不同品系小鼠的体外受精、胚胎冷冻及移植的比较研究

目的　探讨不同品系小鼠的体外受精、胚胎和精子的低温保存效果。方法　本实验分别在中国科学院上海实验动物中心 (SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心 (CARD)对 13个品系小鼠 (C57BL 6J、BALB c、C3H HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA 2、CD 1、BDF1、B6C3F1)的体外受精 (IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究。结果　各品系小鼠新鲜精子的IVF率 15 1%～ 87 9% ,冻融精子的IVF率 8%～ 80 % ;冷冻胚胎的复苏率4 2 6 %～ 83 9% ;冻融胚胎移植后的产仔率在 17 8%～ 5 1 8%。结论　遗传背景不同的小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植的产仔率差异有显著性。但同一品系两个实验室间的新鲜精子的IVF率、冷冻胚胎的复苏率及移植产仔率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;冻融精子的体外受精率CARD明显高于SLAC(P <0 0 1)。     

10个品系小鼠的AFLP分析

目的：实验用小鼠的遗传质量分析和品系鉴定。方法：应用AFLP技术对10个品系小鼠进行分析。结果：共应用25条单酶切引物、25对双酶切引物进行检测，其中17条单酶切AFLP引物、20对双酶切AFLP引物检测到10个品系小鼠的多态性变化。单酶切AFLP共扩出251条带，片段大小在100－2000bp，共得到89个多态位点，占总扩增带的35．5％。双酶切AFLP在50－600bp扩增出清晰条带，统计1507条带，共得到378个多态位点，占总扩增带的25．1％。对多态性片段进行统计，计算出不同品系间的相似指数和遗传距离指数。结果表明昆明鼠（KM）与TA2、BALB／c、BALB／c-nu关系较近；所有品系间关系最近的两品系为BALB／c和BALB／c-nu；关系较远的是DBA／2与T739、615、C57BL／6J，与小鼠品系来源及培育史相符。结论：通过筛选获得特异性AFLP标记，可用以区分遗传背景或外观形态很相似的品系。为小鼠的遗传质量分析和品系鉴定提供了参考资料。     

两个品系小鼠肺纤维化模型的比较观察

目的采用气管内注射博莱霉素（Bleomycin,BLM）的方法,比较观察两个品系小鼠肺纤维化程度,确定适用的肺纤维化小鼠模型。方法BALB／c小鼠和C57BL／6小鼠分别分成模型组和对照组,模型组气管内注射博莱霉素（5mg／kg）,对照组气管内注射相同体积生理盐水。所有小鼠于造模后第28日处死,观察肺系数、肺组织病理学改变及羟脯氨酸含量的变化。结果光镜下各模型组肺组织呈不同程度纤维化,其中以C57BL／6小鼠最为明显;模型组的羟脯氨酸（HYP）含量均显著高于对照组;C57BL／6小鼠模型组肺系数及HYP明显高于BALB／c小鼠模型组。结论通过气管内注射博莱霉素,BALB／c及C57BL／6小鼠均能复制肺纤维化模型,以C57BL／6小鼠肺纤维化程度最高,获得的肺纤维化模型较为理想。     

不同品系小鼠胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究

目的　研究甘油作为冷冻保护剂、不同基因型小鼠对胚胎玻璃化冷冻的影响。方法　采用 6 5mol L的甘油作为冷冻保护剂 ,采用二步法对CBA、NOD、C57BL 6J、ICR及CD1小鼠 3 5d的胚胎进行玻璃化冷冻 ,并比较了不同品系小鼠胚胎的复苏率及移植受孕率。结果和结论　CBA、NOD、C57BL 6J,ICR及CD1的复苏率分别为 5 7 6 %、4 8%、31 3%、86 5 %及 88% ,移植受孕率为 2 1%、2 3 5 %、11%、38%和 35 5 % ,封闭群小鼠的胚胎复苏率、移植受孕率均显著高于近交系小鼠。这提示胚胎的复苏率及移植受孕率可能与小鼠的不同基因型有关。五个品系中 ,桑椹胚及早期囊胚的体外复苏率均显著高于扩张囊胚。这说明不同基因型及胚胎的不同发育阶段对胚胎玻璃化冷冻效果有影响     

遗传工程小鼠的饲养管理和品系建立

随着人类结构基因组序列的阐明 ,生命科学研究重点从结构基因组学转向了功能基因组学。要研究一个基因的功能及其调控 ,最好的方法是在活体内增加或敲除、突变一个或几个基因 ,在整体上观察研究该基因在生命活动中的作用。这种研究在人体不能进行。科学家们发现 ,在所有动物中 ,实验小鼠是研究功能基因组的最佳动物 ,以至于美国 NIH召开的 2 1世纪生命科学研究的战略会议向美国国会提交的“蓝皮书”中明确指出 :小鼠必将成为 2 1世纪生命科学研究的平台 ,小鼠将成为人类真正认识自我的窗口。当大量转基因小鼠、基因敲除小鼠、基因突变小鼠…     

三个品系小鼠流感病毒气溶胶感染模型的比较

[摘要] 目的 通过气雾攻击产生气溶胶的感染方式对三个品系的小鼠分别进行感染,比较三个品系小鼠在感染过程中的感染差异,从而对三个品系小鼠流感模型的特点进行分析,为流感发病机制的研究及疫苗和药物的开发选择合适的感染模型提供参考。方法 选用A/Puerto Rico/8/34（H1N1）病毒株,采用气雾攻击的方法感染近交系C57BL/6、BALB/c和远交群 ICR三个品系的小鼠,每日称小鼠体重,肉眼观察小鼠状态,分别于感染后3d,7d,14d处死小鼠,取肺脏称其湿重,进行肺脏的病毒测定及病理观察。结果 三个品系小鼠均可感染,其中C57BL/6小鼠的存活率低于其他两个品系,3d 的肺指数和病毒载量均明显高于ICR小鼠（P<0.05),镜下病理结果显示较其他两个品系也更明显。BALB/c小鼠与其他两个品系小鼠相比,体重在后期的恢复最慢,存活率比 C57BL/6高但比ICR低;肺指数和病毒载量与其他两个品系相比没有显著差异;镜下病理改变相似,但弱于C57BL/6强于ICR。ICR小鼠的发病进程与其他两个品系小鼠基本相似,但体重、存活率、肺指数、病毒载量及镜下病理改变等指标均弱于其他两个品系。结论 三个品系小鼠均可建立流感气溶胶模型,但感染后的三个模型各有特点,在实验中可以根据不同的研究目的来选用合适的小鼠品系建立模型。     

小鼠体细胞核移植的早期研究

目的 建立成熟的小鼠体细胞核移植技术。方法 通过显微操作，以ICR鼠成纤维细胞核和C57鼠的去核卵母细胞进行胚胎的重构。重构胚经化学激活或3种不同脉冲电压融合后再经体外或输卵管体内培养；3d后回收胚胎并进行胚胎的发育鉴定。结果 去核卵母细胞的成活率为71．91％、化学激活率为75．09％；刺激电压为60V(80μs、刺激5次)的融合率比其他几种方式高；经脉冲电压70V(80μs、刺激2次)处理后的胚胎发育潜力比其他几种方式处理后的胚胎发育潜力要好。结论 小鼠体细胞核移植技术基本获得成功。     

将beige和xid突变基因导入KSN系裸小鼠育成的几种新的免疫缺陷品系

将ｂｅｉｇｅ和ｘｉｄ突变基因导入ＫＳＮ系裸小鼠育成的几种新的免疫缺陷品系［日］ＹａｓｕｈｉｔｏＩｓｈｉｇａｋｉ等免疫缺陷小鼠特别是无胸腺的裸小鼠，不仅在Ｔ细胞缺陷模型方面，而且在异种移植特别在肿瘤研究方面都已有广泛应用。但裸小鼠作为实验动物有２个主要...     

三个品系转基因小鼠的遗传监测

为了解转基因小鼠在繁育过程中其遗传特性的稳定情况，用特异性引物以PCR方法分别对IL－4T、IL－10T、IFNgR%三个品系转基因小鼠进行了遗传监测。结果表明，三个品系的转基因小鼠中的部分小鼠其整合基因发生了不同程度的改变与丢失。     

野生小鼠群体和实验室小鼠品系线粒体基因组序列的比较分析

目的：对192只野生小鼠样品及126只实验室小鼠样品的线粒体全基因组序列进行比较研究,解析小鼠野生群体及实验室品系之间线粒体基因组的遗传差异。方法：利用生物信息学方法比较野生小鼠群体和实验室小鼠品系线粒体基因组多态性,密码子使用及演化速率的差异。结果：现有实验室小鼠品系的线粒体基因组多态性远小于野生群体;小鼠野生群体和实验室品系的线粒体基因组之间已经积累了显著的遗传差异,而且不同功能分类的序列分歧程度有差异;虽然12个在重链表达的蛋白质编码基因(protein coding genes, PCGs)的碱基组成在野生群体和实验室品系间非常相似,但是密码子使用频率显著不同;12个PCGs在野生群体和实验室品系中都经历纯化选择,但是不同的实验室单倍型序列中非同义突变率(Ka)、同义突变率(Ks)及其比值(Ka/Ks)变化趋势不同,提示在实验室品系培育过程中线粒体基因组的演化机制比较复杂。结论：野生小鼠群体和实验室小鼠品系线粒体基因组序列的比较分析有助于更全面地了解小鼠实验室品系培育过程中线粒体基因组的演化差异。     

小鼠胚胎冷冻研究

目的 探讨小鼠胚胎冷冻保存方法。方法 用EG40、ES40、EFS403种冷冻液进行小鼠胚胎快速冷冻，比较解冻后胚胎的发育率、孵化率、着床率。结果 EFS40冷冻液冷冻效果最好，与对照组相比无明显差异；ES40其次，EG40效果最差。结论 EFS40冷冻液适合用于小鼠胚胎冷冻保存。     

卵裂球的存活状况对冻融胚胎种植率的影响

目的:观察冻融胚胎卵裂球存活状况与冻融胚胎种植率的关系. 方法:对134个冻融胚胎移植周期进行回顾性分析. 根据冻融胚胎移植周期中卵裂球存活状况分为3组:A组(n=46)为所有移植胚胎卵裂球全部存活;B组(n=65)为混合移植;C组(n=23)为所有移植胚胎均有卵裂球受损. 结果:在134个FET治疗周期中,共解冻胚胎642个,复苏胚胎455个. 有33个周期获临床妊娠,每个冻融胚胎移植周期的临床妊娠率为24.6%. A组的临床妊娠率和种植率为34.7%和18.5%,B组的临床妊娠率和种植率为23.1%和8.2%,C组的临床妊娠率和种植率为8.7%和3.8%. A组种植率明显高于C组(P《0.05). 随着移植胚胎中含100%卵裂球存活胚胎数的增加(0,1,2,3),其临床妊娠率(8.7%,15.0%,31.4%,38.9%)和种植率(3.8%,6.1%,16.2%,18.5%)均明显增加(P《0.05). 结论:卵裂球的存活状况是影响冻融胚胎种植率的重要因素.     

冻融胚胎移植和新鲜胚胎移植出生体重的比较

目的探讨冻融胚胎移植对新生儿出生体重的影响。方法收集新鲜胚胎移植活产918例;冻融胚胎移植活产751例;以及同期自然妊娠活产555例的临床资料,比较单双胎情况下自然妊娠、新鲜胚胎移植、冻融胚胎移植各组间的胎龄、早产率、出生体重、LBW比例、VLBW比例以及巨大儿比例。结果冻融胚胎移植与新鲜胚胎移植单胎组和双胎组的胎龄、早产率、出生体重、LBW比例、VLBW比例以及巨大儿比例均无显著差异（P均〉0.05）。结论与新鲜胚胎移植比较,冻融胚胎移植技术不影响胎儿的胎龄、新生儿的出生体重。     

A frozen-thawed embryo transfer program improves the embryo utilization rate

Background Frozen-thawed embryo transfer （FET） is the most common way to prevent serious late ovarian hyperstimulation syndrome and increase the cumulative pregnancy rate. We evaluated the effectiveness of an FET program for improving the embryo implantation and clinical pregnancy rates, and ultimate embryo utilization rate in infertility treatment. Methods Patients undergoing in vitro fertilisation （IVF） cycles from January 2006 to June 2008 were enrolled, including 179 patients who had undergone the first FET cycle after controlled ovarian hyperstimulation （COH） in which all embryos were frozen （group C1） and 1306 patients who had COH with fresh embryo transfer （ET） （group T1）. Logistic regression was used to model the embryo implantation and clinical pregnancy rates based on the mother＇s age, numbers of oocytes retrieved, embryos transferred and high-quality embryos transferred. The embryo implantation and clinical pregnancy rates were also compared between two groups after adjusting for age, the numbers of oocytes retrieved and the numbers of embryos transferred. Results Logistic regression analysis confirmed that embryo implantation and clinical pregnancy rates in group C1 were both significantly higher than those in group T1 after adjusting for confounding factors （43.6% vs 29.0%, 63.1% vs 47.0%, respectively; P 〈0.01）. The embryo implantation and clinical pregnancy rates were consistently higher in group C1 by comparing the age groups ≥35 or 〈35 years. The clinical pregnancy rates for the numbers of oocytes retrieved per cycle being ≥15 or 〈15 were higher in group C1, as was the embryo implantation rate. These differences were statistically significant for oocyte numbers 〉15 （P 〈0.05）. The embryo implantation and clinical pregnancy rates in group C1 were both significantly higher than in group T1 when two or three embryos were transferred （P 〈0.05）. Conclusion A program of freezing all embryos and performing FET improved the rates of embryo implantation and clinical pregnancy, and ultimately enhanced the embryo utilization rate.     

阿托西班对新鲜胚胎种植率及妊娠结局的影响

目的分析阿托西班对新鲜胚胎移植患者胚胎种植率及妊娠结局的影响。方法选择行新鲜胚胎移植术的患者60例,根据胚胎移植当日是否使用阿托西班分为观察组和对照组各30例。观察组胚胎移植术前30 min阿托西班静脉推注干预,对照组未使用阿托西班。对两组患者进行跟踪随访,记录两组胚胎种植率和妊娠结局;比较两组患者末次随访时的心理状态及治疗满意度;根据患者年龄,将观察组和对照组患者分为高龄组(年龄≥35岁)和常规组(年龄＜35岁),比较各组的胚胎种植率、临床妊娠率及活产率。结果观察组的胚胎种植率高于对照组(P＜0.05),两组临床妊娠率、异位妊娠、流产率、活产率比较差异无统计学意义(P＞0.05);观察组末次随访时的抑郁评分低于对照组,满意度评分高于对照组(P＜0.05),而两组间的焦虑、恐怖评分差异无统计学意义(P＞0.05);对照高龄组与对照常规组间的临床妊娠、活产率差异有统计学意义(P＜0.05),观察高龄组与对照高龄组间的临床妊娠、胚胎种植率和活产率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论给予行新鲜胚胎移植术患者术前小剂量阿托西班预处理,可明显改善胚胎种植率和高龄患者妊娠结局。     

影响胚胎移植与着床成功率的多种因素总结与分析

在人类辅助生殖技术中,多方面因素会影响胚胎移植与着床的成功率。除了胚胎质量、移植技术和子宫内膜容受性这些主要影响因素外,还有许多其他临床因素。本文对影响胚胎移植与着床成功率的各个因素进行综述和分析,从中总结经验,以期能够改善IVF/ICSI的结局。     

Effect of 935-MHz phone-simulating electromagnetic radiation on endometrial glandular cells during mouse embryo implantation

This study examined the impact of 935MHz phone-simulating electromagnetic radiation on embryo implantation of pregnant mice.Each 7-week-old Kunming (KM) female white mouse was set up with a KM male mouse in a single cage for mating overnight after induction of ovulation.In the first three days of pregnancy,the pregnant mice was exposed to electromagnetic radiation at low-intensity (150 μW/cm2,ranging from 130 to 200 μW/cm2,for 2-or 4-h exposure every day),mid-intensity (570 μW/cm2,ranging from 400 to 700 μW/cm2,for 2-or 4-h exposure every day) or high-intensity (1400 μW/cm2,ranging from 1200 to 1500 μW/cm2,for 2-or 4-h exposure every day),respectively.On the day 4 after gestation (known as the window of murine embryo implantation),the endometrium was collected and the suspension of endometrial glandular cells was made.Laser scanning microscopy was employed to detect the mitochondrial membrane potential and intracellular calcium ion concentration.In high-intensity,2-and 4-h groups,mitochondrial membrane potential of endometrial glandular cells was significantly lower than that in the normal control group (P<0.05).The calcium ion concentration was increased in low-intensity 2-h group but decreased in high-intensity 4-h group as compared with the normal control group (P<0.05).However,no significant difference was found in mitochondrial membrane potential of endometrial glandular cells between low-or mid-intensity groups and the normal control group,indicating stronger intensity of the electromagnetic radiation and longer length of the radiation are required to inflict a remarkable functional and structural damage to mitochondrial membrane.Our data demonstrated that electromagnetic radiation with a 935-MHz phone for 4 h conspicuously decreased mitochondrial membrane potential and lowered the calcium ion concentration of endometrial glandular cells.It is suggested that high-intensity electromagnetic radiation is very likely to induce the death of embryonic cells and decrease the chance of their implantati     

宫腔镜检查在胚胎移植前的应用价值

目的 了解冷冻胚胎移植（FET）前宫腔异常类型,评价FET前行宫腔镜检查的临床意义.方法 分析234例既往体外受精-胚胎移植（IVF-ET）失败者后准备行FET的患者,按其是否进行宫腔镜检查及治疗分为宫腔镜组114例和对照组120例,比较两组的妊娠结局,及宫腔镜组宫腔异常的检出率和异常类型.结果 宫腔镜组患者FET后临床妊娠率较对照组增高（49.12％ vs 31.67％,P＜0.05）,继发不孕患者宫腔异常检出率高于原发不孕者（49.09％vs 22.03％,P＜0.05）,其中以宫腔粘连、宫内膜息肉、息肉样增生多见.结论 宫腔镜能改善宫腔环境;宫腔镜检查及治疗后能提高IVF-ET的成功率,建议在FET之前行宫腔镜检查.     

超声引导下定位胚胎移植对IVF-ET妊娠结局的影响

目的:探讨在腹部超声引导下定位胚胎移植对体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)妊娠结局的影响.方法:回顾性研究本生殖中心接受首次IVF-ET,包括卵母细胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,I...     

冻融胚胎复苏后培养时间对临床妊娠率的影响

【摘要】 目的 探讨卵裂期冻融胚胎复苏后体外培养时间对冻融胚胎移植（FET）周期临床妊娠率的影响。 方法 收集2016年1月至12月在海军军医大学（第二军医大学）长海医院生殖医学中心接受FET助孕的692例患者的临床资料。根据胚胎复苏后移植前体外培养的天数将患者分为3组：D0组（复苏后当天未培养）、D1组（复苏后培养1d）、D2组（复苏后培养2 d）,分析比较三组间的妊娠结局。结果 三组患者年龄、体质量指数、不孕年限、基础FSH水平以及内膜准备方案组成均没有统计学差异（P>0.05）;随着冷冻胚胎复苏后培养时间的增加,胚胎丢失率逐渐增加（D0组0.0%→D1组13.3%→D2组43.0%,P<0.05）。三组移植日子宫内膜厚度及平均移植胚胎数均无差异（P>0.05）;尽管D2组及D1组优质胚胎移植率均低于D0组（P<0.05）,但D2组临床妊娠率却高于D0组（62.7% VS 38.6%,P<0.05）、D1组与D0组无统计学差异（45.2% VS 38.6%,P>0.05）。 结论 解冻卵裂期胚胎进行体外培养1～2天后移植,虽然增加胚胎丢失率,但可筛选具有发育潜能的胚胎,显著提高临床妊娠率,因此临床医生需要权衡利弊及风险。