新型冠状病毒核酸检测的性能验证及评价

目的验证实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测系统的主要性能。方法参考《医学实验室质量和能力的要求》第1部分通用要求GB/T22576.1-2018和第10部分分子生物检验学领域的要求GB/T22576.10-2018对该实验室RT-qPCR检测SARS-CoV-2核酸的检测系统的符合率、重复性、检出限、抗干扰能力、交叉反应等性能特征进行验证及评价。结果该实验室与国家卫生健康委临床检验中心2020年第1、2次SARS-CoV-2室间质评标本的阳性符合率为92%,阴性符合率为100%,总符合率为95%,其中有1例阳性标本未检出阳性,系标本浓度低于最低检测限;弱阳性标本检测的靶基因ORF-1ab和N的Ct值的批内变异系数(CV)分别为1.38%和1.16%,批间CV分别为1.84%和1.72%,均小于5%;检测限浓度(500 copies/mL)标本5次重复检测SARS-CoV-2核酸结果均为阳性;在加入严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、磷酸盐缓冲液(PBS)、人冠状病毒NL63(NL63)、人冠状病毒HKU1(HKU1)、人冠...     

1种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证

摘要：目的?验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法?依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》，使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品，依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力进行验证及评价。结果?实时荧光RT-PCR试剂检测2019-nCoV RNA的符合率为100%，检出限为125 copies/mL。该试剂检测人冠状病毒HCoV-OC43、人冠状病毒HCoV-HKU1、人冠状病毒HCoV-229E、人冠状病毒HCoV-NL63、SARS冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、EB病毒、人巨细胞病毒和结核分枝杆菌无交叉反应；2.0×103?copies/mL和2.0×105?copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)为0.70%及1.36%，批间CV为1.17%及1.72%；ORF1ab基因的批内CV为0.48%及0.52%，批间CV为1.36%及2.39%；加入内源性干扰物血红蛋白及清蛋白、外源性干扰物利巴韦林及阿奇霉素对2019-nCoV RNA的检测结果无影响。结论?该试剂检测2019-nCoV RNA的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力均符合临床分子生物学扩增检验的要求，可为临床提供可靠依据。     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。     

一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个检测体系中的检出限分析

目的 验证一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个不同检测体系中的检出限,以提升新型冠状病毒核酸检测质量。方法 选择1个试剂配套体系和3个非配套体系,使用中国计量科学研究院新型冠状病毒全序列假病毒核糖核酸标准物质验证检出限性能,并对未通过验证的体系进行分析,以查找原因。结果 该试剂在4个检测体系中检出限验证均通过,其中非配套体系1检出能力最强,其次为配套体系和非配套体系2。缩短细胞裂解、核酸释放与磁珠结合时间、减少核酸洗涤次数会影响试剂检出限。结论 该试剂检出限性能可满足检测需求。相关部门应出台相应仪器的生产标准和校准标准;实验室应关注加样量、非配套体系的优化和仪器设备的维护、保养、校准。     

新型冠状病毒核酸检测分析

2020年,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在国内和其他国家暴发流行。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法以其高灵敏度与强特异性,被认为是COVID-19的确诊方法。然而,SARS-CoV-2核酸检测对于阳性患者的阳性率仅有30%~50%,临床较多的疑似病例需多次核酸检测之后才得到阳性结果,使SARS-CoV-2核酸检测阳性作为确诊标准备受质疑。本文结合相关文献及在SARS-CoV-2核酸检测中的工作经验,从病原学、标本采集、核酸提取过程、试剂盒等各个方面对SARS-CoV-2核酸检测方法的影响因素进行深入探讨,对SARS-CoV-2检测出现假阴性或假阳性的原因进行分析与归纳总结,为检测的准确性提供依据,也旨在为基层医院的核酸检测工作提供一定的帮助。     

新型冠状病毒核酸临床检测要点及经验

2019年12月以来,新型冠状病毒感染引起的肺炎病例数快速攀升。因患者体内病毒核酸的存在是目前唯一的确诊依据,而目前临床上普遍反映核酸检测阳性率不够理想,故对病毒核酸检测的实验室条件、检验人员及检测过程中各个环节都有较高要求。本文着重阐述了新型冠状病毒核酸检测各个环节中的检测要点、最新的行业规范及共识内容,同时探讨临床检测中的疑难问题,以期为新型冠状病毒所致疾病的准确诊断提供理论依据。     

新型冠状病毒核酸非配套检测系统性能确认方法的建立

目的 对实验室新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸非配套检测系统性能进行确认,以确定其是否满足临床需要。方法 根据ISO15189要求,对北京大学深圳医院实验室SARS-CoV-2核酸达安提取试剂与伯杰扩增试剂组成非配套检测系统的符合率、精密度、检出限及交叉反应进行性能确认。结果 非配套检测系统在实验室内不同的荧光定量PCR扩增仪上检测,方法符合率为100.00%;精密度确认试验ORF1ab基因和N基因变异系数(CV)均<5%。检出限能力ORF1ab基因为98.33%(118/120),N基因为91.67%(110/120),有效检出率为100.00%(120/120);与感染部位相同或感染症状相似的病原体无交叉反应。结论 实验室需对非配套检测系统进行性能确认,确保SARS-CoV-2核酸检测结果质量。     

不同检测系统对新型冠状病毒核酸的检测结果分析

目的评价不同检测系统对新型冠状病毒(2019-n Co V)核酸的检测能力差异,为选择2019-n Co V核酸检测试剂提供指导。方法用本实验室在用的提取试剂、扩增试剂及扩增仪组合成8个检测系统,分别对国家卫生健康委临床检验中心2019-n Co V室间质评发放的12个样本进行检测。结果纳入统计指标的10个样本中,有5个2019-n Co V阴性样本,8个检测系统对5份阴性样本均为未检出,与预期结果相符,另5份2019-n Co V阳性样本中,8个检测系统均未检出202010(128 copies/m L),均检测出202004、202008、202011。对202002(640 copies/m L)弱阳性样本,只有B及D 2个检测系统检出,其余均未检出。B及D检测系统扩增试剂均为e扩增试剂,检测的符合率总体优于f扩增试剂。N区的阳性率高于ORF区,样本2019-n Co V拷贝数越低,这一现象越显著。A-D检测系统检测到的ORF1ab基因的阳性率高于E-H检测系统,A-D检测系统均使用的是b快速提取试剂,而E-H检测系统使用的是a提取试剂,提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。结论...     

5种新型冠状病毒核酸检测试剂应用于DXcellenceTM全自动核酸检测分析系统的性能评估

目的 探讨5种新型冠状病毒核酸检测试剂与DXcellence^TM全自动核酸检测分析系统的适配性,为临床实验室选择新型冠状病毒核酸检测方法和仪器提供参考依据。方法 参考《病原体核酸即时检测质量管理要求专家共识》对定性项目的性能验证要求,在DXcellence^TM全自动核酸检测分析系统上,搭配艾科诺公司(简称Accunome)的核酸提取纯化试剂盒,评价5种新型冠状病毒核酸检测试剂(杭州金迪安、武汉明德、江苏硕世、北京金豪和上海思路迪,简写为JDA、MD、SS、JH、SLD)的性能。结果 5种新型冠状病毒核酸检测试剂均可配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂盒,在DXcellence^TM全自动核酸检测分析系统上实现样本进、结果出的检测。5种试剂检测时间为：单个样本54～94 min, 12个样本65～105 min。JDA、MD、JH试剂对新型冠状病毒开放阅读框1ab基因(ORF1ab基因)329～450 copies/mL的检出率均为100%,在核衣壳蛋白基因(N基因)260 copies/mL的检出率均为100%;SS...     

新型冠状病毒核酸混采对检测结果的影响

目的:评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法:取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中,充分混匀后1∶2、1∶10稀释,加入灭活2019-nCoV病毒培养液,以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏...     

国产新型冠状病毒抗体胶体金法检测试剂盒在低流行区应用的诊断效果评价

目的　探讨评价两种不同的国产新型冠状病毒抗体胶体金法检测试剂盒的 2019-nCoV 免疫球蛋白 M 抗体（抗 -IgM）和免疫球蛋白 G 抗体（抗 -IgG）检测试剂在低流行区北京地区的应用与诊断效果,指导临床合理应用。方法　选取新型冠状病毒肺炎（COVID-19）确诊患者 29 例和非感染筛查人群 19 411 例的血清,采用胶体金免疫层析法,评价国产珠海丽珠及唐山英诺特的 2019-nCoV 抗体检测试剂盒的的灵敏度、特异度、假阳性率等性能指标。结果　英诺特 2019-nCoV 灵敏度稍高于丽珠 2019-nCoV,灵敏度分别为 58.62%,55.17%;抗体全阴组的标本采集时间明显小于抗体阳性各组（P ＜ 0.05）;低流行区两种试剂复合报告抗体假阳性率 0.16%,2019-nCoV IgG 假阳性率英诺特高于丽珠;同一品牌的 2019-nCoV IgM 假阳性率显著高于 IgG（英诺特 χ2=14.756 09,P=0.000 0;丽珠 χ2=27.492 62,P=0.000 0）。结论 2019-nCoV 抗体检测快速、简单易操作、特异度高,可作为新冠的快速筛查指标;两种试剂盒的特异度、正确率和阴性预测值较好,出现阳性结果时应用另一种试剂盒进行复测,可减少通报临床的假阳性率;新冠抗体阳性报告的应用与分析应结合流行区及临床综合判断。     

荧光免疫层析法降钙素原检测试剂盒临床性能评估

  目的  评估荧光免疫层析法试剂盒检测降钙素原的性能。  方法  参照美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)EP5-A和EP6-A文件方法, 对荧光免疫层析法试剂盒(TEBSUN)检测降钙素原的精密度、线性、方法学比对、相对灵敏度和特异性进行评估。  结果  荧光免疫层析法试剂盒检测降钙素原精密度较好, 低浓度和高浓度样本精密度的变异系数分别为8.3%和4.7%;线性验证试验结果显示, 在试剂盒标示的检测范围内具有良好的线性梯度关系(r=0.9989);方法学比对结果显示, 荧光免疫层析法试剂盒与梅里埃VIDAS酶联免疫荧光法分析系统的降钙素原试剂盒检测结果一致性良好(r=0.9770);在0.5和2.0 ng/ml两个浓度水平, 荧光免疫层析法试剂盒相对于酶联免疫荧光法试剂盒的灵敏度和特异性均大于86%, 与其测定结果的总体符合率为93.75%。  结论  荧光免疫层析法试剂盒检测降钙素原的精密度、线性、方法学比对、相对灵敏度和相对特异性等性能评价较好, 适用于临床标本检测。     

国产化学发光免疫试剂检测血清HBsAg的应用评价

目的考核国产化学发光免疫分析试剂检测血清HBsAg的效果,探讨其在血液筛查和临床检测应用中的可行性。方法采用国产化学发光免疫分析试剂筛查345份HBsAg确认阳性的血清标本,比较其与常用的进口和国产酶联免疫检测试剂盒的漏检率;并采用不同浓度的标准HBsAg血清对国产化学发光免疫分析试剂进行线性分析和精密性试验。结果国产化学发光免疫分析检测试剂的漏检率高于Murex和Organon酶联免疫试剂盒,差异有统计学意义（P〈0．01）,而与国产英科新创（厦门）科技公司和上海科华生物技术有限公司的HBsAg酶联免疫诊断试剂盒的差异无统计学意义;采用标准血清进行线性分析,标本浓度在（0．5～150）ng／ml范围时与化学发光单位量（RLUs）呈良好的线性正相关;分别对低、中、高浓度标准血清进行板内和板间的重复检测,其反应具有良好的重复稳定性。结论化学发光免疫分析法检测血清HBsAg具有快速、可定量、反应稳定的特点,可用于血液筛查和临床标本的检测。     

国产Auto TRFIA-4 型自动荧光免疫分析仪与试剂盒检测妊娠相关血浆蛋白A 的性能评价与参考区间的建立

目的 评价国产Auto TRFIA-4 型自动荧光免疫分析仪与试剂盒检测妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）的性能,并建立参考区间。方法 国产Auto TRFIA-4 型自动荧光免疫分析仪与试剂盒组成待评价系统。依据PAPP-A 检测试剂盒医药行业标准,对待评价系统检测PAPP-A 的检测限、线性和精密度进行评价;并采用方法学比对试验检测了66 例孕早期不同孕周的孕母血清样本,进行准确度评价。参考C28-A2 文件,待评价系统检测了2 524 例孕早期不同孕周的孕母血清样本,进行PAPP-A 参考区间的建立。结果 待评价系统检测PAPP-A 的空白限为0.50 mIU/L,检测限优于25.00 mIU/L,线性在9.00 ～ 2 530.00 mIU/L 内的相关系数（r）达0.999 8,批内变异系数（CV）小于3%,批间CV 小于4%。待评价系统与对比系统检测血清样本结果的线性回归方程为Y=0.937 3X+271.15,r=0.996 6（tr=96.68, P ﹤ 0.05）,且两系统检测的PAPP-A 浓度结果差异无统计学意义（t=1.10, P ﹥ 0.05）。在9 ~ 9+6,10 ~ 10+6,11 ~ 11+6,12 ~ 12+6 和13 ~ 13+6 孕周的PAPP-A 中位数分别为977,1 550,2 536,3 683 和5 393 mIU/L。结论 待评价系统检测PAPP-A 满足PAPP-A 检测试剂盒医药行业标准的要求,建立的PAPP-A 参考区间以供临床参考。     

国产ELISA试剂盒检测ξ-珠蛋白链快速筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血的性能评价

目的 评价国产酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测ξ-珠蛋白链快速筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血的性能.方法 选择珠蛋白基因型已经基于PCR技术确诊的临床血液标本265份,其中珠蛋白基因型正常93例,静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血(-α/αα)22例,东南亚缺失型(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血136例,HbH病7例和β-珠蛋白生成障碍性贫血并发(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血6例及HbG并发(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血1例,采用双盲方式分别用海泰生物技术股份有限公司(简称海泰生物)和美国United Biotech(简称美国UBI)公司生产的固相ELISA试剂盒检测ξ-珠蛋白链筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血并以基于PCR技术的诊断结果作为金标准,对这两种ELISA试剂盒筛查α-珠蛋白生成障碍性贫血的性能进行评估.结果 海泰生物与美国UBI生产的ELISA试剂盒均能准确地筛出(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血、β-珠蛋白生成障碍性贫血并发(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血和HbG并发(__SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血以及正常血样,但两者既不能筛出静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血,也不能完全检出HbH病;检测(——SEA)基因总的灵敏度、特异度、准确度、阴性预测值(NPV)、阳性预测值(PPV)和诊断效率(EDF)(分别为98％,97.5％,98.9％,98％,100％和98.9％)与后者相比(分别为98.7％,98.3?％,99.2％,98.7％,100％和99.2％),差异无统计学显著性意义(P均＞0.9).两者诊断(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血的效率均为100％.结论 固相ELISA法是一种高度灵敏、高度特异和非常可靠的筛查(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血的方法.海泰生物生产的(——SEA)α-珠蛋白生成障碍性贫血ELISA检测试剂盒与同类进口产品相比,具有成本低、需要样品量少的优势,非常适合于地贫高发区大人群的α-珠蛋白生成障碍性贫血筛查.     

Evaluation of the Roche Diagnostics LightCycler-Apo B 3500 Mutation Detection Kit.

Familial defective apolipoprotein (apo) B-100 is an autosomal codominant disorder associated with hypercholesterolemia and an increased risk of coronary artery disease. Two independent mutations affecting the codon 3500 (Arg3500-->Gln and Arg3500-->Trp) have been shown to cause ligand-defective apo B-100. Identification of carriers of these mutations is an important step in the risk stratification of individuals and families with hypercholesterolemia. We evaluated a homogeneous assay for detection of mutations at codon 3500 that combines rapid-cycle PCR with allele-specific fluorescent probe melting profiles for product genotyping. This single-tube analysis is performed on the LightCycler, a microvolume fluorimeter integrated with a thermal cycler. Continuous acquisition of fluorescence data during a melting curve analysis at completion of PCR allows the detection of mutations, as loss of fluorescence occurs in an allele-specific manner. By plotting melting peaks, the three apo B-100 alleles were readily distinguishable. Using this method, genotyping of 32 samples is completed within 40 min without the need for any post-PCR sample manipulation, thereby eliminating the risks of end-product contamination and sample tracking errors. The specific detection of mutations at codon 3500 of the apo B gene on the LightCycler is a rapid and reliable method that is ideally suitable for typing both small and large numbers of samples.     

重庆地区食物过敏原特异性IgG检测及试剂盒性能分析

目的 了解在研试剂盒对食物过敏原特异性IgG的检测性能并筛查重庆地区常见食物过敏原特异性IgG抗体.方法 以Biomerica有限公司生产的食物不耐受检测试剂盒作为标准对照,采用ELISA方法及双盲平行对照临床试验设计,分别应用在研试剂盒和标准对照试剂盒对280例变态反应性疾病患者和70例健康对照者常见食物过敏原的特异性IgG进行平行检测,并将两种检测结果进行一致性检验.结果 重庆地区,变态反应性疾病的患者中不耐受食物主要是鸡蛋,其次是虾;280例变态反应性疾病患者检测中,标准对照试剂盒阳性率为92.50%(259/280),在研试剂盒阳性率为93.57%(262/280),两者差异无统计学意义(χ2=0.571 4,P>0.05).在研试剂盒10个检测项目的敏感度、特异度分别在92.0%～96.9%,98.2%～99.7%之间,准确度达到97.7%～99.4%;10个检测项目的Kappa值均大于0.75,说明两种检测试剂盒检测性能一致性良好.结论 重庆地区与其他地区的食物不耐受情况不完全一致,应结合本地区实际情况寻找适合本地区的过敏原筛查范围及制定相应的治疗措施;在研试剂盒和标准对照试剂盒检测食物过敏原特异性IgG抗体一致性良好,该在研试剂盒适合在临床中推广应用.     

国产浓缩型酶法二氧化碳试剂盒的应用研究

目的 探讨浓缩型酶法二氧化碳(CO2)试剂盒在Roche Modular生化分析仪中的检测性能.方法 根据CLSI系列文件(EP15-A2,EP6-A,EP9-A2,C28-A3)和其他相关文献的实验方案,对迈克浓缩型酶法CO2的精密度、线性范围、参考区间及其与Roche配套试剂进行可比性分析,结果与厂商声明的性能或者公认的质量目标进行比较.同时比较分析迈克与罗氏试剂检测参数,高中低浓度标本结果及其检测点吸光度值变化.结果 精密度性能通过验证;呈一次线性,线性范围为5.8～43.8 mmol/L;与罗氏原装试剂具有较好的可比性,回归方程为Y-0.982 2X+0.020 8,相关系数r=0.9916;参考区间验证结果均在该实验室给出的参考区间内;迈克和罗氏试剂的参数设置略有不同,高中低浓度标本检测点吸光度值差异具有统计学意义(P＜0.05),但检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 迈克浓缩型酶法CO2试剂盒在Roche Modular检测中的主要分析性能均符合质量目标要求,满足临床需要.