莪蚕健胃方治疗大鼠胃癌前病变作用机制的探讨

[目的]通过观察莪蚕健胃方对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织细胞增殖、凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响,探讨莪蚕健胃方治疗胃癌前病变的作用机制.[方法]采用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)配合饥饱失常法诱导造模.设空白对照组,模型对照组,莪蚕健胃方大、中、小剂量组,进行常规病理检测,采用免疫组化SP法、TUNEL法检测胃黏膜组织细胞增殖核抗原(PCNA)、Bcl-2蛋白及凋亡指数(AI)的表达情况.[结果]莪蚕健胃方各剂量组胃黏膜组织病理学变化,中、重度异型增生率与模型对照组相比明显降低(均P＜0.05);莪蚕健胃方能明显下调胃癌前病变组织细胞的PCNA、Bcl-2的表达,上调AI.[结论]莪蚕健胃方对大鼠实验性胃黏膜癌前病变有逆转作用,抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡可能是该方的作用机制之一.     

阻癌胃泰对胃癌前病变Bcl-2及P53 基因蛋白的影响

[目的]探讨胃癌前病变(PLGC)Bcl-2、P53基因蛋白的表达及阻癌胃泰的治疗机制.[方法]N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍溶液加胃黏膜机械损伤诱发Wistar大鼠PLGC状态.用阻癌胃泰与维酶素预防和治疗,观察对病变黏膜组织中P53、Bcl-2基因蛋白水平的影响.[结果]中药组能明显阻断化学致癌物对黏膜的炎症损伤,改善PLGC组织黏膜不典型增生程度;同时中药组治疗后Bcl-2、P53基因蛋白阳性指数亦明显低于病理对照组(P＜0.05).[结论]益气化瘀为主的阻癌胃泰通过改善PLGC大鼠气虚血瘀的病理基础,降低病变组织增殖水平,诱导细胞正常凋亡,从而对PLGC细胞的增殖有良好的阻断作用.     

阻癌胃泰对胃癌前病变Bcl-2及P53 基因蛋白的影响

[目的]探讨胃癌前病变(PLGC)Bcl-2、P53基因蛋白的表达及阻癌胃泰的治疗机制.[方法]N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍溶液加胃黏膜机械损伤诱发Wistar大鼠PLGC状态.用阻癌胃泰与维酶素预防和治疗,观察对病变黏膜组织中P53、Bcl-2基因蛋白水平的影响.[结果]中药组能明显阻断化学致癌物对黏膜的炎症损伤,改善PLGC组织黏膜不典型增生程度;同时中药组治疗后Bcl-2、P53基因蛋白阳性指数亦明显低于病理对照组(P＜0.05).[结论]益气化瘀为主的阻癌胃泰通过改善PLGC大鼠气虚血瘀的病理基础,降低病变组织增殖水平,诱导细胞正常凋亡,从而对PLGC细胞的增殖有良好的阻断作用.     

胃痞颗粒治疗胃癌前病变的实验研究

[目的]观察胃痞颗粒对胃黏膜上皮异型增生大鼠胃黏膜上皮细胞凋亡及调控基因蛋白表达的影响。探讨胃痞颗粒治疗胃癌前病变的作用机制。[方法]采用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱导造模。设空白组、模型组、胃痞颗粒Ⅰ组及Ⅱ组，进行常规病理检测、TUNEL细胞凋亡检测、Bcl-2、Fas、P53（突变型）蛋白表达检测。[结果]胃黏膜组织病理学变化，中、重度异型增生率胃痞颗粒Ⅰ、Ⅱ组与模型组相比明显降低（均P〈0．05）；P53（突变型）、Bcl-2基因蛋白表达，胃痞颗粒Ⅰ、Ⅱ组明显低于模型组（均P〈0．05）；Fas蛋白表达，胃痞颗粒Ⅰ、Ⅱ组均高于模型组，但前者差异无统计学意义（P〉0．05），后者差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]胃痞颗粒对大鼠实验性胃黏膜癌前病变有逆转治疗作用。     

乐胃煎对大鼠胃粘膜上皮异型增生细胞凋亡及调控基因的影响*

目的研究乐胃煎对大鼠胃粘膜上皮异型增生细胞凋亡及调控基因(Bcl-2、Fas、ICE)蛋白表达的影响,探讨乐胃煎治疗胃粘膜癌前病变的作用机制.方法用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)建立大鼠胃粘膜异型增生模型,对大鼠胃粘膜用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测Bcl-2、Fas蛋白表达水平.结果治疗组癌前病变发生率与造模组和对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05).Bc1-2蛋白表达率及过量表达率,治疗组与造模组比较,均有显著性差异(P＜0.05);治疗组与造模组比较,Fas蛋白表达率亦有显著性差异(P＜0.05),过表达率无显著性差异(P＞0.05).结论乐胃煎治疗可抑制大鼠胃粘膜Bcl-2基因蛋白的表达,促进Fas基因蛋白的表达,从而使胃粘膜上皮细胞发生正常凋亡,逆转或阻止胃癌的发生.     

盐酸小檗碱对老年大鼠心肌细胞抗氧化及相关凋亡蛋白表达的影响

目的探讨盐酸小檗碱对老龄大鼠心肌细胞抗氧化及抗凋亡蛋白表达的作用。方法选择30只SD老龄大鼠随机平均分为老年组、100 mg小檗碱用药(100 mg)组及200 mg小檗碱用药(200 mg)组,设10只SD大鼠为青年组。用药组每日灌小檗碱共4 w。电镜下观察各组心肌超微结构的变化及检测心肌线粒体内丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的活性、呼吸链酶复合体(Co)Ⅳ活性及其蛋白表达的变化。免疫印迹法检测相关凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2关联X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。使用TUNEL染色法检测各组心肌细胞凋亡情况。结果与老年组比较,青年组及用药组大鼠线粒体及内质网的形态结构相对完好;小檗碱可提高老龄大鼠线粒体Mn-SOD与CoⅣ的活性,降低CoⅣ蛋白的表达(P0.05),降低MDA的含量(P0.05);同时用药组心肌细胞凋亡率、Bax蛋白含量均显著降低(P0.05),而Bcl-2表达水平显著升高(P0.05)。结论盐酸小檗碱能提高衰老的心肌细胞抗氧化能力及抗凋亡作用。     

胃力康颗粒对实验性胃溃疡大鼠胃组织碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

[目的]观察胃力康颗粒对实验性胃溃疡大鼠胃组织碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探讨胃力康颗粒的疗效机制.[方法]大鼠随机分成正常组、模型组、法莫替丁对照组和胃力康治疗组,以Okabe改良法复制实验性胃溃疡大鼠模型,采用RT-PCR检测各组大鼠胃组织bFGF mRNA表达水平.[结果]胃力康治疗组bFGF mRNA表达水平较模型组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]胃力康颗粒能上调bFGF mRNA的表达,从而促进溃疡愈合.     

加味左金丸对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织细胞增殖与凋亡的影响

[目的]探讨加味左金丸对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织细胞增殖与凋亡的影响。[方法]将以饮用甲硝基亚硝基胍为主24周制成的胃癌前病变模型大鼠随机分为模型组，维甲酸组，加味左金丸高、中、低剂量组，治疗16周，采用免疫组化SP法，TUNEL法检测胃黏膜组织细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2蛋白及凋亡指数（AD）的表达情况。[结果]加味左金丸能明显下调胃癌前病变组织细胞的PCNA、Bcl-2的表达，上调AI。[结论]抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡可能是该方的作用机制之一。     

莪蚕健胃方调控MMP-2表达对胃癌前病变血管生成作用的研究

[目的]探讨莪蚕健胃方对胃癌前病变大鼠MMP-2蛋白及其mRNA对血管生成的影响。[方法]实验大鼠分为正常组5只,造模组55只。制作胃癌前病变模型24周并抽检5只确保成功后,将剩余模型大鼠随机分为模型组,维甲酸组和中药高、中、低剂量组,每组10只。给药16周后处死取材。进行胃组织病理检测,MVD计数,和MMP-2蛋白及mRNA的检测。[结果]与正常组比较,造模组的MVD和MMP-2蛋白及其mRNA均过度表达(P0.05),并随异型增生级别的升高而增强。MMP-2蛋白与MVD正相关(r=0.560,P0.05),MMP-2mRNA与MVD无相关性(r=0.297,P0.05)。在MVD、MMP-2蛋白及其mRNA的表达方面:与模型组相比,大部分治疗组能抑制其过度表达(P0.05),中药低剂量组(P0.05)除外。与维甲酸组相比,中药高剂量组表达降低(P0.05),中药中剂量组差异无统计学意义(P0.05)。[结论]1血管生成在胃癌前病变阶段即出现,MMP-2蛋白、mRNA呈过度表达,均随异型增生程度加重而增强。2大鼠胃癌前病变组织中MMP-2仅在蛋白水平与MVD呈正相关,提示MMP-2主要在蛋白层面参与了血管生成。3莪蚕健胃方可抑制胃癌前病变的血管生成,可能是通过削弱MMP-2基因的转录及表达而发挥治疗作用的。其作用与剂量有关。     

马齿苋多糖干预三硝基苯璜酸诱导大鼠结肠炎的作用机制

[目的]探讨马齿苋多糖(POP)干预三硝基苯璜酸(TNBs)诱导大鼠实验性结肠炎(UC)的作用机制.[方法]48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、POP组,每组16只.用5%2,4,6 TNBs 100 mg/kg灌肠建立大鼠UC模型,第3天开始,除正常组外,各组分别给予0.85%氯化钠、POP处理,连续给药7 d后处死.应用透射电镜、免疫组化染色分别分析结肠淋巴细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达;应用黏蛋白染色分析结肠黏膜修复情况,综合评价POP的作用机制.[结果]模型组结肠黏膜淋巴细胞凋亡不明显,凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达呈上升趋势,Bax、Caspase-3蛋白表达呈明显下降趋势,且黏蛋白合成分泌减少,杯状细胞数目减少;予POP干预后,结肠黏膜淋巴细胞凋亡明显,凋亡相关基因Bax/Bcl-2之间比例＞1,作为凋亡终末的关键酶即Caspase-3表达亦呈上升趋势,且黏蛋白合成分泌增加,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]POP可能通过上调Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达,诱导结肠黏膜淋巴细胞凋亡;刺激结肠黏蛋白分泌,促进结肠黏膜修复,发挥缓解大鼠UC的效应.     

加味左金丸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原及B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白表达的影响

[目的] 观察加味左金丸对大鼠萎缩性胃炎(CAG)癌前病变增殖细胞核抗原(PCNA)及B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl- 2)蛋白表达的影响,并探讨其治疗CAG癌前病变的可能机制。[方法] 采用SP法检测大鼠胃癌前病变自然恢复组,加味左金丸高、中、低剂量组,维甲酸组和正常组大鼠胃黏膜组织中PCNA、Bcl -2 蛋白表达的情况,并计算细胞增殖指数(PI)。[结果] 各治疗组PI及Bcl- 2 蛋白阳性率与自然恢复组比较差异有统计学意义(P<0 .01或<0 .05);其中加味左金丸各治疗组PI值与维甲酸组比较差异有统计学意义(P<0 .05)。[结论] 加味左金丸可能通过对抗PCNA、Bcl 2的激活而抑制PCNA、Bcl -2蛋白的表达发挥治疗作用。     

益肝消癥方对大鼠肝癌前病变肝细胞凋亡因子Bcl-2、Bax mRNA及蛋白质表达的影响

目的:观察益肝消癥方对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌前病变肝细胞凋亡因子Bcl-2、Bax mRNA及蛋白质表达的影响。方法:将40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组10只、模型组15只和益肝消癥组15只,除对照组外,其余各组大鼠以二乙基亚硝胺腹腔注射诱导肝癌前病变模型,持续14周。第8周起,每天分别以生理盐水、益肝消癥颗粒的水溶剂给予相应组大鼠灌胃给药,第14周末给药后取材,检测大鼠0、7、14周体重,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白质表达,观察肝脏病理情况。结果:益肝消癥方可改善肝癌前病变大鼠一般状况、肝脏病理,下调Bcl-2、Bax mRNA、Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2比值。结论:益肝消癥方通过Bcl-2/Bax途径抑制肝细胞凋亡,减轻肝星状细胞增殖,从而对大鼠肝癌前病变具有一定改善作用。     

凋亡基因在心肌梗死的表达及血管紧张素转化酶抑制剂的干预作用

目的探讨凋亡基因对大鼠心肌梗死的表达及血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)的干预作用。方法将大鼠随机分为假手术组、梗死模型组、梗死模型 福辛普利小剂量组、梗死模型 福辛普利大剂量组,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠心肌梗死24h和4周时心肌细胞内凋亡抑制基因Bcl-2与凋亡基因Bax、P53、Fas的mRNA表达量,并探讨它们之间的相互关系。结果急性心肌梗死24hBcl-2表达下降,福辛普利促进其高表达,Bax、P53、Fas增高,福辛普利抑制其表达;急性心肌梗死4周,Bcl-2表达下降,福辛普利促进其表达,Bax、P53表达变化不大,福辛普利对其表达无影响,Fas高表达,福辛普利抑制其表达。结论大鼠急性心肌梗死后心肌细胞存在凋亡现象,Bcl-2表达下降,Bax、P53、Fas表达上调介导心肌梗死后心肌细胞凋亡的发生。ACEI可通过干预上述基因抑制急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡。     

尼美舒利抑制乙基硝基亚硝基胍诱导大鼠胃癌癌前病变的作用机制

目的:探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利在乙基硝基亚硝基胍(ENNG)诱导大鼠胃癌癌前病变发展过程的作用以及可能机制.方法:6周龄♂Wistar大鼠给予浓度为100 mg/L的ENNG溶液饮用14 wk后,使用浓度为300 m g/L和1 200 mg/L的尼美舒利溶液由大鼠自由饮用,分别在喂养14、26和38 wk后观察大鼠胃黏膜病变.使用免疫组织化学的方法观察大鼠病变胃黏膜COX-2蛋白、Bcl-2蛋白以及PCNA的表达,TUNEL法检测大鼠胃黏膜细胞凋亡.结果:药物干预的大鼠胃癌癌前病变的发生率显著低于对应的非用药组(P<0.05);药物干预组大鼠病变胃黏膜的COX-2蛋白和Bcl-2蛋白表达分别为17.6%,35.3%,显著低于非用药组的60%和84%(P<0.05);增殖指数18.9±4.57显著低于非用药组49.43±7.92(P<0.05);凋亡指数13.6±1.82显著高于非用药组2.12±0.53(P<0.05);COX-2蛋白和Bcl-2蛋白与PCNA的表达以及凋亡指数具有相关性(P<0.01).结论:选择性COX-2抑制剂尼美舒利能有效抑制ENNG诱导的大鼠胃癌癌前病变的发展,其机制可能是通过抑制COX-2、Bcl-2蛋白的表达,从而抑制病变胃黏膜细胞的增殖以及诱导其凋亡.     

中西医结合治疗对萎缩性胃炎癌前病变环氧合酶-2蛋白表达及胃黏膜病理改变的影响

[目的]观察加味四君子汤联合甲硝唑、叶酸三联疗法对脾虚血瘀型萎缩性胃炎癌前病变患者环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达的影响及胃黏膜病理改变。[方法]68例脾虚血瘀型萎缩性胃炎和（或）伴有肠上皮化生（IM）及异型增生（Dys）患者均服用甲硝唑与叶酸,其中三联组34例同时服用加味四君子汤,甲硝唑服用1周,其他服用至第24周,用ABC免疫组化法检测COX-2蛋白。观察比较治疗前后COX-2蛋白表达及黏膜病理改变。[结果]三联组治疗后COX-2蛋白表达较对照组减弱（P〈0.01）,病理改变逆转优于对照组（P〈0.05-0.01）。[结论]脾虚血瘀与萎缩性胃炎癌前病变关系密切。中西医结合疗法能改善症状,一定程度逆转胃黏膜萎缩I、M和Dys,并降低COX-2蛋白表达。     

丁基苯酞对血管性痴呆大鼠记忆及海马Bcl-2、Bax的影响

目的 研究丁基苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠记忆、海马病理变化及抗凋亡蛋白(Bcl-2)和促凋亡蛋白(Bax)蛋白表达的影响.方法 采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型.SD大鼠被随机分成假手术组、VD模型组、NBP治疗组、尼莫地平治疗组.应用Morris水迷宫检测大鼠记忆能力,苏术精-伊红(HE)染色观察海马神经元形态,免疫组化检测海马Bcl-2和Bax的表达.结果 VD模型组与假手术组大鼠比较记忆能力显著下降,逃避潜伏期分别为(78.79±21.93) s与(16.96±7.44) s (P＜0.05),海马神经元病理改变严重,免疫阳性细胞数量显著增加,其中Bax变化更为显著 (43.00±6.72与6.00±1.29,P＜0.05),Bcl-2与Bax的比值较对照组明显降低;NBP治疗组与模型组比较记忆能力显著改善,逃避潜伏期分别为(47.13±21.75) s与(78.79±21.93) s (P＜0.05),海马神经元病理形态明显改善,Bcl-2免疫阳性细胞数显著增多(33.14±8.05与21.81±4.97,P＜0.05),Bax免疫阳性细胞数显著减少(32.93±4.99与43.00±6.72,P＜0.05).NBP治疗组与尼莫地平治疗组之间比较,各项指标均无显著差异 (P＞0.05).结论 NBP能改善VD大鼠记忆能力,抑制海马细胞凋亡,对VD大鼠有一定的治疗作用.

Abstract：

Objective To study the effects of butylphthalide (NBP) on memory and apoptosis related protein as well as neuronal pathology in hippocampus of vascular dementia (VD) rats. Methods VD model was generated by the permanent occlusion of bilateral common carotid arteries in SD rats to produce the forebran ischemia. Male SD rats were randomly allocated into sham-operation group, VD model group, NBP treatment group and nimodipine treatment group. The function of memory was tested by the Morris water maze. The neuronal pathological changes and the expression of Bcl-2 and Bax proteins in the hippocampus were observed with hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemical staining, respectively. Results The impaired memory of VD rats was proved by the lengthened mean escape latency [(78.79±21.93)vs.(16.96±7.44),P＜0.05] and the neuron in hippocampus was severely damaged. The decveased ratio of Bcl-2/Bax resulted from the overexpression of Bax proteins in VD model group versus the sham-operation group [(43.00±6.72)vs.(6.00±1.29),P＜0.05]. The treatment of NBP notably improved the memory function of VD rats and reduced the hippocampus pathological injury (P＜0.05). The expression of Bcl-2 protein raised [(33.14±8.05)vs.(21.81±4.97),P＜0.05] along with reduced expression of Bax protein [(32.93±4.99)vs.(43.00±6.72),P＜0.05] after NBP treatment. However, there was no significant difference in the treatment effects between nimodipine and NBP group (P＞0.05). Conclusions NBP treatment could improve memory of VD rats and reduce the hippocampus pathological lesion by inhibiting the apoptosis related protein.     

细胞增殖与凋亡在十二指肠胃反流患者胃黏膜病变进展中的变化

目的 探讨细胞增殖与凋亡在原发性十二指肠胃反流(DGR)患者胃黏膜病变的发生发展中的作用.方法 对58例原发性病理性DGR患者进行24 h胃内胆汁监测,并行胃镜检查及胃黏膜活检,采用免疫组化方法 分析不同病变胃黏膜组织Ki-67、Bcl-2蛋白的表达,采用TUNEL技术观察胃黏膜细胞凋亡情况.结果 1.原发性病理性DGR患者胃黏膜上皮细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)均显著高于正常对照组(P<0.05),高反流组PI、AI均高于低反流组(P<0.05);2.高反流组胃窦部萎缩性胃炎的检出率高于低反流组(P<0.05);3.在正常胃黏膜→浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠上皮化生发展过程中,PI、AI均逐渐升高且呈一致性升高.在发生异型增生时PI仍显著增加而AI显著下降.4.呈异型增生的患者胃黏膜上皮细胞Ki-67表达阳性率显著升高(P<0.05),呈异型增生的患者胃黏膜上皮细胞Bcl-2阳性率高于其它各组(P<0.05).结论细胞增殖与凋亡失调可能在十二指肠反流液造成胃黏膜病变的进展中发挥重要作用,Ki-67、Bel-2蛋白表达异常可能是DGR患者胃黏膜损伤及癌变的分子机制之一.