黄连及黄连解毒汤对小鼠的急性毒性实验研究

 目的 探讨黄连单味药及其复方黄连解毒汤对小鼠的急性毒性,摸索半数致死量（LD₅₀）或最大耐受量,并确定其毒性靶器官。方法 采用灌胃给药的方法,给予不同剂量黄连水煎液或黄连解毒汤水煎液,连续观察7 d,检测药物对小鼠的急性毒性作用,用加权回归几率法（Bliss）计算LD₅₀,对死亡小鼠进行主要脏器的病理学观察。结果 黄连水煎液的小鼠LD₅₀剂量（以含黄连生药量计）为18.826 g·kg-1,95%可信限为16.923~21.314 g·kg-1,LD₅为12.407 g·kg-1,LD₉₅为28.565 g·kg-1。病理结果提示,黄连对小鼠的主要毒性靶器官为脑、肝、脾、肺、肾。黄连解毒汤未引起小鼠死亡,其最大耐受量（以含黄连生药量计,黄连-黄芩-黄柏-栀子=20∶6∶6∶9）为80 g·kg-1。结论 单味黄连水煎液具有毒性,其小鼠LD₅₀剂量（以含黄连生药量计）为18.826 g·kg-1,毒性靶器官为脑、肝、脾、肺、肾;经配伍后的黄连解毒汤则较为安全。     

泻心汤不同配伍抗炎作用比较研究

目的对泻心汤不同配伍抗炎作用进行研究,以阐明该方的配伍原理。方法采用脂多糖(LPS)小鼠急性炎症模型,以血清NO浓度变化作为炎症指标,观察ig泻心汤生药18g/kg对血清NO浓度经时变化的影响;ig泻心汤生药4.5、9、18g/kg对血清NO浓度的影响;按正交设计,观察ig泻心汤不同配伍,即大黄、黄连、黄芩、大黄 黄连、大黄 黄芩、黄连 黄芩、全方(全方组生药18g/kg,其余各组按照在全方中的等量生药剂量给药)对血清NO浓度的影响。结果泻心汤给药后小鼠血清NO浓度均较对应时间点模型组低,6h差异显著,12、15h差异非常显著;泻心汤各剂量组小鼠血清NO浓度均较模型组低,高剂量组差异显著;不同配伍结果显示,除黄连组外,各给药组血清NO浓度与模型组相比差异显著;正交分析表明,在抗炎方面,大黄为该方第一要药,黄芩其次,黄芩与大黄有协同作用,黄连无明显作用及影响。结论在抗炎方面,泻心汤中大黄为第一要药,黄芩其次,黄芩与大黄有协同作用。     

半夏泻心汤对正常大鼠胃底条运动的影响

目的 :采用正交设计法拆方研究半夏泻心汤对正常大鼠胃底条运动的影响。方法 :实验选用L₁₆(2¹⁵)正交表 ;各味药用量均为 1剂半夏泻心汤中之含量 ,且加药容量固定不变 ;将实验组随机化 ,重复 5次实验 ,取平均值进行统计分析。结果 :直观分析发现 ,使大鼠胃底条运动张力增加的作用大小依次为 :党参 >大枣 >甘草 ;使张力减小的作用大小依次为 :干姜 >黄芩 >黄连 >半夏。方差分析可见 ,党参和大枣对胃底条运动张力具有显著的增加作用 (P<0.01) ;干姜和黄芩则对运动张力具有明显的减小作用 (P<0.01) ;而黄连、甘草和半夏作用不明显 ;党参和大枣配伍可明显增加胃底条运动张力 ,干姜和黄芩配伍可明显减小胃底条运动张力。结论 :半夏泻心汤对胃肠运动的双向调节作用 ,与其作用相反的二类组分有关。     

正交设计探讨黄连解毒汤组方配伍

目的:探讨黄连解毒汤的组方原理.方法:以小鼠为研究对象,以急性毒性(死亡率)为指标,运用正交设计研究黄连解毒汤各药物(黄连、黄柏、黄芩、栀子)在处方中地位及其相互作用.结果:黄连是该方中的主要毒性药物,黄柏的毒性作用较弱,而黄芩和栀子无明显毒性作用;其中黄芩在处方中主要起解毒作用,处方中的黄连与黄芩配伍其毒性明显降低,而黄连与黄柏、栀子的交互作用较弱;黄柏、栀子及黄芩三药间无明显的交互作用.结论:在黄连解毒汤中,配伍黄芩起到了降低黄连的急性毒性作用.     

滇黄芩总黄酮急性毒性及抗实验性心律失常作用的研究

目的 :观察滇总黄芩黄酮提取物的小鼠急性毒性及对乌头碱诱发大鼠实验性心律失常的影响。 方法 :①以Bliss法测定滇黄芩总黄酮提取物的急性毒性;②通过测定大鼠心电图研究滇黄芩总黄酮的抗心律失常作用。 结果 :①滇黄芩总黄酮提取物对小鼠有一定急性毒性,但半数致死量(LD₅₀,4.438 8 g ·kg^-1体重)与抗心律失常实验所采用的中剂量(20 mg ·kg^-1体重)的剂量距离较远;②滇黄芩总黄酮提取物能明显增加乌头碱诱发大鼠室早(VP)、室颤(VF)和室性停搏(CA)所需的阈剂量;可剂量依赖性地缩短肾上腺素致麻醉豚鼠心律失常的持续时间。 结论 :滇黄芩总黄酮提取物对小鼠毒性小,但有明显的抗实验性心律失常作用。     

海藻玉壶汤中海藻-甘草反药组合加减应用的急性毒性实验研究

目的: 比较海藻玉壶汤(生甘草)组、海藻玉壶汤(炙甘草)组、去海藻(生甘草)组、去海藻(炙甘草)组、去甘草组、去海藻甘草组的小鼠急性毒性,评价海藻-甘草反药组合在复方中应用的毒性。 方法: 灌胃给与不同配伍组合不同剂量的海藻玉壶汤,计算出LD₅₀,不符合LD₅₀评价条件的组别,采用连续给药28 d,即累计半数致死量的方法来进行毒性评价;眼球采血,通过检测小鼠血清肝、肾功能相关指标评价其对小鼠肝、肾系统的影响。 结果: 各给药组均未得出LD₅₀,海藻玉壶汤(生甘草)组LD₅₀₍₁₆₎为71.08 g·kg^-1,药物剂量21 g·kg^-1;海藻玉壶汤(炙甘草)组LD₅₀₍₃₎为68.28 g·kg^-1,剂量21 g·kg^-1;去甘草组LD₅₀₍₁₂₎为55.78 g·kg^-1,剂量20 g·kg^-1;去海藻(生甘草)组LD₅₀₍₂₂₎为72.27 g·kg^-1,剂量21 g·kg^-1;去海藻甘草组LD₅₀₍₂₁₎为79.62 g·kg^-1,剂量18.1 g·kg^-1;去海藻(炙甘草)组小鼠连续给药28 d仍未达到半数致死量,最大耐受量为生药80 g·kg^-1,药物剂量20 g·kg^-1;给药各组对小鼠的肝、肾脏功能均未见明显影响。 结论: 给药各组LD_50(n)均属无毒的范畴,且对小鼠的肝、肾脏功能指标未见明显影响。     

三黄泻心汤及其组成生药的降压作用

以体内、体外实验系探讨了三黄泻心汤、组成生药及其成分的降压作用。 方法:对茶碱引起血压升高的麻醉大鼠,给予三黄泻心汤、黄芩、大黄、黄连以及各生药的水溶性组分、50％甲醇组分、100％甲醇-100％丙酮组分,并记录血压的变化。进一步用大鼠的胸主动脉标本,以Mugnus法探讨各生药对血管张力的影响。     

葛根芩连汤配伍与解热药效关系研究

目的 :通过对葛根芩连汤各配伍与解热药效之间的关系来探讨其配伍规律。方法 :运用正交设计方法 ,灭活细菌悬液造成大鼠发热模型 ,以 6h体温反应指数 (TRI₆)及平均最大体温反应高度 (△T)为指标 ,观察葛根芩连汤各配伍与药效变化之间的关系。结果 :降低发热大鼠的TRI₆值 ,主要作用药物为黄芩 ,葛根能增强黄芩的作用 ,黄连与炙甘草则拮抗。降低△T值 ,主要作用药物为黄芩 ,葛根增强黄芩的作用 ,炙甘草与黄连拮抗黄芩的作用。结论 :在葛根芩连汤的解热药效中 ,其最佳组合为黄芩、葛根。     

吴茱萸水和70%乙醇提取物的急性毒性和遗传毒性试验

目的：研究吴茱萸水和70%乙醇提取物的急性毒性和致突变性。方法：采用霍恩氏法研究灌胃给予小鼠吴茱萸水和70%乙醇提取物的半数致死量(LD₅₀)。选用健康昆明种小鼠40只,雌雄各半,体重17～22 g,随机分为4个受试药物剂量组：1.00,2.15,4.64,10.00 g·kg^-1,灌胃给药,观察7 d,记录中毒和死亡情况,计算得出LD₅₀。采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验) 研究其致突变性,小鼠精子畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试验研究其致畸变性。结果：小鼠口服吴茱萸水和70%乙醇提取物的LD₅₀大于10.0 g·kg^-1;2种提取物各剂量组小鼠灌胃后未见明显中毒症状,亦无死亡。2种提取物的Ames试验阴性、未发现对小鼠精子产生畸变作用、对小鼠骨髓细胞染色体未见损伤。在急性毒性、小鼠精子畸变和小鼠骨髓细胞微核试验中,从试验开始到结束,小鼠体重增重情况良好。结论：吴茱萸水和70%乙醇提取物对小鼠属实际无毒,LD₅₀大于10.0 g·kg^-1;在本试验条件下,未发现其有遗传毒性。     

黄连-黄芩药对在泻心汤和葛根芩连汤组方配伍中主要成分的含量变化

目的：探索药对黄连-黄芩在泻心汤和葛根芩连汤组方不同配伍情况下其中所含小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量变化。方法：采用HPLC以乙腈-10 mmol·mL^-1甲酸铵溶液（内含0.2%三乙胺,用甲酸调pH到4.00）为流动相进行梯度洗脱。结果：组方中黄芩、大黄、甘草使黄连中小檗碱、巴马汀含量降低,葛根使小檗碱、巴马汀含量增加。组方配伍中黄连使黄芩中黄酮类成分含量降低,大黄和甘草对黄芩苷含量的影响无显著性差异,但使黄芩素、汉黄芩素含量降低;葛根使黄芩苷含量降低,但使黄芩素、汉黄芩素含量增加。结论：该方法可以有效鉴定泻心汤和葛根汤中5种成分,不同配伍对5种有效成分含量有影响增加。     

19味中药对淋球菌流行株的敏感性研究

目的：探讨l9味中药对淋球菌的抑制作用。方法：采用琼脂稀释法测定l9味中药对淋球菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果：19味中药中，对淋球菌作用最强的是黄连（Coptis chinensis Franch)；其次为黄柏(Phellodendron chinense Schneid)、黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、大黄(Rhenm palmatum L．)、丁香(Engenia caryophyllata Thund)、地榆(Sanguisorba 0fficinalis L．)、半枝莲(Scutellaria barbata D．Don)；而夏枯草(Prunella vulgaris L．)、蛇床子(Cnidium monnieri(L．)cuss)、紫花地丁(Viola yedoensis)、蚤体(Paris polyphylla Smith)、白鲜皮(Dictamnus dasycarpus Turcz)仅有轻微的抗淋球菌作用。白花蛇舌草(0ldenlandia diffusa (Willd) Roxb)、花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim)、苦参(Sophora flavescens Ait)、挂金灯(Physalis alkekengi L．Var．francheeii (Mast．)Mak．)、萆薢(Dioscorea hypoglauca palib)、车前子(Semen plantaginis)则无抑菌作用。结论：黄连对淋球菌的抑制作用最强。     

三黄泻心汤主要药效成分的含量表征

目的:研究三黄泻心汤煎液(混悬液)中3种主要药效成分黄芩苷、小檗碱和大黄酸的含量与存在形式。方法:用HPLC测定三黄泻心汤、其拆方配伍及单方煎液中3种成分黄芩苷、小檗碱和大黄酸的含量。结果:在得到的200 mL三黄泻心汤中含黄芩苷1 211 mg,小檗碱276 mg,大黄酸25 mg。尽管黄连中的生物碱与黄芩苷和大黄蒽醌会产生沉淀,但黄芩与黄连之间没有显著影响煎出液中的含量,黄芩能明显促进大黄酸的煎出,黄连与大黄之间则存在很强的抑制煎出的作用。结论:酸性成分与碱性成分之间,酸性成分与酸性成分之间都存在相互影响煎出的情况。     

葛根芩连汤配伍抗腹泻药效实验研究

目的:通过对葛根芩连汤各配伍与抗腹泻药效之间关系来探讨其配伍规律.方法:运用正交设计方法,用墨汁为显色剂,小鼠小肠推进率为指标;用番泻叶造成小鼠腹泻模型,以腹泻次数为指标,观察葛根芩连汤各配伍与药效变化之间的关系.结果:葛根芩连汤配伍降低小肠推进率的影响中,以黄连与炙甘草作用为主,葛根与黄芩能拮抗黄连的作用,炙甘草则增强黄连的作用.减少腹泻小鼠DI,主要作用药物为黄连,黄芩拮抗黄连,葛根能增加黄芩的作用,而炙甘草与黄芩黄连配伍后能增强黄连的作用.结论:在葛根芩连汤的抗腹泻药效中,其最佳组合为黄连炙甘草.     

Anti-diabetic effects of a Coptis chinensis containing new traditional Chinese medicine formula in type 2 diabetic rats

The Chinese formula Tang-Min-Ling (TML), an improved product of the decoction of Dachaihu which has a history of more than 2000 years, has main constituents of Coptis chinensis Franch, Scutellaria baicalensis Georgi, Rheum officinale Baill and Bupleurum chinense DC. A multi-central randomized controlled investigation performed previously by us has showed that TML has positive effects on regulating glycometabolism in type 2 diabetes (T2DM) patients, but the mechanisms remain unclear. Using Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty (OLETF) rats as an animal model with rosiglitazone as a positive control, we were able to detect TML's effect on the serum glucose, serum lipid, serum leptin and adiponcetin after oral administration for 12 weeks. We were also able to detect the insulin resistance level by a glucose clamp test and study the mechanisms of TML in improving insulin resistance by detecting skeletal muscle AMP-activated protein kinase (AMPK) and glucose transporter 4 (GLUT4). Results showed that TML significantly reduced the glucose area under a curve of the oral glucose tolerance test, and had a positive effect in regulating serum lipid metabolism. TML treatment also significantly reduced the serum leptin level, but it had no effect on the serum adiponectin level. The AMPK enzymatic activity and GLUT4 expression in Skeletal Muscle were also upregulated in the TML group. The results suggest that the Chinese medicine TML, which contains Coptis chinensis Franch as one of its components, improves glycometabolism and its possible mechanisms may involve in improvement of insulin resistance of OLETF rats.     

Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch., exert antipyretic effect on yeast-induced pyrexia rats involving regulation of TRPV1 and TRPM8 expression

Ethnopharmacological relevance

Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch., are two representative cold-natured traditional Chinese medicine with heat-clearing effect, and were widely used to treat fever associated diseases in China for a long history. To elucidate the mechanism of the antipyretic effect of Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch. from the perspective of transient receptor potential vanilloid 1 and transient receptor potential melastatin 8 expression on yeast-induced pyrexia rat model.

Materials and methods

Pyrexia model was induced by injecting 20 mg/kg of yeast suspension subcutaneously on rat. 3.5 g/kg Rheum palmatum L. or 2.8 g/kg Coptis chinensis Franch. were given intragastric administration 1 h before and 3 h after pyrexia inducion. Rectal temperature was recorded by electronic thermometer every hour. Protein expression of transient receptor potential vanilloid 1 and melastatin 8 were examined by immunohistochemical staining in dorsal root ganglion, as well as in the paraventricular nuclei and supraoptic nucleus, two important nucleuses of hypothalamus for thermoregulation. Western blot analysis was also applied to test transient receptor potential levels in dorsal root ganglion and hypothalamus. The levels of prostaglandin E₂, cyclic adenosine 3?,5?-monophosphate and arginine vasopressin were tested by enzyme-linked immunosorbent assay in plasma and hypothalamus.

Results

Both Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch. clearly decreased the rectal temperature elevated by yeast in rats from 4 h to 12 h, especially 4–8 h after yeast induction. Importantly, Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch suppressed transient receptor potential vanilloid 1 and increased transient receptor potential melastatin 8 expressions in hypothalamus and dorsal root ganglion, at 4 h, 8 h and 12 h after yeast induction when rectal temperature began to rise, reach the peak and decrease separately. Additionally, Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch. interrupted the transient receptor potential vanilloid 1 and melastatin 8 protein expressions in paraventricular nuclei and supraoptic nucleus with the similar tendency as hypothalamus. Finally, Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch. inhibited the production of prostaglandin E₂ and cyclic adenosine 3?,5?-monophosphate, while promoted the secretion of arginine vasopressin.

Conclusion

The antipyretic effect of Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch might result, at least in part, from the regulation of transient receptor potential vanilloid 1 and melastatin 8 expressions. Thus, our findings provide scientific basis for the wide use of cold-natured traditional Chinese medicine such as Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch in China as a traditional antipyretics.     

葛根芩连汤拆方对肺炎链球菌抑菌作用比较研究

目的 通过对葛根芩连汤(GQD)各配伍组合对肺炎链球菌的抑菌作用差异来探讨其配伍规律。方法 采用液体试管两倍稀释法测定各煎液对肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC)，比较各配伍组合后的药效学改变。结果 各配伍煎液的MIC不全相同。结论 GQD各配伍组合水煎液对肺炎链球菌抑菌作用不全相同；在全方中，抑菌作用药物主要为黄连与黄芩，炙甘草与葛根无明显抑菌作用；两药与黄芩、黄连配伍时对其抑菌拮抗作用不同。     

血清芽管实验检测白假丝酵母菌的药物敏感性

目的了解泌尿生殖道感染白假丝酵母菌对黄连、黄芩、七叶一枝花和氟康唑注射液的敏感性,为临床有效控制其感染提供依据。方法采用白假丝酵母菌芽管药敏试验法,测定黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对从泌尿生殖道感染标本中分离出的52株白假丝酵母菌芽管的最低抑制浓度。结果黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液,在一定的浓度下对泌尿生殖道感染白假丝酵母菌芽管有明显的抑制作用,其抑制芽管的最低浓度分别为1.25,5,2.5 mg/ml和0.125 mg/ml。结论白假丝酵母菌芽管药敏试验法,可为临床快速筛选敏感药物;黄连、黄芩、七叶一枝花的50%乙醇提取物和氟康唑注射液对白假丝酵母菌有较好的抗菌活性。     

四种中药对感染牙本质小管粪肠球菌的抑制作用

目的比较黄连等4种中药水煎剂对离体人牙根管内粪肠球菌的体外抑菌效果。方法选取84颗新鲜拔除的人单根管牙,截取6mm高的柱状牙根。随机分为4个实验组(黄连水煎剂组、五味子水煎剂组、大黄水煎剂组、连翘水煎剂组)和3个对照组[甲醛甲酚(FC)组、阴性对照组和阳性对照组],每组12颗牙。常规根管预备后灭菌制备感染粪肠球菌根管模型,阴性对照组不感染细菌,放置0.9%氯化钠注射液,余每组根管均感染细菌,分别放置上述不同药剂,3天、7天后分别培养并测量细菌的透光度。结果黄连水煎剂组3天与甲酫甲酚组3天组间无差别(P>0.05);连翘水煎剂组3天与阳性对照组3天组间无差别(P>0.05);五味子水煎剂组3天与阴性对照组7天组间无差别(P>0.05);大黄水煎剂组3天、黄连水煎剂组7天与甲酫甲酚组7天组间无差别(P>0.05);连翘水煎剂组7天与阳性对照组7天组间无差别(P>0.05);其余各组间差别均有统计学意义(P<0.05)。结论四种中药中,黄连、五味子、大黄均有不同程度抑制粪肠球菌的作用,黄连作用最强。黄连抑菌作用与FC相同。连翘无抑制粪肠球菌的作用。     

不同配伍泻心汤对黄芩苷代谢动力学的影响

目的 :研究泻心汤中大黄的不同提取方法对黄芩苷在大鼠体内代谢过程的影响。方法:大鼠分别灌胃大黄水煎液+黄芩苷+黄连总生物碱,大黄游离蒽醌+黄芩苷+黄连总生物碱以及黄芩苷后0.5、1、2、3、8、24小时取血,分离血浆,用高效液相仪测定黄芩苷的含量。结果:大黄水煎液+黄芩苷+黄连总生物碱组黄芩苷的药代动力学参数为t1/2=(54.19±112.67)h,AUC=(10982.33±17515.24)μg/L.h,Cmax=(9.88±7.95)μg/L,MRT=(95.86±54.24)h,Vd=(2318634.61±4588242.95)L/kg,CL=(29762.82±39003.52)L/h/kg,Tmax=(11.20±7.16)h;大黄游离蒽醌+黄芩苷+黄连总生物碱组黄芩苷的药代动力学参数为t1/2=(6.49±6.83)h,AUC=(3433.04±4193.84)μg/L.h,Cmax=(6.10±3.06)μg/L,MRT=(23.84±7.08),Vd=(652463.39±4930818.35)L/kg,CL=(36292.44±49581.85)L/h/kg,Tmax=(5.00±4.11)h;黄芩苷组黄芩苷的药代动力学参数为t1/2=(8.85±7.61)h,AUC=(439.05±370.73)μg/L.h,Cmax=(7.30±1.65)μg/L,MRT=(25.36±3.35)h,Vd=(188123.41±274588.24)L/kg,CL=(8759.87±11715.64)L/h/kg,Tmax=(2.00±3.36)h。结论:大黄、黄芩和黄连配伍可以促进黄芩苷在机体内的的吸收,大黄水煎液还可以显著延长黄芩苷在机体内的半衰期,使黄芩苷的血药浓度维持在较高水平。     

煎煮方式对葛根芩连汤中黄芩苷和小檗碱家犬体内药动学影响

目的 探讨煎煮方式对葛根芩连汤煎剂(T)、黄芩单煎剂(S1)和黄连单煎剂(S2)中黄芩苷( Baicalin,Ba)、小檗碱( Berberine,Be)在家犬体内药动学的影响.方法 建立测定家犬血清中黄芩苷、小檗碱的高效液相色谱法,通过测定不同时刻家犬体内黄芩苷、小檗碱浓度,计算药动学参数.结果 家犬灌服T、S1、S2后黄芩苷、小檗碱在家犬体内的Cmax 分别为(7.588±0.797) ng/mL(T,Ba)、(7.204±1.368) ng/mL( S1,Ba);(0.323±0.036) ng/mL(T,Be)、(2.044±0.653) ng/mL(S2,Be);tmax分别为(8.333±1.506) h(T,Ba)、(8.066±0.860) h(S1,Ba);(1.750±0.274) h(T,Be)、(2.932±0.532)h(S2,Be);AUC0-∞分别为(268.7±55.97)ng/(h·mL) (T,Ba)、(218.2±77.3) ng/(h·mL) (S1,Ba);(2.098±0.532) ng/(h·mL) (T,Be)和(15.232±8.36) ng/(h·mL) (S2,Be).结论 煎煮方式对黄芩苷、小檗碱家犬体内药动学有显著影响.