清热活血方药对CIA大鼠Wnt信号通路成骨细胞相关因子的影响

目的:分析清热活血方(QRHX)对类风湿关节炎大鼠Wnt信号通路相关因子表达的影响,探讨清热活血方药对CIA大鼠骨破坏的保护机制。方法:SD大鼠40只按随机数字表法分为正常组、模型组、清热活血方药组、依那西普组。通过滑膜病理切片观察各组大鼠关节滑膜病理改变,采用RT-PCR方法对各组大鼠滑膜DKK-1、β-catenin基因mRNA表达水平进行对比分析,通过ELISA检测各组大鼠血清DKK-1、β-catenin、TCF、LRP5的蛋白含量。结果:滑膜病理显示清热活血方药组大鼠滑膜中的炎症水平较模型组明显减轻,清热活血方药组大鼠滑膜中DKK-1mRNA表达水平和血清中DKK-1含量较模型组明显减少,β-catenin mRNA表达水平及血清β-catenin、TCF、LRP5含量与模型组比较显著升高。结论:清热活血方药能降低滑膜炎症水平,抑制Wnt信号通路中DKK-1细胞因子的表达,促进β-catenin、TCF、LRP5的表达,可能通过作用于Wnt/β-catenin通路在CIA大鼠骨破坏过程中发挥骨保护作用。     

补肾舒脊颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞Wnt5a、β-catenin mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨补肾舒脊颗粒延缓异位骨化的可能作用机制。方法体外培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分为空白组、模型组、对照组及中药高、中、低剂量组。空白组加入基础培养基(3.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);模型组加入诱导培养基(4.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);西药组加入诱导培养基(3.8 ml)+5%洛索洛芬钠含药血清(0.2 ml);中药高、中、低剂量组分别加入诱导培养基(3.8 ml)+5%补肾舒脊颗粒含药血清(0.2 ml)。28天后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白表达。结果与空白组比较,模型组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,对照组和中药各剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低,中药中剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);与中药低、中剂量组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组Wnt5a蛋白表达降低,中药高剂量组β-catenin蛋白表达升高(P<0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子水平及软骨中 Wnt3a.β-catenin 蛋白表达影响的研究

目的:探讨温针灸对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组12只。治疗2周后,比较大鼠滑膜组织TNF-α水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达情况。结果:模型制备前各组大鼠LequesneMG评分差异无统计学意义。模型制备后与正常组比较,模型组、药物组、温针灸组LequesneMG评分均升高(P0.05)。治疗2周后,与正常组比较,模型组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与模型组比较,温针灸组和药物组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与药物组比较,温针灸组LequesneMG评分、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05);滑膜组织TNF-α水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可以降低KOA大鼠滑膜组织TNF-α水平,其机制为抑制软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达,从而达到优于西药的治疗效果,值得在临床上推广应用。     

双参消瘤汤调控Wnt/β-catenin信号通路防治胃癌的分子机制研究

目的：基于Wnt/β-catenin信号通路研究双参消瘤汤抑制胃癌细胞增殖防治胃癌的分子机制。方法：动物实验采用健康雄性BALB/c-nu小鼠依据MNNG喂养法建立胃癌小鼠模型，根据干预方法不同分为模型组、双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组、联合组（双参消瘤汤+miR-338-3p agomir）；连续干预8周后采用ELISA法测定血清胃动素（MTL）、胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃泌素（GAS）等水平，HE染色观察肿瘤组织病理，Real-time PCR法检测肿瘤组织miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平，Western blot检测肿瘤组织SIRT2、Wnt、β-catenin蛋白表达水平。细胞实验根据干预方法不同分为模型组、双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p mimics组、miR-Con组；干预后采用MTT法检测细胞活性，Real-time PCR法检测细胞miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平。结果：干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组小鼠血清MTL、PGⅠ及GAS水平明显升高（P <0.05）。HE染色发现，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组的胃组织病理学较模型组得到不同程度的改善。干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组肿瘤组织miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平明显升高（P <0.05）。干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组肿瘤组织SIRT2、Wnt、β-catenin蛋白表达水平明显升高（P <0.05）；干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组和miR-338-3p mimics组细胞存活率均明显升高（P <0.05）；与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组和miR-338-3p mimics组胃癌细胞miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平明显升高（P <0.05）。结论：双参消瘤汤抑制胃癌细胞增殖防治胃癌的分子机制与通过miR-338-3p靶向调控SIRT2促进Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

消炎散中活血化瘀药含药血清对成软骨诱导下兔骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路及SOX9影响的研究

目的探讨消炎散中活血化瘀药含药血清对成软骨诱导下兔间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)Wnt/β-catenin信号通路及SOX9的影响。方法提取并培养MSCs,先分为成软骨细胞诱导剂组和未成软骨细胞诱导剂组,每组又分为不加血清组、含药血清组、空白血清组、sFRP-3组。采用流式细胞仪检测细胞周期情况,运用RT-PCR、Western Blotting检测Wnt信号通路相关Wnt5a、β-catenin,SOX9基因及蛋白水平表达的变化。结果RT-PCR及Western Blotting显示,活血化瘀含药血清抑制诱导前MSCs表达Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白,促进SOX9 mRNA和蛋白表达,而对诱导后的MSCs促进Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白表达,抑制SOX9 mRNA和蛋白表达。结论消炎散中活血化瘀药含药血清可通过作用Wnt/β-catenin信号通路,改变SOX9的表达水平,进而影响MSCs的软骨分化。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨脊蛇祛湿胶囊治疗膝骨关节炎的作用机制

目的：探究脊蛇祛湿胶囊通过调控Wnt/β-catenin信号通路治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制。方法：70只大白兔随机分成7组：空白组,模型组,脊蛇祛湿胶囊低、中、高剂量组,盐酸氨基葡萄糖对照组及美洛昔康对照组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测血清Wnt3a、Wnt5a、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-catenin、基质金属蛋白酶（MMP）13含量,HE染色观察膝关节软骨病理改变、AB-PAS染色进行Mankin’s评分,免疫组化检测软骨组织Wnt5a、Axin、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组Mankin’s评分显著升高（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13含量显著升高（P<0.05）,软骨组织中Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达显著升高（P<0.05）,Axin蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,各药物组Mankin’s评分显著降低（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GS...     

百地枣合剂对抑郁症模型大鼠海马组织中β-catenin蛋白及GSK-3β mRNA表达的影响

目的探讨百地枣合剂治疗抑郁症的可能作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、盐酸氟西汀组和百地枣合剂高、中、低剂量组,每组10只。除空白组外其余各组大鼠采用慢性应激性刺激结合孤养29天建立抑郁症大鼠模型。实验第8天开始,百地枣合剂低、中、高剂量组分别给予浓度为0.7、1.4、2.8g/ml百地枣合剂,盐酸氟西汀组给予浓度为0.36mg/ml盐酸氟西汀混悬液,模型组和空白组给予生理盐水,各组按照1ml/100g体重灌胃,连续灌胃21天。分别于实验第0、7、29天各组大鼠进行旷场试验、糖水偏好实验,观察大鼠水平运动距离、站立次数,计算糖水偏好率;采用尼氏染色观察大鼠海马组织病理,并检测海马组织中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)mRNA和β-连环蛋白(β-catenin)表达。结果实验第29天,与空白组比较,模型组大鼠水平运动距离、站立次数降低,糖水偏好率下降,海马组织β-catenin蛋白表达降低、GSK-3βmRNA表达升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,盐酸氟西汀组和百地枣合剂高剂量组大鼠水平运动距离、站立次数增加,糖水偏好率上升,海马组织β-catenin蛋白表达升高,GSK-3βmRNA降低(P0.05或P0.01)。百地枣合剂高剂量组大鼠糖水偏好率、海马组织β-catenin蛋白表达较百地枣合剂中、低剂量组升高(P0.01)。结论百地枣合剂可改善抑郁大鼠行为,其机制可能与减少海马中GSK-3βmRNA、增加β-catenin表达有关,且以高剂量效果最佳。     

独活寄生汤水提物对退变大鼠椎间盘软骨细胞功能的影响

目的探究独活寄生汤水提物对经IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1的影响。方法采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,进行软骨细胞体外培养、镜下观察与鉴定,分为正常组、模型组(经10 ng/m L浓度IL-1β造模)、实验1组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预24 h)、实验2组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预48 h)。观察4组大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1 m RNA与蛋白的表达及上清液中Sox 9表达。结果 (1)第2代大鼠椎间盘软骨细胞增殖速度快,呈现多边形,胞核清晰,且含有1~2个核仁,融合后出现"铺路石"状,经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;(2)与正常组比较,模型组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显提高(P0.05),DKK-1 m RNA与蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,实验1组、实验2组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显降低(P0.05),DKK-1m RNA与蛋白表达明显提高(P0.05),以实验2组变化最为显著(P0.05)。结论独活寄生汤水提物组可调控退变椎间盘软骨细胞的功能,下调Wnt 4、GSK-3β、β-catenin和上调DKK-1 m RNA与蛋白表达,进而延缓大鼠椎间盘软骨细胞的退变。     

参慈胶囊联合顺铂对A549/DDP肺癌组织Wnt/β-catenin信号通路DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨参慈胶囊通过Wnt/β-catenin信号通路对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的影响。方法:将50只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549/DDP细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为模型组、参慈胶囊组、顺铂组、参慈胶囊+顺铂组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,脱颈椎处死取肿瘤组织,采用FQ-PCR技术检测肿瘤组织DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结果:参慈胶囊能升高A549/DDP荷瘤裸鼠肿瘤组织DKK-3 mRNA的表达,降低肿瘤组织β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结论:通过影响Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达,可能是参慈胶囊逆转人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的作用机制之一。     

祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。     

丹参酮ⅡA对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 探究高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程中Wnt/β-catenin信号途径的表达及丹参酮ⅡA对其影响。方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常糖组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+丹参酮ⅡA干预组（HG+T组）。采用免疫细胞化学观察β-catenin表达情况;Western印迹检测β-catenin、上皮细胞标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达水平。结果 与NG组比较,HG组β-catenin蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01),E-cadherin表达显著降低（P<0.01),β-catenin蛋白在胞浆与胞核表达增强。终浓度为100 μmol/L的丹参酮ⅡA可显著减少β-catenin的异位表达;在该浓度下,β-catenin在胞核蛋白及mRNA的表达量显著下降, 而E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平上升,同时间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达明显下降。结论Wnt / β-catenin信号途径参与了高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程,丹参酮ⅡA可能通过下调Wnt / β-catenin信号途径的活性而抑制转分化过程,进而发挥保护肾脏的作用。     

加味丹玄口康调控口腔黏膜下纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路机制研究

目的:探讨加味丹玄口康调控口腔黏膜下纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路表达作用机制。方法:从35只SPF级成年雄鼠中随机挑选5只作为正常组,剩余30只大鼠采用槟榔提取物建模,成功建立25只口腔黏膜下纤维化(OSF)大鼠模型。将25只OSF模型大鼠随机分为OSF模型组、加味丹玄口康低剂量组、加味丹玄口康中剂量组、加味丹玄口康高剂量组和Wnt抑制剂组,每组各5只。加味丹玄口康低剂量组、加味丹玄口康中剂量组、加味丹玄口康高剂量组大鼠分别给予4、8、12 ml/kg加味丹玄口康灌胃,Wnt抑制剂组大鼠给予25 mg/kg的KYA1797K腹腔注射,OSF模型组和正常组大鼠给予4 ml/kg的0.9%氯化钠溶液灌胃。1次/d,持续给药4周。分别于治疗前、治疗2周、治疗4周比较各组大鼠张口度和颊黏膜评分。给药4周后处死大鼠,采用PCR和Western blot分别检测Wnt-1、β-catenin、Cylin D1和Axin基因及蛋白表达情况。结果:治疗2周及治疗4周后,Wnt抑制剂组、加味丹玄口康中剂量组、加味丹玄口康高剂量组大鼠的张口度增大,颊黏膜评分减小,加味丹玄口康高剂量组大鼠的张口度最大、颊黏膜评分最低,差异有统计学意义(均P<0.05); 且以上各组大鼠张口度和颊黏膜评分与正常组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。加味丹玄口康高剂量组与OSF模型组、加味丹玄口康低剂量组、加味丹玄口康中剂量组、Wnt抑制剂组比较,Wnt-1、β-catenin、Cylin D1 mRNA和蛋白表达水平降低,Axin mRNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。加味丹玄口康高剂量组Wnt-1、β-catenin、Cylin D1和Axin基因及蛋白表达与正常组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:加味丹玄口康可有效改善OSF模型大鼠临床症状,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关基因及蛋白表达,抑制大鼠口腔黏膜纤维化。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨血府逐瘀汤在非小细胞肺癌EGFR-TKI获得性耐药中的作用

目的:探讨血府逐瘀汤基于Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子(EGFR)-酪氨酸酶抑制剂(TKI)获得性耐药小鼠模型的干预作用。方法:选取SPF级Balb/c小鼠40只,腋下接种NSCLC EGFR-TKI获得性耐药细胞株构建皮下移植瘤,随机分为空白组、TKI组、低剂量组、高剂量组、高剂量+TKI组,共五组,每组8只。各组小鼠均经灌胃给药,给药剂量:厄洛替尼(TKI)30 mg/(kg·d),血府逐瘀汤低剂量含生药15 mg/ml、30 ml/(kg·d)给药,高剂量含生药45 mg/ml、30 ml/(kg·d)给药。空白组给予0.9%氯化钠溶液(0.4 ml/只)。比较各组瘤体体积、肿瘤生长抑制率、肿瘤细胞增殖指数、Wnt3α、P-GSK3β与β-catenin的蛋白表达情况。结果:在给药第16天、第20天时,高剂量+TKI组瘤体体积小于空白组及TKI组,在给药第20天时,高剂量组瘤体体积小于空白组(P<0.05)。在给药第16天、第20天时,高剂量+TKI组瘤体生长抑制率高于TKI组、高剂量组,在给药第20天时,高剂量组瘤体生长抑制率高于TKI组(P<0.05)。空白组、TKI组、低剂量组肿瘤细胞增殖Ki67指数比较差异无统计学意义(P>0.05); 高剂量组、高剂量+TKI组肿瘤增殖Ki67指数均低于空白组,高剂量+TKI组肿瘤增殖Ki67指数低于高剂量组(P<0.05)。空白组、TKI组、低剂量组Wnt3α、P-GSK3β与β-catenin的蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05); 高剂量组、高剂量+TKI组Wnt3α、β-catenin蛋白表达均低于空白组,P-GSK3β蛋白表达均高于空白组(P<0.05)。结论:高剂量血府逐瘀汤可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,通过下调Wnt3α、β-catenin蛋白表达,上调P-GSK3β蛋白表达来延缓EGFR-TKI获得性耐药NSCLC小鼠肿瘤进展,抑制腋下移植瘤体积,降低肿瘤细胞增殖指数。     

定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响

目的研究定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响,探讨其可能的疗效机制。方法取100只8~10周龄SPF级雄性小鼠,其中20只用于模型失败备用小鼠,将80只小鼠随机分为4组,分别为模型组(A)、生理盐水组(B)、卡马西平组(C)、定痫丸组(D),每组20只,采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品的方法制作急性期癫痫小鼠模型,A组不予干预,B组实验全程均给予生理盐水,C组予卡马西平混悬液灌胃,D组予定痫丸混悬液灌胃,应用免疫组化和Western Blot分别检测海马组织内β-Catenin(β-连环蛋白),Cyclin D1(细胞周期蛋白D1)和Wnt3a的蛋白表达水平,运用Tunel法检测神经元的凋亡情况。结果与生理盐水组比较,模型组海马组织中的β-Catenin、Wnt3a的蛋白表达明显上调(P<0.05),在海马CA1区和CA3区的凋亡阳性细胞增多(P<0.05);与模型组比较,定痫丸组中的β-Catenin、Wnt3a的蛋白表达下调(P<0.05),在海马CA1区和CA3区的凋亡阳性细胞减少(P<0.05);在4组海马组织中均未检测到Cyclin D1蛋白的表达。结论定痫丸可能是通过下调Wnt/β-Catenin信号通路上的β-Catenin、Wnt3a的蛋白的表达,抑制了海马神经元的凋亡,达到治疗癫痫的作用。     

黄芪丹参颗粒药对干预肾纤维化Wnt/β-catenin信号通路的实验研究

目的：观察黄芪丹参颗粒药对对肾纤维化信号通路Wnt/β-catenin的影响,并初步明确其量效关系。方法：40只雄性SD大鼠,随机分为5组,即正常组,模型组,黄芪丹参颗粒药对（1：1）低剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对（1：1）中剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对高剂量（1：1）治疗组。除正常组外,其余大鼠均建立单侧输尿管梗阻（UUO）模型。各组给予相应药物治疗,收集尿液检测24 h尿蛋白、α1-微球蛋白（α1-Microglobulin ,α1-MG）的含量,光镜观察肾组织病理;Western Blot技术检测肾组织Wnt4和β-catenin蛋白表达。结果：淤24 h尿蛋白和α1- MG检测结果,与正常组比较,模型组24 h尿蛋白和α1- MG均明显升高（〈0.05）;与模型组比较,各治疗组24 h尿蛋白和α1-MG明显降低（〈0.05）;与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组24h尿蛋白均明显降低（〈0.05）,各剂量组之间α1-MG差异无显著性。于HE染色结果,各治疗组病理变化较模型组均有明显改善,与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组评分明显减少（〈0.05）。盂肾组织Wnt4和β-catenin免疫印迹检测结果,与正常组比较,模型组和各剂量组大鼠肾组织Wnt4和β-catenin具有明显有升高趋势,各治疗组均有不同程度下降,尤以颗粒中、高剂量组下降明显。结论：黄芪丹参（1：1）颗粒药对可以保护UUO大鼠肾小管功能,一定程度改善UUO大鼠肾脏病理改变,其机制可能与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。黄芪丹参颗粒药对可以干预UUO大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin的表达,并存在一定的量效关系。     

七厘散治疗兔膝骨关节炎及其相关分子机制研究

目的:探讨七厘散对膝骨关节炎(KOA)兔的治疗作用及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法:将清洁级新西兰兔20只随机分为对照组和七厘散组(n=10),雌雄各取5只。七厘散组采取2%木瓜蛋白酶溶液关节腔注射及复合强迫屈曲位法构建兔膝关节骨性关节炎(KOA)模型; 造模结束后七厘散组兔进行灌胃七厘散(0.25 g/kg),对照组兔给予相同体积的生理盐水,连续14 d。治疗前后对所有兔行右后肢X线拍摄,采用免疫组化法检测家兔软骨组织中Wnt4a的表达情况; 取5只幼龄SD大鼠骨膜通过密度梯度离心法分离纯化制备骨膜间质干细胞(BMSC),再取另外5只灌胃七厘散后6 h取血制备含药血清,制备所得的七厘散含药血清用于给药。实验分为正常组,七厘散血清组,DKK-1组(0.1 μg/kg),DKK-1组(0.2 μg/kg); 在第1、2、3、7、14天时,通过MTT法检测细胞增殖情况,利用RT-PCR法检测Runx2,Osteocalcin,β-catenin,Wnt4a基因的表达。结果:七厘散治疗后,七厘散组兔膝关节表面恢复光滑,少数软骨下骨出行高密度影; 七厘散含药血清组促进了BMSCs增殖,增加Runx2、Osteocalcin、β-catenin,Wnt4a基因的表达; 免疫组织化学染色观察显示,与治疗前相比,七厘散治疗后Wnt4a表达量明显增加。结论:七厘散能够通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间质干细胞的增殖从而改善兔膝骨关节炎。     

加味身痛逐瘀汤调控Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨质疏松症的防治作用

目的:探讨加味身痛逐瘀汤防治去卵巢大鼠骨质疏松症(OP)的疗效及其可能作用机制。方法:将60只SD大鼠,体重(245±25)g,随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组、加味身痛逐瘀汤高、中、低剂量组,每组10只。利用双侧卵巢切除法制备大鼠骨质疏松模型,手术模型制备成功后,戊酸雌二醇组大鼠给予戊酸雌二醇(剂量为 0.09 μg/g)灌胃; 加味身痛逐瘀汤治疗组大鼠给予加味身痛逐瘀汤(剂量为 32、16、8 g/kg)灌胃; 假手术组和模型对照组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃给药2个月。利用双能 X 线骨密度检测仪、HE染色法及Western blot分别测定骨密度,观察骨组织病理形态变化,分析大鼠股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型对照组骨密度明显降低(P<0.05),骨微结构遭到严重破坏,股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。与模型对照组相比,戊酸雌二醇组、加味身痛逐瘀汤高、中、低剂量组骨密度显著升高(P<0.05),骨微结构明显改善,股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白的表达量显著升高(P<0.05),且加味身痛逐瘀汤高剂量组和戊酸雌二醇组对骨密度及蛋白表达量的影响最为显著。结论:加味身痛逐瘀汤可能通过调节 Wnt/β-catenin 信号通路提高骨质疏松症大鼠的骨密度以及改善骨组织形态,从而发挥抗骨质疏松的作用。     

电针“关元”穴对绝经后骨质疏松症大鼠Wnt信号通路的影响

目的:观察电针"关元"穴对绝经后骨质疏松症大鼠血清骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨生物力学、骨密度以及Wnt 3a、β-连环蛋白(catenin)、Runx 2表达的影响,探讨电针治疗绝经后骨质疏松症的可能机制。方法:SD雌性大鼠分为假手术组、模型组、关元组、非经非穴组,每组10只。采用双侧卵巢切除制备绝经后骨质疏松症模型。关元组电针"关元",非经非穴组电针胁下髂嵴上20~25mm、后正中线旁开20mm处,每日电针1次,每次20min,10d为1个疗程,共治疗3个疗程。治疗后光学显微镜下观察股骨组织形态结构,三点弯曲实验检测股骨生物力学性能,X线检测骨密度,酶联免疫法检测血清BGP,生化分析仪测定血清ALP,RT-PCR法和免疫组化法检测Wnt 3a、β-catenin、Runx 2表达。结果:电针"关元"穴能够显著改善绝经后骨质疏松症大鼠骨小梁结构松散、排列紊乱、密度降低等骨质疏松形态学改变,提高血清ALP、BGP水平,改善股骨最大载荷和断裂载荷,并提高骨密度,与模型组比较差异均有统计学意义(P0.05);RT-PCR及免疫组化结果表明电针"关元"穴较模型组能够明显上调Wnt 3a、β-catenin、Runx 2的表达(P0.05)。非经非穴组不能显著改善上述生物学指标。结论:通过激活Wnt-β-catenin信号通路、提高骨代谢过程中的骨形成并增强骨强度可能是电针"关元"穴治疗绝经后骨质疏松症的机制之一。     

淫羊藿素对腹膜纤维化大鼠糖原合酶激酶3β、β连环蛋白的影响

目的:探讨淫羊藿素对腹膜纤维化大鼠糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、β连环蛋白(β-catenin)的影响。方法:30只健康SD大鼠随机分为假手术组(10只)、造模组(20只)。造模组大鼠采用0.1%葡萄糖氯已定腹腔注射建立腹膜纤维化模型,造模成功后随机分为模型组和淫羊藿素组,淫羊藿素组按3 mg/kg剂量灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水,连续6周,处死大鼠,取腹膜组织。采用HE染色观察腹膜组织病理变化; Masson染色观察腹膜组织胶原纤维化; 免疫组化法、ELISA法检测腹膜组织GSK-3β、β-catenin水平; Western blot检测腹膜组织GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组腹膜组织腹膜增厚,胶原纤维增加,腹膜组织GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,淫羊藿素可减轻腹膜增厚并减少腹膜组织胶原纤维,明显降低腹膜组织GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论:淫羊藿素可减轻腹膜纤维化大鼠腹膜增厚及腹膜组织胶原纤维,抑制GSK-3β、β-catenin的表达,具有抗腹膜纤维化的重要作用。