益气化瘀解毒方对MRP、GST-π和Topo Ⅱ基因在Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞表达的干预研究

目的探讨益气化瘀解毒方干预后对Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞(QGY7702/Sora)增殖及MRP、GST-π和Topo Ⅱ基因表达的影响。方法培养QGY7702/Sora细胞和QGY7702细胞,利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测Sorafenib对细胞的半数抑制率浓度(IC50值),计算耐药指数RI;观察益气化瘀解毒方对耐药细胞的增殖影响;采用荧光定量PCR检测药物干预前后2种细胞中MRP、GST-π和Topo Ⅱ基因表达水平。结果亲本细胞和耐药细胞Sorafenib的IC50值分别为(7.993±0.522)μmol/L和(19.651±1.216)μmol/L,RI约为2.5。益气化瘀解毒方可抑制耐药细胞的增殖活性。2种细胞的MRP、GST-π、Topo Ⅱ表达量无明显差异(P>0.05)。Sorafenib组可促进耐药细胞MRP 、GST-π基因的过表达(P<0.05),益气化瘀解毒方组可抑制GST-π基因的过表达(P<0.01),且联合Sorafenib可显著提高Topo Ⅱ基因的表达量(P<0.01)。结论 QGY7702/Sora细胞MRP、GST-π和Topo Ⅱ的表达水平与亲本细胞无显著差异。耐药细胞对Sorafenib敏感性降低与MRP、GST-π过表达相关,而益气化瘀解毒方拮抗Sorafenib耐药与抑制GST-π过表达相关。     

益气化瘀解毒方及其单味药对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤血管拟态相关因子的影响

目的探讨益气化瘀解毒方及其单味药对人肝癌移植瘤血管拟态相关因子表达的影响。方法瘤细胞接种建立人肝癌移植瘤模型,随机分为益气化瘀解毒方组(全方组)、黄芪组、莪术组、重楼组、壁虎组、顺铂组及模型组,除模型组外,各给药组予相应药物干预。21d后,采用免疫组化法检测瘤组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、E-钙黏附蛋白(E-cad)表达,免疫荧光法观察血管生成拟态结构,实时荧光定量PCR检测瘤组织Twist1、Bcl-2表达。结果与模型组比较,给药后各给药组瘤体积减小(P0.05),全方组优于黄芪组、重楼组、壁虎组(P0.05);各组血管生成拟态结构荧光表达稀少,模型组、顺铂组最为明显;除黄芪组外,各给药组HIF-1α及MMP-9、MMP-2表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),全方组最为明显;全方组、黄芪组E-cad表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05);全方组、重楼组、壁虎组与模型组比较Bcl-2表达明显降低(P0.05),其中全方组Bcl-2表达明显优于其他给药组(P0.05);全方组、莪术组、重楼组、顺铂组Twist1表达与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论益气化瘀解毒方及其单味药通过下调HIF-1α、Twist1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9及上调E-cad表达,从而抑制血管生成拟态形成。     

益气解毒方对ACHN人肾癌干细胞微环境影响的实验研究

目的:观察益气解毒方对人肾癌干细胞微环境的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:建立ACHN人肾癌干细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水)和益气解毒方组,连续给药25 d,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率;免疫组织化学方法测定移植瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达。结果:与对照组比较,益气解毒方组移植瘤重量显著下降,抑瘤率为37.1%(P0.01);益气解毒方组瘤组织VEGF、TGF-β1、MMP-2、TGF-β1蛋白表达的平均光密度值降低(P0.05)。结论:益气解毒方能够抑制ACHN人肾癌干细胞移植瘤的生长,对肾癌干细胞血管生成环境、细胞外因子环境、细胞外基质环境、乏氧环境等微环境的影响是其抗肿瘤作用机制之一。     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。     

益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响

目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响。方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织行免疫组化检测。结果:①对MVD的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);除黄芪、莪术外的其它组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。②对HIF1a的影响:全方组与除黄芪外的其它组比较有统计学意义(P<0.05);各组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。③对VEGF表达的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较均有统计学意义(P<0.05);莪术组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。④对KDR表达的影响:全方组与其它各组比较均有统计学意义(P<0.05);黄芪组与空白组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:益气化瘀解毒方能明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤MVD、HIF1a、VEGF和KDR的表达而发挥抗血管生成作用;各单味药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用。     

健脾解毒方对人结肠癌裸鼠原位移植瘤铂类耐药相关铜转运蛋白ATP7A ATP7B表达的影响

目的:探讨健脾解毒方对奥沙利铂抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长的增效作用及其对移植瘤铂类耐药相关铜转运蛋白ATP7A、ATP7B表达的影响,揭示健脾解毒方对奥沙利铂增效作用的部分机制。方法:建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,随机分为4组:对照组、奥沙利铂组、健脾解毒方组、健脾解毒方联合奥沙利铂组(联合用药组),治疗后观察各组移植瘤生长情况,采用实时荧光定量-PCR及免疫组化S-P法、Western-blot检测移植瘤中ATP7A、ATP7B mRNA和蛋白的表达。结果:(1)联合用药组的抑瘤率为53.6%,是单用奥沙利铂组的4.25倍;(2)奥沙利铂组裸鼠反复腹腔注射L-OHP后,移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达均高于对照组(P<0.05);联合用药组移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达均低于奥沙利铂组(P<0.05)。结论:健脾解毒方对奥沙利铂抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长有增效作用,其增效作用可能与下调移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达,增加细胞内奥沙利铂药物的浓度有关。     

益气养阴解毒方对K562/A02裸鼠移植瘤逆转作用研究

目的:研究益气养阴解毒方对K562/A02多药耐药移植瘤的逆转作用。方法:建立K562/A02裸鼠移植瘤多药耐药模型;选用维拉帕米作阳性对照,用流式细胞仪(FCM)检测各组移植瘤耐药细胞P糖蛋白(P-gp)与bcl-2的表达情况和移植瘤细胞内注射用盐酸多柔比星(ADM)蓄积浓度及移植瘤耐药细胞的凋亡情况。结果:移植瘤P-gp表达与维拉帕米组相比,生理盐水组与中药小剂量组有差异(P<0.05);bcl-2的表达与维拉帕米组相比,中药大剂量组有差异(P<0.05);益气养阴解毒方能使移植瘤耐药细胞内ADM的浓度升高。结论:益气养阴解毒方具有部份逆转白血病K562/A02移植瘤多药耐药性的作用,其逆转移植瘤裸鼠多药耐药性的机制不是通过下调肿瘤细胞膜上P-gp的表达实现的,而与降低bcl-2的表达、促进耐药细胞凋亡有关。     

蝎毒多肽提取物联合5 氟尿嘧啶对H22肝癌血管生成拟态形成的作用及机制研究

目的 观察蝎毒多肽提取物（polypeptide extract from scorpion venom, PESV）联合5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil, 5-Fu）对小鼠H22肝癌移植瘤血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）形成的抑制作用并探讨其可能的作用机制。方法 60只昆明小鼠,皮下接种H22肝癌细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶组（5-Fu组）、联合组（PESV+5-Fu）,每组20只,连续干预14天,隔日测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积增殖曲线,并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织的形态学改变;免疫组织化学法和过碘酸雪夫氏染色（PAS）双标法检测各组肿瘤组织VM密度;免疫组织化学法检测缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的蛋白表达水平, 用LeicaQwinV3图像分析软件进行灰度值半定量分析。结果 联合组和5-Fu组H22肝癌移植瘤的生长较荷瘤对照组均受到明显抑制（P<0.05）,且联合组和5-Fu组瘤重和肿瘤体积亦存在显著差异（P<0.05）;免疫组织化学法和PAS双标法检测显示,联合组VM密度明显低于荷瘤对照组和5-Fu组（P<0.01）;与荷瘤对照组比较,联合组HIF-1α和MMP-2的蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。结论 PESV联合5-Fu可抑制小鼠H22肝癌移植瘤VM形成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中HIF-1α和MMP-2的表达有关。     

益气解毒方提取物对CNE2细胞的体内外抑瘤作用

目的观察益气解毒方提取物对鼻咽癌CNE2细胞及移植瘤的抑制作用。方法采用MTT法测定益气解毒方多糖提取物、乙酸乙酯提取物（EAE）、乙醇提取物对CNE2细胞体外增殖的影响。建立CNE2裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、EAE组、顺铂（DDP）组和联合治疗组,分别给予生理盐水、益气解毒方EAE、DDP注射液以及EAE联合DDP注射液,12 d后检测各治疗组的肿瘤抑制率。结果益气解毒方EAE对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈明显的剂量效应关系（P〈0.05）。联合治疗组能明显抑制裸鼠CNE2肿瘤的生长,抑瘤率高达56.7%,明显高于EAE组和DDP组（P〈0.01）。结论 EAE是益气解毒方中的一种有效的抗鼻咽癌肿瘤成分,EAE联合DDP对裸鼠CNE2鼻咽癌移植瘤的生长具有协同抑制作用。     

益气化瘀解毒方及拆方对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤和HIF1α、E-cad表达的影响

目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌移植瘤及HIF1a、E-cad表达的影响。方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织,行免疫组化检测。结果:(1)成瘤体积比较:给药后瘤体积及差值比较,各组与空白组均有显著性差异(P<0.05);全方组分别与黄芪组、重楼组、壁虎组、空白对照组等比较有显著性差异(P<0.05)。(2)对HIF1a的影响:全方组与黄芪组比较无显著性差异(P>0.05),与其它组比较有显著性差异(P<0.05);各组与空白组比较有显著性差异(P<0.05);莪术组、壁虎组、顺铂组间比较无显著性差异(P>0.05)。(3)对E-cad影响:全方组与黄芪组比较无显著性差异(P>0.05),莪术、重楼、壁虎组与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:(1)益气化瘀解毒方全方较单味中药具有较强的抑瘤作用,其组方中药如莪术、重楼、壁虎均有一定程度抑瘤作用,莪术抑瘤作用较强;组方内主要单味中药发挥了协同抑瘤效应,使整方呈现出最强的抑瘤效应。(2)益气化瘀解毒方能抑制HIF1a表达,促进E-cad表达,可能通过阻断上皮间质转化而发挥抗肝癌转移侵袭作用,组方中药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用。     

健脾解毒方诱导裸鼠人胃癌细胞凋亡相关基因表达的研究

目的:研究健脾解毒方对裸鼠人胃癌皮下移植瘤的抑制作用,利用基因芯片筛选其诱导裸鼠人胃癌细胞凋亡相关基因表达,分析其可能的作用靶点。方法:建立人胃癌MKN-45细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组:生理盐水对照组、替加氟化疗组100mg·kg-1·2d-1、中药健脾解毒方组(40g/kg)、健脾解毒方联合化疗药组(健脾解毒方40g/kg联合替加氟100mg·kg-1·2d-1,每组12只。给药14d后观察各组瘤体质量量和动物生存期,并利用Affymetrix Genechip U133 Plus2.0基因芯片筛选健脾解毒方诱导凋亡相关基因表达。结果:与对照组相比,健脾解毒方组瘤体质量量明显降低(P<0.01),生存期显著延长(P<0.01)。且健脾解毒方联合化疗药组对肿瘤的生长抑制作用明显优于单纯化疗组和单纯健脾解毒方组(P<0.05)。基因芯片分析结果显示,健脾解毒方治疗后表达丰度相差在2倍以上基因的有879个,其中与细胞凋亡相关的基因有358个。结论:健脾解毒方抗裸鼠人胃癌作用,联合化疗药可提高疗效,其抗癌机制与诱导胃癌细胞凋亡有关。     

健脾化瘀方对裸鼠结肠癌皮下移植瘤及相关MicroRNAs的实验研究

目的:观察健脾化瘀方对人结肠癌Lovo细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率以及对皮下移植瘤中结肠癌相关miRNAs表达的影响。方法:(1)取人结肠癌Lovo细胞接种于小鼠皮下,造成移植性裸鼠结肠癌模型。随机分为阴性对照组(NS组)、阳性对照组(5-FU组)、健脾化瘀方大剂量组、健脾化瘀方中剂量组、健脾化瘀方小剂量组。观察荷瘤鼠肿瘤生长情况、体积和重量,分析健脾化瘀方对Lovo细胞裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率。(2)使用实时荧光定量PCR检测健脾化瘀方对结肠癌皮下移植瘤中miRNA31、miRNA143表达的影响。结果:(1)健脾化瘀方大、中剂量组小鼠瘤体体积及平均重量均小于阴性对照组(P<0.01),差异具有统计学意义;(2)健脾化瘀方各剂量组中miR-NA31的表达下调、miRNA143的表达上调。结论:健脾化瘀方对结肠癌Lovo细胞裸鼠皮下移植瘤有显著的抑制作用,其作用可能与下调miRNA31以及上调miRNA143的表达有关。     

健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达的影响

目的:观察健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-x L(B-cell lymphoma/leukemia-x L,Bcl-x L)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响。方法:建立裸鼠肠癌原位瘤模型,分为模型组,健脾益气组(15 g·kg-1),化瘀解毒组(15 g·kg-1),健脾消癌方组(全方组,15 g·kg-1),5-氟尿嘧啶组(5-Fu,20 mg·kg-1),共5组。分别予以相应药物干预4周,观察裸鼠体重、瘤体抑制率、转移率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3,Bcl-x L,Bax蛋白表达。结果:健脾益气组、全方组体重下降低于模型组(P0.05),化瘀解毒组体重下降高于模型组(P0.05);健脾益气组对瘤体的抑制与模型组比较无统计学差异,与空白组比较,化瘀解毒组、全方组对瘤体均有较好抑制作用(P0.05);各组均出现不同程度地转移,其中模型组、健脾益气组总体转移率达90%,化瘀解毒组、全方组转移率分别为70%,60%,低于模型组(P0.05);与模型组比较,化瘀解毒组及全方组能够上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3,Bcl-x L蛋白表达(P0.01)。结论:健脾消癌方中健脾益气组优势在于稳定体重,化瘀解毒组优势在于抑制肿瘤,抑制转移;全方组能够稳定体质量,抑制肿瘤,抑制转移,全方配伍疗效最优,其抗肿瘤机制可能是上调凋亡相关蛋白Bax及下调Caspase-3,Bcl-x L,诱导肿瘤细胞凋亡。     

通莲汤对裸小鼠胃癌移植瘤生长及缺氧诱导因子-1α的影响

目的探讨复方通莲汤对胃癌MGC803细胞荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,为该方临床应用提供实验依据。方法胃癌细胞株MGC803接种于裸鼠右前肢皮下。模型组灌胃生理盐水溶液10 m L/kg,阳性对照组灌胃消癌平片1.8 g(生药量)/kg的药液10 m L/kg,复方通莲汤高、中、低剂量组分别灌胃1.5,0.75,0.375 g(生药量)/L的药液10 m L/kg,各组连续给药3周,再连续观察3周,6周后处死小鼠,分离瘤组织,计算抑瘤率,免疫组织化学法检测肿瘤组织HIF-1α表达。结果高剂量通莲汤显著抑瘤生长,瘤重(1.51±0.49)g,抑瘤率为(61.04±4.79)%,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05);通莲汤可显著抑制HIF-1α表达,与模型组比较,阳性表达率χ2=4.286,P=0.0380.05。结论通莲汤可抑制裸鼠人胃癌MGC803细胞移植瘤生长,其抑瘤机制与下调肿瘤细胞HIF-1α蛋白表达有关。     

健脾解毒中药延长肝癌裸鼠带瘤生存时间及对PTEN/FAK的影响

目的探讨健脾解毒方提高裸鼠人肝癌模型的"带瘤生存"作用和对PTEN、FAK的影响。方法 40只裸鼠随机分为4组,每组10只,其中3组制作裸鼠人肝癌模型,分别给予健脾解毒方、生理盐水、替加氟(FT-207)灌胃,每天1次,持续71 d;第4组不造模作空白对照,每天给予生理盐水。实验过程中记录裸鼠生存时间和体质量,免疫组化SP法检测各组肝组织和癌组织PTEN、黏附斑激酶(FAK)的表达,IPP6.0分析平均光密度。结果生存分析表明健脾解毒方组裸鼠累积生存率显著高于其余各组(P<0.05或0.01);健脾解毒方组体质量减轻率显著低于其余各组(P<0.05或0.01);累积生存率和体质量减轻率FT-207组最差(P均<0.05);各组肿瘤体积比较无显著性差异(P均>0.05);PTEN在肝组织中的表达水平(平均光密度)显著高于癌组织(P<0.01);肝癌模型肝组织中PTEN表达水平明显低于空白组(P<0.05或0.01);FT-207组肝组织和癌组织中PTEN表达水平明显低于健脾解毒方组和生理盐水组(P<0.05或0.01);FAK在各组肝组织中的表达水平显著高于癌组织(P<0.01);健脾解毒方组肝组织中FAK表达水平显著高于其余各组(P均<0.01),癌组织中FAK表达水平显著低于其余各组(P均<0.01)。结论健脾解毒方能延长荷瘤鼠的带瘤生存时间,延缓体质量下降,其作用可能与健脾解毒方能良性调节PTEN、FAK的表达有关。     

益气解毒方对ACHN人肾癌干细胞移植瘤VEGF、MVD影响的实验研究

目的:探讨益气解毒方抗肾癌作用机制,为中药抗肾癌提供理论基础。方法:选取20只SPF级BALB/c裸鼠随机分为空白对照组(生理盐水)和益气解毒方组,每组10只。建立ACHN人肾癌干细胞裸鼠皮下移植瘤模型,2组分别给予生理盐水和益气解毒方煎剂灌胃,每日2次,连续25 d。于接种30 d处死裸鼠,剥取瘤体后,比较2组裸鼠肿瘤的体积和质量;通过免疫组织化学(SP法)测定移植瘤组织血管内皮因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD)计数值。结果:益气解毒方组和空白对照组的肿瘤体积(mm~3)分别为(304.68±13.53)、(419.60±22.69);质量(g)为(1.74±0.42)、(2.69±0.49);计算益气解毒方的抑瘤率为(35.3±14)%。免疫组化测定2组裸鼠移植瘤VEGF的OD值分别为(0.10±0.02)、(0.17±0.02);MVD计数值分别为(10.5±2.4)、(22.8±2.5)。益气解毒方组的移植瘤体积、质量、VEGF的OD值和MVD计数值较空白对照组均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益气解毒方对ACHN人肾癌干细胞移植瘤的生长和血管微环境的VEGF、MVD具有明显的抑制作用。     

蜂毒素对骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的本研究拟探讨蜂毒素抗骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法建立骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤模型,成瘤后随机分为两组生理盐水组、蜂毒素治疗组.瘤内注射给药治疗10天,计算治疗组肿瘤的体积抑制率和重量抑制率;采用免疫组化CD105观察移植瘤的微血管密度(MVD);免疫组化和Western blot检测瘤组织VEGF、HIF-1α蛋白表达.结果蜂毒素组对骨肉瘤的重量押制率为38.92%,体积抑制率为43.04%(P＜0.05).免疫组化及Western blot检测结果显示蜂毒素组CD105蛋白标记的MVD、VEGF、HIF-lα蛋白表达水平均明显低于生理盐水组(P＜0.01).结论蜂毒素能明显抑制骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的血管生成,从而抑制肿瘤生长.与蜂毒素能够下调瘤组织VEGF、HIF-1α蛋白表达有关.     

益气化瘀解毒方加减联合索拉非尼治疗原发性肝癌疗效研究

目的:比较索拉非尼与益气化瘀解毒方联合索拉非尼治疗原发性肝癌的临床疗效。方法:将56例原发性肝癌患者随机分为对照组和联合组,对照组予以索拉非尼口服,联合组在口服索拉非尼的基础上予以益气化瘀解毒方治疗。结果:两组患者基线资料比较无统计学意义(P>0.05)。两组患者半年、1年、两年生存率分别是:对照组与联合组,78.6%与96.4%,60.7%与85.7%,14.3%与39.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。患者两组PFS比较,对照组(4.55±0.41)个月,联合组(6.99±0.60)个月,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者生活质量评分,治疗前对照组与联合组无统计学意义,治疗后对照组高于联合组,且差异具有统计学意义。两组患者不良反应率比较,对照组与联合组无统计学意义。结论:尽管益气化瘀解毒方加减未能减轻索拉非尼毒副作用,但益气化瘀解毒方联合索拉非尼能延长患者半年、一年及两年生存率,同时能延长患者疾病无进展生存时间,改善患者生活质量。     

益气健脾化瘀方协同5-FU对胃癌的抑制作用及机制

目的:观察益气健脾化瘀方协同5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对615小鼠胃癌生长的抑制作用,并通过肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)极化方向,探讨其可能的作用机制。方法:40只615小鼠随机分为正常组,益气健脾化瘀方(25 g·kg~(-1))组,5-FU(25 mg·kg~(-1))组,联合(益气健脾化瘀方25 g·kg~(-1)+5-FU 25 mg·kg~(-1))组,每组10只。腋下接种MFC胃癌细胞建立小鼠胃癌移植瘤模型。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察各组小鼠肿瘤病理的改变;流式细胞仪测定肿瘤组织中M1,M2型TAMs含量;免疫组化观察腋下移植瘤中CD206的表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测瘤组织中TAMs相关基因白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),精氨酸酶1(arginase-1,Arg1),几丁质酶3蛋白3(chitinase 3-like 3,Ym1)的mRNA表达水平。Real-time PCR,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测瘤组织中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin),神经性钙黏附蛋白(N-cadherin),锌指转录因子Slug,Snail,波形蛋白(Vimentin)mRNA及蛋白的表达。结果:各组小鼠胃癌细胞排列呈巢状及片状,细胞间质见促纤维结缔组织反应及少量炎症细胞浸润。各药物组可见明显肿瘤凝固性坏死,残留肿瘤细胞量正常组益气健脾化瘀方组5-FU组联合组。免疫组化表明,各给药组均能减少瘤体CD206的表达,以联合组最明显。流式细胞仪检测证实,与正常组比较,各给药组均能减少M2型TAMs的含量(P0.05,P0.01),联合组减少M2型TAMs的含量最明显;益气健脾化瘀方组、联合组均能增加M1型TAMs的含量(P0.05,P0.01),以益气健脾化瘀方组最为明显。与正常组比较,益气健脾化瘀方组、联合组均能下调Arg1,Ym1 mRNA,上调IL-1β,TNF-α,IL-12 mRNA表达(P0.05)。与5-FU组比较,联合组能明显升高IL-1β,IL-12,TNF-αmRNA,下调Arg1,Ym1 mRNA表达(P0.05)。与正常组比较,益气健脾化瘀方组能上调E-cadherin mRNA及蛋白表达(P0.05),下调N-cadherin,Vimentin mRNA表达(P0.05);联合组能上调E-cadherin,下调N-cadherin,Slug,Snail,Vimentin mRNA表达(P0.05),上调E-cadherin,下调N-cadherin,Slug蛋白表达(P0.01)。与5-FU组比较,联合组能上调肿瘤组织中E-cadherin,下调N-cadherin,Slug,Vimentin mRNA及蛋白表达(P0.05)。结论:益气健脾化瘀方对胃癌生长有一定的抑制作用,与5-FU联用有较好的协同抑制胃癌生长、改善胃癌上皮间质转化,机制可能与促进胃癌中TAMs从M2表型向M1表型转化有关。     

健脾补肾解毒方通过JAK2/STAT3通路抑制肝癌上皮间质转化的研究

目的研究健脾补肾解毒方通过JAK2/STAT3通路对小鼠HCCLM3皮下移植瘤上皮间质转化的影响。方法构建小鼠HCCLM3皮下移植瘤模型。将造模成功的24只裸鼠按随机数字表法分为对照组、中药组、联合组, 每组8只。中药组灌胃健脾补肾解毒方醇提物0.68 mg/ml, 联合组灌胃索拉非尼混悬液3.5 mg/ml加健脾补肾解毒方醇提物0.68 mg/ml, 1次/d, 连续给药4周。观察各组小鼠HCCLM3皮下移植瘤体积、瘤重、小鼠体重;采用Western blot法检测HCCLM3皮下移植瘤组织中上皮间质转化相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较, 中药组、联合组小鼠HCCLM3皮下移植瘤平均瘤重降低(P<0.05), 皮下移植瘤组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、N-cadherin、Vimentin表达降低(P<0.05), E-cadherin表达升高(P<0.05)。结论健脾补肾解毒方对小鼠HCCLM3皮下移植瘤生...