TGFβ_1及其受体在着床期小鼠子宫内膜中转录和表达状况的研究

目的 :为进一步探讨转化生长因子 ( transforming growth factorβ1,TGFβ1)在胚泡着床过程中的生物学作用。方法 :本文通过原位杂交和免疫组化方法 ,检测了 TGFβ1及其受体在着床前后小鼠子宫内膜中的转录和表达状况。结果 :受精后 d4,子宫内膜腔上皮、腺上皮和基质细胞 TGFβ1及其受体转录和表达均较未孕期增强。受精后 d5～ 6 ,TGFβ1及其受体免疫组化和原位杂交阳性着色主要分布于初级蜕膜带 ( primary decidual zone,PDZ)。随着胚泡植入的进行 ,PDZ区蜕膜细胞 TGFβ1及其受体的转录和表达增强。结论 :TGFβ1可能是小鼠胚泡着床过程中的一个重要调节因子。     

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

sLe~x在小鼠胚泡植入早期子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨唾液酸化的路易斯寡糖(sLex)在胚泡植入早期小鼠子宫内膜的表达及作用。方法:①应用免疫组化方法对sLex在小鼠妊娠早期子宫内膜的表达进行定位,免疫印迹法以另一侧为自身对照,检测妊娠d1-5小鼠子宫内膜sLeX的表达情况。②向妊娠小鼠一侧子宫角注射sLeX单克隆抗体,观察其对胚胎着床的影响。结果:妊娠d1-5小鼠子宫内膜组织中,sLeX表达量逐渐增加,在植入窗口期(d4)达高峰;子宫角注射抗体后对胚泡植入有明显的抑制作用。结论:在小鼠胚泡植入早期,sLex参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要的作用。     

STAT3在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的:检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)在小鼠围植入期子宫内膜的表达,探讨STAT3在胚泡植入中的生物学作用。方法:取未孕动情期、真孕及假孕1天、2天、3天、4天上午、4天下午、4天午夜、5天、6天、7天、8天小鼠子宫做切片,用免疫组化技术和图像分析方法对STAT3在围植入期子宫内膜的表达进行定位和半定量分析。结果:STAT3主要分布于小鼠子宫内膜腔上皮、腺上皮和蜕膜细胞。真孕组小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮的STAT3于孕4天上午开始呈强阳性表达,孕4天下午表达最强,此后表达逐渐减弱;蜕膜细胞的STAT3表达则从孕5天开始逐渐增强。假孕组小鼠子宫内膜中STAT3只在孕4天呈弱阳性表达。未孕组小鼠子宫内膜中STAT3弱表达。真孕组小鼠子宫内膜中STAT3含量明显高于同期各假孕组。结论:STAT3参与胚泡植入过程和子宫内膜容受性的建立。STAT3还可能参与植入后胚泡滋养层的扩展、分化及子宫内膜蜕膜化反应。STAT3在子宫内膜的表达不仅受母体因素调控,而且可能与胚泡的刺激有关。     

表皮生长因子受体特异的酪氨酸激酶抑制剂对小鼠胚泡体外发育和胚胎着床的影响

胚胎着床是一个极为复杂的过程。其中，胚胎接受来自子宫内环境或自身信息的调节，是着床成功的必要前提。EGF受体可能是参予这一调节的分子之一，该受体早在4-细胞鼠胚即有表达，随后表达呈进行性增加直至着床前的胚泡[1，2]。同时，着床期的子宫内膜能表达多种EGF家族生长因子［3～6]，有实验表明这些因子的靶作用位点是胚泡而不是子宫内膜，因而，EGF受体被认为是着床过程中胚泡与子宫内膜间双向信息交流的分子[7]。EGF受体是位于细胞膜上的Ⅰ型信号传导分子，其信号的传递有赖于其细胞内段的蛋白酪氨酸激酶活性的活化（即磷酸化）…     

着床研究模型:离体胚泡与子宫内膜“共培养”

本工作用小鼠和豚鼠的离体胚泡与子宫内膜共培养方法,为研究着床与抗着床机理提供了一个体外研究模型。子宫内膜取自妊娠小鼠第5天上午8时前和妊娠豚鼠第4天下午,分别与小鼠或豚鼠胚泡共培养。经培养2～3天后可见胚泡从透明带逸出并附着于子宫内膜,部分植入内膜。     

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。     

胚泡和内膜发育状态对子宫内膜“着床窗口”形成的影响

本文应用胚泡移植和改进的内膜上皮细胞与胚泡共培养方法研究了胚胎和子宫内膜不同发育状态对子宫内膜对胚泡接受性的影响.实验证明正常胚泡移植到子宫内膜的“着床窗口”出现时间以妊娠d4天上午9时到下午18时.如果被移植的胚泡是取自延缓着床胚泡,则它们的“着床窗口”出现时间有明显缩短,只能到下午14时为止.另外也证明.子宫内膜本身发育状态对内膜的接受性也有影响.以妊娠d5天内膜的胚泡附着数最多.所以.可以认为胚胎和内膜的发育状态都是可以影响内膜“着床窗口”的出现与消失的.     

Expression of galectin-3 in mouse endometrium and its effect during embryo implantation

This study investigated the expression pattern of galectin-3 (Gal-3) in mouse endometrium during early pregnancy and its function during embryo implantation. The expression of Gal-3 was measured at the mRNA level using real-time PCR and at the protein level using immunohistochemistry and Western blotting. The expression of Gal-3 mRNA and protein in the pregnant group was higher than in the non-pregnant group, and mRNA and protein expression reached their maximum levels on days 4 and 2, respectively. Immunohistochemistry results showed that Gal-3 protein presented in luminal epithelium and glandular epithelium and reached its maximum on days 6–8 and days 2–4 after pregnancy, respectively. The number of embryos implanted decreased substantially when Gal-3 was knocked down in mouse endometrium. In conclusion, increased Gal-3 expression after pregnancy is required for embryo implantation.     

促血管生成素-1,-2基因在小鼠着床期子宫内膜的表达

目的:检查Ang-1/-2蛋白在小鼠胚胎着床期子宫内膜的分布及mRNA的表达,以研究Ang-1/-2基因在胚胎着床过程中所起的作用和生物学意义。方法:取D2,D4,D6和D8昆明种小鼠子宫内(蜕)膜,分别用免疫组织化学S-P法和原位杂交技术,检查着床期子宫内膜中Ang-1/-2蛋白的表达及其mRNA的转录水平。并用计算机图像分析技术检测不同时期子宫内膜中Ang-1/-2表达的平均光密度值。结果:免疫组化显示,Ang-1蛋白在基质细胞、上皮细胞和血管壁中表达,而Ang-2蛋白则在腺上皮细胞及基质细胞中表达,两者随着妊娠天数的增加而表达增强(P<0·01)。原位杂交显示,Ang-1mRNA自D2起即表达于基质细胞中,D4血管壁胞浆中也出现阳性表达;而Ang-2mRNA自D2起则表达于基质细胞和腺上皮,D4血管壁胞浆中也出现阳性表达。Ang-1/-2mR-NA表达强度在D6,D8逐渐增加。平均光密度值差异有显著性(P<0·01)。结论:Ang-1/-2基因在小鼠胚胎着床期血管新生和血管重塑过程中起重要作用,从而有助于囊胚成功着床。     

雌/孕激素对围着床期小鼠子宫内膜明胶酶表达的影响

目的 :了解雌、孕激素对围着床期小鼠子宫内膜明胶酶表达的影响。方法 :应用酶谱法检测经雌 /孕激素处理的早孕期及去卵巢后小鼠子宫内膜明胶酶的表达。结果 :明胶酶-B的表达总量在早孕 d 1～ 4明显下降 ,但 d 5 (植入开始 )骤然上升 ,同时活性型明胶酶 -A也相对增多。去卵巢后明胶酶表达明显减弱 ,且未能测出明胶酶 -A活性 ;明胶酶 B表达在雌激素组增强 ,孕激素组及雌 /孕激素处理组均减弱 ,经雌 /孕激素处理后仍未测出明胶酶 -A的活性。结论 :明胶酶的表达受雌激素上调、孕激素下调 ,雌孕激素联合处理仍以孕激素作用为主     

VEGF, bFGF and their receptors at the fetal-maternal interface of the rhesus monkey

Placental development involves trophoblast outgrowth and a coordinated angiogenesis in the implantation site. In this study, expression of angiogenic factors, vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), VEGF receptors, kinase insert domain-containing region (KDR), and bFGF receptor Flg was characterized at the maternal-embryonic boundary of the rhesus monkey on Day 17, 19, 28 and 34 of pregnancy. Immunohistochemistry and in situ hybridization showed that VEGF mRNA and protein were both strongly expressed in the cytotrophoblast, the blood vessels and certain immunocytes. These sites were also immunopositive for KDR. In addition to the vascular endothelial cells and the vascular smooth muscle cells, the protein and mRNA for bFGF were also detected in cyto/syncytiotrophoblast bilayer, whereas the staining for Flg protein was mainly localized in the cytotrophoblast cells. The staining degree of VEGF and bFGF in the villi gradually decreased with the development of placenta. Strong expression of bFGF, Flg and KDR was also detected in the decidual cells. These data suggest that VEGF and bFGF may be involved in angiogenesis, cytotrophoblast proliferation and migration during early stage of placentation in the rhesus monkey.     

Expression of Smad2 and Smad4 in mouse uterus during the oestrous cycle and early pregnancy

SMAD2 and SMAD4 are intracellular transducers of TGF-beta superfamily. In situ hybridization and semi-quantitative RT-PCR were employed to determine the temporal and spatial expression of Smad2 and Smad4 mRNA in mouse uterus during the oestrous cycle and early pregnancy. Smad2 mRNA was predominantly present in the luminal and glandular epithelium at dioestrus and prooestrus, while Smad4 expression was at a steady level in the luminal and glandular epithelium throughout the oestrous cycle. During pre-implantation period, Smad2 hybridization signals were accumulated in the luminal and glandular epithelium at a basal level; Smad4 mRNA appeared in the epithelium with a little variation in hybridization signal intensity. After implantation, on day 5 of pregnancy, Smad2 signals were localized to the subluminal stroma surrounding the implanting blastocyst, and Smad4 mRNA were accumulated in the decidua near the luminal epithelium. Both Smads were present in the decidua on days 6-7 with a switch from the mesometrial pole to the antimesometrial pole. RT-PCR results showed that both Smad2 and Smad4 mRNA levels were rising during peri-implantatation. The results suggest that Smad2 and Smad4 might be involved in the cycling changes of mouse uterus during the oestrous cycle and embryo implantation.     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宫的表达及其对小鼠胚胎着床的影响

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕d1-8小鼠子宫中的表达规律,以及CD82/KAI1抗体对小鼠胚胎体外发育及着床的影响。方法:用RT-PCR及免疫组织化学技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律。将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度CD82/KAI1抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况。妊娠d4小鼠宫角注射CD82/KAI1抗体,于妊娠d8观察小鼠胚胎植入数量。结果:①CD82/KAI1mRNA在假孕d1-8小鼠子宫中均有表达,于d4、d5表达最丰富。CD82/KAI1蛋白在假孕d1-8的子宫基质细胞及腺上皮细胞均有表达,假孕d1-4腔上皮细胞无表达,假孕d5子宫腔上皮细胞出现弱阳性表达,从d6开始子宫腔上皮细胞表达逐渐增强。②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制囊胚的形成率(1∶400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。③宫角注射一定量的CD82抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.35±0.17vs4.52±0.24,P<0.05)。结论:CD82/KAI1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。CD82/KAI1在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用。     

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。     

IGF-I和IGF-I受体在早孕期大鼠子宫中的表达及意义

目的 :探讨类胰岛素样生长因子 - I(IGF- 1 )和 IGF- I受体 (IGF- IR)在围着床期大鼠子宫内膜和胚胎滋养层细胞中的表达、意义及其与孕激素 (P)的关系。方法 :收集自然交配的孕 3～ 1 0 d大鼠的血清及子宫组织 ,以动情期雌鼠为对照。采用放射免疫法测定大鼠血清 P水平 ;免疫组化Ls AB法检测 IGF- I、IGF- IR及孕激素受体 (PR)在孕早期大鼠子宫内膜及胚胎滋养层细胞中的表达 ,计算机图像分析法进行定量。结果 :IGF- I及其受体在大鼠内膜腺、腔上皮 ,蜕膜细胞及滋养层细胞中均有表达。IGF- I在大鼠子宫内膜中的表达强度随孕天逐渐升高 ,孕 5～ 7d达到最强 ,此后降到动情期水平 ,与 P及 PR无显著性相关。IGF- IR的表达强度随孕天降低 ,孕 5～ 6 d达到最小值 ,孕 8～ 1 0 d又上升到动情期水平 ,与 P及 PR均呈显著性负相关 (P<0 .0 5 )。IGF- I和 IGF-IR在孕 8～ 1 0 d大鼠滋养层细胞中的表达强度随孕天逐渐升高 ,与血 P及 PR均无显著性相关。结论 :IGF- I与 IGF- IR在围着床期大鼠子宫内膜中的表达出现分离 ,既抑制了 IGF- I对子宫内膜过强的促生长作用 ,使之蜕膜化 ;同时又满足了孕早期胚胎生长发育所需的较高 IGF- I水平 ,此效应主要受 P调节。 P和 IGF- I对胚胎滋养层细胞功能的调节可能是独立进行的。