人正常及炎症牙髓中炎症信号受体TLR4表达的研究

目的:研究人正常及炎症牙髓组织中炎症信号受体TLR4的表达特点,探讨其在牙髓和根尖周组织炎症中的可能作用。方法:采用激光共聚焦扫描显微镜和免疫荧光技术,检测正常及炎症牙髓TLR4的表达情况。结果:正常牙髓组织中未发现TLR4免疫阳性细胞,炎症牙髓组织病灶处TLR4表达强阳性。正常组平均荧光强度为28.80±2.57,炎症组为258.12±24.51(P<0.001)。结论:与正常牙髓组织相比,炎症牙髓组织TLR4表达显著增强,提示其可能参与牙髓组织炎症过程。     

Toll样受体4在大鼠实验性牙髓炎和根尖周炎中的表达

目的:建立大鼠实验性牙髓炎及根尖周炎模型,了解TLR4在大鼠牙髓和根尖周组织的表达情况。方法:采用单纯髓腔开放法建立大鼠实验性牙髓炎及根尖周炎模型,进行组织学及X线片观察。免疫组化检测TLR4在牙髓炎中的表达,RT-PCR检测TLR4在根尖周炎中的表达。结果:组织学及X线观察证实成功复制大鼠牙髓炎及根尖周炎模型,免疫组化结果表明大鼠正常牙髓组织成牙本质细胞层TLR4阳性表达,牙髓内部血管内皮细胞亦见表达,牙髓成纤维细胞未见表达。炎症牙髓组织TLR4表达较正常组增强。RT-PCR检测发现正常和炎症根尖周组织均有TLR4mRNA表达,炎症组表达较正常组增强。结论:TLR4在牙髓组织和根尖周组织均有表达并参与了牙髓根尖周炎症的发生和发展。     

炎症信号受体TLR4在大鼠正常牙髓和牙周组织中的分布及意义

目的:研究大鼠正常牙髓和牙周组织中炎症信号受体TLR4表达特点,探讨其在健康牙髓及牙周组织天然免疫防御中的可能作用.方法:采用石蜡及冰冻切片和免疫组化技术检测大鼠健康牙髓及牙周组织中TLR4的表达情况.结果:正常牙髓组织中成牙本质细胞、血管内皮细胞及参与先天免疫的巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞等细胞TLR4免疫反应阳性,牙髓成纤维细胞不表达TLR4.TLR4表达于牙周结缔组织,可见与上皮层临近的固有层结缔组织强阳性染色.结论:TLR4可能参与了牙髓牙周组织的先天免疫反应,在牙髓牙周组织抵御外来病原微生物入侵中可能起重要作用.     

Toll样受体4对牙周膜细胞增殖的影响

目的：了解Toll样受体4对人牙周膜细胞增殖的影响。方法：以改良组织块法体外获得人牙周膜细胞,取生长良好的第3代细胞随机分为3组：空白对照组、NC对照组（NC－shRNA转染组）和TLR4－shRNA转染组,并于转染48 h 后用倒置荧光显微镜观察转染效果、用荧光实时定量 PCR检测各组细胞中TLR4mRNA的表达水平;最后将3组细胞分别接种于96孔细胞培养板进行培养,分别于培养24、48、72 h用MTT法检测各组细胞的增殖能力。结果：TLR4－shRNA可明显降低人牙周膜细胞的TLR4mRNA表达水平（P＜0．05）;MTT检测结果显示,TLR4－shRNA转染组在常规培养48、72 h的OD值均明显低于空白对照组和NC对照组（P＜0．05）,而NC对照组的OD值在72 h时明显低于空白对照组（P＜0．05）。结论：TLR4对牙周膜细胞的增殖有一定调控作用,转染慢病毒后该作用增强。     

大肠杆菌脂多糖影响Toll样受体4在人牙髓细胞的表达

目的:探讨大肠杆菌脂多糖(lippolysacchaide,LPS)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)表达的影响及TLR4在LPS对牙髓细胞激活中的作用。方法:以大肠杆菌LPS刺激体外培养的人牙髓细胞,运用实时荧光定量RT-PCR和免疫荧光技术分别检测牙髓细胞TLR4mRNA和蛋白的表达。利用抗体阻断和ELISA方法观察TLR4在LPS激活牙髓细胞释放IL-1β中的作用。结果:正常牙髓细胞不表达TLR4,1×10-4g/L大肠杆菌LPS作用HDPCs6、12、24h后均可见TLR4在胞膜/胞质的表达,胞核并不表达TLR4。FQRT-PCR结果表明LPS能明显上调牙髓细胞TLR4mRNA的表达(P<0.001),并具有LPS浓度依赖性。抗体阻断和ELISA结果证实LPS能激活牙髓细胞释放IL-1β(P<0.01),抗TLR4单抗能明显抑制LPS对HDPCs的激活(P<0.05)。结论:正常人牙髓细胞不表达TLR4,大肠杆菌LPS能诱导牙髓细胞表达TLR4mRNA和蛋白。TLR4介导了LPS对牙髓细胞的活化,在LPS对牙髓细胞激活效应中具有重要作用。     

Toll样受体4在人成牙本质细胞和牙髓组织中的表达

目的 探讨人牙髓组织和成牙本质细胞中Toll样受体4（TLR4）的表达与分布特点，及其在牙髓组织天然免疫防御中的可能作用。方法从新鲜拔除的人第三磨牙获取牙髓组织和成牙本质细胞，扫描电镜观察牙髓摘除后髓腔壁成牙本质细胞形态和附着情况；RT—PCR检测人牙髓组织以及成牙本质细胞中TLR4mRNA的表达情况：采用免疫印迹技术和免疫组织化学方法检测TLR4蛋白的表达与定位。结果扫描电镜观察牙髓摘除后成牙本质细胞大部存留在髓室壁上，细胞形态良好：RT-PCR结果发现健康牙髓、成牙本质细胞均可表达TLR4mRNA，产物大小为278bp；免疫印迹法检测正常牙髓、成牙本质细胞在相对分子质量89000附近出现蛋白条带；免疫组化显示牙髓组织中的成牙本质细胞、血管内皮细胞TLR4免疫反应阳性。正常牙髓中牙髓成纤维细胞不表达TLR4。结论成牙本质细胞通过表达TLR4参与牙髓牙本质复合体的先天免疫反应，TLR4在牙髓抵御外来病原微生物入侵的宿主免疫防御中起重要作用。     

大鼠正常牙髓和炎症牙髓中的细胞凋亡

目的：建立大鼠实验性牙髓炎模型;原位观察大鼠正常牙髓和炎症牙髓中细胞凋亡现象,探讨细胞凋亡在牙髓炎病理变化中的作用。方法：１６只ＳＤ大鼠的磨牙采用内毒素化学诱导法建立牙髓炎模型,分别于１ｄ、３ｄ、５ｄ、７ｄ取材,常规制备石蜡切片,行ＨＥ染色和ＴＵＮＥＬ法检测。结果：正常牙髓中成牙本质细胞和牙髓细胞均发现有凋亡细胞;炎症牙髓中炎细胞聚集区未发现典型的凋亡细胞,而在其周边发现有较典型的凋亡细胞,在其正常组织中也有散在的凋亡细胞存在。结论：正常牙髓和炎症牙髓中存在细胞凋亡,细胞凋亡在牙髓炎的转归和预后方面可能有一定的作用。     

Toll样受体4在慢性牙周炎诱发大鼠肝脏炎症中的作用

目的:初步探究Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)在慢性牙周炎诱发大鼠肝脏炎症中的作用。方法:将24只雄性Wistar大鼠随机分成两组,对照组和牙周炎组每组各12只,2%戊巴比妥钠麻醉下检测牙龈出血指数、牙周探诊深度及松动度;将20μL牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS)(1 g/L)注射到大鼠双侧上颌第一磨牙龈沟及第一二磨牙龈间隙内,隔1 d注射1次,每周3次,连续6周。对照组不做处理。最后一次注射Pg-LPS 12 h后,2%戊巴比妥钠麻醉下检测牙周探诊深度、牙龈出血指数及松动度等3项牙周指标后将大鼠处死,取其上颌骨及肝脏,采用组织学方法、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、Western blot分别检测肝组织炎症反应情况及TLR4、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的基因和蛋白表达水平。结果:牙周炎组大鼠牙周探诊深度、牙龈出血指数及松动度均重于对照组;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色结果显示慢性牙周炎大鼠肝组织内肝索结构紊乱,汇管区可见大量淋巴细胞浸润,大量肝细胞呈空泡样改变;qRT-PCR结果显示慢性牙周炎组大鼠肝组织TLR4、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平较对照组升高;Western blot结果显示TLR4蛋白表达与基因表达一致。结论:TLR4在慢性牙周炎诱发大鼠肝脏炎症性改变的过程中发挥着重要的作用。     

大鼠正常牙髓和炎症牙髓中Bcl-2，Bax的表达及其意义

目的：建立大鼠实验性牙髓炎模型;原位观察大鼠正常牙髓和炎症牙髓中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达情况,探讨两者在牙髓炎病理变化中的作用。方法：利用ＳＤ大鼠的下颌第一磨牙采用内毒素化学诱导法建立牙髓炎模型,用免疫组织化学染色的方法研究Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达及其意义。结果：正常牙髓中Ｂｃｌ－２在成牙本质细胞层表达阳性,牙髓中央区域弱阳性,Ｂａｘ在成牙本质细胞层表达强阳性,牙髓中央区域阳性。在牙髓中央的表达弱于牙髓外周,Ｂｃｌ－２的表达在相应部位弱于Ｂａｘ。在炎症牙髓中炎细胞浸润区Ｂｃｌ－２表达强阳性,纤维包饶区和充血反应区表达分别为阳性和弱阳性,Ｂａｘ在炎症牙髓中着色较均匀。结论：成牙本质细胞凋亡与Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达量有关,正常牙髓中存在细胞凋亡,这与该部位Ｂａｘ表达量较高有关;Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ是牙髓炎时炎细胞凋亡的重要调控因素之一。     

茶多酚对内毒素作用下人牙周膜细胞分泌和表达Toll样受体4的影响

目的:观察茶多酚(tea polyphenol,TP)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)分泌和表达Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的影响。方法:体外分离及培养PDLCs,实验组分别为LPS和不同质量浓度的TP的不同组合,对照组为仅含1% FBS的DMEM培养液。培养24 h、48 h和72 h后,通过酶联免疫吸附测定法检测TLR4的分泌量,荧光实时定量PCR法检测TLR4的表达。结果:100 mg/L LPS组PDLCs TLR4分泌量显著高于其它各组(P<0.05),加入TP进行干预后实验组与对照组TLR4的分泌量和表达量无显著差异(P>0.05)。结论:TP对LPS作用下PDLCs TLR4的分泌和表达有一定的抑制作用。     

大鼠实验性牙髓炎组织中诱导型一氧化氮合成酶的mRNA表达

目的：探讨诱导型一氧化氮合成酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）在牙髓炎症中的ｍＲＮＡ表达。方法：建立大鼠牙髓炎模型，并随机分为４组：正常对照组，牙髓炎２４ｈ、７２ｈ和１２０ｈ组。采用反转录－聚合酶链式反应（ｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定各组ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达量。结果：大鼠牙髓炎早期，局部病灶可见大量中性粒细胞浸润，ｉＮＯＳ表达以各炎症组较对照组升高，其中炎症７２ｈ组明显增高。结论：牙髓炎早期，中性粒细胞可能是ｉＮＯＳ分泌的主要部位，并且ｉＮＯＳ的产生与炎症病程有关，表明它在早期牙髓炎的发生发展中起作用     

窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响研究

目的 动物实验观察窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响,探讨牙髓组织在LPS刺激后的信号转导途径.方法 在8头小型猪磨牙和前磨牙上制备不同深度窝洞,窝洞分为牙釉质深层组、牙本质浅层组、牙本质深层组.封入一定量的内毒素,分另q于术后3天、7天、14天、28天处死动物取牙.采用免疫组织化学染色的方法,观察小型猪磨牙和前磨牙窝洞内封入内毒素后牙髓组织中TLR4的表达和分布.结果 小型猪正常牙髓中未见TLR4阳性细胞.内毒素实验组随着窝洞深度增加,TLR4阳性细胞数增加.在深窝洞组3a窝洞下方牙髓组织中TLR4阳性细胞多为中性粒细胞表达,其他实验组多为单核细胞表达.结论 牙髓组织中TLR4的表达提示内毒素通过牙本质渗透至牙髓,通过LPS信号受体TLR4在牙髓组织的炎症发展过程中发挥作用.     

Immunohistochemical expression of TLR-4 in temporomandibular joint dysfunction

Objective Toll-like receptor 4 (TLR-4) is a transmembrane protein involved in the innate immune system and has been implicated in the pathogenesis of temporomandibular joint dysfunction (TMD). The purpose of this study was to histologically examine the level of expression of TLR-4 relative to severity of TMD.

Methods Thirty-one human TMJ disc samples were immunostained for TLR-4 and evaluated for intensity of stain. Among the samples, 8 were control samples, 16 were from patients with anterior disc displacement with reduction (ADDwR), and 7 were from patients with anterior disc displacement without reduction (ADDwoR).

Results There was no statistically significant difference in intensity of stain between groupings (p = 0.673).

Conclusions The results indicate a negative correlation between TMD and the expression of TLR-4.     

TLR4 and TLR9 are induced in oral lichen planus

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 741–747 Background: The role of Toll‐like receptors (TLRs) has been elucidated in many human infectious, autoimmune and neoplastic diseases. Previously, TLR2 and TLR4 expression in oral lichen planus (OLP) was described. The aim of our study was to examine expression patterns of TLR4 and TLR9 in normal oral mucosa and OLP and describe the effect of topical tacrolimus treatment on the expression of TLR4 and TLR9 in OLP. Methods: Toll‐like receptor 4 and TLR9 expression was analysed by immunohistochemistry in five samples of normal oral mucosa and 50 samples of OLP (31 representing clinically white and 19 clinically erythematous/erosive lesions). We evaluated also the effect of topical tacrolimus on TLR4 and TLR9 expression in a patient with OLP. Results: Toll‐like receptor 4 and TLR9 expression was increased in OLP epithelium compared with normal epithelium (P < 0.001); no significant difference between the two clinical types of OLP was observed. TLR9 expression was strongest in the superficial layer of the epithelium (P < 0.001), while the expression of TLR4 was strongest in the basal layer (P < 0.001). Treatment of OLP lesions with topical tacrolimus resulted in clinical improvement but had no effect on TLR expression levels. Conclusions: Toll‐like receptor 4 and TLR9 are induced in OLP; our finding confirms the results of a previous study. TLR4 and TLR9 may play a part in the pathogenesis of OLP. Further studies are needed to dissect the definitive role of TLRs in OLP pathogenesis and progression and to determine the effect of tacrolimus on the function of TLRs.     

Toll样受体4在牙髓根尖周疾病及牙周病中的作用

牙髓根尖周疾病及牙周病是以革兰阴性厌氧菌感染为主的混合感染,脂多糖(LPS)是所有革兰阴性厌氧菌细胞膜的组成成分,是主要的毒力因子.Toll样受体4作为重要的脂多糖结合受体,由于其独特的生物学特性,近年来成为研究热点.本文从Toll样受体4的结构特点、表达分布、致病机制、临床意义等方面作一综述.     

细菌及内毒素致大鼠实验性牙髓炎的牙髓组织病理学研究

目的 建立细菌及内毒素快速诱导大鼠实验性牙髓炎模型的方法。方法 采用口腔细菌与革兰氏阴性类杆菌ＬＰＳ联合运用,以产生大鼠实验性牙髓炎,并在其不同时期,观察牙髓组织的病理变化及疾病发展过程。结果（１）细菌－ＬＰＳ混合组较之生理盐水组,除２４ｈ时间段上无明显差异外,其它各时间段上牙髓组织充血、水肿、炎性浸润均明显甚于生理盐水组。（２）牙髓内共存有纤维增生以及成纤维细胞的成牙本质细胞增殖分化等牙髓组织修     

4%阿替卡因与2%利多卡因对上后牙不可复性牙髓炎患者麻醉效果的比较

对40例上颌后牙不可复性牙髓炎患者分组后分别使用4%阿替卡因与2%利多卡因进行颊侧注射麻醉。比较两药在开髓时的麻醉成功率。结果显示阿替卡因与利多卡因组间存在明显差异：4%阿替卡因在上后牙的颊侧注射麻醉中效果优于2%利多卡因。