Ziehl-Neelsen改良染色法在痰涂片中的应用

针对结核杆菌菌体含有蜡质的特点和传统Ziehl Neelsen抗酸染色法存在的不足 ,笔者在以前工作的基础上对染色液的配方进行改良〔1,2〕,并结合微波辐射技术建立了一种快速、敏感、简便的痰涂片抗酸染色法。1　材料与方法1.1　材料　 5 3例结核杆菌痰培养阳性的痰液 ,每例涂片 2张 ,95 %乙醇固定 15～ 30min ,分别用Ziehl Neelsen改良染色法和传统的抗酸染色法染色 ,同时设阳性对照、阴性对照。1.2　染液配制　 (1)改良的Ziehl Neelsen染色液 :碱性复红无水乙醇饱和液 (相当 6 %浓度 ) 10ml,活性剂 5ml,蒸馏水85ml,先将碱性复红溶于无水乙醇…     

介绍一种抗酸染色法

抗酸染色法有多种 ,根据本科近 10年来应用不同抗酸染色法的经验 ,对 8例已确诊为结核病的病理切片及细胞学涂片 ,从染色效果、操作难易程度及染色时间方面 ,用 6种不同抗酸染色法〔1～ 4〕反复染色对比实验结果 ,推荐一种经典的、简易的、快速实用性强的抗酸染色法———萋纳石炭酸染色法。1　材料与方法1.1　溶液配制　 (1)萋纳石炭酸复红溶液 :碱性复红乙醇饱和溶液 10ｍｌ,5 %石炭酸溶液 90ｍｌ。 (2 )脱色剂 :浓盐酸 3ｍｌ,95 %乙醇 97ｍｌ。 (3)复染液 (吕弗勒美蓝液 ) :美蓝乙醇饱和溶液 30ｍｌ,10 %氢氧化钾 0 1ｍｌ,蒸馏水 10 0ｍ…     

PCR-膜芯片检测石蜡包埋组织中结核杆菌耐药基因突变

目的探讨PCR-膜芯片技术检测石蜡包埋组织中结核杆菌耐药基因突变的可行性及其在临床病理中的应用价值。方法采集100例石蜡包埋的肺或淋巴结组织标本(临床诊断为结核患者80例,非结核患者20例),TB膜芯片检测标本中的结核杆菌IS6110基因,阳性者利用12对特异性引物进行多重PCR,扩增产物与含有59个探针的耐药-TB膜芯片反向点杂交检测结核杆菌耐药基因突变并测序验证。结果 TB膜芯片检测石蜡包埋组织标本中的结核杆菌IS6110基因,以临床诊断为标准时,灵敏度为52.5%(42/80),特异度为100%(20/20);以抗酸染色结果为标准时,灵敏度为90.5%(19/21),特异度为61.0%(36/59)。耐药-TB膜芯片检测石蜡包埋组织结核杆菌耐药基因突变,在42例结核杆菌IS6110基因阳性的标本中,检出INH基因突变2例,RFP或SM基因突变各1例,INH、RFP和EMB基因同时突变1例,与测序结果基本符合,提示上述5例可能为耐药结核病。结论应用PCR-膜芯片技术可提高石蜡包埋组织中结核杆菌基因的检出率,耐药-TB膜芯片检测结果可为耐药结核病的病理学诊断提供有价值的参考。     

荧光定量聚合酶链反应检测弓形虫DNA及其临床应用

我们设计合成了弓形虫 (ＴＯＸ)荧光定量ＰＣＲ (ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,ＦＱ ＰＣＲ)诊断试剂盒 ,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法 ,检测了 2 2 5例产妇的血清标本和 179例新生儿脐血标本的ＴＯＸ ＤＮＡ的含量 ,同时与免疫指标进行比较 ,探讨其在弓形虫临床诊断中的应用价值。2 2 5例产妇ＴＯＸ ＩｇＧ阳性 2 9例 ,阳作者单位 :570 31 1海口 ,海南省人民医院医学研究中心 (符生苗 ,阮和球 ,陈鑫萍 ,庞海云 ,凌奕 ) ;中山医科大学达安基因诊断中心(徐…     

低剂量螺旋CT诊断早期肺癌

据ＳｗｅｎｓｅｎＳＪ等〔ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ ,2 0 0 2 ,16 5 (4) :5 0 8- 5 13〕报道 ,螺旋ＣＴ可用于检出早期肺癌 ,对良性结节诊断率更高。螺旋ＣＴ可检出较小病灶的肺癌。ＳｗｅｎｓｅｎＳＪ与其同事对 15 2 0例年龄≥ 5 0岁 ,有 2 0年吸烟史的个体进行低放射剂量螺旋ＣＴ成像和痰细胞检查。基准成像后 1年 ,在 10 0 0例 (6 6 % )中确诊 2 2 4 4非钙化肺结节者。 2 5例被诊断为肺癌。单用ＣＴ检出 2 3例 ,单做痰细胞检查仅检出 2例。病理癌症类型 :鳞癌 6例 ,腺癌或支气管小泡癌 15例 ,大细胞癌 1例 ,小细胞癌 3…     

不同荧光定量PCR试剂盒在结核分枝杆菌检测中的应用

目的比较两种不同荧光定量PCR试剂盒在福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed and paraffin embedded,FFPE)组织结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)核酸检测中的应用。方法选取40例经临床确诊结核病患者的FFPE组织标本,运用凯杰MTB核酸PCR检测试剂盒、晶芯分枝杆菌核酸PCR检测试剂盒及抗酸染色法进行检测,分析不同方法的MTB检出率。结果凯杰PCR法、晶芯PCR法及抗酸染色法的MTB检出率分别为80%(32/40)、37. 5%(15/40)、50%(20/40),各组之间差异有统计学意义(P 0. 01);凯杰PCR法的MTB检出率明显高于晶芯PCR法和抗酸染色法(P 0. 01)。结论凯杰PCR试剂盒检测FFPE组织中MTB的灵敏度高于晶芯PCR试剂盒,但晶芯PCR试剂盒能够同时检测并区分MTB和非结核分枝杆菌。     

改良痰结核分枝杆菌L型涂片检测方法的建立和应用

目的建立一种快速简便、灵敏度高、特异性好的痰结核分枝杆菌L型的涂片染色检测方法。方法对常规的抗酸染色法进行方法学改良,以特异性基因扩增诊断法为标准,分析评价改良方法的灵敏度、特异性和总有效检出率等统计学指标;分别采用本改良抗酸染色法（以下简称本改良法）、常规抗酸染色法和改良IK抗酸染色法检测468例临床标本,对三种方法的阳性检出率进行统计学比较。结果本改良法阳性检出率与特异性基因扩增诊断法、改良IK抗酸染色法比较均无明显差异（χ2=0.25,P=0.6171;U=0.155,P=0.4404）,但明显高于常规抗酸染色法（U=3.713,P〈0.0010）;本改良法灵敏度、特异性和总有效检出率与改良IK抗酸染色法相似,但高于常规抗酸染色法。同时,本改良法所需时间少于改良IK抗酸染色法（5minvs24h）。结论成功建立了一种快速简便、灵敏度高、特异性好的痰结核分支杆菌L型的涂片染色检测方法,适合临床推广应用。     

脑胶质瘤中S-100,CD80和CD86的表达及其生物学意义

目的 :研究S - 10 0、CD80和CD86在脑胶质瘤中的表达及其生物学意义。方法 :应用免疫组织化学染色法检测 30例脑胶质瘤、10例瘤旁组织和 10例正常脑组织手术标本中S - 10 0、CD80和CD86的表达水平。结果 :S - 10 0蛋白在脑胶质瘤、瘤旁组织和正常脑组织的阳性率均为 10 0 % ,用HPISA - 10 0 0图像分析测得其不同的平均阳性灰度值 (AGV)分别为 72 2 0± 12 30、35 6 0± 9 5 0和 2 8 6 0± 10 2 0 ,脑胶质瘤组织与正常脑组织比较 ,差别有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而瘤旁组织与正常脑组织比较 ,差别无统计学意义 (P >0 0 5 )。脑胶质瘤瘤旁组织及正常脑组织中未发现CD80和CD86表达 ,脑胶质瘤组织未发现表达CD80 ,但有 1例 (1/ 30 )CD86弱阳性。结论 :S - 10 0蛋白在胶质瘤组织中表达上调提示与胶质细胞的异常增殖及胶质瘤的发生发展有关。CD80和CD86在正常脑组织及胶质瘤中到底是否表达尚待进一步深入研究。     

表面活性剂在Wade-Fite法中的应用

由于结核杆菌属抗酸菌,其菌体壁上含有脂质,一般不易着色。常规W ade-F ite法染色使用汽油、松节油混合液代替二甲苯脱蜡,以保存菌体脂质不受破坏。我们通过反复探索,发现通过在染液中加入表面活性剂能有效地提高结核杆菌的检出率,现报道如下。1材料与方法1.1材料收集广东省揭阳市人民医院病理科近2年来所收结核病例标本24例,每例切片2张,分为两组,分别用常规W ade-F ite法和加入表面活性剂的W ade-F ite进行染色。1.2染色剂的配制(1)A液:100 m l石炭酸复红溶液加5m l表面活性剂,混匀。(2)B液:20%硫酸水溶液。(3)C液:亚甲蓝水溶液。1.3…     

胆囊腺瘤p53蛋白检测

1　材料与方法1 1　临床资料　标本为武警新疆总队医院 1992年 6月至1999年 12月间手术或腹腔镜摘除的胆囊腺瘤 32例 ,其中男性 2 0例 ,女性 12例 ,年龄 34～ 6 8岁 ,平均 5 7岁。并选出2 0例胆固醇性及炎性息肉做对照。1 2　免疫组化染色　标本经 10 %福尔马林液固定 ,石蜡包埋 ,5 μｍ厚切片 2张 ,分别做ＨＥ染色和ＡＢＣ法 ｐ5 3免疫组化染色。鼠抗人单克隆抗体ＤＯ 7,丹麦Ｄａｋｏ公司产品。按照ＡＢＣ试剂盒 (美国Ｖｅｃｔｏｒ公司 )操作程序进行 ,ＤＡＢ显色 ,苏木精复染。阴性对照以ＰＢＳ代一抗 ,阳性对照用已知ｐ5 3蛋白阳性的胃癌…     

不同痰标本性状对抗酸杆菌阳性检出率的影响

目的 比较不同性状痰标本中抗酸杆菌的阳性检出率,提高实验室抗酸杆菌阳性检出率.方法 将痰液按性状分为干酪样,血样,脓性粘液样,水样,选择本院2009年9月至2010年8月结核病细菌学实验室涂片登记本上的原始结果做回顾性分析.结果 不同痰标本性状抗酸杆菌阳性检出率有显著性差异.干酪样痰29.8%,脓性粘液痰15.0%,血样痰8.1%,水样痰1.1%.结论 重视痰标本质量,指导病人留取合格的痰标本以提高痰检阳性率.     

肺癌胸水间期细胞遗传学异常变化的研究

目的 探讨肺癌胸水肿瘤细胞的间期细胞遗传学改变,并将其结果与传统细胞学结果进行比较。方法 用７号、１１号、１７号、Ｘ染色体着丝粒特异的ＤＮＡ探针,以２６例肺癌胸水标本进行双色荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）结果 在１９例肺癌阳性胸水标本中,７号、Ｘ、１７号、１１号染色体出现超二倍体的病例分别为１６例（８４．２％）、１４例（７３．７％）、     

DNA酸解后甲基绿—派洛宁染色法的改良和应用

近年来我们采用IsekiS.MoriT极道[1]的DNA酸解后甲基绿—派洛宁(MethylGreen-Py-ronine.MG-P)染色法,对我室的病理标本进行回顾性研究时发现:该方法的效果不理想,如色彩不够解艳,极易褪色,不能长期保存等,影响使用效果,为此我们对原方法进行了改良,取得了满意的效果。1　材料和方法1.1　组织标本　收集我室已明确病理诊断的消化道恶性肿瘤标本:胃癌、食管癌。组织标本经10%甲醛生理盐水溶液或Carnoy氏溶液固定,常规脱水,石蜡包埋,做连续切片,厚5μm。实验设阳性,阴性对照。1.2　方法1.2.1　试剂及改良1甲基绿—派洛宁染色法:　原方法…     

Klinefelter综合征的细胞遗传学与内分泌学分析

Ｋｌｉｎｅｆｅｌｔｅｒ综合征 (简称克氏征 ) ,又称先天性睾丸发育不全 ,是一种较常见的因染色体数目异常而引起的并伴有多种异常表现的综合征。 1942年由Ｋｌｉｎｅｆｅｌｔｅｒ等首先对综合征作了记载 ,195 9年Ｊａｃｏｂｓ等证明其核型为 47,ＸＸＹ。现已报告的核型较多 ,其中 47,ＸＸＹ占 80 % ,其它核型占 2 0 %。本综合征发生率约占分娩男婴的 1- 2 / 10 0 0 ,在婴幼儿时不易发现 ,大约有 1/ 10的不育男子具有这种异常[1] 。我室自1983- 1999年共检出不同的克氏征患者 116例 ,其中 10 0例有详细的病史记载 ,现分析如下。临床资料1 对…     

腹腔镜胃旁路手术效果优于开腹手术

据ＮｇｕｙｅｎＮＴ等〔ＪＡｍＣｏｌｌＳｕｒｇ ,2 0 0 1,192 ( 4 ) :4 69- 4 76〕报道在美国加利福尼亚大学Ｄａｖｉｓ医学中心以腹腔镜做胃旁路 (ＧＢＰ)和开腹Ｒｏｕｘ -ｅｎ -ＹＧＢＰ的术后肺功能及需要镇痛情况进行比较。结果发现 ,腹腔镜ＧＢＰ术后并发症少 ,肺功能好。70例体量指数为 4 0 %～ 60 %ｋｇ/ｍ2 的病人随机分为腹腔镜ＧＢＰ组 (ｎ =3 6)和开腹ＧＢＰ组 (ｎ =3 4 )。两组的年龄、性别、体量指数、肺病史和肺功能基线均相似。对术前和术后 1、2、3、4、7天肺功能及术前、术后第 1天的氧饱和度及胸部Ｘ线做了检测。结果 :…     

脆性X综合征的FMR-1基因

脆性Ｘ综合征 [ｆｒａｇｉｌｅＸｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｙｎｄｒｏｍ ,ｆｒａ(ｘ) ]是常见的遗传性智力障碍性疾病 ,其遗传方式为Ｘ连锁不完全显性遗传。据调查 ,人群中男性发病率为 1/ 15 0 0 1/ 2 0 0 0 ,女性发病率约为 1/ 2 5 0 0 [1] ,但女性突变基因携带者则高达 1/6 0 0 1/ 70 0 [2 ] ,弱智者中本病占 6 .0 % 10 .4% [2 ] 。脆性Ｘ综合征主要表现为智力低下 ,一般为中度到重度 ,男性有大睾丸 ,前额前突 ,下颌前突 ,大耳 ,蓝色巩膜等症状。过去曾认为女性携带者表型正常 ,但现在知晓的 1/ 3女性杂合子有轻度智力低下。脆性Ｘ综合…     

Tween-40软化剂在组织切片技术上的应用

在制备临床和科研组织标本时 ,我们常会遇到一种既韧又硬的组织 ,如病变的指甲和眼球中的晶状体。以前对该类组织没有相适宜的技术方法制备组织切片 ,病甲的切片只有放弃 ;全眼切片只能把晶状体从眼球中挑出后进行 ,破坏了眼球的完整结构。这对于该类组织的结构和病变的研究十分不利。笔者参考有关文献[1] ,配制了 10 %～ 2 0 %的Ｔｗｅｅｎ 4 0软化剂 ,可以很好的软化该类组织并制备石蜡组织切片 ,然后进行ＨＥ染色和免疫组织化学染色 ,效果十分满意。一、材料和方法1 指甲 :把病人剪下的指甲 (如灰指甲 )投入 4 %甲醛液中固定 2～ 3ｄ ,置…     

改良抗酸染色法诊断盆腔结核意义分析

目的 建立改良抗酸染色法并分析其在盆腔结核中的诊断价值.方法 对48例盆腔结核患者盆腔积液用离心涂片法、改良抗酸染色法和BACTEC MGIT 960培养法进行检测,并对结果进行分析.结果 离心涂片法、改良抗酸染色法和BACTEC MGIT 960培养法阳性率分别为2.08％ (1/48)、39.58％ (19/48)和37.50％ (18/48),改良抗酸法分别与离心涂片法及BACTEC MGIT 960培养法比较,改良抗酸染色法的阳性检出率最高,其与离心涂片法差异有统计学意义(P＜0.001),但与BACTEC MGIT 960培养法差异无统计学意义(P＞0.05).结论 改良抗酸染色法较离心涂片法阳性率明显提高,虽然和BACTEC MGIT 960培养法阳性率无明显差异,但是改良抗酸染色法可以快速诊断盆腔结核,对于临床工作有重要意义.     

PCR技术检测TB菌的临床意义

近年来结核病发病率有上升的趋势,目前常规的结核杆菌检测方法,主要是直接涂片抗酸染色镜检和细菌培养等,前者阳性率低,且不能确诊,后者虽可提高阳性率．但条件要求高,需在培养基中加入复杂的有机物,且生长速度慢,常需2～4周时间后才能形成菌落,常因培养基污染而致失败,本文应用聚合酶链反应法（PCR－DNA）检测标本SO例与直接涂片染色法比较如下,1材料与方法标本取自我院门诊及住院部患者展痰液、年龄18～76岁．试剂由广州中山医科大学达安基因诊断中心提供．按说明书操作,而直接涂片染色按常规抗酸染色,镜检．结果（见附…     

Sensititre Yeastone比色抗真菌药敏试验检测产孢丝状真菌MICs的应用评价

1998年美国临床国家实验室标准化委员会 (ＮＣＣＬＳ)提出了产孢丝状真菌肉汤稀释法的抗真菌药敏试验参考方案(Ｍ38 Ｐ)。ＳｅｎｓｉｔｉｔｒｅＹｅａｓｔｏｎｅ比色抗真菌药敏试验国外多用于酵母样真菌的测试。为此通过ＳｅｎｓｉｔｉｔｒｅＹｅａｓｔｏｎｅ比色微量稀释法与Ｍ38 Ｐ方法比较试验 ,对利用ＳｅｎｓｉｔｉｔｒｅＹｅａｓｔｏｎｅ方法进行产孢丝状真菌检测的特点和临床应用进行评价。从 2 0 0 1年 1月至 2 0 0 2年 1月自眼部分泌物分离到 2 3株丝状真菌 ,自深部呼吸道分离到 5株丝状真菌 ,其中烟曲霉菌 8株 ,镰刀菌 7株 ,黄曲…