舒林酸对结肠癌SW1116细胞生长的影响

目的观察选择性环氧化酶－2（COX－2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）与非选择性COX抑制剂舒林酸（sulindac）对结肠癌细胞株SW1116前列腺素E2（PGE2）释放的影响,以及舒林酸对细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响,以探讨非甾体抗炎药（NSAIDs）的抗癌机制。方法采用放射免疫法检测尼美舒利和舒林酸作用前后细胞上清液中PGE：水平的变化;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察舒林酸对结肠癌细胞SW1116增殖的抑制作用;流式细胞术（FCM）分析舒林酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果放免检测发现,尼美舒利、舒林酸作用1h即可出现细胞上清液中PGE2水平下降,且呈剂量依赖性,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;MTT比色法显示舒林酸呈时间和剂量依赖性抑制细胞的增殖（P〈0．05或P〈0．01）;FCM分析结果显示舒林酸能促进细胞的凋亡且改变细胞周期的分布（降低G0／G1期细胞的比例、增加S期和G2／M期细胞的比例）,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论NSAIDs能抑制结肠癌SW1116细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期的进程、促进细胞凋亡、抑制PGE2的释放等有关。     

尼美舒利对结肠癌细胞株PGE2及VEGF表达的影响

目的:探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂对COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响,明确以COX-2为靶点治疗结肠癌的作用途径。方法:将选择性COX-2抑制剂尼美舒利(nimesulide)按不同浓度作用于结肠癌细胞系HT-29,用MTT(四甲基偶氮唑蓝比色法)法分别于0、24、48、72h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察尼美舒利对细胞凋亡的影响,进一步采用ELISA法检测药物作用后前列腺素E2(PGE2)的表达,免疫组化法测定内皮细胞生长因子(VEGF)表达阳性率。结果:尼美舒利对结肠癌细胞系HT-29呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增殖,促进其凋亡。PEG2及VEGF表达水平随作用时间延长而下降。结论:选择性COX-2抑制剂可能通过PGE2与VEGF途径影响结肠癌细胞HT-29的增殖与凋亡,是其治疗结肠癌的分子机制。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过COX-2抑制剂NS-398对胃癌培养细胞系SGC7901增殖及凋亡影响的研究证实非甾体类抗炎药（NSAID。）可在体外抑制胃癌细胞的生长。方法应用MTT法检测NS-398对胃癌细胞SGC7901细胞增殖的影响；应用流式细胞仪、透射电镜检测NS-398对胃癌细胞SGC7901细胞凋亡的影响。结果MTT结果显示NS-398对胃癌细胞均抑制作用，并随剂量的增加及作用时间延长，其抑制作用要明显增加；透射电镜观察发现未经NS-398作用的胃癌培养细胞的细胞核和细胞器亚微结构清晰，核模完整，而经不同浓度的舒林酸和尼美舒利作用后细胞呈现典型的凋亡形态学变化，并可见凋亡小体形成；流式细胞仪结果显示不同浓度的NS-398作用SGC7901细胞72h后，均可出现亚G1峰，呈剂量依赖关系诱导胃癌细胞凋亡，并呈浓度依赖性改变的细胞周期分布，一方面增高G0／G期细胞比例，另一方面降低S期和G2／M期细胞比例。结论NS-398可抑制胃癌SGC7901细胞的增殖；NS-398促进胃癌SGC7901细胞的凋亡；NS-398抑制胃癌的机制可能是通过抑制胃癌细胞COX-2的活性，从而抑制前列腺素E2的释放而抑制胃癌细胞的生长。     

尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的协同作用。方法:通过MTT法和流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI荧光染色法检测不同浓度的尼美舒利及其与阿霉素联合对胃癌MGC803细胞的生长抑制作用和凋亡率。结果:25μmol/L尼美舒利作用24h、72h细胞生长抑制率为10.90%和32.52%;浓度400μmol/L时,抑制率升为39.90%和91.78%。单用阿霉素(0.25mg/L)作用48h抑制率为28.56%,合用25、400μmol/L尼美舒利抑制率升为68.50%和89.30%。100μmol/L尼美舒利作用6h时细胞的凋亡率为5.67%,作用24h时凋亡率升为29.60%。结论:尼美舒利能抑制胃癌MGC803细胞的增殖并诱导其凋亡,与阿霉素具有协同作用。     

环氧化酶-2抑制剂尼美舒利对膀胱癌T24细胞的体外凋亡诱导作用

目的：观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）对人膀胱癌细胞体外凋亡的诱导作用，探讨其作用机制。方法：采用流式细胞术、吖啶橙-溴化乙啶双染法（AO-EB）、透射电镜等技术，检测尼美舒利作用下体外培养的人膀胱癌细胞株T24凋亡变化：Western Blot法检测survivin、Smad2蛋白表达变化。结果：尼美舒利作用后T24细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”，细胞凋亡率与尼美舒利作用时间和剂量相关；AO-EB双染色后．细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光．典型细胞可见新月形改变，固缩或片段化的核；电镜下可见较为典型的细胞凋亡形态变化；同时，survivin蛋白表达较对照组减弱，而Smad2表达增强。结论：尼美舒利对膀胱癌细胞有明显的凋亡诱导作用．下调survivin、上调Smad2基因表达可能是其机制之一。     

尼美舒利联合表阿霉素对人膀胱癌EJ细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利对人膀胱癌EJ细胞的体外作用及其与表阿霉素的协同抗肿瘤作用。方法:通过MTT法检测尼美舒利及其与表阿霉素联合对EJ细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI荧光染色法检测EJ细胞在尼美舒利作用下的凋亡率,免疫组化SP法检测尼美舒利对EJ细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。结果:40μmol/L尼美舒利作用24、48、72h细胞生长抑制率分别为15.18%、30.79%和43.50%;浓度360μmol/L时,抑制率分别升为50.45%、70.98%和88.67%。单用表阿霉素(0.2mg/L)作用48h抑制率为25.51%;合用40、120、400μmol/L尼美舒利抑制率升为58.52%、69.38%和80.30%。40、120、400μmol/L的尼美舒利作用12h时细胞的凋亡率为2.41%、8.27%和15.05%,作用36h时凋亡率分别升为13.32%、27.60%和42.48%。随着尼美舒利浓度增加,EJ细胞中Bcl-2表达下调,Bax的表达上调(P<0.05)。结论:尼美舒利可能通过下调Bcl-2表达和上调Bax表达来抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖并诱导其凋亡,...     

尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的体外作用

目的：探讨尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的协同作用。方法：通过MTT法和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI荧光染色法检测不同浓度的尼美舒利及其与阿霉素联合对胃癌MGC803细胞的生长抑制作用和凋亡率。结果：25µmol/L尼美舒利作用24h，72h细胞生长抑制率为10.90%和32.52%；浓度400µmol/L时，抑制率升为39.90%和91.78%。单用阿霉素(0.25mg/L) 作用48h抑制率为28.56%；合用25、400µmol/L尼美舒利抑制率升为68.50%和89.30%。100µmol/L尼美舒利作用6h时细胞的调亡率为5.67%，作用24h时调亡率升为29.60％。结论：尼美舒利能抑制胃癌MGC803细胞的增殖并诱导其凋亡，与阿霉素具有协同作用。     

尼美舒利对慢性萎缩性胃炎COX-2及P16表达的影响

目的观察尼美舒利对慢性萎缩性胃炎（CAG）COX-2及p16蛋白表达的影响。方法用甲基硝基亚硝基胍（MNNG）建立CAG大鼠模型,免疫组化等方法观察尼美舒利对CAG中环氧合酶-2（COX-2）和P16蛋白表达的影响。结果尼美舒利能有效降低CAG中COX-2表达水平,同时能上调MNNG诱导的肿瘤抑制基因P16蛋白表达。结论尼美舒利可能在降低胃癌的发生中具有一定的作用。     

pEgr-hp53体外稳定转染联合辐射对人肺腺癌A549细胞周期进程及增殖的影响

目的探讨pEgr-hp53重组质粒体外稳定转染联合辐射对人肺腺癌A549细胞周期进程及增殖的影响,阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法脂质体包裹重组质粒pEgr-hp53体外转染A549细胞,G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果经pEgr-hp53体外转染A549细胞10到20d,G418筛选得到稳定表达的细胞株,联合X射线照射可明显抑制A549细胞的体外增殖,细胞周期进程明显改变,G1期和G2期发生阻滞。结论提示pEgr-hp53体外稳定转染联合辐射可使人肺腺癌A549细胞周期阻滞于G1期和G2期,并可抑制肿瘤细胞增殖,本研究为提高肿瘤放射治疗效果提供新的治疗方案奠定了理论基础和实验依据。     

尼美舒利对耐药胃癌细胞SGC7901/VCR的逆转作用

目的：研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对耐药胃癌细胞药物敏感性的影响及其作用机制，为COX-2抑制剂应用于胃癌的联合化疗提供支持依据。方法：以长春新碱（VCR）诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901／VCR为研究对象。应用MTT法观测尼美舒利对SGC7901／VCR耐药性的逆转作用。采用高效液相色谱（HPLC）法分析尼美舒利对SGC7901／VCR细胞内VCR浓度的影响。结果：尼美舒利能逆转耐药细胞SGC7901／VCR对长春新碱的耐药，且呈浓度依赖性，逆转倍数在尼美舒利浓度为100、200、400Izmol／L时分别为1．38、3．07、6．45倍：400μmol／L尼美舒利能增加SGC7901／VCR中VCR的浓度3．22倍。结论：尼美舒利能增加耐药细胞内VCR浓度．从而部分逆转胃癌细胞SGC7901／VCR对VCR的耐药     

尼美舒利对丝裂霉素-c抑制人胃癌细胞株细胞增殖及诱导凋亡影响的实验研究

目的 研究环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)选择性抑制剂尼美舒利(Nimesulide，NIM)对丝裂霉素-c(Mitomycin，MMC-c)抑制体外培养人胃癌细胞株SGC7901及MGC803细胞增殖及诱导凋亡作用的影响。方法 采用MTT比色法观察NIM对MMC-c抑制人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞增殖的影响；采用流式细胞仪技术及吖啶橙荧光染色观察NIM对MMC-c诱导人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞凋亡的影响。结果 NIM能增强MMC-c抑制SGC7901细胞增殖及诱导SGC7901细胞凋亡，而对MGC803细胞无明显影响。结论 COX-2选择性抑制剂NIM能增强MMC-c对部分人胃癌细胞抑制增殖与诱导凋亡作用，作用有无可能取决于癌细胞COX-2的表达情况。     

尼美舒利不依赖环氧合酶-2途径抑制胃癌生长的机制研究

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利不依赖COX-2途径抑制胃癌细胞移植瘤的可能机制。方法应用W estern-b lotting方法从人胃癌细胞株MKN45、AGS、MKN28、SGC-7901以及BGC-823中筛选出COX-2极低表达的细胞株MKN28,将其收集后皮下注射在BALB/C裸鼠的右侧前肢腋下。24只裸鼠分为模型组和干预组,干预组给予300 mg/L的尼美舒利灌胃,每日1次。每10天测定瘤体的大小,第40天终止实验,处置动物,留取移植瘤组织,免疫组化检测核因子-κB(NF-κB)和p21WAF1的表达;提取瘤组织总RNA进行RT-PCR,测定模型组和干预组过氧化物酶体增殖蛋白激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA的表达水平。结果干预组移植瘤体积显著小于模型组(P<0.05),提示选择性COX-2抑制剂对MKN28胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有良好的抑瘤作用。干预组NF-κB的表达显著低于模型组(P<0.05),p21WAF1的表达则显著高于模型组(P<0,05);RT-PCR发现干预组PPAR-γmRNA的表达较模型组增强。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利对COX-2表达水平极低的胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有抑瘤作用。其机制可能是通过影响细胞凋亡相关蛋白p21WAF1的表达以及NF-κB和PPAR-γ转录因子等不依赖COX-2途径的作用得以实现。     

MALAT1 promotes cell proliferation in gastric cancer by recruiting SF2/ASF

The functions of long non-coding RNAs (lncRNAs) in gastric cancer (GC) remain largely unknown. MALAT1 is a kind of lncRNA that had been validated as a pivotal metastasis and prognosis mark in lung adenocarcinoma. In this study, we found that MALAT1 was aberrantly highly expressed in GC cell lines (SGC-7901, MKN-45 and SUN-16), and induced specific distribution and over-expression of SF2/ASF in nucleolus. Knock-down of MALAT1 or SF2/ASF in SGC-7901 cells respectively induced significant arrest of cell cycle in G0/G1 phase along with a remarkable suppression of cell proliferation, and the nuclear distribution and expression of SF2/ASF was significantly impaired when MALAT1 was depleted. However, over-expression of SF2/ASF exhibited no effect on rescuing the cell proliferation suppression by MALAT1 depletion. These results suggest that MALAT1 may function as a promoter of GC cell proliferation partly by regulating SF2/ASF, and our findings may provide us a likely biomarker and a potential target for GC diagnosis and therapeutic treatment.     

CpG ODN增强树突状细胞对胃癌细胞增殖周期和凋亡影响的实验研究

目的探讨CpG ODN1826增强树突状细胞(DC)抗胃癌效应的作用。方法分离正常人外周血DC,用GM-CSF和IL-4培养,于第5天加入TNF-α并分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组继续培养。第6天各组均加入胃癌细胞冻融抗原50μl,Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ组再分别加入CpG ODN182610μg/ml,第10天ELISA检测IL-12和IFN-γ的水平,MTT法检测CTL对MKN45、MKN28、SGC7901和A549细胞的体外杀伤效应。流式细胞术检测CpG ODN1826增强DC对胃癌细胞增殖周期、凋亡的影响。结果体外培养第10天,加入CpG ODN1826后各组IL-12、IFN-γ的分泌量明显提高;CpG ODN1826协助DC对同种不同分化类型的胃癌细胞株MKN45、MKN28、SGC7901均有强烈的杀伤效应(P<0.01),杀伤活性显著高于A549(P<0.01)。体外应用CpG ODN1826对肿瘤细胞周期比例:G0/G1间期(MKN4568.35%、MKN2869.23%、SGC790169.80%),S期(MKN4539.45%、MKN2839.75%、SGC790139.55%),G2/M期(MKN456.50%、MKN286.30%、SGC79016.42%);与A549(G0/G1间期57.68%,S期25.13%,G2/M期18.46%)比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时,不同肿瘤细胞株的凋亡率分别为MKN4575.20%、MKN2373.87%、SGC790172.43%、A54951.43%,表明CpG ODN1826能显著增强DC对胃癌细胞周期的抑制作用,促进胃癌细胞的早期凋亡(P<0.01)。结论 CpG ODN1826体外可显著增强DC诱导出高效而特异的抗胃癌效应,显著抑制胃癌细胞分裂增殖、促进凋亡,可作为胃癌免疫治疗的一种有效方法。     

NM-3对体外胃癌细胞株SGC-7901的作用和机制探讨

目的：研究新小分子血管生成抑制剂NM-3对体外培养的胃癌SGC79n1细胞的作用，并探讨NM-3对胃癌抑制作用的机理。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901用NM-3、卡铂及生理盐水处理，观察细胞的生长规律。并在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率，分析细胞周期分布。结果：将药物作用后1h，2h，3h，6h，12h，24h，48h，72h的胃癌SGC7901细胞通过流式细胞仪检测胃癌细胞早期凋亡率及凋亡峰。发现NM-3组（1mol／L）在72h内与对照组比较细胞早期调亡率无显著差异（P2〉0．05）；经0．1mol／L卡铂处理的细胞组早期即可诱导发生明显的凋亡，并随着时间的延长调亡率增高，呈时间依赖性，与对照组相比较，有显著差异（P〈0．05）。对细胞周期分布的分析中，NM-3组（1mg／L）Sub-G1峰与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。而卡铂能使细胞周期发生相对变化，随着药物作用时间的增加，Go／G1期细胞增多，而S期覆G2／M期细胞则相应减少。结论：NM-3对胃癌组织的生长抑制主要是通过作用于血管内皮细胞，减少肿瘤新生血管生成。而对体外培养的人胃癌细胞无直接诱导其凋亡的作用。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱＋20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂（Z-VAD-FMK）作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐（MTT）比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。