增殖细胞核抗原在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞中表达

目的 通过建立低氧性肺动脉高压大鼠模型,探讨增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在大鼠低氧性肺血管平滑肌细胞中的表达.方法 将SPF级SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=10),通过间断常压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压模型,肺组织切片经HE染色后图像分析技术定量检测大鼠肺小动脉的形态改变;免疫组织化学染色法测定肺血管平滑肌细胞内PCNA蛋白表达,并经图像分析半定量检测其表达强度.结果 4周后,模型组SD大鼠MT%、MA%与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05);模型组SD大鼠肺血管平滑肌细胞内PCNA核蛋白表达(积分面积、累积光密度)与对照组比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 常压低氧4周可成功建立肺动脉高压大鼠模型,PCNA在肺血管平滑肌细胞中的表达量具有差异性提示其可能在肺动脉高压形成过程中起重要作用.     

慢性低氧对大鼠肺内血管内皮生长因子表达的影响

慢性低氧对大鼠肺内血管内皮生长因子表达的影响程德云陈文彬吴琦肖欣荣为了解血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）在低氧性肺动脉高压发病中的可能作用，我们以慢性低氧复制大鼠肺动脉高压模型，观察其血清Ｖ...     

苏拉明对大鼠低氧性肺动脉高压的影响

目的 探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在低氧性肺动脉高压发病中的作用。方法 将３０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为对照组、低氧组和低氧＋苏拉明组,以常压低氧复制大鼠肺动脉高压模型,采用微导管法测定肺动脉平均压,对肺组织切片进行图像分析。结果 经低氧３周后,大鼠形成明显的肺动脉高压、肺小动脉管壁增厚和在左心室肥厚;经苏拉明处理,可明显减轻低氧所致的肺动脉压升高、肺血管壁增厚和右心室肥厚。结论 慢性低氧导致肺动     

二十二碳六烯酸对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)在动物整体水平的抗大鼠肺动脉高压作用及其对肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧DHA处理组,每组7只。大鼠缺氧肺动脉高压模型采用慢性间歇性低氧方法建立,通过右心导管法测定大鼠平均肺动脉压,精确称左右心室质量计算右心室指数,测定肺动脉平滑肌细胞凋亡率和Caspase3、Caspase9活性。结果:与常氧组比较,低氧组大鼠平均肺动脉压和右心室指数均明显升高(PPPP结论:DHA具有抗大鼠肺动脉高压作用,其机制与促进肺动脉平滑肌细胞凋亡有关。     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺内血管内皮生长因子表达的变化

为了解低氧对肺内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因表达的影响及ＶＥＧＦ在肺动脉高压发生中的作用，以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型，采用Ｅｌｉｓａ法检测大鼠肺动脉血血清ＶＥＧＦ的含量改变，以体外转录并用ＤＩＧ－ＵＴＰ标记的ＶＥＧＦｃＲＮＡ探针进行肺组织原位杂交，检测大鼠肺内ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达的变化。结果发现：低氧３周后，大鼠形成明显的肺动脉高压；大鼠肺动脉血血清中ＶＥＧＦ含量在低氧３周组为４２０．３±７３．１ｐｇ／ｍｌ，明显高于对照组的３２２．２±５８．１ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１）；原位杂交显示，低氧大鼠肺小动脉管壁出现明显的ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达，说明低氧在引起肺动脉高压的同时可刺激肺小动脉管壁，使ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达增强，导致ＶＥＧＦ的合成和分泌增加，后者可能在低氧性肺动脉高压发生过程中起一定的作用。     

动力性肺动脉高压犬肺动脉PCNA及α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的 探讨平滑肌细胞增殖在动力性肺动脉高压形成中的作用。方法 利用降主动脉－左下肺动脉分流建立的幼犬动力性肺动脉高压模型,取90d肺组织病理切片,应用鼠抗人增殖细胞核抗原（PCNA）抗体、α－平滑肌细胞肌动蛋白抗体（α－actin)、及Dako二抗免疫组化检测,图像分析仪对所得结果进行分析,计算细胞增殖指数。结果 分流犬左下肺动脉中膜α-actin免疫组化染色呈强阳性表达,右下肺动脉弱阳性,而对照组均呈阴性;分流犬左下肺动脉PCNA阳性信号表达明显多于右肺动脉,而右肺动脉及左上肺动脉仅有少量表达;增殖指数左下肺动脉内膜为33％,中膜11％,外膜7％,右下肺动脉仅为少量。结论 平滑肌细胞增殖参与实验犬动力性肺动脉高压形成过程并与肺动脉压力高程度和肺血管重构改变一致。     

HIF和VEGF在低氧性肺动脉高压中的调控作用

目的:观察低氧诱导因子-1α(HIF-1 α)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在低氧性肺动脉高压小鼠肺内的表达,探讨HIF和VEGF在其中的调控作用.方法:建立低氧性肺动脉高压小鼠模型,SPF级雄性C57BL/6小鼠16只,随机分为正常对照组(C组),低氧、高二氧化碳4 w组(H组),每组8只.测二组小鼠的右心室收缩压(RVSP)和右心室重量:比RV/(LV S).光镜下观察右心室和肺组织病理学改变.应用免疫组化技术检测肺细小动脉上HIF-1 α蛋白和VEGF蛋白的表达.结果:H组小鼠RVSP明显高于C组,且RV/(LV S)亦有增加.光镜下肺细小动脉管腔变窄管壁增厚,中膜平滑肌细胞肥大增生.免疫组织化学显示:H组小鼠肺细小动脉HIF-1 α蛋白和VEGF蛋白免疫组化吸光度高于对照组;VEGF蛋白与HIF-1 α蛋白表达呈正相关.结论:慢性低氧使HIF-1 α蛋白和VEGF蛋白在肺细小动脉表达增加,二者参与小鼠肺动脉高压的形成和发展过程.     

尼氟灭酸对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞mCLCA mRNA及MAPK表达的影响Symbol

目的 研究氯通道阻滞剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活氯离子通道蛋白 (chloride channel calcium activated protein,mouse;mCLCA) mRNA及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK )表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,随机分为对照组、低氧组、低氧+用药组,每组8只.建立常压低氧肺动脉高压大鼠模型,低氧组及低氧+用药组均在低氧箱中缺氧8 h/d,共21 d.于缺氧前3 d开始,低氧+用药组每天腹腔内注射NFA 3 mg/kg体重,低氧组注射同等剂量对照剂.缺氧21 d后测量右心室肥厚指数(RVHI).分离并培养原代肺动脉平滑肌细胞;采用RT-PCR方法检测肺动脉平滑肌细胞mCLCA mRNA表达的变化;免疫细胞化学方法检测肺动脉平滑肌细胞中MAPK表达的变化.结果 低氧+用药组RVHI、mCLCA mRNA表达、MAPK表达均较低氧组明显降低(均P<0.05).结论氯通道阻滞剂NFA对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞mCLCA mRNA及MAPK的表达有抑制作用,从而推测NFA对低氧性肺动脉高压有一定治疗作用.     

bFGFmRNA在慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及分布

为探讨碱性成纤维细胞生长因子在慢性低氧性肺动脉高压肺血管重建中的作用及机理,通过建立慢性低氧性动脉高压大鼠模型,测定其肺血流动力学 。     

血管内皮生长因子在低氧性肺动脉高压大鼠肺内的分布和水平变化

为了解低氧性肺动脉高压时肺内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的改变及其意义，以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型，采用免疫组织化学染色法和Ｅｌｉｓａ法检测模型大鼠肺内ＶＥＧＦ的分布和含量变化。结果显示：低氧３周后大鼠形成明显的肺动脉高压；大鼠肺匀浆内ＶＥＧＦ含量在低氧３周组为４６６．９±７５．５ｐｇ／ｇ，明显高于对照组（３７６．２±４７．１ｐｇ／ｇ）；肺小动脉内膜的ＶＥＧＦ免疫组化染色阳性在低氧大鼠组明显增强。提示低氧在引起肺动脉高压的同时，可强烈刺激ＶＥＧＦ的合成和分泌，后者可能在低氧性肺血管重建过程中发挥重要的作用。     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺内血管内皮生长因子表达的变化

为了解低氧对肺内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因表达的影响及ＶＥＧＦ在肺动脉闹压发生中的作用，以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型，采用Ｅｌｉｓａ检测大鼠肺动脉血血清ＶＥＧＦ的含量改变，以体外转录并用ＤＩＧ－ＵＴＰ标记的ＶＥＧＦ ｃＲＮＡ探针进行肺组织原位杂交，检测大鼠肺内ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ表达的变化。结果发现：低氧３周后，大鼠形成明显的肺动脉高压；大鼠肺动脉血血清中ＶＥＧＦ含量在低氧３周组为４２０．     

VEGF、PCNA在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义. 方法:采用免疫组化SP法检测了40例非小细胞肺癌和10例正常肺组织中VEGF、PCNA的表达情况,并分析其与临床病理分期的关系.结果:40例非小细胞肺癌的VEGF阳性表达率为72.5%,明显高于正常对照组(20%),差异有统计学意义(P<0.05),但临床Ⅲ～Ⅳ期的VEGF阳性表达率(80%)与Ⅰ～Ⅱ期的表达率(65%)相比,差异无统计学意义(P＞0.05).PCNA在非小细胞肺癌中的阳性表达率为62.5%,明显高于正常对照组(20%) ,差异有统计学意义(P<0.05),但临床Ⅲ～Ⅳ期的PCNA阳性表达率(65%)与Ⅰ～Ⅱ期的表达率(60%)之间无明显差异(P＞0.05).结论:VEGF和PCNA可以作为评价非小细胞肺癌预后的重要指标.     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响

目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。     

血管移植后血管平滑肌细胞PCNA表达及药物对其影响

目的：探讨Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ等药物对兔静脉移植模型早期ＰＣＮＡ表达的影响。方法：兔颈静脉移植于颈动脉后应用Ｂａｔｒｏｘｂｉｎ，ＬＭＷＨ，Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ和Ｖｅｒａｐａｍｉｌ治疗，并于不同时间采用免疫组化方法观察血管平滑肌（ＶＳＭＣ）中ＰＣＮＡ表达的变化。结果：术后３、７，１４ｄ均有ＰＣＮＡ的表达；３ｄ的Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ，ＬＭＷＨ两组ＰＣＮＡ的表达与对照组无显著差异；Ｖｅｒａｐａｍｉｌ及Ｂａｔ     

bFGF mRNA在慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及分布

为探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在慢性低氧性肺动脉高压肺血管重建中的作用及机理,通过建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,测定其肺血流动力学。并用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定肺组织匀浆ｂＦＧＦ含量,以及用原位杂交观察ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达及分布变化。结果：①缺氧组肺组织匀浆ｂＦＧＦ含量为１８．６±２．９７Ｐｇ／ｍｌ,明显高于对照组（Ｐ＜０．００１）;②缺氧组肺小动脉ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达明显增强。结果显示ｂＦＧＦ参与了慢性低氧性肺动脉高压肺小动脉重建的调控,其主要作用机理可能是自分泌或旁分泌形式     

冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的 探讨冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其可能的作用机制.方法 用MTT法测定不同浓度冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠PASMCs增殖的影响,用流式细胞仪分析冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠PASMCs细胞周期的影响,用免疫细胞化学染色法测定冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠PASMCs增殖细胞核抗原(PCNA)和癌基因c-fos、c-jun表达的影响.结果 低氧对照组大鼠PASMCs吸光度(A)值明显高于常氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),1、10、100 mg/mL冬虫夏草组A值呈明显下降趋势,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧对照组S+G2M 期细胞比例明显高于常氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),冬虫夏草组S+G2M期细胞比例明显低于低氧对照组,但高于常氧对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);冬虫夏草组PCNA阳性表达率明显低于低氧对照组,但高于常氧对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);冬虫夏草组细胞c-fos和c-jun 蛋白阳性染色平均积分光密度值(AIOD)明显低于低氧对照组,但高于常氧对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 冬虫夏草水提取物呈浓度依赖性抑制慢性低氧导致的大鼠PASMCs增殖,其抑制作用可能是通过减少细胞内c-fos、c-jun基因和PCNA的表达、降低S期和G2/M期细胞比例来实现的.     

内皮素在低氧性肺动脉高压大鼠肺内的分布及变化研究

为研究低氧性肺动脉高压时大鼠肺内内皮素的分布和变化,以及其与低氧肺动脉高压的关系,用免疫组织化学染色法确定ＥＴ－１在肺内的分布,用族免法测定ＥＴ－１逍度。结果;ＥＴ－１阳性反应部位主要位于内皮细胞,而在内皮与平滑肌连接处浓度更高。缺氧２小时,ＥＴ－１浓度无明显变化,缺氧２４后,ＥＴ－１水平呈升高趋势,并随着缺氧时间的延长而维持在较高水平。