正畸牙龈炎患者龈沟液中牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因的研究

目的探讨正畸过程中牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因与牙龈炎症程度的相关关系,分析其在正畸牙龈炎发生发展中的作用。方法收集102例来自济南市口腔医院正畸科和口腔内科患者组成正畸牙龈炎组（57例）、对照组（20例）、牙周炎组（25例）,并记录其各临床指标,分别采集牙周袋最深处或龈沟液标本,采用16SrDNAPCR和多重PCR对牙龈卟啉单胞菌及致病岛rag基因进行检测,分析其与临床指标的关系。结果102例患者临床标本,共扩增出牙龈卟啉单胞菌65株,其中正畸牙龈炎组35株;对照组7株;牙周炎组23株,经Spearman等级相关分析,牙龈卟啉单胞菌检出率与牙龈指数之间存在明显的正相关关系（P〈0．01）。正畸牙龈炎组检出率明显高于对照组,牙周炎组高于正畸牙龈炎组和对照组,三者之间有显著性差异（X2=15．918,P〈0．001）,65例牙龈卟啉单胞菌阳性患者临床标本,扩增出rag基因的有52例,其中正畸牙龈炎组29例;对照组1例;牙周炎组22例,正畸牙龈炎组明显高于对照组,牙周炎组高于正畸牙龈炎组和对照组,三者之间有显著性差异（X2=22．593,P〈0．001）。结论牙龈卟啉单胞菌致病岛rag基因与正畸治疗中牙龈炎性反应密切相关。     

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目的探讨具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)在正畸牙龈炎性反应发生发展中的作用。方法收集2011年8月至2012年2月在济南市口腔医院正畸科接受固定矫治并伴有不同程度牙龈炎性反应的牙颌畸形患者63例组成正畸治疗组;正畸治疗前未戴用矫治器的牙周健康者30例组成正常对照组;牙周科就诊的慢性牙周炎患者35例组成牙周炎组。记录患者牙龈指数(GI),分别采集牙周袋最深处或龈沟液标本,采用16SrDNAPCR技术对Fn进行检测,分析Fn的检出率与GI之间的关系。结果 128例患者临床标本中,共扩增出Fn87例,检出率67.97%。其中正畸治疗组检出率为69.84%(44/63);正常对照组检出率为46.67%(14/30);牙周炎组检出率为82.86%(29/35)。正畸治疗组的Fn检出率明显高于正常对照组,牙周炎组高于正畸治疗组和正常对照组,三者之间差异有统计学意义(χ2=9.843,P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,Fn的检出率与牙龈指数之间存在明显的正相关关系(rs=1.000,P<0.01)。结论 Fn与正畸治疗中牙龈炎性反应的发生发展密切相关,正畸医生应高度重视正畸治疗前与治疗过程中的口腔卫生指导和监督。     

牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑和颊黏膜中的检测

目的　检测牙周健康者及牙周炎患者在颊黏膜和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的阳性率,探讨其与牙周炎发生和发展的关系。方法　选取40例牙周健康者和39例慢性牙周炎患者,分别收集颊黏膜和龈下菌斑样本,提取细菌DNA,设计细菌通用引物和牙龈卟啉单胞菌的特异引物用于PCR扩增,检测牙龈卟啉单胞菌的阳性率。结果　牙周健康组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为37·5%和32·5%,而牙周炎组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为69·23%和46·15%。牙周炎组菌斑的牙龈卟啉单胞菌阳性率高于牙周健康组,颊黏膜的牙龈卟啉单胞菌阳性率在组间无统计学差异;牙周炎组菌斑牙龈卟啉单胞菌阳性率高于颊黏膜, 牙周健康组两部位阳性率无统计学差异。结论　牙龈卟啉单胞菌除在菌斑中有高检出率外,在颊黏膜中也有较高的检出率,提示颊黏膜也是牙周细菌在口腔定植的重要部位,牙龈卟啉单胞菌也可在健康人群中检出,提示其有可能是口腔内固有菌群之一。     

不同牙周状况龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的分布

目的 分析中国牙周健康者和慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的分布情况,探讨两种细菌在中国慢性牙周炎患者中的分布及其致病机理.方法 收集65例牙周健康者、62例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用16S rRNA PCR方法检测牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的分布.结果 牙周健康者牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的检出率分别是21.6%、12.3%,慢性牙周炎患者病变位点两菌检出率分别为74.2%、58.1%,牙周炎健康位点两菌的检出率分别是22.6%、4.8%.牙周炎病变位点两种细菌的检出率均明显高于牙周健康者和牙周炎健康位点(P＜0.001);福赛斯坦纳菌在牙周健康者中的检出率高于牙周炎健康位点(P＜0.05);牙周健康者和牙周炎健康位点牙龈卟啉单胞菌的检出率没有差异.慢性牙周炎患者两菌联合检出率为51.6%.结论 牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌以及两种细菌联合感染与牙周炎密切相关.     

慢性牙周炎患者牙周袋内硫化物水平与厌氧细菌分布的相关性研究

目的:探讨慢性牙周炎患者牙周袋内硫化物水平(sulfide levels in periodontal pockets,SUL)与牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、伴放线放线杆菌分布的相关性.方法:用perio2000 system金刚探针牙周诊断仪测定慢性牙周炎患者SUL,采用PCR方法检测龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌和伴放线放线杆菌.结果:慢性牙周炎患者随着牙周袋内SUL浓度的增加牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌的检出率逐渐增加,相关系数分别为0.812和0.651(P<0.05);SUL阳性位点与阴性位点中牙龈卟啉单胞菌的检出率分别是为85.6%、26.7%,中间普氏菌的检出率分别为95.2%、53.3%.SUL阳性位点中牙龈卟啉单胞菌和中间普氏菌的检出率明显高于SUL阴性位点;在80.9%的SUL阳性位点中牙龈卟啉单胞菌与中间普氏菌共存.SUL阳性位点与阴性位点均未检出伴放线放线杆菌.结论:慢性牙周炎患者SUL与牙龈卟啉单胞菌和中间普氏菌分布关系较为密切.     

青少年正畸治疗中牙龈蛋白R的变化对牙龈炎性反应的影响

目的 分析青少年在正畸治疗中牙龈蛋白R（gingipain R,Rgp）变化对牙龈炎症的影响.方法 选择青少年牙龈健康者60名,分别取矫治器戴入前与矫治器戴入后第2个月的龈沟液,应用16S rDNA PCR技术检测各样本中的牙龈卟啉单胞菌及Rgp,同时记录牙龈指数,用x2检验比较牙龈卟啉单胞菌、Rgp各组间检出率,分析牙龈卟啉单胞菌、Rgp的检出率与牙龈指数之间相关性.结果 矫治器戴入前与戴入后第2个月的牙龈卟啉单胞菌的检出率分别为31.67％和56.67％,两者之间有极显著性差异（P＜0.01）;Rgp检出率分别为15.79％和44.12％,两者之间具有显著性差异（P＜0.05）.矫治器戴入后牙龈炎症指数Ⅰ级与戴入前牙龈炎症指数0级检出率之间有显著性差异（P＜0.05）.结论 青少年在正畸治疗中,矫治器的戴入使得牙龈卟啉单胞菌及Rgp检出率明显增加,易出现牙龈炎性反应,提示口腔卫生宣教的重要性.     

慢性间歇性低氧条件下大鼠龈沟液中牙龈卟啉单胞菌的变化

目的:探讨间歇性低氧条件下大鼠龈沟液中牙龈卟啉单胞菌的变化.方法:将32只6周龄雄性SD大鼠随机分成4组(n=8):常氧对照组(A组)、常氧牙周炎组(B组)、间歇性低氧组(C组)、间歇性低氧合并牙周炎组(D组).用正畸结扎丝结扎双侧上颌第二磨牙颈部和高糖饮食方法建立牙周炎模型,常氧和低氧组分别在常氧和模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征条件下饲养8周,采集大鼠实验牙龈沟液标本,实时荧光定量PCR方法检测牙龈卟啉单胞菌的变化.结果:所有的大鼠均检出牙龈卟啉单胞菌.D组牙龈卟啉单胞菌的量明显高于其他3组(P＜0.05);B组牙龈卟啉单胞菌的量高于A组(P＜0.05).结论:慢性间歇性低氧可加重牙周炎病程,与龈沟液中牙龈卟啉单胞菌的增加有关.     

5种牙周龈下可疑致病微生物与慢性牙周炎局部不同牙周状态间的关系

目的 观察5种龈下微生物检出水平与慢性牙周炎局部牙周状态的关系。方法 选择20例慢性牙周炎患者的80个位点及10例牙周健康者的20个位点为观察位点,采集龈下微生物样本,记录牙周探诊深度（PD）,根据所测位点的PD进行分组。PD≤4 mm为A组,4 mm＜PD≤6 mm为B组,PD>6 mm为C组,健康对照组为H组。通过聚合酶链反应（PCR）和DNA探针反杂交技术半定量检测各组伴放线菌嗜血菌、牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌、齿垢密螺旋体和中间普氏菌的检出率和检出水平。结果 B、C组牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌、齿垢密螺旋体和中间普氏菌的检出率和检出水平均高于H组,A组牙龈卟啉单胞菌的检出率和检出水平也高于H组,C组福赛斯坦纳菌和齿垢密螺旋体检出水平高于B组,以上差异均有统计学意义（P<0.05）;伴放线菌嗜血菌在各组间的检出率及检出水平都无明显差异。结论 随着牙周袋的加深,牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌、齿垢密螺旋体和中间普氏菌体的阳性检出率和检出水平都有随之增加的趋势;牙龈卟啉单胞菌与慢性牙周炎的早期炎症关系较为密切,而福赛斯坦纳菌和齿垢密螺旋体与中重度慢性牙周炎炎症位点的严重程度有关。     

Ⅱ型糖尿病前期伴牙龈炎患儿牙周可疑致病菌的检测

目的:检测Ⅱ型糖尿病前期伴牙龈炎患儿龈下菌斑中的牙周可疑致病菌,指导牙周病的治疗和预防。方法:以6～14岁的儿童作为研究对象,按照血糖水平和牙龈炎症状况分为3组:糖尿病前期伴牙龈炎组(实验组)、代谢正常伴牙龈炎组(对照组一)、代谢正常而牙周健康组(对照组二),每组各30例。以牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn),中间普氏菌(Prevotella intermedia,Pi),福塞坦氏菌(Tannerella forsythia,Tf)为目标菌,应用以16SrRNA为基础的聚合酶链反应(polynerase chain reaction,PCR)技术对龈下菌群进行检测。分析5种菌的相对含量与牙周临床指标和血糖水平的相关性。结果:5种可疑致病菌的检出率实验组明显高于对照组二(P<0.05);实验组虽高于对照组一,但无统计学差异(P>0.05)。Pg的相对含量与牙周探诊深度(Probing depth,PD)、龈沟出血指数(Sulcus bleeding index,SBI)以及空腹血糖(Fasting blood-glucose,FBG)存在相关性(P<0.05);Pi的相对含量与PD、SBI、FPG、口服葡萄糖耐量实验2 h血糖(OGTT2hBG)存在相关性(P<0.05);Aa和Fn的相对含量与SBI、PD存在相关性(P<0.05);Tf的相对含量与SBI、PD、FBG存在相关性(P<0.05)。结论:Ⅱ型糖尿病前期伴牙龈炎者牙周可疑致病菌的检出率明显高于正常对照组,虽与单纯牙龈炎组相比,其数量无明显差异,但应更加注意血糖水平和菌斑控制。     

正畸患者牙龈卟啉单胞菌基因检测

目的 对正畸患者口腔中牙龈卟啉单胞菌等牙周致病菌进行检测。方法 选择１６例固定正畸患者发生牙周炎症的牙周袋和牙周健康的龄袋为取菌斑样本占。分成牙周炎症组和对照组。根据改良聚合酶链反应检测技术，直接检测临床标本中牙龈卟啉单力的ＦｉｍＡ基因，并做此检测技术的敏感性和特异性实验。结果 牙周炎组牙龈卟啉单胞菌的检测阳性率（５６．３５）显著大于对照组（１８．８％），Ｐ〈０．０５。检测技术的敏感性和特异性较高     

Prevalence of fimA genotypes of Porphyromonas gingivalis and other periodontal bacteria in a Spanish population with chronic periodontitis

Objectives: The aim of this study was to determine the prevalence of the different fimA genotypes of Porphyromonas gingivalis in adult Spanish patients with chronic periodontitis, patients with gingivitis and periodontally healthy subjects, and the relationship between these genotypes and other periodontopathogenic bacteria. Study design: Samples of subgingival plaque were taken from 86 patients (33 with chronic periodontitis, 16 with gingivitis, and 37 periodontally healthy) in the course of a full periodontal examination. PCR was employed to determine the presence of the 6 fimA genotypes of Porphyromonas gingivalis (I-V and Ib) and of Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Tannerella forsythia and Treponema denticola. Results: Porphyromonas gingivalis fimA genotypes II and Ib were present in significantly higher percentages in periodontal patients (39.4% and 12.1% respectively) than in healthy or gingivitis subjects. The prevalence of Tannerella forsythia, Treponema denticola, and Porphyromonas gingivalis fimA genotype IV was significantly higher in the group that presented bleeding greater than 30%. A positive correlation was found between Porphyromonas gingivalis fimA genotype IV and Treponema denticola. Conclusions: A strong association between Porphyromonas gingivalis fimA genotypes II and Ib and chronic periodontitis exists in the Spanish population. The most prevalent genotype in periodontal patients is II. Key words:Periodontitis, Porphyromonas gingivalis, fimA genotype, periodontal bacteria, polymerase chain reaction.     

青春期龈炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的检测

目的:检测青春期龈炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的存在情况,探讨青春期Pg与牙龈健康状况的关系。方法:14～17岁青春期龈炎患者及牙龈健康者各36例,采用16SrRNA聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测2组受检者的龈下菌斑样本中Pg的存在,并用电泳凝胶成像分析软件检测各电泳条带的平均灰度值,计算Pg的相对含量;同时检测并记录受检者的各牙周指数测值,观察其与Pg相对含量的相关性。数据用SPSS11.5软件包作统计学分析。2组Pg阳性检出率的比较采用χ2检验;Pg的相对含量以及Pg阳性检出者与阴性检出者的牙龈炎严重度的比较采用Wilcoxon秩和检验;Pg的相对含量与各牙周指数之间的相关关系采用Spearman相关分析。结果:青春期龈炎组与牙龈健康组的龈下菌斑中Pg的阳性检出率分别为47.22%和25.00%,两者之间具有显著性差异(P<0.05);青春期龈炎组与牙龈健康组的Pg在龈下菌斑中的平均相对含量分别为48.02%和21.46%,统计学上有高度显著性差异(P<0.01);在青春期龈炎组Pg阳性个体中,Pg的相对含量与牙龈指数(gingivalindex,GI)、龈沟出血指数(sulcusbleedingindex,SBI)、探诊深度(probedepth,PD)数值的高低呈正相关;青春期龈炎组中,Pg阳性检出者的GI、SBI数值高于阴性检出者,两者之间具有高度显著性差异(P<0.01)。结论:青春期个体的龈下菌斑中有Pg的定植,且与牙龈健康状况有密切关系。     

Identification of intracellular oral species within human crevicular epithelial cells from subjects with chronic periodontitis by fluorescence in situ hybridization

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Interactions between oral bacteria and gingival epithelial cells play an important role in the pathogenesis of periodontal diseases. This study used in situ hybridization with 16 rRNA probes and confocal microscopy to detect the periodontal pathogens Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Tannerella forsythia, and Treponema denticola within epithelial cells from periodontal pockets, gingival crevice, and buccal mucosa collected from subjects with chronic periodontitis (n = 14) and good periodontal health (n = 8). MATERIAL AND METHODS: Each green fluorescent species-specific and universal probe was hybridized with all 58 epithelial samples from the 22 patients. The samples were observed by confocal microscopy to confirm the intracellular localization of oral species of bacteria. The mean frequency of detection and number of intracellular bacteria per epithelial cell were computed for each sample. RESULTS: The frequency of cells with internalized bacteria was higher in samples from the gingival crevice than in samples from the oral mucosa. Epithelial cells from all subjects harbored intracellular bacteria; however, patients with periodontitis presented significantly higher counts of bacteria per cell than periodontally healthy individuals (p < 0.05). Periodontal pathogens showed a trend to be detected in higher numbers in epithelial cells from periodontitis patients. In particular, T. forsythia and T. denticola were significantly more prevalent in periodontal pocket cells than healthy sulci and buccal cell samples in the periodontitis group (p < 0.05). CONCLUSION: Those findings indicate that crevicular and buccal cells present internalized bacteria, regardless of periodontal status. However, higher bacterial loads are detected in cells from subjects with periodontitis.     

反向基因芯片技术检测牙龈卟啉单胞菌致病岛基因

目的：应用反向基因芯片技术检测PG0836、PG0838、PG0839基因在慢性牙周炎患者和牙周健康者牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）中分布,探讨这些基因与牙周临床指数之间的关系。方法：选取41例慢性牙周炎患者,牙周健康者76例,记录临床指标牙周探诊深度、临床附着丧失、探诊出血及牙齿松动度,取龈下菌斑进行细菌分离培养,以临床采集的样本提取的DNA为探针,以抑制消减杂交技术获得的P.gingivalis W83的特异基因片段PG0836、PG0838、PG0839为目标序列,采用Cy5荧光标记目标序列。应用基因芯片技术检测PG0836、PG0838、PG0839基因在病变部位及非病变部位的牙龈卟啉单胞菌中的分布。结果：PG0836、PG0838、PG0839基因在病变部位和非病变部位中的检出率均有统计学差异（P〈0.05）,并且与牙周临床指数PD、CAL、TM相关。结论：PG0836、PG0838、PG0839基因与P.gingivalis的致病性有关。     

牙龈卟啉单胞菌及其牙龈蛋白酶K对青少年牙龈健康的影响

目的：分析牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）及牙龈蛋白酶K（Kgp）对青少年牙龈健康的影响。方法???收集12~17岁青少年牙龈正常组（50例）、牙龈炎症指数Ⅰ级组（25例）和牙龈炎症指数Ⅱ级组（32例）的3组龈沟液标本,应用16S?rDNA?PCR技术检测各样本中的P. gingivalis及Kgp。3组P. gingivalis和Kgp阳性检出率的比较采用χ2检验;P. gingivalis和Kgp的相对含量与牙龈炎症指数之间的关系采用Spearman相关分析。结果???P. gingivalis在牙龈炎症指数Ⅰ级组的检出率大于牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅱ级组的检出率大于牙龈炎症指数Ⅰ级组和牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅰ级组、Ⅱ级组与牙龈正常组间有明显差异（P<0.01）,牙龈炎症指数Ⅰ级组与Ⅱ级组间差异具有统计学意义（P<0.05）。Kgp在牙龈炎症指数Ⅰ级组的检出率大于牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅱ级组的检出率大于牙龈炎症指数Ⅰ级组和牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅰ级组与牙龈正常组间差异具有统计学意义（P<0.05）,牙龈炎症指数Ⅱ级组与牙龈正常组间有明显差异（P<0.01）。P. gingivalis和Kgp的检出率随着牙龈炎症指数的增加而升高。结论???P. gingivalis和Kgp与青少年牙龈健康密切相关。     

Detection frequency of periodontitis-associated bacteria by polymerase chain reaction in subgingival and supragingival plaque of periodontitis and healthy subjects

The aim of this study was to compare the detection frequencies of 25 bacterial species in subgingival and supragingival plaque of 18 untreated periodontitis subjects and 12 periodontally healthy subjects. Genomic DNA was extracted from subgingival and supragingival plaque samples, and bacterial detection was performed by polymerase chain reaction of the 16S rRNA genes. Fourteen bacteria showed no relationship with periodontitis, and 11 of these 14 species were frequently detected (≥50%) in subgingival plaque in both periodontitis and healthy subjects. Nine bacteria such as Eubacterium saphenum, Prevotella intermedia, and Treponema denticola seemed to be related to periodontitis; their detection frequencies in subgingival plaque samples were higher in periodontitis than in healthy subjects, but these differences were not statistically significant by multiple comparisons (0.002≤ P< 0.05). Two species ( Mogibacterium timidum and Porphyromonas gingivalis ) were detected significantly more frequently in subgingival plaque of periodontitis subjects than of healthy subjects ( P< 0.002), with P. gingivalis being detected only in periodontitis subjects, suggesting that these two species are closely related to periodontitis. There were no significant differences in the detection frequencies of the 25 bacteria between subgingival and supragingival plaque, suggesting that the bacterial flora of supragingival plaque reflects that of subgingival plaque.     

牙龈卟啉单胞菌脂蛋白基因在慢性牙周炎及牙周健康者中的检测

目的 应用基因芯片技术检测3种脂蛋白基因PG0717、PG0183、PG2135在慢性牙周炎患者和牙周健康者牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)中的分布,探讨这些基因与牙周临床指数之间的关系,为研究脂蛋白在Pg致病过程中的作用提供依据.方法 选取41例慢性牙周炎患者(牙周炎组)及76例牙周健康者(健康对照组),记录探诊深度、附着丧失、探诊出血及牙齿松动度,取龈下菌斑进行细菌分离培养,以临床采集的样本提取的DNA为探针,以抑制消减杂交技术获得的PgW83特异基因片段PG0717、PG0183、PG2135为目标序列,采用Cy5荧光标记目标序列.应用基因芯片技术检测PG0717、PG0183、PG2135基因在牙周炎组病变部位、非病变部位和健康对照组Pg中的分布.结果在牙周炎组病变部位PG0717、PG0183、PG2135基因的检出率分别为90%(18/20)、70%(14/20)、70%(14/20),非病变部位的检出率分别为60%(12/20)、45%(9/20)、40%(8/20),而在健康对照组PG0717、PG0183、PG2135的检出率分别为55%(11/20)、25%(5/20)、30%(6/20).3种脂蛋白基因在牙周炎组病变部位和健康对照组中的检出率差异均有统计学意义(P＜0.05),并且与牙周探诊深度、临床附着丧失、探诊出血及牙齿松动度相关.结论 带有PG0717、PG0183、PG2135基因的Pg菌株致病力强.