光敏生物素标记流行性出血热病毒R_(22)株M片段cDNA探针

核酸探针一般多采用同位素标记,限制了它的推广应用。所以应用非放射性标记物代替同位素,具有实际意义。作者采用国产光敏生物素,标记流行性出血热病毒R_(22)株M片段R_3 cDNA探针,报告如下。1 光敏生物素标记 cDNA探针的敏感性 以R_3克隆cDNA为目的基因,加热变性后再经10倍系列稀释后,点到硝酸纤维素膜上,分别用光敏生物素,生物素-11-dUTP及a-~(32)P-dATP标记的探针杂交检测,结果光敏生物素与生物素-11-dATP敏感性一致,均     

大劣按蚊AdS7基因的克隆及分析

目的克隆AdS7基因cDNA序列,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照.方法采用RT-PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7 cDNA部分序列,标记地高辛AdS7探针,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆,以半定量RT-PCR方法研究血餐和约氏疟原虫感染对其表达水平的影响.结果从大劣按蚊cDNA克隆得到长464 bp的AdS7基因cDNA部分序列,从大劣按蚊cDNA文库筛选获得了长871 bp的AdS7基因全长克隆,大劣按蚊吸血和感染约氏疟原虫后24 h,AdS7表达水平没有显著变化.结论 AdS7基因可作为大劣按蚊基因定量研究的内参照.     

DNA探针非同位素标记技术

自1953年Watson和Crick创立DNA双螺旋结构模型以来，核酸的研究工作出现了飞速发展。正是作为研究核酸的有力工具，DNA探针在60年代后期应运而生，并以惊人的速度发展起来。目前，DNA探针最常用的标记物仍然是放射性同位素（32P等）。同位素标记探针具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在半衰期短，价格昂贵，需放射性防护，废弃物难处理等缺点。近年来，国外许多学者致力于DNA探针非同位素标记的研究，取得了令人瞩目的进展。非同位素探针的标记物有酶、荧光素、生物素等，其标记方法大致可分两种：直接标记和间按标记．1直接标记法…     

地高辛与光敏生物素标记探针在肝细胞癌原位杂交中应用的比较观察

地高辛与光敏生物素标记探针在肝细胞癌原位杂交中应用的比较观察同济医科大学实验医学研究中心，武汉４３００３０杨木兰，郑杰，杨渝珍，李东关键词地高辛；光敏生物素；肿瘤中图法分类号Ｒ９７２＋１，Ｒ７３５．７原位分子杂交技术最早（１９６９）用于细胞内核蛋白体...     

酶标记核酸探针的应用前景

基因探针已逐渐运用于传染病的诊断、流行病学调查、肿瘤学研究、食品检验、人类各种遗传病诊断等。目前使用的基因探针有同位素标记探针和生物标记探针。同位素探针多半使用高度活性放射性同位素标记的多核苷酸探针,以及放射自显影的检测方法,其灵敏度为0.5～5pg的靶DNA;但由于同位素半衰期短、易扩散、操作者个人安全和同位素废物处理等问题,以及检测时间长,不适于临床检测和基层推广使用。而生物素标记核酸探针虽有着放射性物质标记探针可不相比的优点,但生物素标记的核酸探针不论长短,在实际应用中     

爱克宁微胶囊剂对大劣按蚊毒效的试验观察

为了考核爱克宁微胶囊剂浸泡蚊帐对海南传疟媒介大劣按蚊的毒力大小．我们在实验室进行了药效测定。现将结果报告如下。1．材料与方法1．1试验材料1．1．1试验药物：爱克宁（ICON）10％微胶囊剂，由捷利康中国有限公司提供。澳佩菊酯（Deltamethrin）2．5％乳油．由海南力力达农药厂提供。1．1．2试虫；大劣按蚊（AnophelesDirus）为本所养蚊室饲养的未吸血羽化3～5日龄雌成蚊。1．2试验方法将杀虫剂按一定倍数稀释后．浸泡用棉蚊帐有制成的蚊笼，凉干后进行试验。爱克宁浸泡两个蚊笼，有效成份分别为：15mg／m2、20mg／m2。为了便于比较…     

大劣按蚊成虫前期在低温区的生长与发育情况

大劣按蚊是东南亚和我国海南、云南的重要传疟媒介,也是疟疾研究较理想的实验蚊媒。由于该蚊滋生地较分散,环境因素对其成虫前期生长发育的影响很难进行较系统的观察,故有关的研究报告甚少。笔者于1989～1992年用冬春季室温对大劣按蚊海     

海南省疟疾暴发点与高发病村庄媒介按蚊调查

目的：了解目前我省疟疾暴发点与高发病村介媒介按蚊种群密度与分布及其生态习性。方法：采用人诱与牛诱半通宵捕蚊法调查。结果：在山林区高发病村庄,捕获大劣按蚊和微小按蚊点,分别占捕蚊点的４２．９％和５７．１％;在平原丘陵区暴发点,均捕获微小按蚊,无捕获大劣按蚊。其中人诱捕大劣按蚊、微小按蚊、中华按蚊和吉甫按蚊数,分别占捕蚊总数的９．９％、６．９％、５４．５％和２．０％;牛诱捕获上述４种按蚊却分别占捕蚊总     

海南岛按蚊名录

本名录收集整理1991年以来的有关文献和海南按蚊调查研究的结果,迄今记录海南岛共有按蚊32种,分属于按蚊亚属13种,塞蚊亚属19种,其中6种发现自然感染疟原虫,以大劣按蚊和微小按蚊两种为主要传疟媒介。     

传疟媒介大劣按蚊及食蟹猴疟原虫B株配子体生物学特性的研究

大劣按蚊(Anopheles dirus)是我国海南、云南及东南亚丛林地区高效传疟媒介,国内外资料表明:大劣按蚊嗜吸人血、野栖、疟原虫子孢子腺感染率高。据调查,缅甸、柬埔寨、老挝、泰国及越南该蚊的自然腺感染率约1～9％,我国海南岛为1～11％。由于对其尚缺乏有效的防制方法,成为东南亚及我国南方灭疟后期丛林山麓地区疟疾疫点难以有效控制的重要根源。据调查,以大劣按蚊为媒介地区的疟疾     

海南省大劣按蚊实验室自然交配的驯化研究

目的 建立实验室大劣按蚊自然交配繁殖种群,为同类研究提供依据。方法 将野外捕捉并在实验室人工交配繁殖至第61代的大劣按蚊,按不同雌雄比例先后顺序置于大、中、小三种不同型号的蚊笼中喂养、驯化、观察产卵情况并计算产卵数和孵化率。结果 在大、中、小蚊笼内的分别驯化至第15、10和18代时成蚊卵的孵化率各达到82％、83．4％和80．7％,成功建立小蚊笼自然交配的大劣按蚊种群。结论 经实验室驯化的大劣按蚊能够自然交配、产卵、繁殖,有助于建立实验室自然种群。     

海南岛大劣按蚊扩散实验的观察

大劣按蚊是海南岛疟疾的主要传播媒介,了解大劣按蚊的扩散范围(俗称飞行距离),是进行疟区流行病学分析,规划防制区域界限和评价防制措施的重要依据,国内未见开展此项观察;国外报道资料寥寥无几。海南寄生虫病防治研究所科技人员苏善强、王志光等,在中山医科大学何桂铭教授     

球型芽孢杆菌2362株对两种按蚊幼虫杀伤效果的比较研究

摘要：目的了解球形芽孢杆菌2362株（Bs）对大劣按蚊及斯氏按蚊幼虫的毒力作用,为生物杀虫剂的使用提供科学依据。方法利用Probitan~ysis方法在实验室对球型芽孢杆菌2362株杀伤大劣按蚊和斯氏按蚊幼虫的效果进行了生物测定,并对两种按蚊的敏感性进行了比较研究。结果球形芽孢杆菌2362株对大劣按蚊幼虫48h和72h的LC50值为（0．0151±0．0029）m朗和（O．0110±0．0014）m胡,LC95值为（O．0960±O．0099）mg／1和（O．0529±0．0193）ml;对斯氏按蚊Hot株幼虫48h和72h的LC值为（O．0184±0．0015）mg／l和（0．0162±0．0014）mg／1,LC95值为（0．0850±0．0219）mg／1和（0．0620±0．0114）rag／1。结论球形芽孢杆菌2362株对大劣按蚊和斯氏按蚊均有较好的杀伤效果,大劣按蚊对Bs的敏感性似较斯氏按蚊幼虫略高,且作用持续时间也稍长。     

用斑点杂交法检测肾综合征出血热患者尿沉渣细胞中病毒核酸

用光敏生物素标记的肾综合征出血热(HFRS)病毒R22株M片段R3克隆cDNA探针检测HFRS患者尿沉渣细胞内的病毒核酸,共检测81份患者尿液标本,阳性率为65.4％,而正常人及其他疾病患者的55份尿液标本均呈阴性,病程第1—7日病毒核酸检出率为80.8％(21/26),在发病第22日以后有的(5/13)仍可检出。7份尿液标本同时用光敏生物素和x-~(32)P标记探针检测,均为4份阳性,本实验结果提示,光敏生物素标记的核酸杂交技术可作为HFRS早期诊断及流行病学调查之用。     

生物素标记bcr基因探针的制备

采用乙二胺化学修饰法制备生物素bcr基因探针，探针的检测敏感性达1pg，接近同位素标记探针的敏感性。该标记方法操作方便，标记效果稳定，探针可长期保存，试剂价格较低廉，为bcr基因探针的临床应用开辟了一条新途径。     

光生物素标记探针检测乙型肝炎病毒DNA

近年来,生物素的应用越来越广泛,它不但用于病理技术,而且在临床检验和生物学领域内的用途也日益广泛。目前,进行的斑点杂交法,大多用同位素标记探针,由于同位素对人体有损伤,故生物素的利用日趋兴旺,而光生物素标记探针,既简便、省时,又快速、安全,是检验系统检测液状物质内核酸的最佳选择。有关这方面的文献,国内报道甚少。本文应用光生物素标记探针检测血清中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA,获得了满意的结果。现介绍如下:(一)材料1.HBV DNA:带有 HBV:DNA 全基     

大劣按蚊感染约氏疟原虫defensins基因的克隆及生物信息学分析

目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目的片段,TA克隆后测序并进行序列分析。结果用简并引物的RT-PCR扩增出约氏疟原虫感染的大劣按蚊的189bp目的片段,序列分析表明与冈比亚按蚊defensins有87%同源性,与白蚊伊蚊defensinsD有88%同源性,为大劣按蚊的defensins基因。结论成功克隆并分析了大劣按蚊抗菌肽defensins基因,为进一步的重组表达和研究按蚊抗菌肽的生物活性奠定基础。     

光敏生物素标记cDNA探针在肾综合征出血热实验诊断中的应用

作者用光敏生物素标记的R_5cDNA探针杂交检验了肾综合征出血热(HFRS)患者外周血淋巴细胞、血清和尿沉淀细胞中HFRS病毒核酸，     

罗葵地区大劣按蚊成蚊调查

大劣按蚊是海南省山林及山麓地区的主要传疟媒介，１９９１年６月－１９９２年６月，连续１３个月在保葶县罗葵地区什故村对大劣按蚊成蚊进行了调查，发现当地大劣按蚊构成比为６０％（２０７／３４５），４、５、６、７、８月份均有，５月为密度高峰；平均密度为２．４只／人工小时；半通宵观察平均叮人率为２．９６；经产蚊比率为０．６４６，日存活率为０．８８；预期寿命为７．８天；恶性疟原虫孢子增殖需要１１．３天；传染性蚊     

约氏疟原虫感染诱导大劣按蚊AdSP1 和AdSP3的转录

目的观察丝氨酸蛋白酶AdSP1 和AdSP3在大劣按蚊主要组织中的表达,分析血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞AdSP1 和AdSP3转录的影响.方法离心收集血细胞,解剖分离大劣按蚊蚊胃和唾液腺,提取相应的总RNA,RT-PCR扩增;然后将同批3～5 d龄大劣按蚊分为正常组(N)、吸正常血组(B)和感染约氏疟原虫组(I),分别在血餐后1、2、3、4、7 d和11 d,收集3组各50只雌大劣按蚊血细胞和提取总RNA,以Ads7为内参照,进行半定量RT-PCR分析.结果丝氨酸蛋白酶AdSP1 和AdSP3在大劣按蚊血细胞和唾液腺中表达,不在蚊胃表达;吸血和约氏疟原虫感染后,大劣按蚊血细胞中AdSP1 和AdSP3的转录上调,尤以约氏疟原虫黑化期间明显.结论 AdSP1和AdSP3可能参与大劣按蚊对约氏疟原虫的黑化反应,并可能是大劣按蚊的PPAE.