核转录活性测定法研究黄芪当归及单组分对肾病鼠白蛋白基因的…

目的；探讨黄芪当归的治疗机理，并试图内芪的有效组分。方法 采用核转录活性测定和分子杂交的方法了肾病综合征大鼠肝脏白蛋白的转录活性和白蛋白ｍＲＮＡ的表达水平。结果 肾病组转录活性高于对照组，而黄芪当归治疗组又高于肾病组。白蛋白ｍＲＮＡ的表达水平的变化趋势与之相吻俣。用单味黄芪或黄芪的三个单组分治疗的各组大鼠白蛋白基因转录活性及ｍＲＮＡ表达水平与肾病相比无显著差异，但在血浆白蛋白水平有显著差异，且黄芪     

黄芪当归合剂降低肾病综合征大鼠血脂机制的探讨

目的　探讨黄芪当归合剂降低肾病综合征（ＮＳ）大鼠血脂的机制。方法　采用加速型肾毒血清肾炎致ＮＳ模型。治疗组灌服黄芪当归合剂,正常组和肾病对照组灌水。检测各组血清脂谱,以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交检测肝脏羧甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧＣｏＡ） 还原酶和低密度脂蛋白受体（ＬＤＬＲ）ｍＲＮＡ表达。结果　肾病大鼠呈高脂蛋白血症,该组肝脏ＨＭＧＣｏＡ还原酶的ｍＲＮＡ在早期呈短暂上调（ Ｐ ＜ ０－００１） ,ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达随病程逐渐下调（ Ｐ ＜ ０－００１）;黄芪当归治疗组,血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白低于肾病对照组,虽肝脏ＨＭＧＣｏＡ 还原酶ｍＲＮＡ 无明显变化,但ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ表达较肾病对照组显著上调（ Ｐ＜ ０－０１） 。结论　黄芪当归组显著降低ＮＳ大鼠血脂水平,这一改善脂代谢紊乱的作用可能部份是通过肝脏ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达上调而实现。     

黄芪菟箭合剂对糖尿病大鼠肾脏PI3K-Akt-mTOR信号通路的影响

目的:观察中药黄芪菟箭合剂对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏PI3K-Akt-m TOR信号通路的影响,并与雷帕霉素的作用进行比较。方法:糖尿病大鼠分为糖尿病对照组(DM组)、黄芪菟箭合剂治疗组(CM组)、雷帕霉素治疗组(RAPA组),并设正常大鼠对照组(CON组),分别给予不同治疗,12周后用ELISA法检测大鼠的尿白蛋白排泄率,免疫组化法观察肾小球ZO-1、nephrin蛋白表达;Western-blot法检测肾脏磷酸化Akt(Thr308)、磷酸化PTEN、磷酸化S6K的蛋白表达;应用qRT-PCR检测肾脏Akt、PTEN、S6K的mRNA表达。结果:CM组与RAPA组大鼠尿微量白蛋白排泄率均显著低于DM组,ZO-1、nephrin阳性表达显著高于DM组,且CM组与RAPA组之间无显著差别;CM组与RAPA组肾脏磷酸化S6K蛋白表达、S6KmRNA表达均显著低于DM组;CM组磷酸化PTEN蛋白及PTEN mRNA表达显著高于DM组,磷酸化Akt(Thr308)蛋白、Akt mRNA则低于DM组;但RAPA组磷酸化PTEN蛋白及PTEN mRNA表达以及磷酸化Akt(Thr308)蛋白、Akt mRNA表达与DM差异无统计学意义,RAPA组体重显著低于DM组及CM组、死亡率显著高于DM组及CM组。结论:雷帕霉素和黄芪菟箭合剂都可以有效地保护STZ诱导的糖尿病大鼠足细胞的完整性、减少尿微量白蛋白排泄率,但雷帕霉素存在显著毒副作用。     

黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织COX-2和NF-κB表达的影响

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）和核转录因子κB（NF-κB）在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及黄芪对其的影响。方法：将大鼠分成正常对照组、糖尿病肾病组、黄芪干预组。12周周末检测血肌酐、尿素氮、尿蛋白定量;应用免疫组化、Western印迹和聚合酶链式反应方法分别检测大鼠肾组织COX-2和NF-κB的表达。结果：与正常对照组相比,糖尿病肾病组大鼠COX-2和NF-κB的基因及蛋白表达升高（均P〈0.01）。黄芪干预组大鼠肾组织COX-2和NF-κB的基因及蛋白表达较糖尿病肾病组下调（均P〈0.01）。结论：COX-2参与了糖尿病肾病发生发展的病理过程,黄芪治疗糖尿病肾病的作用机制之一是通过下调COX-2的表达从而发挥肾脏保护作用。     

防己黄芪汤加减干预对阿霉素肾病大鼠肾组织MCP-1表达的影响

目的：观察探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在阿霉素肾病（AIN）大鼠的作用机制及防己黄芪汤加减对其表达的影响。方法：SD雄性大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、防己黄芪汤＋雷公藤组（A组）及防己黄芪汤-甘草＋雷公藤组（B组）。造模予阿霉素（ADR）6.5mg/kg一次性尾静脉注射,正常对照予等量生理盐水尾静脉注射,注射后2周24h尿蛋白〉100mg为肾病模型成立。治疗A、B组分别予防己黄芪汤＋雷公藤及防己黄芪汤-甘草＋雷公藤灌胃,正常组与模型组予等量生理盐水灌胃。于第1、2、8周测24h尿蛋白定量,实验4、8周时留血,取肾,检测血生化,观察肾组织病理改变,测肾组织中MCP-1表达水平。结果：1）素造模后2周,各造模组24h尿蛋白定量均高于正常对照组（P〈0.05）,说明阿霉素单次尾静脉注射6.5mg/kg可成功制备MCNS模型;2）免疫组化和RT-PCR检测MCP-1表达情况,模型组与正常对照组比较MCP-1明显上调,两个中药治疗组与模型对照组比较MCP-1表达下调,A、B组之间比较MCP-1表达差异无统计学意义。结论：1）阿霉素肾病大鼠存在MCP-1mRNA转录和蛋白水平的异常,MCP-1表达的增加可能是阿霉素肾病蛋白尿产生的重要因素之一;2）本研究中去除组方中的甘草对防己黄芪汤加减疗效无明显影响;3）临床上应用防己黄芪汤加减治疗慢性肾病可能是通过降低蛋白尿、改善肾病理、抑制MCP-1的表达而发挥肾保护作用。     

黄芪当归合剂对肾病综合征鼠肾转化生长因子β1的影响

目的探讨黄芪当归合剂降脂及减少肾小球细胞外基质沉积的作用是否与肾脏转化生长因子（ＴＧＦ）β１表达的改变有关。方法用嘌呤霉素致肾病综合征大鼠，随机分肾病对照、中药、西药治疗三组。用免疫组化及原位杂交观察肾脏ＴＧＦβ１表达及细胞外基质（ＥＣＭ）沉积。以计算机图象分析进行半定量比较。结果正常组，可见ＴＧＦβ１蛋白及ｍＲＮＡ于肾小管上皮细胞微弱表达，肾小球系膜区ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ弱表达。其余各组ＴＧＦβ１蛋白表达位于肾小管上皮细胞，ｍＲＮＡ表达位于肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞，而后者表达更明显。两治疗组ＴＧＦβ１表达较肾病组明显降低（Ｐ＜０．００１），两治疗组间比较，无显著性差异。两治疗组细胞外基质沉积均明显少于肾病对照组。结论黄芪当归合剂及ＨＭＧＣｏＡ还原酶抑制剂对肾病综合征鼠能明显减少肾小球细胞外基质沉积，同时使ＴＧＦβ１表达的下调。提示黄芪当归合剂可能通过这一下调作用减少肾小球细胞外基质的沉积     

黄芪对阿霉素肾病大鼠的足细胞影响实验研究

目的：动态观察阿霉素肾病大鼠的蛋白尿、血清白蛋白及足细胞足突的变化;观察单味中药黄芪、泼尼松及两者联合应用对阿霉素肾病大鼠的蛋白尿、血清白蛋白及足细胞足突的影响。方法：单次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,在14d、28d、56d时检测每组大鼠的24h尿蛋白、血清白蛋白、血脂的水平;同时各组处死2只大鼠留取肾脏标本,应用透射电镜观察各组大鼠各时间点的足细胞足突的变化。结果：（1）各肾病大鼠从14d开始24h尿蛋白显著高于对照组（P〈0．01）,24h尿蛋白持续增高,但到56d时尿蛋白有所下降,与此同时,血清白蛋白降低。（2）透射电镜显示14d时肾病组足突不同程度变宽,28d时足突弥漫性融合,56d时足突融合有所减轻。（3）与肾病组相比,到56d时黄芪组尿蛋白较对照组减少且足突融合较肾病组改善明显,血清白蛋白较肾病组升高（P〈0．05）。（4）到56d时,与其他各肾病组相比,泼尼松加黄芪组尿蛋白最少（P〈0．01）,电镜显示足突病变改善最明显。结论：中药黄芪能减少阿霉素肾病大鼠的尿蛋白、改善蛋白质代谢及减轻足细胞损害;黄芪与泼尼松合用能更好地减轻尿蛋白,升高血清白蛋白,减轻足细胞和足突的病变。     

重楼对膜性肾病大鼠肾脏核转录因子-κB活化及Ⅳ型胶原表达的影响

目的：探讨重楼对膜性肾病（membranous nephropathy,MN）大鼠肾脏核转录因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）活性及Ⅳ型胶原表达的影响。方法：采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）复制大鼠MN模型。随机分为模型对照组、重楼治疗组、雷公藤多苷治疗组（阳性对照组）及正常对照组。应用免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织内NF-κBp65及Ⅳ型胶原（ColⅣ）的表达水平;应用RT-PCR法检测各组大鼠肾组织NF-κB mRNA水平。结果：与模型组相比,重楼能明显抑制肾小球NF-κB活化（P〈0.05）及ColⅣ分泌（P〈0.01）;两治疗组的NF-κB的mRNA表达明显低于模型组（P〈0.05）。以上指标两治疗组间无统计学差异。结论：NF-κB的活化参与了MN的肾小球的病理损害过程,重楼对MN大鼠肾脏的保护作用可能与其抑制NF-κB活化有关。     

红曲提取物对肾病综合征血清脂谱和肾小球硬化的影响

目的:探讨红曲提取物对肾病综合征(NS)大鼠降血脂的肾脏保护作用。方法:采用嘌呤霉素引起的NS模型。实验分正常组、肾病组和治疗组(红曲提取物0.8g·kg~(-1)·d~(-1))。检测各组血清脂谱,以Northern杂交检测肾脏转化生长因子β(TGF-β)纤维连接蛋白(FN)mRNA表达。结果:肾病大鼠呈高脂蛋白血症,该组肾脏TGF-β和FNmRNA表达较正常对照组和治疗组均明显上调(P<0.01,~#P<0.01);红曲提取物治疗组,血清总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白,低密度脂蛋白和载脂蛋白B低于肾病对照组,而高密度脂蛋白和载脂蛋白A_1高于肾病组(~#P<0.05),同时治疗组较肾病组血浆白蛋白升高,尿蛋白减少。结论:红曲提取物能显著降低NS大鼠血脂水平,减轻蛋白尿,升高血浆白蛋白。并通过下调肾脏TGF-β和FNmRNA的表达防止和减轻肾小球硬化。     

益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达的影响

目的:观察益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达的影响,为临床治疗膜性肾病(MN)提供依据。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、中药组,各组按相应剂量灌胃,于第4周末观察24 h尿蛋白定量(UTP)、血清总蛋白(TP)、血白蛋白(Alb)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),留取肾脏组织,用免疫荧光、光镜、电镜来观察大鼠肾组织病理变化,Real-time PCR法测Nephrin、Podocin mRNA在肾脏中的表达情况。结果:与正常组相比,其余三组TP、Alb均明显降低而TC、TG、UTP均明显升高,肾脏病理出现损害,肾组织中Nephrin、Podocin mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组相比,治疗组UTP、TC、TG均明显降低,TP、Alb均明显升高,肾脏病理损害较轻,肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达有所升高(P0.05)。贝那普利组与中药组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:益肾通络方可明显降低膜性肾病大鼠的尿蛋白、升高血白蛋白水平、改善血脂代谢,对膜性肾病大鼠肾小球基底膜免疫复合物的沉积及基底膜的增厚有抑制作用,可减少肾脏病理损伤,能够上调膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA的表达,延缓膜性肾病进一步发展。