检测乳腺癌患者骨髓中CK19的表达及其临床意义

背景与目的:乳腺癌早期即可发生播散和转移,远处转移尤其骨转移是影响患者预后的主要因素之一,而骨髓微转移用常规方法又难以检测出来。本研究旨在探讨检测乳腺癌患者骨髓中CK19mRNA的表达及其临床意义。方法:应用RT鄄PCR技术,同时对照检测65例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变患者和8例健康人骨髓中的CK19mRNA表达,并分析CK19mRNA表达与临床病理因素的关系。结果:65例乳腺癌患者中,22例CK19mRNA阳性,阳性率为33.8%;乳腺良性病变患者和健康人骨髓中未检测到CK19mRNA表达。CK19mRNA表达与乳腺癌肿瘤大小和分期有关(P<0.05),与年龄和淋巴结转移状况无显著性相关(P>0.05);与外周血中CEA异常增高呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论:CK19mRNA可作为检测乳腺癌患者骨髓微转移的分子指标之一,可为乳腺癌患者的治疗和预后判断提供帮助。     

Enumeration of Circulating Tumor Cells in the Blood of Breast Cancer Patients After Filtration Enrichment: Correlation with Disease Stage

The biological and clinical significance of circulating tumor cells (CTC) in the peripheral blood of breast cancer patients is not known. To study this question, we used a direct visualization assay to correlate the number of CTC with disease stage and progression. The CTC were enriched from the nucleated cell fraction by filtration and enumerated visually following immunostaining with anti-cytokeratin 8 (CK8) antibody CAM 5.2. In mixing experiments, we achieved a limit of detection of 5 MCF7 cells per 5 ml of blood or 5 x 10(7) peripheral blood leukocytes (PBL). We did not detect CTC in any control subjects (0/20). In 131 breast cancer patients, we found a higher incidence of CTC in patients with distant metastatic 36/51 (71%) than those with node-positive 17/36 (47%) (p = 0.026), or node-negative 17/44 (39%) (p = 0.001) disease. The distribution of the highest numbers of CTC observed in individual patients by repeated sampling over time ranged from 1 to 700 per 5 ml of blood with a trend toward higher numbers in those with distant metastases. In comparison with previous studies of equal specificity, based on a similar absence of CTC in controls, we report a higher incidence of CTC in node-negative and node-positive patients, suggesting a more frequent detection of CTC by our approach. This higher incidence was achieved, in part, by repeated sampling of our study population over time. Our results support the concept that CTC can be detected and enumerated in peripheral blood and that this minimally invasive assay merits further evaluation as a potential prognostic indicator and marker of disease progression.     

宫颈癌患者外周血中CK19 mRNA和HPV16 mRNA基因的检测及其意义

目的：检测宫颈癌患者外周血标本中的组织特异性标志物(CK19 mRNA)与宫颈癌相对特异性标志物(HPV16 mRNA)的表达。方法：采用RT-PCR技术检测了Ⅰb～Ⅱb期宫颈癌患者的外周血标本30例。远处转移宫颈癌患者8例，妇科良性疾病患者16例，健康人9例：结果：30例外周血标本中3例扩增出CK19的特异性条带，检出率为10．0％(3／30)。远处转移患者CK19检出率为8／8，良性病变患者为0／16，健康者为0／9。30例宫颈癌患者中有10例患者术后宫颈癌标本的免疫组化HPV E6和(或)原位杂交为阳性，均未检测到HPV16 mRNA(0／10)；8例远处转移患者的检出率为12．5％(1／8)，妇科良性病变患者和健康者的检出率分别为0／16和0／9。结论：CK19 mRNA作为宫颈癌患者外周血的检测标志物显示了较好的敏感性和特异性。HPV16 mRNA的检出率较低，临床价值有待进一步研究。     

定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血中 CK19 mRNA表达的意义

目的:建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达的状况,并探讨其临床意义.方法:70例经病理诊断的乳腺癌患者和30名健康对照者,以实时荧光定量RT-PCR检测其外周血CK19 mRNA的表达.结果:70例乳癌患者外周血CK19 mRNA表达的阳性率为32.9%(23/70),30例对照者的阳性率为3.3%(1/30),经统计学分析,两者差异具有显著性差异(P=0.002).在不同分期的乳腺癌患者中均存在不同程度CK19 mRNA的表达,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者外周血CK19 mRNA阳性率随分期增加而增高.结论:实时荧光定量RT-PCR方法可检测出各期乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA的表达,具有较高的敏感性和特异性,提示循环肿瘤细胞可能存在于乳腺癌发展的各个阶段.     

早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

巢式RT-PCR检胃癌患者外周血循环癌细胞的研究

目的　分析胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA及CEAmRNA的异常表达及意义。方法　采用RT PCR方法检测 5 2例胃癌患者术前外周血中CK 2 0mRNA及CEAmRNA的表达。结果　胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为 42 .3 % (2 2 /5 2 )及 5 1.9% (2 7/5 2 ) ,CK 2 0mRNA和CEAmRNA两者中至少 1个基因为阳性的表达率为 63 .5 % (3 3 /5 2 )。胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA表达与胃癌的远处转移有关 ,CEAmRNA表达、CK 2 0mRNA和CEAmRNA都表达、CK 2 0mR NA和CEAmRNA两者中至少 1个表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和远处转移相关 (P <0 .0 5 )。结论　胃癌患者外周血CK 2 0和CEA的RT PCR检测有助于患者预后的判断 ;联合检测CK 2 0mRNA和CEAmRNA可增加外周血循环癌细胞检测的敏感性     

实时荧光定量RT-PCR检测肺癌、癌旁组织及外周血中CK19 mRNA的表达及临床意义

目的 探讨角蛋白CK19在肺癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表达特点及其临床意义。方法 采用实时荧光定量RT-PCR的方法对62例肺癌患者癌和癌旁组织内CK19mRNA表达进行检测，并与其对应的外周血中的CK19 mRNA表达结果进行比较。结果 62例肺癌患者的癌和癌旁组织和外周血中CK19mRNA均有表达（分别为61．2％、32．2％、40．3％），而肺癌组织中CK19mRNA水平明显高于癌旁组织，两者差异显著（P〈0．05）。外周血中CK19mRNA的表达与临床分期和病理类型无关；却与肺癌组织中CK19mRNA的高表达水平及淋巴结是否转移密切相关；健康对照组则无阳性。结论 实时荧光定量RT-PCR方法检测肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达有较高的敏感性和特异性，且操作方便，在肿瘤微转移的诊断监测方面有一定的应用价值。     

乳腺癌骨髓微转移状况与ER PR VEGF 及Cath-D等因子的关系

目的:检测乳腺癌骨髓组织CK19 mRNA的表达,判断骨髓微转移状况,探讨其与各因子的关系.方法:采用RT-PCR法(一步法)检测骨髓组织中CK19 mRNA表达;用免疫组化SP法检测乳腺癌组织中ER、PR、Cath-D、C-erbB-2及VEGF的表达.结果:102例乳腺癌患者骨髓组织CK19 mRNA表达阳性率56.9%.骨髓CK19 mRNA表达随乳腺癌组织中ER及PR蛋白表达增强而降低(P＜0.05,P＜0.01);随Cath-D、VEGF蛋白表达增强而呈增高趋势(P＜0.005,P＜0.05);但与C-erbB-2表达状况无关.结论:乳腺癌骨髓微转移与癌组织中某些生物学因子表达有关;这些因子决定癌细胞的生物学行为.     

大肠癌患者外周血中细胞角蛋白19和癌胚抗原的表达及临床意义

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested RT-PCR）技术检测大肠癌患者外周血中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达及临床意义,探讨其作为大肠癌微转移检测分子标记物的可能性。方法:应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果:大肠癌组CK19 mRNA和CEA mRNA表达的阳性率为58.89%（53/90）和53.33%（48/90）;20例健康人外周血中无CK19 mRNA和CEA mRNA的表达; 20例大肠腺瘤疾病患者有1例CK19 mRNA的表达,阳性率为5.00%（1/20）,无CEA mRNA的表达。大肠癌患者中CK19 mRNA、CEA mRNA的阳性率与肿瘤分期及肿瘤转移有显著相关性（P＜0.05)。结论:CK19 mRNA和CEA mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性,同时可作为判断大肠癌患者的预后指标。     

Assessment of highly angiogenic and disseminated in the peripheral blood disease in breast cancer patients predicts for resistance to adjuvant chemotherapy and early relapse

The assessment of tumor molecular features in combination with the detection of occult malignant cells may provide important clinical information, beyond the standard staging of breast cancer. Using a nested RT-PCR technique, we assessed prospectively the presence of cytokeratin-19 (CK19) mRNA positive cells in the blood of 100 operated patients with breast cancer before the initiation of adjuvant chemotherapy and local radiotherapy. Tissue samples were prospectively collected and analyzed for estrogen (ER) and progesterone (PgR) receptor, c-erbB-2 overexpression, mutant-p53 and bcl-2 protein accumulation, proliferation index and microvessel density (MVD). CK-19 mRNA-positive cells were detected in the peripheral blood of 33% of patients. Simultaneous display of high intratumoral MVD and of CK-19 mRNA-positive cells, which characterized highly angiogenic and disseminated in the peripheral blood (HAD) disease was noted in 25% of patients. Detection of CK-19 positive cells was significantly associated with increased MVD (p = 0.002). In univariate analysis (median follow-up 30 months) CK19 mRNA detection and MVD were the most significant factors related to a short relapse-free survival (RFS), (p < 0.0001). In multivariate analysis, CK19 positivity, high MVD and c-erbB-2 overexpression were the only significant and independent variables associated with relapse (p = 0.0005, 0.03 and 0.04, respectively). Patients with HAD had an expected relapse rate close to 70% vs. <5% in the remaining patients irrespectively of the used chemotherapy regimen. The simultaneous presence of high MVD and CK19-positive cells in the blood of patients with early breast is linked with poor prognosis, which cannot be improved with standard chemotherapy regimens.     

乳腺癌组织中E-cadherin的表达与外周血微转移的相关性及临床意义

目的检测乳腺癌组织中E-cadherin的表达及患者外周血微转移的发生,探讨二者的相互关系及临床意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测15例乳腺良性肿瘤患者及60例乳腺癌患者外周血CK-20及乳腺组织中E-cadherin mRNA的表达.结果 15例乳腺良性肿瘤组织中,均有E-cadherin阳性表达（100%）,而60例乳腺癌组织中,E-cadherin阳性表达23例（38.3%）,二者差异显著（P〈0.01）;CK-20在乳腺良性肿瘤患者外周血中未见表达.在60例乳腺癌患者外周血中,检出CK-20阳性表达28例（46.7%）,E-cadherin在相应癌组织中的阳性表达率为14.3% （4/28）,32例外周血CK-20阴性的乳腺癌病例中,E-cadherin的阳性表达率为59.3%（19/32）,二者差异显著（P〈0.01）.结论乳腺癌组织中E-cadherin的低表达与外周血高转移率显著相关,提示E-cadherin的表达缺失或低表达可能是导致乳腺癌高转移的因素之一,可作为临床判断预后的参考指标.     

腋淋巴结阴性乳腺癌临床病理特征和预后的回顾性分析

目的:分析腋窝淋巴结阴性乳腺癌的临床病理特征及预后的影响因素。方法:收集215例腋窝淋巴结阴性及225例淋巴结阳性乳腺癌患者的临床病理及预后资料,应用χ2检验进行组间比较,以logistic回归进行多因素分析。结果:单因素分析显示,两组间月经状况(P=0.04)、肿瘤大小(P<0.001)、肿瘤分级(P=0.008)、肿瘤位置(P=0.001)差异均有统计学意义。多因素分析显示,肿瘤大小和肿瘤位置是影响淋巴结阴性和阳性乳腺癌患者独立的临床病理因素。两组预后指标分析显示,阴性组有较低的复发率(P<0.001)及远处转移率(P=0.002),有较高的术后生存率(P<0.001)。其中,肿瘤大小(P<0.001)、肿瘤分级(P=0.003)、肿瘤位置(P<0.001)是影响淋巴结阴性乳腺癌患者5年无病生存的因素;肿瘤大小(P=0.012)和肿瘤位置(P<0.001)是影响淋巴结阴性乳腺癌患者5年总生存的因素。结论:淋巴结阴性乳腺癌患者有较好的预后,肿块大小、肿瘤位置是淋巴结阴性乳腺癌患者的独立临床病理因素,也是影响淋巴结阴性乳腺癌患者5年无病生存率及总生存率的预后指标。     

肺癌患者外周血CK19-mRNA的测定及其临床意义

目的：建立一种敏感的方法来检测肺癌患者外周血循环癌细胞,并探讨其临床应用的意义。方法：采用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测肺癌患者患者外周血CK19－mRNA的表达情况。结果：40例肺癌外周血标本中16例（40％）CK19－mRNA阳性,15例肺良性病变中1例＊（6．6％）阳性,5例正常人为阴性,10例有转移的肺癌患者,其外周血CK19－mRNA均为阳性（100％）,30例检测时尚我转移证据者,有6例阳性（20％）,经过半定量分析,两组CK19－mRNA在量上判别有显著性,结论：CK19－mRNA可作为一个标志物来检测肺癌患者外周血微转移,定量检测外周血CK19－mRNA有助于诊断肺癌的血行转移,定期检测外周血CK19－mRNA,尚可作为疗效的观察指标。