三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞的增殖抑制作用 .方法　应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验 ,研究 As2 O3对肝癌 Hep G2细胞的增殖抑制和细胞毒作用 .结果　 As2 O3 能显著抑制肝癌细胞的生长 ,5μmol· L- 1 As2 O3 抑制程度明显强于 1μmol· L- 1 . 5和 1μmol· L- 1 As2 O3 作用后细胞克隆形成率分别为 (1.5±1.2 ) %和 (12 .3± 2 .2 ) % ,明显低于对照组的 (30 .0± 4.2 ) %(P<0 .0 1) .As2 O3对肝癌细胞有较强的细胞毒作用 ,且呈明显剂量和时间依赖性 ,其对肝癌细胞的杀伤率高于 5 -氟脲嘧啶 (5 - FU )和丝裂霉素 (MMC) ,但无显著性差异 ,As2 O3与 5 -FU及 MMC存在协同效应 ,联合应用杀伤率明显升高 .结论　 As2 O3具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用 ,有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值     

miR-199a对肝癌HepG2细胞增殖的影响及机制

目的：探讨miR-199a对肝癌HepG2细胞增殖的影响及机制。方法：使用DNA重组技术,将含有miR-199a的基因片段克隆人带有EGFP的慢病毒载体pLV-GFP-puro,DNA测序鉴定阳性克降,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带miR-199a的质粒共转染293T细胞包装病毒,纯化后感染肝癌HepG2细胞。用荧光显微镜观察感染效率;MTT法检测细胞增殖活性;Westernblot检测HepG2细胞miR-199a和NF-kB相关抗凋亡基因（TRAF2、cIAP2、Bfl-1和cFLIP）的表达情况。结果：成功构建了miR-199a重组慢病毒载体,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108TU/mL;感染后HepG2细胞高表达miR-199a,抑制HepG2细胞增殖,并证实过表达miR-199a有效稳定IkBa表达,抑制NF-kB活性,进一步抑制NF-kB相关抗凋亡基因TRAF2、cIAP2\Bfl-1和cFLIP表达。结论：miR-199a重组慢病毒过表达载体有效感染HepG2细胞,并抑制HepG2细胞增殖,其机制可能与miR-199a抑制NF-kB活性及其相关抗凋亡基因表达有关。     

他莫昔芬对人肝癌HepG2细胞增殖和Smad7表达的影响

目的研究他莫昔芬（TAM）对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法将他莫昔芬配制为0、7.5、l5、30?μmol／L,与人肝癌HepG2细胞培养24、48、72?h,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定人肝癌HepG2细胞的抑制率;免疫组化染色观察人肝癌HepG2细胞Smad7蛋白的阳性表达。结果人肝癌HepG2细胞增殖随他莫昔芬浓度增加和处理时间的延长,细胞抑制率明显增加,细胞浆内Smad7蛋白阳性表达率明显降低,与时间和浓度呈负相关。结论他莫昔芬可抑制肝癌细胞增殖,可能与下调Smad7蛋白的表达有关。     

青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度和作用不同时间的青蒿素对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用。方法取对数生长期的细胞接种于96孔板,给予不同浓度的青蒿素0．10．20．40．60．81．01．2 mmol／L）处理,给药24 h后在倒置显微镜下观察细胞形态的改变,并用MTT法检测药物的细胞毒作用。结果倒置显微镜下,细胞随药物浓度和作用时间的增加对细胞的毒性作用增强,细胞数目均有所减少,多数细胞体积固缩变小,失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形。 MTT结果显示,不同浓度青蒿素对肿瘤细胞的抑制效果呈现出浓度和时间的依赖性。1．2 mmol／L的青蒿素,作用细胞24 h后的抑制率达到了81．33％。结论青蒿素在体外对肝HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈现一定的时间和剂量依赖性。     

E2F-1基因对HepG2肝癌细胞增殖影响的研究

目的了解转录因子E2F-1对肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法脂质体Lipofectami-neTM2000将pCMV-E2F-1-HA2载体转染HepG2肝癌细胞,然后用含G418的培养液筛选获得具有Genectin抗性的过表达E2F-1的肝癌细胞株。通过MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖的变化。结果 MTT和克隆形成实验结果显示,过表达E2F-1的HepG2/E2F-1细胞组与HepG2/EV细胞组和HepG2细胞组相比,其增殖速度明显减慢(P<0.01)。结论 E2F-1基因过表达可抑制HepG2肝癌细胞的增殖。     

和厚朴酚对人肝癌HepG2细胞增殖及NF-kB mRNA表达的影响

目的探讨和厚朴酚对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及其对NF-kB基因mRNA水平的影响。方法采用MTT法检测和厚朴酚对HepG2细胞增殖的影响。以RT-PCR方法研究和厚朴酚对NF-kB基因mRNA表达的影响。结果和厚朴酚使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;NF-kB基因mRNA水平随和厚朴酚浓度升高而降低。结论和厚朴酚对人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能下调NF-kB的表达,从而起到抗肿瘤的治疗作用。     

肉苁蓉苯乙醇苷对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨肉苁蓉苯乙醇苷(Cistache deserticola phenylethanoid glycosides,CPhGs)对HepG2细胞增殖、凋亡的影响.方法 实验以HepG2细胞为研究对象,采用MTT及平板克隆实验检测细胞增殖情况、Annexin V-FITC/PI、Hochest33258和线粒体染色法...     

银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的银杏叶总黄酮具有诸多药用价值,文中通过其对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的增殖与凋亡的影响,探讨银杏叶总黄酮的抗肿瘤活性及其作用机制。方法不同浓度的银杏叶总黄酮体外作用于人肝癌细胞株HepG2不同时间,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测银杏叶总黄酮对HepG2细胞增殖的影响,以脱氧核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法观察银杏叶总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响。结果人肝癌HepG2细胞经银杏叶总黄酮处理一定时间后,增殖比率明显下降（P〈0.01）,且具有剂量依赖效应;细胞凋亡明显增加（P〈0.01）,也具有剂量依赖效应。结论银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

肌醇六磷酸对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌HepG2细胞增殖的影响并探讨其作用机制.方法 体外培养HepG2细胞,应用MTT实验观察IP6对HepG2细胞增殖的影响,平板集落形成实验检测IP6作用后HepG2细胞的克隆形成能力,免疫细胞化学法检测IP6作用后HepG2细胞突变型P53、细胞周期抑制蛋白P21的表达.结果 I...     

miR-26a对人肝癌HepG2蛋白表达的影响

目的 分析mircoRNA-26a(miR-26a)转染对人肝癌HepG2细胞表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性.方法 常规培养人肝癌HepG2细胞株,经miR-26a转染72h后裂解并提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定.结果 HepG2细胞经miR-26a转染后表达蛋白谱呈现普遍下调的趋势,差异表达超过2倍及以上的蛋白斑点有10个.其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有7个蛋白斑点为表达下调.质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C氧化酶5a、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白.结论 miR-26a可能通过调节HepG2肝癌细胞上述蛋白分子的表达,直接或间接发挥其抑癌作用.通过对这些差异表达蛋白分子机制的深入研究,将为阐明miR-26a的抗癌作用提供进一步的线索和依据.     

miR26a靶向EZH2抑制肝癌HepG2细胞的增殖活性

目的 探讨mi R26a靶向EZH2抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性的影响并探讨其可能的分子机制。方法 设计合成mi R26a mimic,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和mi R26a mimic组,采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R26a的表达水平,MTT检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因系统检测mi R26a与EZH2的靶向关系,Western blot检测各组细胞中EZH2蛋白的表达。结果 MTT分析及流式细胞术的检测证实过表达mi R26a能够抑制肝癌细胞的增殖效应,促进肝癌细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因系统以及Western blot的结果均证实mi R26a能够显著下调EZH2在蛋白水平的表达。结论 mi R26a能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系。     

CyclinE干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和蛋白质组的影响

目的:研究siRNA对HepG2细胞株cyclinE表达的抑制及细胞生长的影响,并用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质.方法:构建质粒表达载体pU6-cyclinE-shRNA,稳定转染肝癌HepG2细胞株,获得HepG2-cyclinEshRNA细胞系,RT-PCR检测cyclinE mRNA表达,MTT测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.裂解、抽提HepG2-cyclinEshRNA细胞和Cl期肝癌HepG2细胞全蛋白,用双向电泳技术进行分离后.用Proxpress2D分析软件对两组细胞全蛋白质表达谱进行差异分析,并应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定差异显著的蛋白点.结果:HepG2-cyclinE-shRNA细胞与转染空质粒HepG2细胞和未转染的HepG2细胞相比,生长速度减慢,出现G0/G1期细胞增多,C2/M和S期细胞减少.双向电泳后软件分析G1期肝癌HepG2细胞株平均检测到435±51(n=3)个蛋白点,HepG2-cyclinEshRNA细胞376±44(n=3)个,匹配分析,筛选出两组间差异6倍及以上且出现频率大于等于50%的蛋白点20个.应用质谱鉴定出角蛋白19、波形蛋白、神经多肽113等8个G1期HepG2细胞高表达蛋白点.结论:在HepG2细胞株中,导入eydinE干扰RNA,可有效抑制cyclinE的表达,进而使细胞增殖减缓,逆转其恶性表型.两组细胞蛋白质谱有明显差异,鉴定出G1期HepG2细胞高表达蛋白点8个,这些蛋白的高表达引起肿瘤的基因修饰异常、分化异常、增殖紊乱,肿瘤侵袭转移.     

胡桃醌联合顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨胡桃醌与顺铂（DDP）联合应用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法采用不同浓度的胡桃醌或（和）顺铂处理肝癌HepG2细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,通过MTT法检测其对HepG2细胞生长的抑制作用.结果 不同浓度的药物作用可导致HepG2细胞发生形态学变化,MTT比色法测定显示,采用胡桃醌、顺铂合用,可显著抑制HepG2细胞的增殖,单用不同浓度的胡桃醌与顺铂分别作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性.胡桃醌联合顺铂增强了HepG2细胞的凋亡.结论 胡桃醌联合顺铂与单药相比能更显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,促进其凋亡,两药对肝癌细胞的杀伤效应具有一定的协同作用.     

骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其机制?方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定其分子表面标志,体外扩增培养并收集培养上清?MTT法?平板克隆实验及软琼脂克隆实验检测大鼠间充质干细胞对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响,流式细胞术检测肝癌细胞周期的改变,Western blot法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达情况?结果:骨髓间充质干细胞CD105和CD90表达阳性,CD34和CD45表达阴性?在骨髓间充质干细胞培养上清作用下,MTT法显示实验组肝癌细胞光密度值增加(P < 0.05),平板克隆法显示实验组肝癌细胞克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),软琼脂克隆法显示实验组肝癌细胞空间克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),流式细胞术显示实验组细胞周期G1期比例降低,S期?G2期比例增加?Western blot显示实验组细胞Cyclin D1表达量增加(P < 0.05)?结论:骨髓间充质干细胞可促进HepG2肝癌细胞的增殖及空间克隆形成能力,其促进肝癌细胞体外增殖可能与Cyclin D1表达上调有关?     

重复加热对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期蛋白D1的影响

目的探讨多次热疗后残存下来的HepG2细胞增殖速度的变化及与此相关的可能原因。方法HepG2细胞43℃加热，每次80分钟，每天两次，共10个循环后，分析细胞倍增时间，检测细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果热处理后的HepG2细胞增殖加快，细胞周期中S期和G2期的比率增高，细胞周期素D1的表达增强。结论热处理后的HepG2细胞增殖加快与其完成DNA复制而进入分裂的细胞比率高、细胞周期素D1的表达增强有关。     

RNA干扰survivin基因对人肝癌HepG2细胞增殖影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制survivin基因表达对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响.方法 构建针对人肝癌HepG2细胞 survivin基因3个不同靶序列的 shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine 2000脂质体介导转染法转染质粒, 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测survivin 基因mRNA表达水平.选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后, 免疫细胞化学法(ICC)检测HepG2细胞survivin蛋白的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况.结果 与对照组比较,构建的3个shRNA质粒中pshRNA-survivin-387转染组survivin mRNA水平下调,差异有显著性(F=18.64,q=4.293～4.925,P<0.05),而pshRNA-survivin-323/52质粒对survivin的表达及mRNA水平的影响差异无显著性(q=0.631～0.126,P>0.05).转染pshRNA-survivin-387质粒的HepG2细胞survivin蛋白表达较对照组明显下调(F=68.39,q=13.71、14.37,P<0.01),其增殖能力较对照组显著下降(F=20.06～47.65,q=11.186、 12.601,P<0.01).结论 构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-survivin-387可显著抑制survivin的表达及HepG2细胞增殖.     

Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移侵袭的影响

  目的  探讨核受体Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。  方法  首先采用对靶向基因进行特定DNA修饰的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建Rev-erbβ基因敲除的HepG2细胞系。用Rev-erbβ打靶载体共转染到HepG2细胞,通过筛选、克隆化构建Rev-erbβ基因敲除HepG2细胞系,并采用PCR、测序和Western blot鉴定。以正常HepG2细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Rev-erbβ基因敲除对肿瘤迁移、侵袭相关基因表达的影响,采用MTT、细胞划痕、Transwell等实验检测Rev-erbβ基因敲除对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。  结果  成功构建一株Rev-erbβ基因完全敲除单克隆细胞系(经PCR、测序和Western blot鉴定),命名为HepG2 C5(Rev-erbβ-/-)。qRT-PCR结果显示,Rev-erbβ基因敲除可以导致基质金属蛋白酶-2,-9基因(MMP2,MMP9)、细胞外基质蛋白1基因(ECM1)表达上调(P均＜0.05),细胞黏附相关基因E-钙黏蛋白基因(CDH1)下降(P=0.05);MTT、细胞划痕、Transwell实验显示,并且HepG2 C5比对照细胞有更强的增殖、迁移与侵袭能力(P＜0.05)。  结论  Rev-erbβ基因敲除可以改变HepG2细胞与迁移、黏附相关基因的表达,进而影响HepG2细胞增殖、迁移与侵袭能力。     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞,同时设无义对照组(转染无义siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用MTT法检测...     

刺参酸性黏多糖对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的了解刺参酸性黏多糖(SJAMP)对体外培养的人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法体外培养HepG2细胞,MTT法检测SJAMP对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,免疫细胞化学法检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达,以正常肝细胞(张氏细胞)作为对照。结果 SJAMP能抑制HepG2细胞增殖,且随着干预剂量(0、0.5、2.0、8.0mg/L)和干预时间(12、24、48h)延长其抑制作用增强(F=68.430～596.680,q=3.714～55.029,P<0.05);不同浓度SJAMP作用对张氏细胞增殖无明显的抑制作用(P<0.05)。随着SJAMP剂量的增加,HepG2细胞停留在G1期比例增加,S期、G2期的细胞减少(F=4.483～18.791,q=1.921～9.876,P<0.05);对于张氏细胞,SJAMP作用后其细胞周期未发生显著改变(P>0.05)。SJAMP作用后HepG2细胞的PCNA表达降低,且随着SJAMP作用剂量的增加而降低(F=2 688.640,q=55.365～156.296,P<0.05);张氏细胞PC-NA表达未发生显著变化(P>0.05)。结论 SJAMP通过诱导HepG2细胞发生细胞周期G1期阻滞并抑制其PCNA表达,从而抑制HepG2细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。