重组人肿瘤坏死因子α衍生物11a的毒性

重组人肿瘤坏死因子α衍生物１１ａ的毒性叶洪金孙辉业刘丽１赵建增１谢宝树１李培忠（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）利用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术，对人原型肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒ...     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物氨基酸分析

用ＷｉａｔｅｒｓＰＩＣＯ．ＴＡＧ＾ＴＭ系统分析测定了３种已知氨基酸序列的人重组肿瘤坏死因子的氨基酸组成，并测定了６批样品，对样品与对照品氨基酸组成的同质性及样品之间的一致性进行了统计分析比较，同时将所测得的蛋白质含量与用其它方法测定的结果进行了比较，结果表明，此法在检测基因工程产品的同一性方面是行之有效的，且具有快速，准确的特点，并能同时获得蛋白含量的测定结果。     

基因重组人肿瘤坏死因子α衍生物在小鼠组织中的分布

AIM: To study the tissue distribution and its mechanism of a new recombinant tumor necrosis factor alpha derivative (rhTNF alpha Da) in mice. METHODS: 125I-rhTNF alpha Da was prepared by Iodogen method. Tissue distribution of 125I-rhTNF alpha Da in mice was studied by determining radioactivity of tetrachloroacetic acid (TCA)- precipitable fraction in tissues. The isolated heart-lung perfusion study using 125I-rhTNF alpha Da perfusate was carried out to study the distribution characteristics of 125I-rhTNF alpha Da in lung. RESULTS: Except for thyroid, AUC of the TCA-precipitable 125I-rhTNF alpha Da in tissues was highest in lung, which was 12.2-fold of that in serum, while concentrations in other tissues were all lower than that in serum. Perfusion study in vitro revealed that the concentration of radio-labeled peptide in lung was higher than that in perfusate. On the contrary, level in heart was much lower than that in perfusate. The overall distribution of 125I-rhTNF alpha Da in lungs showed rapidly equilibratory, dose-dependent, saturable, competitive, and highly affinitive, with Kd 47.6 pmol.L-1 and Bmax 348 fmol.g-1 (lung tissue). CONCLUSION: The specific distribution of rhTNF alpha Da in lungs was its distinctive characteristics.     

转基因蓝藻制备α型重组人肿瘤坏死因子衍生物

应用ＤＮＡ重组技术将ａ型重组人肿瘤坏死因子衍生物（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａ，ｒｈＴＮＦａ）ｃＤＮＡ插到穿梭质粒ＰＤＣ－８上，构建成穿梭表达载体ＰＤＣ－ＴＮＦ，转入鱼腥藻ＰＣＣ－７１２２０中进行表达。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a体外对肿瘤细胞的直接细胞毒作用

研究了重组人肿瘤坏死因子ａ衍生物３ａ（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｔｕｍｏｒｎｅｃｒｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ３ａ，ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）对多种肿瘤细胞株的体外直接杀伤作用，结果表明：ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ在极低浓度下即能在体外对多种肿瘤细胞发挥明显的直接细胞毒作用，其对Ｌ９２９（小鼠成纤维细胞系）Ｅｈｒｌｉｃｈ（小鼠腹水癌细胞）Ｌｅｗｉｓ（小鼠肺癌细胞）ＳＭＭＣ７７２１（人肝细胞癌）     

α-型重组人肿瘤坏死因子衍生物的稳定性研究

应用体外细胞毒实验对2种α－型重组人肿瘤坏死因子衍生物生物学效优的稳定性进行了考察。结果表明，这2种制品对温度和光照都比较敏感，受热后其生物学活性迅速下降。但在一20℃存放1a后，活性光明显变化。建议该2种制品应在低温条件下避光贮存。     

基因重组人肿瘤坏死因子α衍生物在小鼠组织中的分布(英文)

目的:研究基因重组人肿瘤坏死因子衍生物α(rhTNFαDa)的组织分布及其机制。方法:用Iodogen法制备~(125)I-rhTNFαDa,测定在小鼠全身组织的分布;用离体心肺灌流研究~(125)I-rhTNFαDa在肺组织的分布机制。结果:除甲状腺组织外,~(125)I-rhTNFαDa的组织浓度-时间曲线下面积在肺组织中最高,为血清的12.2倍;离体心肺灌流显示~(125)I-rhTNFαDa在肺中的浓度高于灌流液3.7-7.4倍,而心脏组织低于灌流液.~(125)I-rhTNFαDa在肺中分布具有时间依赖性,剂量依赖性,可竞争性,和高亲和性特征,K_d为47.6 pmol·L~(-1),B_(max)为348 fmol·g~(-1)(肺组织),结论:~(125)I-rhTNFαDa在肺组织中有特异性的高分布,此过程可能有受体介导。     

重组人肿瘤坏死因子α突变体11a的Ⅰ期临床药代动力学

目的在肿瘤患者中观察重组人肿瘤坏死因子α突变体rhTNF-αD11a的药代动力学.方法在单次肌内注射160×104 U和240×104 U及连续肌内注射160×104U,qd×7d后,用ELISA法测定其抗原浓度.结果方法学检验表明,灵敏度、特异性、线性、线性范围、精密度和回收率均符合要求.肌注0.5 h后血清浓度显著高于内源水平(P≤0.05～0.001),24 h后多数患者恢复至药前水平.Cmax和AUC随剂量增高,平均Cmax分别为10.5和14.7 pg-eq·mL-1,AUC分别为50.1和106.1 pg-eq·h·mL-1,但无统计学差异.Tmax随剂量有延长趋势.连续注射7次后浓度明显低于首次注射(P＜0.05).蓄积因子(AUC第7次/AUC第1次)为0.65.结论在研究剂量范围内单次肌内注射药代动力学近似线性,连续注射后药物浓度呈降低趋势.     

重组人肿瘤坏死因子α的抗病毒活性

本文旨在进一步了解重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)的生物学活性。首先在大肠杆菌中克隆出编码TNE-α的基因:裂菌,进而用一系列层析技术从不溶性物质中将TNF-α纯化至均一程度。重新折叠变性蛋白,该重新折叠的TNF-α在小鼠L929细胞上的溶细胞作用达1×10~7U/mg。4℃保存TNF-α。检测按Spofford的改良方法将小鼠L929(获自ATCC,CCl-1)或Hela细胞分别以12500或20000细胞/孔种于96孔平底微滴板上。培养24小时,加入TNF-α,继续培养48小时后,细胞溶解,用0.5%结晶紫溶液染色观察结果。对照细胞仅用培养基,以细胞溶解50%为1个单位。用标准细胞致病作用(CPE)测定抗病毒活性。用TNF-α处理Hela细胞,以脑心肌     

α－型重组人肿瘤坏死因子衍生物国家标准品的协作标定

应用首批α－型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）国际标准品，通过体外细胞毒试验，对三种结构不同的ｒｈＴＮＦ－α衍生物制品的生物学效价进行了协作标定。根据对标化结果的统计学分析，将这三种ｒｈＴＮＦ－α衍生物制品建立为其相应物质的国家标准品，编号为６２８－Ｄａ－０１，６２８－Ｄ３ａ－０１和６２８－Ｋ－０１，它们的效价分别确定为每安瓿４００００，２４０００和１４０００国际单位。     

α—型重组人肿瘤坏死因子衍生物国家标准品的协作标定

应用首批α－型重组人肿瘤坏死因子（rhTNF-α）国际标准品，通过体外细胞毒试验，对三种结果不同的rhTNF-α衍生物制品的生物学效价进行了协作标定。根据对标化结果的统计学分析，将这三种rhTNF-α衍生物制品建立为其相应物质的国家标准品，编号为628－Da-01，628－D3a-01和628－K－01，它们的效价分别确定为每安瓿40000，24000和14000国际单位。     

人肿瘤坏死因子α的结构和衍生物研究进展

对人肿瘤坏死因子α（hTNF-α）结构研究表明,生理条件下具有生物学活性的hTNF-α是一个紧密的三聚体,其活性位点位于两个相邻亚基之间的V形结构域。hTNF-α有两种不同的受体,分别介导不同的生物学活性。在对hTNF-α结构与功能研究的基础上,人们对其N末端、C末端和p75受体结合位点进行基因改造,研制了一系列衍生物,以提高hTNF-α的抗肿瘤活性,降低毒副反应。     

人肿瘤坏死因子α的结构和衍生物研究进展

对人肿瘤坏死因子α（hTNF-α）结构研究表明，生理条件下具有生物学活性的hTNF-α是一个紧密的三聚体，其活必位点位于两个相邻亚基之间的V型结构域，hTNF-α有两种不同的受体，分别介导不同的生物学活性，在对hTNF-α结构与功能研究的基础上，人们对其N末端、C末端和p75受体结合位点进行基因改造。研制了一系列衍生物，以提高hTNF-α的抗肿瘤活性，降低毒副反应。     

高效凝胶色谱法测定重组人肿瘤坏死因子衍生物

研究了多种蛋白质在ＢｅｃｋｍａｎＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｏｇｅｌＳＥＣ３０００柱上的表现，选择其中线性较好的蛋白质作为标准蛋白，测定了７批国产ｒｈ－ＴＮＦ衍生物天然状态下的分子量，结果表明此法具有快速，微量，重现性好，简便易行等优点，是一种非常实用的药品质控方法。     

重组人肿瘤坏死因子-α衍生物在小鼠体内的药代动力学和组织分布

采用放射性测量法检测了小鼠血浆和组织中人肿瘤坏死因子-α衍生物(rhTNF-B)的浓度.以Iodogen法制备125I-rhTNF-B,将其静注小鼠后呈二房室模型处置特征,分布半衰期平均为2.81±0.62 min,消除半衰期平均为25.3±5.0 min,中央室分布容积为17.8±2.3 ml.静注后125I-rhTNF-B可很快向机体的各组织分布,大多数组织在3 min即达到较高浓度,其中以肝脏浓度最高,肺,肾,心,胃,脾,小肠,皮肤等组织也有较高的浓度;而肌注125I-rhTNF-B后大多数组织在给药60 min后达高峰.各组织脏器的 4 h放射性累积量在iv组依次为肝＞肾＞肺＞小肠＞胃＞脾＞心＞皮肤＞肌肉＞脑,在im组依次为:肾＞胃＞肝＞肺＞皮肤＞小肠＞心＞脾＞肌肉＞脑.     

地高辛标记探针检测重组人肿瘤坏死因子α衍生物中残余DNA

本文用地高辛标记工程菌ＤＮＡ片段作探针，通过分子杂交和免疫显色检测ｒ－ｈＴＮＦαＤ半成品和制剂中的残余ＤＮＡ。该法对半成品和制剂分别采用蛋白酶Ｋ膜后处理和酚与氯仿抽提方法，消除了蛋白质或甘露醇对ＤＮＡ测定的干扰。本法特异、准确，灵敏度达１ｐｇ／点。用此法测定３批ｒ－ｈＴＮＦαＤ半成品和制剂（ｎ＝５），其残余ＤＮＡ均小于１００ｐｇ／剂量且重复性较好。     

Western印迹技术在重组人肿瘤坏死因子α衍生物质控中的应用

本文报告用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术对ｒ－ｈＴＮＦαＤ进行定性分析。实验结果表明，该技术具有特异和灵敏的特点，尤其在ｒ－ｈＴＮＦαＤ纯度测定中起十分重要的作用。     

新型重组人肿瘤坏死因子-α的研究进展

提高肿瘤坏死因子 α(TNF α)的抗肿瘤活性 ,降低其毒副作用 ,是将人TNF α应用于临床的关键。此文综述了近年来对TNF α进行结构基因改造、构建融合蛋白基因用以制备高效、毒副作用小的新型抗肿瘤药物的研究进展。     

首批α－型重组人肿瘤坏死因子衍生物国家标准品的效价标定

应用首批α－型重组人肿瘤坏死因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ－α，ｒｈＴＮＦ－ａ）国际标准品，通过体外细胞毒试验，对３种ｒｈＴＮＦ－α衍生物的国家标准品进行了效价的协作标定，标化的结果经统计学分析，其效价分别确定为每安瓿４００００、２４０００和１４０００国际单位。     

首批α—型重组人肿瘤坏死因子衍生物国家标准品的效价标定

应用首批α－型重组人肿瘤坏死因子国际标准品，通过体外细胞毒试验，对３种ｒｈＴＮＦ－α衍生物的国家标准品进行了效价的协作标定，标化的结果经统计学分析，其效价分别确定为每安瓿４００００，２４０００和１４０００国际单位。