热休克蛋白70对大鼠牙髓细胞高温损伤的影响

目的:研究预热处理诱导的热休克蛋白70(HSP70)对受高温损伤的大鼠牙髓细胞的影响.方法:将体外培养的大鼠牙髓细胞随机分为4组,分别为正常对照组(C组):37℃常规培养18 h;预热处理组(pH组):37℃常规培养9h后42℃培养1h,再复温培养8h;高温损伤组(SH组):37℃常规培养9h后46℃培养1h,再复温培养8h;预热处理+高温损伤组(pH+SH组):42 ℃培养1h后恢复常规培养8h,再置于46℃培养1h后恢复常规培养8h.以Western Blot检测细胞内HSP70的表达变化;以四唑盐(MTT)比色法、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法、细胞形态学观察评价细胞存活能力.结果:Western Blot显示,与C组相比较PH组HSP70表达上调;MTT比色法、AO/EB双染法、细胞形态学观察均显示pH+SH组较SH组的细胞存活能力强.结论:预热处理可诱导大鼠牙髓细胞中的HSP70表达上调,减轻高温对牙髓细胞的损伤.     

热休克蛋白70在第三磨牙成牙本质细胞中表达的增龄变化

目的观察热休克蛋白70（heat shock protein70 HSPT0）在第三磨牙成牙本质细胞中表达的增龄变化。方法共选取33例21—30岁、31～40岁、4I～50岁和51～60岁四个年龄组健康第三磨牙的组织标本进行免疫组化染色，并通过计算机图像分析对比四组牙髓组织成牙本质细胞中HSP70表达量的不同。结果41～50岁和51～60岁年龄组平均光密度值明显低于21～30岁年龄组和31～40岁年龄组（P〈0．05），其余各组间无显著性差异。结论以41～50岁牟龄组为转折点，HSP70在第三磨牙成牙本质细胞中的表达强度显著下降。     

热休克蛋白70对人牙周膜细胞高温损伤影响的研究

目的 观察谷氨酰胺（glutamine,Gln）诱导的热休克蛋白70(heat shock protein,HSP)对人牙周膜细胞高温损伤的影响。 方法 将体外培养的人牙周膜细胞随机分为正常对照组(C组)：常规培养的人牙周膜细胞;谷氨酰胺预处理组(Gln组)：常规培养的人牙周膜细胞加入Gln 15 mmol/L培养;高温损伤组(SH组)：常规培养的人牙周膜细胞置46 ℃培养1 h后恢复常规培养;预处理+高温损伤组(Gln+SH组)：常规培养的人牙周膜细胞加入Gln 15 mmol/L培养1 h后,置于46 ℃培养1 h后恢复常规培养。以Western Blot检测细胞内HSP70的表达变化;以四唑盐（MTT）比色法、细胞形态学观察评价细胞存活能力。 结果 Western Blot显示： Gln组、Gln+SH组较C组HSP70表达上调（P<0.05）;MTT比色法、细胞形态学观察均显示Gln+SH组较SH组的细胞存活能力强（P<0.05）。 结论 Gln可诱导人牙周膜细胞中的HSP70表达上调,减轻高温对人牙周膜细胞的损伤。     

热休克蛋白70在两个年龄组前磨牙成牙本质细胞表达的比较研究

目的观察热休克蛋白(HSP)70在前磨牙成牙本质细胞表达的增龄变化特点。方法采用免疫组化法结合图像分析系统,对HSP70在年老组(71~80岁)和年轻组(13~20岁)前磨牙成牙本质细胞和成牙本质细胞胞质中的表达强度进行比较。结果年老组成牙本质细胞内总的HSP70免疫组化染色的平均吸光度值比年轻组降低,而胞质内HSP70免疫组化染色的平均吸光度值平均值比年轻组略高,但无显著性差异。结论年老患者成牙本质细胞抵御急性刺激的能力下降可能与胞核内HSP70表达强度下降有关。     

热休克蛋白70在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的　研究内毒素 (LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中诱导型热休克蛋白 (HSP) 70在不同时间动态表达及定位情况 ;推测其在牙髓炎发生、发展中的意义。方法　通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织进行连续切片 ,同时行超敏免疫组化分析。结果　 1d组、3d组HSP70在成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈强阳性表达 ,成牙本质细胞呈中度阳性表达 ,随后表达逐渐减弱 ,至 2周修复期为弱阳性表达。 2周以后 ,成牙本质细胞 ,前期牙本质细胞层仍有阳性表达。 3周、4周以后 ,成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达。 5周以后 ,牙髓组织变性、坏死 ,呈均质弱阳性染色。结论　HSP70在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞 ,限制炎症发展 ,在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

热休克蛋白及其在牙髓中的生物学意义

热休克蛋白是普遍存在于生物体细胞中的一个蛋白质家族,能够保护和促进细胞从各种刺激中自身修复。在正常及应激条件下,热休克蛋白主要涉及细胞内在机制如蛋白质折叠、转运、稳定和分泌的过程,同时也参与其他重要的细胞功能如信号传导、细胞的繁殖、分化等。本文介绍了热休克蛋白基本概念,热休克蛋白家族的组成及各家族蛋白的生物学功能,热休克蛋白在人类牙髓中的表达及其在牙髓修复中的意义。     

热休克蛋白在口腔疾病中的作用

热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎｓ ,ＨＳＰｓ)又叫应激蛋白 (ｓｔｒｅｓｓｐｒｏｔｅｉｎｓ) ,是一种在进化过程中存在着高度保守性的蛋白质。ＨＳＰｓ不但维持机体自身的稳定 ,还能防止热和其它应激损伤细胞并促进受损细胞复原。由于在微生物ＨＳＰｓ与人体ＨＳＰｓ间具有高度同源性 ,因此在它们之间存在着高度免疫反应 ,这可能是引发人体自身免疫疾病的病因之一。已有研究显示 ,ＨＳＰｓ在多种口腔疾病发生发展过程中具有重要作用。1　ＨＳＰｓ的功能及分类ＨＳＰｓ是一组Ｍｒ为 8.17× 10 6 的糖蛋白 ,最初是由于热休克反…     

雌激素对大鼠咬肌热休克蛋白70表达的影响

目的探讨雌激素对大鼠咬肌热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法将60只雌性未孕12周龄Sprague-Dawley大鼠随机分成3组,每组20只。假手术组大鼠在轻微骚动卵巢后缝合,去卵巢组大鼠去除卵巢后缝合,雌激素替代组大鼠去卵巢后接受雌二醇替代治疗。在实验的第4周和8周,每组各处死10只大鼠,采用免疫组织化学方法研究雌激素对大鼠咬肌HSP70表达的影响。结果4周时3组大鼠咬肌HSP70的表达无明显差异（P>0.05）;8周时去卵巢组大鼠HSP70的表达下降,与假手术组、雌激素替代组之间的差异有统计学意义（P＜0.05）,而假手术组与雌激素替代组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论雌激素水平降低会导致大鼠咬肌HSP70的表达下降,雌激素替代疗法可以预防HSP70表达降低。     

热休克蛋白及其在牙髓中的生物学意义

热休克蛋白是普遍存在于生物体细胞中的一个蛋白质家族,能够保护和促进细胞从各种刺激中自身修复。在正常及应激条件下,热休克蛋白主要涉及细胞内在机制如蛋白质折叠、转运、稳定和分泌的过程,同时也参与其他重要的细胞功能如信号传导、细胞的繁殖、分化等。本文介绍了热休克蛋白基本概念,热休克蛋白家族的组成及各家族蛋白的生物学功能,热休克蛋白在人类牙髓中的表达及其在牙髓修复中的意义。     

热休克诱导人牙髓细胞表达HSP70的细胞模型研究

目的：通过热休克预处理提高人牙髓细胞ＨＳＰ７０的表达水平,建立供体外实验研究的热休克细胞模型。方法：将体外培养的人牙髓细胞爬片后进行热处理,置４２℃水浴２５ｍｉｎ,３７℃复温。于复温后１、２、３、４、６、８、１０ｈ、１ｄ固定,进行ＨＳＰ７０的免疫组化染色;９６孔板细胞同样方法热处理,连续培养３ｄ后,进行ＭＴＴ检测。结果：下沉对照牙贿细胞呈阴性表达。热休克处理牙贿细胞１、２ｈ组中度阳性着色,３、４ｈ     

舌鳞癌细胞热处理后HSP27的表达变化

目的 观察热疗后舌鳞癌Tscca细胞中热休克蛋白27 (heat shock protein 27,HSP27)的变化及其对凋亡的作用.方法 常规培养的Tscca细胞分6组,对照组不加热,其余5组43℃水浴法热处理40 min后分别常规培养2、4、8、12、24h,应用蛋白组学方法检测HSP27变化.运用空载质粒(pcDNA3)、pcDNA3-HSP27质粒转染Tscca细胞24h,免疫印迹分析靶细胞中的HSP27表达.43℃水浴处理未转染及转染组细胞0 min、40 min,再培养24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 加热后12 h内细胞内HSP27持续升高.HSP27质粒转染细胞中HSP27蛋白表达增强.0 min热处理,未转染组、pcDNA3转染组及HSP27质粒转染组细胞凋亡率无差异;40min热处理,未转染组与pcDNA3转染组凋亡率无差异,HSP27质粒转染组分别与未转染组及空载质粒转染组比较,均有差异(P＜0.05).结论 热处理后舌鳞癌Tscca细胞中HSP27含量升高.HSP27的变化与Tscca细胞凋亡的变化有关.     

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP70表达的研究

目的:研究热休克恢复期人舌癌Tca8113细胞热休克蛋白(HSP70)的表达和热动力学变化,为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法:通过人舌鳞癌细胞Tca8113在43℃加热30min,运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达,各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性,以期了解Tca8113细胞HSP70表达的动态变化。结果:热休克后恢复2h即出现HSP70的表达,8~12h达到高峰,之后逐渐减少,48h后基本恢复至加热2h后的水平,热休克后恢复12h细胞活性最强。结论:HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tca8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。     

热休克蛋白60、70在口腔扁平苔藓中表达的研究

目的　探讨热休克蛋白 (heatshockprotein ,HSP) 60和HSP70在口腔扁平苔藓病变中的作用。方法　对 62例口腔扁平苔藓、1 0例正常口腔粘膜、2 1例慢性盘状红斑狼疮、1 0例粘膜良性淋巴组织增生病 ,46例白斑进行免疫组织化学SP法染色 ,分析HSP60、HSP70在口腔扁平苔藓中的表达 ;对 1 2例口腔扁平苔藓和 5例正常粘膜进行逆转录PCR实验 ,观察HSP60、HSP70mRNA的变化。结果　HSP60在口腔扁平苔藓病损区的表达较其他各组显著增强 ,差异有显著性 (P <0 0 0 1 )。HSP70在糜烂型口腔扁平苔藓病损区的表达下调。RT PCR结果显示 ,HSP60、HSP70mRNA表达增强。结论　HSP60及HSP70在口腔扁平苔藓的发病中起重要作用     

细胞表达HSP70的细胞模型研究

目的 :通过热休克预处理提高人牙髓细胞HSP70的表达水平 ,建立供体外实验研究的热休克细胞模型。方法 :将体外培养的人牙髓细胞爬片后进行热处理 ,置 42℃水浴 2 5min ,37℃复温。于复温后 1、2、3、4、6、8、10h、1d固定 ,进行HSP70的免疫组化染色 ;96孔板细胞同样方法热处理 ,连续培养 3d后 ,进行MTT检测。结果 :正常对照牙髓细胞呈阴性表达。热休克处理牙髓细胞 1、2h组中度阳性着色 ,3、4h组强阳性着色 ,6、8、10h组达到高峰 ,1d组恢复到弱阳性水平。MTT检测显示热处理组与对照组无统计学差异。结论 :热预处理方法可成功诱导人牙髓细胞表达HSP70 ;该方法不会导致连续培养 3d后细胞存活数量的明显变化     

热休克蛋白70在人正常牙和龋坏牙牙髓中的免疫定位

目的：观察热休克蛋白７０（ｈｅａｔｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０ ,ＨＳＰ７０）在人正常和龋坏牙牙髓组织中免疫定位,并通过对比研究,检测ＨＳＰ７０ 的分布变化。方法：选取人正常牙、浅龋牙和深龋牙的组织切片标本进行免疫组织化学染色,并通过计算机图像分析对比３ 种牙髓中ＨＳＰ７０ 量的不同。结果：ＨＳＰ７０ 于３ 组牙髓组织中普遍表达,分布于成牙本质细胞及细胞突、牙髓成纤维细胞、血管内皮细胞及管壁平滑肌细胞中。牙髓神经阴性。深龋组成牙本质细胞或成牙本质细胞样细胞中含量显著增加（ Ｐ＜ ０．０５） 。浅龋组观察到阳性细胞核数目增加。结论：提示ＨＳＰ７０ 维持成牙本质细胞、牙髓细胞功能,参与牙髓组织的自身修复。     

SL7207／PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP重组沙门菌的构建及在B16细胞中的表达

目的构建能够稳定表达结核杆菌热休克蛋白70（mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70）与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluore scent protein,EGFP）双基因的鼠减毒伤寒沙门菌真核共表达载体,探讨其在小鼠黑色素瘤B16肿瘤细胞中的表达。方法将重组质粒PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP电穿孔转入减毒沙门氏菌SL7207中,酶切鉴定,并对构建的重组减毒沙门氏菌体外连续传代20代后再酶切鉴定,对其稳定性进行观察;重组菌体外感染B16,荧光显微镜下观察B16细胞荧光表达及蛋白印迹法（Western blot）检测重组菌在B16细胞内mtHSP70蛋白的表达。结果PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP成功导入减毒沙门氏菌SL7207中;该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代;重组菌体外感染B16约36h后,B16细胞胞体变圆并高效表达强荧光,重组菌在B16细胞内表达mtHSP70蛋白。结论成功构建能在真核细胞中稳定表达mtHSP70与EGFP双基因的重组减毒沙门氏菌株为恶性黑色素瘤靶向基因免疫治疗的后续研究奠定了基础。     

Putative heat shock protein 70 gene from Actinobacillus actinomycetemcomitans: molecular cloning and sequence analysis of its gene

We have cloned and sequenced two overlapping fragments of chromosomal DNA from Actinobacillus actinomycetemcomitans. The nucleotide sequence contained two open reading frames. The deduced amino acid sequences of the two open reading frames showed significant homology with the heat shock proteins hsp70 and hsp40 of other organisms respectively. The upstream open reading frame consisted of 1902 bp, corresponding to 634-amino-acid residues. The CAA codon for glutamines was frequently seen in hsp70, i.e., in 30 of 32 glutamines (93.8%). The spacing region between the two open reading frames was unusually long compared with other prokaryotic organisms. A number of unique and distinguishing features of the sequences in the hsp70 family were verified, and it was found that a particular spacing sequence between the hsp70 and hsp40 gene loci can be used to identify A. actinomycetemcomitans from the periodontal pocket.     

釉基质蛋白对牙周细胞覆盖体外创面的影响

目的：评价体外创面模型环境中,釉基质蛋白对牙周膜细胞、牙龈成纤维细胞覆盖创面能力的影响。方法：利用在盖玻片上形成的人牙周膜和牙龈成纤维细胞的融合培养物,以机械方法去除7mm宽的细胞层条带,形成体外创面模型。受损培养物在含有10％胎牛血清的培养液中继续培养2、6、9d,同时以100μg／ml的釉基质蛋白分别刺激牙周膜、牙龈成纤维细胞,并与不加釉基质蛋白者作对照。玻片经同定后作甲紫染色。以计算机辅助图像分析系统对细胞覆盖体外创面的面积进行百分比定量,采用SAS6、12软件包进行样本均数的t检验。结果：对照组组内牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖创面的面积存在差异,牙龈成纤维细胞覆盖创面面积在创面形成后第9天显著高于牙周膜细胞,差异有显著性（P〈0.05）。在加用100μg／ml釉基质蛋白的条件下,牙周膜细胞覆盖体外创面的面积较对照组明显增加．创面形成后第6、9天,牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖体外创面面积均无显著差异（P〉0．05）。结论：牙龈成纤维细胞覆盖创面的能力高于牙周膜细胞。釉基质蛋白有增进创面愈合,特别是牙周膜细胞创面覆盖的作用。