大鼠脑挫伤DNA含量变化与损伤时间的关系

目的观察大鼠脑挫伤后DNA含量的时序变化规律。方法建立自由落体打击大鼠脑挫伤动物模型,采用Feulgen’s DNA染色方法,结合图像分析技术。结果损伤侧大脑皮质浅层和海马区平均积分光密度（IOD）变化呈：24h内迅速下降,24—96h有缓慢上升趋势;伤后24h内上述两区域平均积分光密度均与损伤时间呈线性关系,R^2分别为0．668和0．615。可导出直线回归方程。结论采用Feulgen’s DNA染色法结合图像分析技术观察伤后DNA含量变化,可以应用于脑损伤时间推断的研究,探索推断脑损伤时间的新方法。     

应用单细胞凝胶电泳检测大鼠死后脾细胞核DNA降解与死亡时间的关系

目的:探讨应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测大鼠死后脾细胞核DNA降解与死亡时间的一般规律,为早期死亡时间的推断提供新的方法。方法:建立大鼠死亡模型,在死后27h内,每隔3h取脾组织样本进行单细胞凝胶电泳,用共聚焦显微镜摄取彗星图像,应用彗星图像分析软件(IMI1.0)进行图像分析,并作统计学分析。结果:大鼠死后,脾细胞在电泳图像上出现了明显的彗星形拖尾,其尾长(TL)、尾矩(TM)在一定的时间范围内(0～15h)随死亡时间的延长而逐渐增大,二者均与死亡时间(PMI)呈现一定的相关回归关系。结果:单细胞凝胶电泳技术可应用于早期死亡时间的推断;彗星图像分析软件为SCGE的结果分析提供了便利。     

不同温度下人脾细胞DNA降解推断早期死亡时间

目的 对不同温度下人体脾细胞DNA降解状态进行多参数联合定量分析,得出温度相关的多元回归方程.方法 选取13例已知PMI的人体离体脾脏,在死后13h～34h内,分别在10℃、20℃及30℃条件下,每隔1h取材,进行细胞学涂片,Feulgen-Vans染色,选用图像分析系统检测几何参数(ID)及灰度参数(AOD、IOD、AG、LDC)指标,对不同温度的检测指标进行多元回归等统计分析,得出相应的回归方程.结果 温度相关的脾细胞DNA降解推断死亡时间回归方程是:Y=-0.668619XT+2.31609XID-33.45671XAOD-1.13296XIOD+0.44433XAG(XT=10,20,30).结论 不同温度的牌细胞AOD、IOD、ID、AG均有显著性差异,温度及反映DNA含量的各个参数与PMI存在很强的相关性,可以将温度作为参数引入方程用于推断PMI.     

大鼠死后肾上腺突触素含量变化与死亡时间关系的研究

目的探讨大鼠死后肾上腺内突触素含量变化与死亡时间的关系。方法建立大鼠死亡模型，在死后不同时间取出肾上腺。应用免疫组织化学方法检测肾上腺内突触素含量变化，采用图像分析系统测定突触素阳性反应物的平均灰度值，分析其随死亡时间变化的规律。结果大鼠死亡后12h内突触素含量变化不明显，随着死后时间的延长，肾上腺内突触素含量逐渐下降。结论大鼠死亡后肾上腺内突触素含量变化具有一定时间规律性，突触素可作为推测死亡时间的参考指标。     

死后角膜厚度的实验病理学研究

目的 :利用人体死后角膜增厚为推断死亡时间 (Timeofdeath ,TD)提供理论依据。方法 :用光学显微镜测量死后不同时间的角膜厚度 (Cornealthickness,CT)。结果 :死后 48h以内的角膜厚度增加与死后时间呈线性关系 :Y =5 16 + 10 .7X。结论 :法医可以通过测量角膜厚度推断早期死亡时间。     

人死亡后特定条件下骨髓细胞核DNA降解与死后时间间隔推断

目的：探讨人死亡后骨髓细胞核DNA含量变化与晚期死后时间间隔关系.方法：离体人胸骨置于特定条件下,随时间延长分别取材制成病理切片,应用DNA高度特异性染色方法Feulgen改良法结合计算机图像分析技术对死后不同时间胸骨骨髓细胞核DNA含量变化进行分析.结果：人死亡后1～10d,Feulgen染色阳性产物随死亡时间延长逐渐减少,胸骨骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈规律下降,DNA染色逐渐变浅淡,至死后10d已基本观察不到.结论：人死亡后骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈下降趋势,两者之间存在线性关系.     

不同温度下人脾细胞DNA降解推断早期死亡时间

目的对不同温度下人体脾细胞DNA降解状态进行多参数联合定量分析,得出温度相关的多元回归方程。方法选取13例已知PMI的人体离体脾脏,在死后13h～34h内,分别在10℃、20℃及30℃条件下,每隔1h取材,进行细胞学涂片,Feulgen-Vans染色,选用图像分析系统检测几何参数（ID）及灰度参数（AOD、IOD、AG、LDC）指标,对不同温度的检测指标进行多元回归等统计分析,得出相应的回归方程。结果温度相关的脾细胞DNA降解推断死亡时间回归方程是：Y=-0.668619XT＋2.31609XID-33.45671XAOD-1.13296XIOD＋0.44433XAG（XT=10,20,30）。结论不同温度的脾细胞AOD、IOD、ID、AG均有显著性差异,温度及反映DNA含量的各个参数与PMI存在很强的相关性,可以将温度作为参数引入方程用于推断PMI。     

大鼠骨骼肌肌动蛋白在死亡后的形态学变化

目的探讨大鼠骨骼肌肌动蛋白纤维的形态学变化与死亡时间的相关性。方法分别采用激光扫描共聚焦显微镜和透射电镜对大鼠死后不同时间骨骼肌(右后肢的内收大肌)肌动蛋白纤维的形态学变化进行观察。结果大鼠死后,透射电镜观察可见由肌动蛋白构成的细肌丝逐渐崩解、紊乱,直至肌小节和细肌丝结构消失;激光扫描共聚焦显微镜观察可见,自死后24h起,骨骼肌纤维横纹可有小片状或弥漫状抗肌动蛋白抗体缺染灶出现,并且抗肌动蛋白抗体染色面积随着死亡时间的延长而逐渐减少,其变化趋势与死亡时间相关(Y=0.934-0.005X,R2=0.95,P<0.05);大鼠死后168h内,肌动蛋白阳性产物的积分光密度值随死亡时间的延长而逐渐降低,组间差异均具有统计学意义(P<0.05),至死后168h,几乎无抗肌动蛋白抗体染色。结论大鼠骨骼肌肌动蛋白纤维的形态学改变与死亡时间具有相关性。     

死后小鼠肾组织细胞核DNA变化规律的研究

目的:研究DNA降解变化与死亡时间的关系,为法医学推断死亡时间提供一种比较准确可靠的新方法。方法:应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠肾组织细胞核头半径、尾长度、头DNA含量比例、尾DNA含量比例、尾矩、Olive矩、头面积、尾面积8项参数的变化值。结果:在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径、头DNA含量比例、头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程和多元回归方程,均具有高度的统计学意义(P均<0.01)。结论:应用本研究提供的72h内肾组织组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,为法医学推断死后经过时间提供了一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。     

人体死后不同时间玻璃体液化学成分的变化趋势

目的测定人死后玻璃体液化学成分含量,对多种化学指标进行分析,建立各自的回归方程,使玻璃体液检测能更广泛地应用于法医实践。方法用日本产OL YMPUS AU400自动生化仪对死后时间在0．5-216h的126例尸体玻璃体液中葡萄糖等11种成分的含量进行测定。结果①玻璃体液中葡萄糖、钠、氯随死后时间的延长而逐渐下降;尿素、肌酐、尿酸、钾、钙、镁、无机磷、微量蛋白随死后时间的延长而逐渐升高。葡萄糖、钾离子和无机磷与死亡时间的相关性好（r=-0．824,0．967,0．880）,而尿酸和微量蛋白则不能用于推断死亡时间（r=0．350,0．153）。②死后72h内,死亡时间的逐步回归方程为：Y=-35．15＋6．05X,R^2=0．957,X代表玻璃体液钾离子浓度。Y=-27．83＋5．49X1-1．35X2,R^2=0．960,X1、X2分别代表玻璃体液钾离子、葡萄糖浓度。Y=-16．37＋3．93X1-2．29X2＋5．36X3,R^2=0．966,X1、X2、X3分别代表玻璃体液钾离子、葡萄糖、无机磷浓度。结论①玻璃体液中葡萄糖等11种化学成分的含量随死后时间的延长而改变,其中钾离子在死后72h内与死亡时间最具有线性关系。②用逐步回归法建立多元回归方程推断死亡时间,可以提高对死亡时间估计的准确性。     

Correlative Analysis on the Relationship between PMI and DNA Degradation of Cell Nucleus in Human Different Tissues

Summary： To determining the postmortem interval （PMI） through quantitative analysis of the DNA degradation of cell nucleus in human brain and spleen by using image analysis technique （IAT）. The brain and spleen tissues from 32 cadavers with known PMI were collected, subjected to cell smear every 1 h within the first 5-36 h after death, stained by Feulgen-Van＇s staining, Three indices reflecting DNA in brain cells （astrocytes） and splenic lymphocytes, including integral optical density （IOD）, average optical density （AOD）, average gray （AG） were measured by employing the mage analysis instrument. The results showed that IOD and AOD declined and AG increased with the prolongation of dead time within 5 36 h. A correlation between the PMI and gray parameters （IOD,AOD and AG） was identified and the corresponding regression equation was obtained. The parameters （IOD, AOD and AG） were proved to be effective quantitative indicators for accurate estimation of PMI within 5-36 h after death.     

Determination of the Early Time of Death by Computerized Image Analysis of DNA Degradation： Which Is the Best Quantitative Indicator of DNA Degradation？

This study evaluated the correlation between DNA degradation of the splenic lympho-cytes and the early time of death,examined the early time of death by computerized image analysis technique(CIAT) and identified the best parameter that quantitatively reflects the DNA degradation.The spleen tissues from 34 SD rats were collected,subjected to cell smearing every 2 h within the first 36 h after death,stained by Feulgen-Van's staining,three indices reflecting DNA content in splenic lymphocytes,including integral optical density(IOD),average optical density(AOD),aver-age gray scale(AG) were measured by the image analysis.Our results showed that IOD and AOD decreased and AG increased over time within the first 36 h.A stepwise linear regression analysis showed that only AG was fitted.A correlation between the postmortem interval(PMI) and AG was identified and the corresponding regression equation was obtained.Our study suggests that CIAT is a useful and promising tool for the estimation of early PMI with good objectivity and reproducibility,and AG is a more effective and better quantitative indicator for the estimation of PMI within the first 36 h after death in rats.     

褪黑素对大鼠脑内强啡肽水平的影响

目的观察褪黑素（MLT）对大鼠脑内某些镇痛相关核团内神经细胞的强啡肽样免疫反应强度的影响。方法实验大鼠分给药组及对照组,分别腹腔注射MLT110mg/kg或配药液,1h后灌注取脑、冰冻切片,进行免疫组化染色,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度（IOD）值。结果给药组大鼠视上核、中缝背核内强啡肽样免疫阳性反应减弱,其IOD值显著减少（P<0.01）;给药组大鼠下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、中缝大核的IOD值,与对照组比较差别无显著意义。结论MLT可致视上核、中缝背核内强啡肽含量减少。     

兔急性肺损伤死后肝内血管内皮生长因子时序性变化的研究

目的研究大潮气量机械通气致兔急性肺损伤（ALI）12h后处死，死后肝微血管内血管内皮生长因子（VEGF）的动态变化。方法机械通气（VT60mL／kg，R50次／min）致急性肺损伤后12h处死兔，应用免疫组织化学染色（SABC法）和图像分析系统，观测死后不同时间点肝内微血管内皮细胞内vEGF的动态变化。结果对照组死后即刻肝内微血管内皮细胞胞浆vEGF呈弱阳性染色，死后2h阳性染色程度有轻度增加，但以后随PMI的延长VEGF逐渐减弱，死后18h呈阴性；试验组死后肝内微血管的内皮细胞胞浆VEGF呈强阳性表达，但随着PMI延长逐渐减弱，在死亡后0-24h减弱幅度较小，但21-36h阳性染色程度下降较快，直至死后42h随肝内微血管结构崩解而完全消失。结论大潮气量机械通气致急性肺损伤12h处死后，肝微血管内VEGF的变化在一定的时间段内与死亡时间呈现相关关系。     

P53基因在肝母细胞瘤中的表达及意义

目的 :探讨P5 3在肝母细胞瘤的表达情况。方法 :应用S -P法对 2 6例肝母细胞瘤行P5 3免疫组化染色 ,用显微图像分析仪测定阳性细胞百分率P/A(% )、平均光密度 (AOD)、积分光密度 (IOD)。结果 :P5 3在肝母细胞瘤中表达阳性率为 6 9.2 % (P <0 .0 1) ,P5 3的阳性表达水平 ,临床分期越晚越高 (P <0 .0 5 )。结论 :肝母细胞瘤的发生与P5 3蛋白异常表达有关 ,测定P5 3表达有助于判断预后。     

Image Analysis for Degradation of DNA in Retinal Nuclei of Rat after Death

The changes of retinal nuclear DNA content in rats after death was detected and the rela-tionship between degradation of retinal nuclear DNA and postmortem interval (PMI) was analyzed. Ninety healthy adult SD rats, female, weighing 250±10 g, were randomly divided into 15 groups. At 20 ℃, the retinal cells were withdrawn every 2 h within 0 to 28 h after death and stained with Feul-gen-Vans. Index of density (ID), integral absorbance (IA) and average absorbance (AA) in retinal nu-cleus were analyzed by image analysis system. And the obtained data were subjected to linear regres-sion analysis by using SPSS12.0 software. The results showed that in retinal nucleus, AA and IA were gradually declined with the prolongation of PMI, while ID had an increased tendency. Within 28 h after PMI, the regression equations were as follows: YAA=-0.009XAA 0.590 (R2=0.949), YIA=-0.097XIA 18.903 (R2=0.968), YID=0.122XID 2.246 (R2=0.951). It was concluded that retinal nuclear DNA after death in rats was degraded gradually and had a good correlation with PMI.     

自然条件下盐酸吗啡对肥须亚麻蝇幼虫发育积温和头咽骨的影响

目的 自然条件下,通过盐酸吗啡对石家庄地区优势蝇种肥须亚麻蝇（Parasarcophaga crassipalpis）幼虫发育积温与头咽骨影响的研究,探讨利用积温和头咽骨形态学指征推断死后间隔时间（PMI）的可行性。方法 自然条件下,用不同剂量盐酸吗啡注射后处死的兔肉上饲养肥须亚麻蝇。观察并留取幼虫标本一次直至达到离食期。将幼虫烫死并保存。计算实验期间的日均温累加为积温（ADH）。体视显微镜下分离出幼虫头咽骨并在光学显微镜下观察、拍照。利用计算机图像分析系统对头咽骨的形态学指征进行测定。结果 (1) 自然条件下,盐酸吗啡一定程度上改变了肥须亚麻蝇幼虫的积温和历期。 (2) 自然条件下,幼虫头咽骨的骨化面积和平均光密度均随积温的增加而逐渐增高,直至三龄期结束。二者达到最大值的积温明显大于面积达到最大值的积温。结论 (1)自然条件下,盐酸吗啡显著改变了肥须亚麻蝇幼虫发育积温。故积温并非准确推断PMI的理想指标。(2)自然条件下,口钩和咽骨的骨化面积、平均光密度均随积温的增加呈现良好的线性趋势,并一直维持到三龄期后,此4项指标是推测PMI的理想指标。     

兔死后角膜瞳孔区域图像颜色的时序性变化规律

目的探讨个体死后角膜瞳孔区域图像颜色时序性变化规律,为死亡时间（PMI）推断提供一种无损、客观方法。方法构建 家兔空气栓塞和溺死死亡模型,在温度20 ℃、湿度30%的暗室内,于死后72 h内每隔2 h用数码相机获取兔角膜图像。通过计 算机图像处理技术（MATLAB）分割出角膜瞳孔区域图像,提取RGBHSV 6项图像颜色特征参数值并进行与PMI关系的回归分 析,同时比较不同死因对死后角膜瞳孔区域图像颜色变化的影响。结果不同死因死后72 h内,兔角膜瞳孔区域图像的R、G、B 值均随PMI呈上升趋势,与PMI拟合关系较好（P<0.01）,H、S、V值与PMI关系均无统计学意义（P>0.05);经比较,两种死因死后 兔角膜瞳孔区域图像R、G、B值的变化趋势一致,与PMI的相关性相近,空气栓塞组兔角膜瞳孔区域图像的R、G、B实测值总体 大于溺死组。结论个体死后角膜瞳孔区域图像颜色变化随PMI呈一定规律性,死因会影响死后角膜瞳孔区域图像颜色特征参 数值大小。研究建立的相关回归方程为无损、客观推断PMI提供参考依据。     

Changes of cerebral β-endorphin in rats treated with combination therapy of melatonin and electroacupuncture

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇｏｆａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅａｎａｌｇｅｓｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｎｔｈｅｌｅｖ ｅｌｏｆβ ｅｎｄｏｒｐｈｉｎａｎｄｐｒｏｏｐｉｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎｍＲ ＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅａｒｃｕａｔｅｎｕｃｌｅｕｓｏｆｈｙｐｏ ｔｈａｌａｍｕｓｉｎｒａｔｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ（ＥＡ）ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｍｅｌａｔｏｎｉｎ（ＭＥＬ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｏｐｔｉｃａｌｄｅｎ…     

MMP-9表达在不同方法获得破骨细胞的比较研究

目的比较基质金属蛋白酶9（matrix metailoproteinase 9,MMP-9）表达在机械法获得破骨细胞（osteoclasts,OC）和诱导法获得破骨样细胞（osteoclast like cells,OLC）的差异,为体外培养OC提供实验依据．方法采用机械分离方法,从1d龄sD大鼠四肢长骨获得成熟OC;利用RANKL（100ng／mL）和M—CSF（100ng／mL）诱导RAW264．7细胞形成OLC．采用免疫细胞化学和原位杂交技术检测不同方法获得的OC和OLC MMP-9蛋白及其mRNA的表达．结果诱导法12d组的积分光密度和平均光密度均明显高于机械法3d组．结论诱导12d的OLC MMP-9及其mRNA表达的明显高于机械法3d,为OLC提供了进一步的实验数据．