r—干扰素对过度增生的血管平滑肌细胞癌基因表达的抑制作用

本实验建立了兔腹主动脉球囊扩张（ＢＡ）动物模型。以地高辛标记的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ癌基因探针进行ＢＡ术后血管段组织的原位杂交，以生物素标记的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ探针以经ＢＡ组织培养液刺激的、培养的血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）进行细胞的原位杂交。结果显示：（１）ＢＡ术后再狭窄的血管段中ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ－Ｎ－ｒａｓ三种癌基因表达均增高，而且表达颗粒主要分布于粥样斑块再狭窄     

重组γ干扰素的表达与纯化

目的 探讨γ干扰素在大肠杆菌中的表达及纯化方法,为下一步批量生产提供实验依据。方法 应用ＤＮＡ重组技术把中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物ＩＦＮ－γｃＤＮＡ克隆到析核表达质料ｐＢＶ２２０上,构建出ｐＢＶＩＦＮ高效表达载体,转化大肠杆菌ｐｌｙｓｓ。通过温度诱导,高效表达ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ。然后,经过包涵体溶解、复性、浓缩及ＤＥＡＥ离子交换层析,使γ干扰素纯化。结果 ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ表达水平占菌体     

γ干扰素的分子生物学研究进展

γ干扰素（interferon gamma，IFN-γ）具有强大的抗增殖、控制细胞凋亡和免疫调节作用。本文针对IFN-γ的结构与来源、基因表达、受体与信号传导、基因工作的相关分子生物学研究进行综述。     

干扰素—γ,一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖的关系

目的 研究干扰素γ与一氧化氮合酶,一氧化氮及血管平滑肌细胞增殖之间的关系,方法 将不同质量浓度的干扰素－γ（２５０－１０００Ｕ．ｍｌ＾－１）作用于培养血管平滑肌细胞中,采用（＾３Ｈ）ＴｄＲ掺入,细胞生长曲线和定量ＲＴ－ＰＣＲ等方法检测血管平滑细胞一氧化氮合酶基因表达,一氧化氮产生及血管平滑肌细胞增殖。结果;干扰素－γ可以诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因及酶蛋白,产生一氧化氮并呈质量浓度依赖。     

干扰素-γ对甲状腺细胞钠/碘转运体基因调控的研究

目的研究干扰素-γ(IFN-γ)对甲状腺滤泡细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,探讨细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中的作用和地位.方法取Graves病(GD)患者的甲状腺组织,进行甲状腺细胞原代培养,培养5天后,吸去培养液,换用含不同浓度IFN-γ的试验液,与单层培养的滤泡上皮细胞共同孵育48 h,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测钠碘转运体(NIS)mRNA表达的变化.结果IFN-γ浓度在0、1 U/ml时,GD甲状腺滤泡上皮细胞膜上NIS mRNA表达无明显差异;IFN-γ浓度在10、100U/ml时,NIS基因表达比前一浓度时明显受抑制(P＜0.05);IFN-γ浓度为1000U/ml时,NIS基因表达量与前一浓度比较无统计学差别.结论IFN-γ可抑制甲状腺滤泡细胞基膜上NIS基因的表达,提示细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中发挥重要作用.     

γ—干扰素对哮喘气道炎症的影响

为探讨人重组γ－干扰系能否抑制抗原引起嗜酸性粒细胞在支气管哮喘患者气道的聚集。我们选择１０例过敏性哮喘患者以纤支镜直接将ｈｒｌＦＮ－γ及过敏原注入左叶或右中叶的肺段支气管，将生理盐水及过敏原注入对侧肺相应的肺段作为对照。     

TP40对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨转化生长因子α(TGFα)-绿脓杆菌外毒素(PE40)融合蛋白（TP40）对血管平滑肌细胞（SMC）增殖的抑制作用。方法：用免疫组化ABC法检测原代培养增殖期及静止期SMC表皮生长因子受体（EGFR）的表达,用结晶紫染色法和3H-亮氨酸掺入法检测TP40对增殖期和静止期SMC增殖及蛋白质合成的抑制,用过量EGF竞争抑制TP40的细胞毒作用。结果：增殖期SMC能高水平表达EGFR,静止期SMC表达水平较低。TP40浓度为0.1和1.0 ng/ml时,对增殖期SMC增殖及蛋白质合成的抑制作用与静止期SMC无差异（P>0.05）;10及100 ng/ml时,对增殖期SMC增殖及蛋白质合成的抑制作用较静止期SMC强（P<0.01）;过量EGF能完全抑制TP40的细胞毒作用。结论：TP40对增殖期SMC的增殖具有较强的抑制作用,对静止期SMC则影响较小,作用部位为细胞的EGFR。     

氧化低密度脂蛋白诱导人载脂蛋白AI转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因的研究

目的 为研究人载脂蛋白AI(h-ApoA-I)抗氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h-apoA-I转基因小鼠血管平滑肌细胞(vSMC)抗ox-LDL所致AS过程中表达的相关基因。方法以ox-LDL为刺激物作用于培养的转基因小鼠vSMC,应用抑制性差减杂交方法构建减除文库,筛选、克隆差异表达基因,并进行序列测定及同源性比较。同时用SMART技术构建了ox-LDL诱导的转基因小鼠vSMC全长噬菌体文库。结果从57个差异克隆中随机选取15个克隆测序并分析,得到3个表达序列标签(EST),均为与免疫系统有关的功能基因片段,即：补体C1-抑制物(C1-INH)、植物凝集素及T细胞受体B(TCRB)。有明显抗内膜脂质沉积能力的h-apoA-I转基因小鼠的vSMC在被ox-LDL诱导后,筛选出的3个EST均与免疫系统有关,其中C1-INH及植物凝集素与补体系统密切相关。结论ox-LDL致AS及h-ApoA-I抗AS可能有免疫机制参与,且与补体活化及其调控密切相关。其中C1-INH作为抗AS的潜在靶点值得关注。     

干扰素-γ抗肝纤维化组织学疗效及其对HBV复制的影响

目的　观察干扰素 (IFN) -γ治疗慢性乙型肝炎 (CHB)肝纤维化的疗效及其对HBV复制的影响。方法　采用开放、随机、肝纤维化半定量计分等方法 ,对 60例CHB患者进行治疗前后肝组织学、血清肝纤维化指标及HBVDNA水平比较。结果　治疗 9个月后肝纤维化计分从治疗前的 13 4± 5 4下降到治疗后的 10 2± 5 3 ,与对照组比较差异非常显著 (P <0 0 0 1) ;透明质酸 (HA)、Ⅳ型胶原 (CⅣ )、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、层黏蛋白 (LN)分别为 ( 165 2± 98 4)ng/ml、( 13 6 3± 5 8 9) μg/ml、( 187 6± 42 3 ) μg/ml、( 15 8 4± 10 8 6)ng/ml ,与治疗前及对照组比较 ,差异有显著性 (P均 <0 0 0 1) ;血清HBVDNA水平 ( 10 5.8± 3 .6copies/ml)较治疗前 ( 10 7.6± 3 .4copies/ml)显著下降 (P <0 0 1)。结论　IFN -γ治疗CHB肝纤维化具有较好疗效 ,其对HBV复制有一定的抑制作用     

SiRNA对大鼠钙调神经磷酸酶活性及VSMCs增殖的影响

目的:观察神经肽Y(NPY)刺激的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中钙调神经磷酸酶(CaN)活性和c-fos表达水平的变化,以及RNA干扰抑制CaN活性的作用.方法:采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;NPY刺激培养的大鼠VSMCs增殖;RNA干扰特异性抑制CaN的活性及其mRNA的表达,阻断NPY刺激的大鼠VSMCs中CaN依赖的信号转导通路,观察对CaN活性、细胞增殖、核内原癌基因c-fos表达水平的变化.结果:NPY可增加VSMCs的CaN活性,加快细胞增殖及增加核内c-fos表达水平.RNA干扰抑制CaN活性后,明显降低NPY刺激的VSMCs增殖及核内c-fos表达水平.结论:CaN参与了NPY刺激的VSMCs增殖,RNA干扰通过抑制CaN的活性可阻断NPY诱导的VSMCs增殖作用.     

罗格列酮抑制鼠动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的：探讨PPAR-γ合成型配体罗格列酮对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法：采用组织贴块法原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞并传代,根据细胞生长的形态特点和免疫细胞化学染色进行细胞鉴定.取第五代纯化细胞血清饥饿24h,然后用PDGF-BB或bFGF（20ng/ml）刺激24h,按实验分组在30min前加或不加入不同浓度（1～10umol/L）的罗格列酮进行预处理,应用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期分布.结果：镜下培养细胞呈典型的“谷峰状”生长,免疫细胞化学染色显示胞浆内特异的α平滑肌肌动蛋白阳性表达.PDGF-BB或bFGF均能诱导平滑肌细胞增殖,MTT中A490值增加,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.罗格列酮预处理能够抑制平滑肌细胞增殖,抑制细胞从G0/G1期向S期转变,且呈明显的剂量依赖关系.结论：罗格列酮能够抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞的增殖.     

鼻腔吸入IFN-r治疗变应性鼻炎的实验研究

目的:探讨鼻腔吸入r干扰素(IFN-r)对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的防治作用。方法:采用卵清蛋白(OVA)、氢氧化铝建立大鼠AR模型。IFN-r鼻腔吸入组(C组)与模型建立第23~30天,每日1次鼻腔吸入IFN-r 12μg,第31天取鼻腔灌洗液测定细胞成分,白介素(IL)-4,IL-5浓度,取血测定血浆IgE水平。设正常对照组(A组),AR模型磷酸盐缓冲液(PBS)处理组(B组)和丙酸倍氯米松吸入组(D组),每组5只大鼠。结果:C组鼻腔灌洗液中的嗜酸性粒细胞(EOS)为(0.005±0.003)×104/ml,明显低于B组的(0.223±0.068)×104/ml(P<0.01);C组鼻腔灌洗液中的IL-4为(7.8±3.2)pg/mL,IL-5为(12.5±4.6)pg/mL,均明显低于B组(P<0.01);C组血浆中总IgE为(38.5±9.6)μg/ml,OVA特异性IgE为(19.6±5.2)U/mL,明显低于B组(P<0.01)。结论:鼻腔吸入IFN-r可以抑制AR鼠IL-4和IL-5的合成,抑制EOS在鼻腔内的炎性浸润及血浆中总IgE和OVA特异性IgE水平,因而,对AR具有一定的防治作用。     

Inhibitory effect of iron on in vitro proliferation of smooth muscle cells

at the cellular and protein levels of soluble divalent iron (ferrous gluconate) and soluble trivalent iron (ferric chloride) on the proliferation of human aortic smooth muscle cells (HASMC) in vitro.

Methods The WST-1 test was used to evaluate the effect of iron on proliferation of HASMC and Western blot was used to measure the levels of signaling proteins involved in proliferative and apoptosis pathways.

Results HASMC proliferation was inhibited in a concentration dependent manner after treatment with soluble divalent and trivalent iron at concentrations of 100-500μmol/L. Western blot analysis showed the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression following treatment with soluble divalent iron and trivalent iron at 100, 300 and 500μmol/L was reduced compared to the control. The PCNA expression decreased with increasing iron concentration and to a greater extent with the trivalent iron than with the divalent iron treatment group. The p53 expression was markedly increased in a concentration dependent manner in both iron treatment groups.

Conclusions The soluble divalent iron and, to a greater degree trivalent iron, inhibited HASMC proliferation in a dose-dependent manner, which may be attributed to reduction of PCNA expression and increase of p53 expression.

     

Inhibitory effect of iron on in vitro proliferation of smooth muscle cells

Background Iron is a biocorrodible metal that might be used in bioabsorbable stents.This study investigated the effects at the cellular and protein levels of soluble divalent iron （ferrous gluconate） and soluble trivalent iron （ferric chloride） on the proliferation of human aortic smooth muscle cell （HASMC） in vitro.Methods The water-soluble tetrazolium （WST-1） test was used to evaluate the effect of iron on proliferation of HASMC and Western blotting was used to measure the levels of signaling proteins involved in proliferative and apoptosis pathways.Results HASMC proliferation was inhibited in a concentration dependent manner after treatment with soluble divalent and trivalent iron at concentrations of 100-500 μmol/L.Western blotting analysis showed that the proliferating cell nuclear antigen （PCNA） expression following treatment with soluble divalent iron and trivalent iron at 100,300 and 500 μmol/L was reduced compared to the control.The PCNA expression decreased with increasing iron concentration and to a greater extent with the trivalent iron than with the divalent iron treatment group.The p53 expression was markedly increased in a concentration dependent manner in both iron treatment groups.Conclusion The soluble divalent iron and,to a greater degree trivalent iron,inhibited HASMC proliferation in a dosedependent manner,which may be attributed to reduction of PCNA expression and increase of p53 expression.     

钙激活性CI-通道阻断剂对气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

【目的】探讨钙激活性CI-通道阻断剂尼氟灭酸(NFA)对平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及机制。【方法】采用[3H]-TdR掺入法检测不同剂量NFA对ASMCs增殖活性的影响。观察NFA及硝苯地平对组胺致ASMCs中[Ca2 ]i变化的影响。间接免疫荧光法观察NFA对ASMCs表达MAPK蛋白的影响。【结果】10μmol/L和50μmol/L NFA组细胞的活性明显低于对照组,并且高浓度50μmol/L NFA组比低浓度10μmol/LNFA组更显著,表现出剂量依赖性。对照组ASMCs胞浆和胞核呈现亮绿色荧光,胞膜周围较淡,加入激动剂组胺后,荧光亮度逐渐增强。相反,当同时存在NFA或硝苯地平干预时,镜下观察荧光强度变化不够明显。间接免疫荧光染色结果表明,培养24 h后,对照组中ASMCs细胞沿梭形胞浆出现大斑片状亮绿色荧光,而NFA干预组细胞表现为弱绿色荧光,胞浆内分布区域局限。【结论】NFA能有效抑制培养ASMCs的增殖活性,可能是通过阻断钙激活性CI-通道对[Ca2 ]i的正反馈效应,以及降低MAPK的表达来实现的。     

干扰素治疗慢性乙肝临床疗效观察

目的 观察干扰素α－１ｂ治疗慢性惭型肝炎的临床疗效。方法 采用前瞻性对照研究方法,将符合纳入标准的７５例患者分为治疗组（４５例）及对照组（３０例）。治疗组采用干扰素α－１ｂ３ＭＵ或５ＭＵ,周３次肌内注射给药,疗程４～６月;对照组不使用干扰素等抗病毒药物及免疫调节剂,仅予保肝及对症处理。观察用药开始（纳入随访）后６月时的临床疗效。结果 治疗组完全反应１３例（２８．８８％）;部分反应１３例（２８．８８