IL-6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复的促进作用

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)基因转染的骨位基质细胞系QXMSC, IL6对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法:将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠,建立骨髓移植(BMT)模型。小鼠的造血功能用脾结节(CFU-S)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)测定及外周血各项血液学指标来确定。结果:QXMSC_1 IL-6转基因骨髓基质细胞可明显增强BMT小鼠形成的CFU-S、CFU-GM、CFU-E和BFU-E数,促进外周血象的恢复。结论:QXMSC_1 IL-6细胞可明显促进小鼠骨髓移植后早期造血功能重建。     

化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用

目的观察化疗对造血祖细胞、造血微环境的影响,化疗后回输体外扩增的自体骨髓基质细胞(ABMSC)对造血功能恢复的作用.方法对化疗患者进行骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及基质细胞集落(CFU-F)培养、长期骨髓培养,观察基质层融合情况,计算基质层覆盖率及完全融合时间.长期化疗的10例患者进行自身前后对照,在同一化疗方案下,单纯化疗与化疗后回输体外扩增的ABMSC[(1.1～8.7)×103/次]作对比,观察两者造血恢复情况.结果①长期化疗组的CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-F显著低于正常对照组及短期化疗组,后两组差异无显著性;②三组基质层覆盖率及完全融合时间差异无显著性;③长期化疗组ABMSC输注后的CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-F显著高于未输注组;④输注ABMSC后白细胞计数及血小板计数降至最低点的值显著高于未输注组,前者白细胞计数及血小板计数恢复正常时间较后者明显缩短;⑤基质细胞回输过程及输后临床观察无不良反应.结论长期化疗明显损伤造血祖细胞、基质祖细胞,但对骨髓基质细胞融合功能无明显影响,化疗后给予ABMSC可加速造血功能的恢复.     

骨髓基质细胞促进γ射线照射小鼠的造血恢复

用体外骨髓贴壁细胞长期传代法,建立一株骨髓基质细胞QXMSC1,经鉴定可能为巨噬细胞来源。用5Gyγ射线照射BALB/c小鼠建立造血功能缺损动物模型,将QXMSC1细胞输入到照射小鼠体内,用半固体琼脂法测定粒-巨噬系祖细胞,甲基纤维素法测定红系祖细胞,血细胞自动计数仪测定外周血各项血液学指标。结果表明,在照射后第10天,骨髓基质细胞可增加辐射损伤小鼠骨髓有核细胞数,增加CFU-GM,CFU-E和mBFU-E集落数。在照射后第20天,可促进外周血WBC,RBC,Hct和Hb的恢复。说明骨髓基质细胞QXMSC1可促进辐射损伤小鼠造血功能恢复。此外,QXMSC1细胞条件培养上清液具有刺激体外CFU-GM集落生长的作用。     

脐血血浆支持造血祖细胞体外集落培养的研究

10份去血小板的脐血血浆混合后用于研究其对造血细胞培养的支持作用。发现按10％的终浓度加入粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)琼脂培养体系时,集落产率稍高于用GM-CSF作刺激因子组。当按30％终浓度加入含EPO的甲基纤维素培养体系时,可支持CFU-GM、爆式红系集落(BFU-E)、巨核细胞集落(CFU-Meg),粗-巨噬细胞与红系细胞混合的集落(CFU-GEM),粒-巨噬细胞与红细胞、巨核细胞混合的集落(CFU-GEMM)生长,而混合成人血浆则无此作用。植物血凝素刺激的单个核细胞条件液(PHA-MNCCM)对大部分集落有促进作用,但均无统计学意义。国产IL-3可提高CFU-GEM产率,但似乎不利于含巨核细胞的集落生长。研究结果提示,脐血血浆含有丰富的造血刺激活性,利用脐血血浆进行造血祖细胞体外集落培养可能为简化并推广体外造血细胞培养提供新的途径。     

微载体支持体外造血研究

为了探索体外维持造血干细胞自我更新潜能,抑制过度分化以及大量扩增造血细胞的技术,我们将小鼠骨髓基质细胞贴附于微载体上,再接种小鼠骨髓造血细胞共同培养(G2组).在此基础上,用海藻酸钠包埋微载体基质细胞和造血细胞制成凝胶珠进行培养(G1组);设置单纯微载体基质细胞(G3组)和单纯骨髓细胞(G4组)培养作为对照.对比观察,显微摄影,计数细胞总数、CFU-GM集落数和CD34阳性细胞百分率.培养2周观察到造血细胞粘附在微载体基质细胞上或龛在微载体基质细胞间并形成造血灶.3次实验结果显示,G2组CFU-GM集落总数显著高于G4组,同时也显著高于G3加G4组集落总数之和(t=6.553和t=5.494;P＜0.05);G2组CD34+细胞百分率高于其他各组,与CFU-GM测定结果趋向一致.实验表明,微载体基质细胞有较好的支持体外造血的效果,至少可维持4周,而海藻酸固定化造血细胞培养与对照组没有差异.     

自体骨髓基质细胞回输促进急性白血病病人化疗后骨髓造血恢复的研究

目的通过回输成纤维集落生成单位（CFU—F）促进骨髓实质细胞造血恢复。减轻白血病化疗的副作用，促进骨髓损伤早日恢复。方法选取经明确诊断的AML患者化疗回输组前后行自身对照，化疗回输前及后采骨髓行红系造血祖细胞（BFU-E）、粒、巨系集落生成单位（CFU—GM）培养，观察化疗回输前后的外周血象。结果化疗回输CFU-F后第3周。其BFU—E、CFU-GM数明显高于化疗回输前的水平（P〈0．05）。同时高于单纯化疗组第3周测得的BFU-E和CFU-GM数（P〈0．05）。结论体外扩增造血基质细胞于化疗自体回输方法，促进了病人造血恢复，对预防和减轻化疗药物造成的骨髓损伤，缩短化疗间期，加大化疗药物剂量，具有理论意义和应用价值。     

混合脐血血浆对脐血CD34^＋细胞体外扩增的作用

采用两步法分离出脐血CD34~ 细胞,比较研究了混合脐血血浆联合IL-3,IL-6,GM-CSF,Epo 4种中、晚期造血因子和单纯的4种造血因子情况下脐血CD34~ 细胞的体外扩增。结果表明,混合脐血血浆联合造血因子对粒-巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony-forming unit,CFU-GM),红系爆式集落形成单位(burst-forming unit of erythriod,BFU-E),混合集落形成单位(minxed colony-forming unit,CFU-mix)3种集落的扩增效果明显优于单纯的4种造血因子联合组,差异具有统计学意义(P<0.01),但单纯混合脐血血浆扩增效果较差。脐血造血细胞扩增对子成人脐血移植有重要意义。上述结果提示,混合脐血血浆的扩增成功,可代替或弥补早期造血生长因子的作用,用于脐血造血细胞的体外扩增。     

再生障碍性贫血患者造血细胞凋亡与PML蛋白的关系

目的了解再生障碍性贫血患者血清对造血细胞凋亡的活性,及其对造血细胞PML蛋白表达和定位的影响。方法应用甲基纤维素半固体培养法,免疫荧光标记法及流式细胞技术分析12例再生障碍性贫血患者血清体外抑制正常人骨髓BFU-E、CFU-GM增殖及促进其集落细胞凋亡的作用,以共聚焦免疫荧光显微镜及流式细胞仪检测再生障碍性贫血患者血清与正常人骨髓造血细胞共同培养后,再生障碍性贫血患者血清对所形成集落细胞内的PML蛋白表达的影响。结果4例重型再生障碍性贫血(SAA)患者和8例非重型再生障碍性贫血(NSAA)患者血清在体外均可明显抑制正常人骨髓BFU-E、CFU-GM的增殖;SAA组、NSAA组和正常对照组血清作用后集落细胞内均表达一定量的PML蛋白,SAA组高于对照组。结论再生障碍性贫血患者血清具有诱导造血细胞凋亡的活性;再生障碍性贫血患者血清作用后PML蛋白在造血细胞内表达增加。     

铁过载骨髓造血细胞体外模型的建立及其对造血的影响

本研究通过铁与骨髓单个核细胞共培养,建立铁过载骨髓造血细胞模型并观察其对造血功能的影响.在体外培养骨髓单个核细胞的过程中,在培养液中添加枸橼酸铁铵(FAC),使细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,然后检验这一过程中造血细胞的凋亡水平、造血集落形成(CFU-E、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)和CD34+细胞的计数变化.再用去铁胺(DFO)祛铁,观察上述指标的变化.结果发现:在不同时间加入培养液中不同浓度FAC,骨髓造血细胞内可变铁池(LIP)水平升高,且具有时间和浓度依赖性,在含400 μmol/L FAC的培养液中培养24小时时LIP水平达到最高.骨髓细胞造血功能检测表明,FAC组细胞凋亡比例(24.8 ±2.99%)较对照组(8.9±0.96%)显著升高(P＜0.01);造血集落形成单位计数明显低于对照组(P＜0.05);CD34+细胞比例(0.39±0.07%)与对照组(0.91±0.12%)相比也显著降低(P＜0.01).这些损伤影响可以通过DFO的处理部分消除.结论:在体外培养过程中添加铁能诱导骨髓单个核细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,并能引起骨髓造血功能损伤,而这种损伤作用可以通过祛铁法减轻.本模型为深入研究铁过载对骨髓细胞造血功能的作用机制提供实验方法,并为骨髓造血功能低下的铁过载病人治疗提供新的靶点.     

骨髓增生异常综合征CD34~ 细胞增殖与分化特性

利用吸附单克隆抗体的MACS分离系统分离纯化了16例MDS患者骨髓CD34~ 细胞,研究了其体外增殖与分化特性。结果表明:MDS CD34~ 细胞中CFU-GM,BFU-E和CFU-E均低于正常对照组,以BFU-E为显著,尤其是在MDS高转组。在MDS高转组中部分患者还可有白血病细胞集落的形成,说明MDS患者CD34~ 细胞在增殖与分化过程中存在明显异常,对其体外集落的培养在一定程度上可预测该MDS患者的预后。     

IL—6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复？…

目的：探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１ＩＬ－６对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法：将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠，建立骨髓移植（ＢＭＴ）模型。小鼠的造血功能用脾结节（ＣＦＵ－Ｓ）、粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ）测定及外周血各项血液学指标来确定。结果：ＷＸＭＳＣ１ＩＬ－６转基因骨髓基质细胞可明显增强ＢＭ     

异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复

探讨用逆转录病毒载体转入IL 3和IL 6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用。用逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA ,人IL 6cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6。供体小鼠BALB/c(H 2 d)骨髓去除骨髓中T细胞 ,受体小鼠C57BL/6(H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入去除T细胞的供体骨髓 (1× 1 0 7/鼠 )的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 3/IL 6(5× 1 0 5/鼠 )。在骨髓移植后 2 0和 40天 ,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果 :异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL 3/IL 6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC数明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM明显增加。基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建。结论 :基质细胞转入细胞因子IL 3或IL 6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建 ,联合转导IL 3和IL 6有协同作用     

转染IL-3基因的骨髓基质细胞促进骨髓移植小鼠造血功能重建

为了探讨可调控表达IL 3基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠造血功能重建的促进作用 ,建立了可诱导表达IL 3基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,加入多西环素 (Dox)诱导骨髓基质细胞系表达IL 3并检测其活性。C5 7BL/ 6 (H 2 b)小鼠经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB/C(H 2 d)小鼠去除T细胞的骨髓细胞 1× 10 7/只 ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on +IL 35× 10 5/只 ,并灌服多西环素诱导IL 3表达。在第 30天 ,6 0天检测骨髓移植小鼠外周血红细胞 ,白细胞数 ,骨髓有核细胞数 ,骨髓CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果表明 :成功建立可诱导表达IL 3基因的骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,异基因骨髓移植共输注基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3可使异基因骨髓移植小鼠外周血红细胞、血小板、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E ,CFU GMEE明显增加。结论 :输注基因工程化基质细胞 ,并诱导细胞因子IL 3基因表达可以进一步促进异基因骨髓移植小鼠造血功能重建     

转IL-3基因骨髓基质细胞对异基因骨髓移植后小鼠造血重建的促进作用

目的　探讨转IL 3基因的小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (allo BMT)小鼠造血功能的促进作用。方法　用重组逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA)感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3,挑选表达量最高的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3用于以后实验。供体小鼠BALB c(H 2 d)骨髓用抗T细胞单抗anti Thy1.2加补体去除骨髓中T细胞。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入供体骨髓细胞 (1× 10 7 只 )的同时输入QXMSC1IL 3(5× 10 6 只 )细胞。在骨髓移植后第 2 0 ,4 0天 ,分别检测受体小鼠外周血红细胞、白细胞、骨髓有核细胞数 ,CFU S、CFU GM、CFU E和CFU GEMM数以反映骨髓移植后受体小鼠的造血功能。结果　QXMSC1IL 3细胞系可稳定分泌IL 3。allo BMT同时输入QXMSC1IL 3细胞可使allo BMT小鼠外周血红细胞、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数、CFU S、CFU GM、CFU E、CFU GEMM明显增加。结论　基质细胞QXMSC1可作为有效的基因载体进一步促进allo BMT小鼠造血功能重建。     

多西环素诱导表达下IL-3基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血

本研究探讨用多西环素调控IL-3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL-3基因逆转录病毒载体系统，转染小鼠骨髓基质细胞系，获得QXMSClTet-on-IL-3；体外加入多西环素诱导IL-3基因表达并检测IL-3表达活性；观察细胞培养条件上清液对造血祖细胞集落形成单位的作用及QXMSClTet-on-IL-3与骨髓细胞共培养对造血干细胞增殖分化的影响。结果表明：多西环素提高了QXMSClTet-on-IL-3细胞系IL-3的表达，促进骨髓造血祖细胞克隆形成数；与骨髓细胞共培养可促进造血干细胞的增殖分化。结论：应用多西环素诱导外源基因转染的骨髓基质细胞IL-3的表达，可促进造血。     

PNH患者骨髓红系祖细胞体外培养的研究

采用造血祖细胞体外培养技术研究了阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ）的增殖能力；骨髓细胞经新鲜酸化ＡＢ型血清处理后培养的ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ的增殖能力；以及ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）的反应能力。发现ＰＮＨ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ集落数明显低于正常；骨髓细胞经新鲜酸化ＡＢ型血清处理后培养的ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ集落数明显低于经热灭活酸化ＡＢ型血清处理后培养的集落数；ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ对Ｅｐｏ的反应回归直线呈低平状态。认为ＰＮＨ患者骨髓红系祖细胞膜缺陷可导致其在酸性条件下对补体的敏感性增高和导致其对Ｅｐｏ的敏感性降低。     

肿瘤坏死因子α,γ干扰素和红细胞生成素与类风湿性关节 …

目的 探讨类风湿性关节炎（ＲＡ）伴慢性病性贫血（ＡＣＤ）的特征,及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、γ干扰素（ＩＦＮ－γ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）在其发病中的作用。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测ＲＡ患者血清ＴＮＦα、ＩＦＮ－γ水平及ＲＡ伴ＡＣＤ虱的血清Ｅｐｏ产生的影响及ＴＮＦα、ＩＦＮ－γ和Ｅｐｏ对正常骨髓ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ的影响;以及ＲＡ自身血清、Ｅｐｏ对ＲＡ骨髓ＣＦＵ－Ｅ的影响。结果 与正常对照组比