化融合蛋白包涵体GST-AEP的方法,为对AEP进一步的相关研究奠定了基础。     

杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区的表达与纯化

目的:构建杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区(KMD)基因原核表达载体并表达纯化KMD.方法:通过软件和在线工具预测KMD的理化性质.构建KMD的原核表达载体pET28a-KMD,而后在大肠杆菌BL21(DE3)内16℃过夜诱导表达KMD,通过超声破碎菌体和高速离心,将上清液进行亲和层析.获得粗纯目的蛋白,再利用离...     

INTRAPANCREATIC CHOLECYSTOKININ MEDIATES VAGALLY STIMULATED EXOCRINE SECRETION FROM THE RAT PANCREAS

Although cholecystokinin is localized within neuronal fibres of the pancreas, a physiological role for intrapancreatic cholecystokinin has not been identified. The strategy of this study was to elicit pure vagal stlmulatbx electrically, and to use specific receptor antagonists to idetxtify the mediators of exocrine pancreatic secretion. We conclude that vagal stimulation of the rat pancreas involves ganglionicand neurotransmission and release of acetylcholine and cholecystokinin from intrapanereatic, postganglionic fibres. To our knowledge, this is the first study to demonstrate a physiological role for intrapancreatic cholecystokinin.     

猪眼晶体钙结合蛋白的分离、纯化及其性质的研究

用疏水性苯基琼脂糖、Sephacryl S—200和DEAE纤维素柱层析从猪眼晶体中提纯了五种钙结合蛋白(CaBP)。DEAE纤维素柱采用了两种不同梯度的洗脱体系。纯化的CaBP的分子量子别为11,000、12,000、18,000、72,000和87,000,故分别称之为CaBP_(11)、CaBP_(12)、CaM、CaBP_(72)和CaBP_(87)。在SDS—PAGE中,除CaBP_(72)显示出三条不同区带外,其他均为单一区带。晶体CaM对环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的刺激作用与牛脑和猪脑CaM相同。CaBP_(11);CaBP_(12)对CaBP_(72)抗体的交叉反应率小于0.1％,但CaBP_(11)和CaBP_(12)的混合物与CaBP_(72)抗体的交叉反应率明显增加。晶体CaM可与兔抗猪脑CaM抗体1:1结合。     

猪骨形态发生蛋白的分离与初步纯化

骨形态发生蛋白(BMP)为诱导中胚层未分化间充质细胞向成骨细胞方向分化的诱导因子。本实验以猪皮质骨为材料,通过6mol/L脲抽提、分步沉淀、羟基磷灰石层析、凝胶过滤和制备电泳等方法纯化BMP,并通过将BMP植入小鼠骨骼肌诱导成骨测定活性。结果表明,猪BMP的表观分子量小于26000,可能为酸性蛋白质。     

PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF A TUMOR-ASSOCIADET HIGH MOLECULAR WEIGHT SERUM DNA BINDING PROTEIN

A high molecular weight DNA binding protein (HDBP) was separated fromserum DNA binding proteins (DBPs) of mice with Ehrlich ascites carcinoma by immunoa-dsorption and immunoaffinity chromatography. HDBP reacted with antiserum against DBPsfrom mice with Ehrlich ascites carcinoma to form a precipitation band, but did not reactwith antiserum against DBPs from normal mice in Ouchterlony double diffusion studies.Apparent molecular weights of reduced and nonreduced HDBP were 41 000 and 280 000respectively, based upon SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. HDBP gave positive reacti-on in periodic acid Schiff's glycoprotein staining method. In isoelectric focusing analysis, theisoelectric point of HDBP was in a range between 6.4 and 6.5. The amino acid compositionof HDBP was rich in valine and hydrophilic amino acids such as glutamic acid, threonineand serine.     

PNA结合蛋白在胰癌诊断中的作用

胰癌病人的组织和血清中存在着一种特异性糖蛋白。该糖蛋白上有花生凝集素的结合位点。根据这一蛋白与ＰＮＡ的高度亲和性，作者建立了一种用ＰＮＡ捕捉再加抗体识别的酶联免疫测定法（ＥＬＩＳＡ）。用此方法检测了胰腺癌病人血清２４例，对照５０例（包括慢性胰腺炎８例，其他肿瘤１６例，正常人２６例）。胰癌血清的平均含量高于对照组３．１倍。经ｔ检验证明胰腺癌组与其他组之间有非常显著差异（Ｐ〈０．０１）。该方法的敏感性     

原核表达融合蛋白的亲和层析法纯化

目的 :以T7·TagAffinityPurificationKit纯化原核表达Tropic 180 8基因编码的融合蛋白 ,并进行免疫印迹检测。方法 :以 0 .4mmol/LIPTG诱导含pET -2 1a -180 8重组质粒的BL2 1(DE3)大肠杆菌 ,T7·TagAffinityPurifica tionKit纯化菌体上清液 ,SDS -PAGE分析 ,将SDS -PAGE蛋白区带转移至NC膜进行免疫印迹检测。结果 :外源性Tropic 180 8基因在大肠杆菌中表达的融合蛋白可经T7·TagAffinityPurificationKit进一步纯化 ,纯化后的蛋白为单一条带 ,分子量约为 32 .0kDa ,其免疫印迹反应结果提示该蛋白为Tropic 180 8基因编码的融合蛋白。结论 :在大肠杆菌中表达的融合蛋白可以免疫亲和法进行纯化和鉴定。     

小鼠肺腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物的纯化

目的　探索肿瘤热休克蛋白 70抗原肽复合物 (HCA70 )分离、纯化的方法。方法　采用低渗、反复冻融匀浆、ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析 ,从体外培养的小鼠肺腺癌细胞 (LA - 795)中纯化HAC70 ;通过SDS -PAGE电泳、Westernblot检测、小鼠移植瘤动物实验证实所获得蛋白是否为HAC70。结果　获得蛋白分子量为 70kD左右 ,与抗HSP70特异单抗结合 ,用此蛋白主动免疫的小鼠可抵抗LA795细胞的攻击 ,获得了高纯度的HAC70。结论　采用ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析可获得高纯度的HAC70。     

牛精子中蛋白激酶C抑制剂的纯化

在牛精子中发现了蛋白激酶C抑制剂。并用Sephadex G-200及等电聚焦柱将其纯化,这一蛋白激酶C的蛋白抑制剂的分子量约为63000,等电点为pH4.5左右。     

单克隆抗体SZ—39识别的人脑胶质瘤细胞SHG—44膜蛋白的提取

目的：提取ＭｃＡｂ ＳＺ－３９识别的人脑胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４膜抗原蛋白,为其进一步研究作准备。方法：分别以两组去污剂（１）２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４;（２）１％ＳＤＳ、１％去氧胆酸钠、１％ＮＰ－４０、１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ裂解ＳＨＧ－４４细胞,提取细胞蛋白,再以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法分离蛋白,并以Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ法分析鉴定。结果：ＭｃＡｂ ＳＺ－３９识别的蛋白呈一条区带,分子量为６０ｋＤ     

醋酸甲地孕酮与血浆蛋白的结合

醋酸甲地孕酮(MA)能与人、动物(兔、犬、大鼠、豚鼠)血浆蛋白结合。与人血浆蛋白结合率为86.39±2.28％,其外观结合常数为6.38±0.52×10~4L/mol,与动物(除与豚鼠结合率较低外)的血浆蛋白结合率与人的相比无显著差异。MA、睾丸酮、可的松对~3H-MA与血浆蛋白的结合均无显著影响;MA并不显著改变~3H-孕酮与妊娠豚鼠血浆蛋白的结合率及~3H-睾丸酮与性激素结合球蛋白(SHBG)的结合率;~3H-MA不与孕妇血清SHBG结合,提示MA在血浆中无专一结合,MA是与血浆蛋白中的白蛋白结合。