伏马菌素B1免疫学检测方法的建立

目的建立应用单克隆抗体的伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)间接竞争酶联免疫吸附检测方法.方法利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗FB1单克隆抗体,建立FB1间接竞争酶联免疫吸附方法.结果建立稳定分泌抗FB1毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体为IgG1亚类,分子量150KD,腹水稀释度为12.0×108,亲和常数为6.72×109L/mol.FB1间接竞争酶联免疫吸附方法的最低检出浓度为5μg/L,校正曲线的线性范围50～500μg/L,线性方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P＜0.05);与脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素均无交叉反应.回收率71.89%～112.95%,平均回收率100.23%.结论所建立的检测方法具有快速、简便、灵敏的特点,可满足实际工作需要.     

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的制备及特性

目的研制能够与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2有较好交叉反应的抗总黄曲霉毒素单克隆抗体。方法利用B细胞杂交瘤技术,建立分泌抗总黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株。结果建立了1株稳定分泌抗总黄曲霉毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为2G2。该细胞株所分泌的单克隆抗体Ig亚类为IgG1,参考工作浓度为1∶1.6×106,亲和力常数为8×10-8mol/L。该抗体与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应分别为100.0%、57.5%、104.0%和19.0%,与其他真菌毒素无交叉反应。结论制备出能分泌具有高特异性和亲和力的抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

抗T-2毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定抗T-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,以期为T-2毒素的快速检测提供有力的抗体工具。方法:采用琥珀酸酐法将T-2毒素活化为T-2HS,T-2HS在DCC与NHS作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联合成完全抗原。以T-2HS-BSA为抗原,免疫BALB/c小鼠,用ELISA筛选、建立分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株。测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接竞争法检测单克隆抗体细胞株的特异性。结果:建立了1株稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株T-1B3,该细胞株所分泌的单隆抗体Ig亚类为IgG1,ELISA检测结果表明抗T-2毒素抗体可以与T-2毒素发生特异性反应,工作浓度为1:6.5×104,IC50为3.6 ng/ml。该抗体与HT-2毒素的交叉反应为65.9%,与黄曲霉毒素无交叉。结论:制备出能分泌具有较高特异性和亲和力的抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究

目的 建立敏感、特异和快速针对赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附试验检测方法，研制具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 利用B细胞杂交瘤技术，建立能够分泌抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并获得抗赭曲霉毒素A单克隆抗体。结果 建立赭曲霉毒素A的间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法(ELISA)。该方法的最低检出浓度为0.5ng/ml，线性范围2～500ng/ml，线性方程Y=0.272X 1.07(r=0.9978)。方法的加标回收率为79.0％～119.7％。利用该方法对北京市售的大米、小麦样品进行检测。结果表明．小麦样品的污染率为60.71％，最大值为8.26μg/kg；大米样品的污染率为17.86％，最大值为3.44μg/kg。结论 该方法简单、快速、灵敏。完全可以满足实际工作的需要。     

胸腺肽α1单克隆抗体的制备及其鉴定

目的:研制胸腺肽α1(Tα1)单克隆抗体，为Tα1作用机制的阐明奠定基础。方法:用戊二醛将Tα1和牛血清白蛋白进行交联，以其交联物为抗原，按常规淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，并采用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和Western免疫印迹来鉴定单克隆抗体的特异性。结果:建立了分泌抗Tα1抗体的杂交瘤细胞株，能特异性地与Tα1结合，但与单纯牛血清白蛋白、酵母抽提物和转染Tα1酵母未诱导表达产物无反应。其抗体效价为1：10240，Ig亚类为IgG2b。结论：本研究建立了针对Tα1高效价、高特异性单克隆抗体细胞株。     

腹泻性贝毒软海绵酸单克隆抗体的制备和酶联免疫检测方法的建立

采用细胞融合技术制备抗赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的单克隆抗体,应用此抗体发展建立了软海绵酸的间接竞争酶联免疫检测方法。采用碳二亚胺法,将半抗原与载体蛋白偶联,得到免疫抗原和包被抗原。免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA方法筛选阳性克隆,经多次克隆化,获得了4株能稳定分泌抗软海绵酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过小鼠体内诱生腹水方法获得单克隆抗体,建立分析检测软海绵酸的间接竞争酶联免疫方法。最低检出限为31.2ng/ml,批内平均变异系数8.1%,回收率为87%~112%。     

Ⅰ型登革病毒prM抗体的制备及初步鉴定

目的以Ⅰ型登革病毒pr M蛋白为靶抗原,制备相应的多克隆和单克隆抗体,并进行初步鉴定。方法 RTPCR扩增Ⅰ型登革病毒全长pr M基因,转入克隆载体和构建重组表达载体,以原核表达及纯化后的pr M蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,采集免疫兔血清,制备抗pr M蛋白多克隆抗体;取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养、间接ELISA筛选阳性克隆,获得特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备抗pr M蛋白单克隆抗体,应用亲和层析法纯化抗体,Western-blot鉴定抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价。结果获得全长pr M的多克隆抗体及1株能稳定分泌抗pr M蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗体的效价高,特异性好。结论制备了Ⅰ型登革病毒pr M多克隆抗体和1株单克隆抗体,为进一步探讨登革病毒pr M抗体依赖的感染增强作用奠定基础。     

伏马菌素B1单抗ELISA检测试剂盒研制

目的研制快速检测粮食中伏马菌素BI（FB1）的试剂盒。方法在制备抗FB1单克隆抗体基础上，利用间接竞争酶联免疫吸附方法研制FB，快速检测试剂盒。结果该试剂盒最低检出浓度为5ng／ml，校正曲线线性范围50～500．g／ml，线性方程Y=-0．582X＋1．793（r=0．99，P〈0．05）。与脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素均无交叉反应。回收率在71．89％～112．95％之间，平均回收率为100．23％。试剂盒常温下可保存225d，实验室内的变异系数和实验室间变异系数均〈20％。结论该试剂盒快速、简单、灵敏，可满足实际工作需要。     

2型登革病毒NS1蛋白单克隆抗体的生物学特性研究

目的制备抗2型登革病毒NSl蛋白的单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法以重组NS1蛋白免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb，采用间接ELISA方法和Westernblot进行mAb特异性鉴定；同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得9株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6andU13D2；相对亲和力均在10^6以上。Westernblot显示9株mAb能特异识别重组NS1蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒NS1蛋白的9株mAb，为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。     

对硫磷人工抗原合成及其鉴定

目的 制备对硫磷人工抗原和抗血清，为建立酶联免疫吸附法提供技术储备。方法 还原对硫磷硝基成为氨基，合成半抗原氨基对硫磷；重氮化偶联大分子载体牛血清白蛋白制备人工抗原；免疫新西兰白兔。进行多抗制备。结果 合成的半抗原核磁共振图谱鉴定结果为6：6．9～7(m，2H，CH2)6．4～6．5(m，2H，CH2)4．1～4．2(q，4H-CH2)3．4(s，2H，NH2)1．3～1．4(t，6H，CH3)；氨基对硫磷与牛血清白蛋白的结合比为35～36：1；抗血清经间接酶联免疫吸附法检测，效价达1：128000，双向免疫扩散实验测得抗血清与人工抗原形成沉淀；间接竞争酶联免疫吸附法测得抗血清对对硫磷最低抑制浓度为0．16ng／mL；经间接酶联免疫吸附法检测人工抗原与羊抗人血清、兔抗人血清、正常兔血清无交叉反应。结论 合成对硫磷半抗原及人工抗原纯度高、结合比高。具有较好的免疫原性。     

抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株的建立

本研究建立了抗黄曲霉素素ＡＦＭ１的单克隆抗体细胞株,用ＡＦＭ１－肟＝朱血清白蛋白（ＡＦＭ１－ｏｘｉｍｅ－ＢＳＡ）ＷＪＭ ＢＵ ＴＲ ＱＫＵＭ本研究建立     

The level of radionuclides and aflatoxin M1 in laid-in milk

The performed studies have provided a model that is based on the predicted trend and permits prediction of the levels of radionuclides and aflatoxin M1 in laid-in milk in its different yield periods.     

Seasonal variations of aflatoxin M1 in the farm milk in Albania

This paper presents monitoring data on levels of aflatoxin M1 in the farm-gate milk in Albania. The monitoring included 120 evenly distributed samples collected in winter and summer from various farms all over the country. The levels of aflatoxin M1 were determined using the quantitative thin layer chromatography. On average, the winter milk samples revealed higher concentrations of aflatoxin M1 than the summer samples. Thirteen percent of the winter samples resulted above the 0.5 microgram/kg level, as compared to 3% of the summer samples exceeding that level. Skimmed and semi-skimmed milk from the same source contained comparatively lower levels of aflatoxin M1 than whole milk.     

Appearance of aflatoxin M1 during the manufacture of Camembert cheese]

Several classic cheese making of camembert are made from raw milk spiked with Aflatoxin M1. Three Aflatoxin levels 7.5 microgram/l, 3 microgram/l are used. In respective curds 35.6, 47.1 and 57.7% of Aflatoxin M1 are recovered and 64.4, 52.9 and 42.3% in respective whey. During the first 15 days of storage the Aflatoxin M1 content of different cheeses decrease respectively 25, 55, 75%. A similar experience is made with a milk contamined in Aflatoxin M1 C14 labelled. Same results are recovered, except about behaviour of Aflatoxin M1 in cheese: a same C14 activity is recovered during storage for 30 days.     

黄曲霉毒素M1的危害、污染现状及检测方法进展

本文针对黄曲霉毒素M1 的理化特性、危害、产生及防治进行了总结 ,详细介绍了黄曲霉毒素M1 的四类检测方法 ,并进行了比较 ,同时展望了检测方法的发展方向     

液体奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的液相色谱-串联质谱联用测定

目的建立免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)法测定液体奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的确证方法,调查深圳市售鲜奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的污染状况。方法随机抽取深圳市各大商场和超市市售液体奶及奶粉样品,样品采用热水经均质、超声提取、离心、取上清液经免疫亲和柱净化,洗脱液经氮气吹干,定容,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测方式检测。基质加标外标法定量。结果本次调查样品共55份,检出率为20%。结论免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)法测定液体奶及奶粉中黄曲霉毒素M1,方法实用,结果可靠。     

Mutagenic effect of aflatoxin B1

The present work aimed to study the mutagenic effect of aflatoxin B1 on human chromosomes. The experiments showed that aflatoxin B1 is a strong chromosome damaging agent. The treated cells showed a high rate of aberrations mainly breaks and interchanges. Using Giemsa banding technique, the study showed that the distribution of breakage points on individual chromosomes was significantly non-random. The study of sister chromatid exchanges (SCEs) indicated that the high incidence of breakage rate was paralled by an increased SCE rate. Some chromosomes were very sensitive to the mutagenic effect of aflatoxin B1, while other chromosomes were very resistant. The present data provides an additional consideration in assessing the risks of exposure to this agent.