高糖和甲基乙二醛对人脐静脉内皮细胞Ang-Tie2信号链表达的影响

目的 观察高浓度葡萄糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成素2(Ang2)和酪氨酸激酶2受体(Tie2)表达的影响,探讨腹膜透析患者腹膜血管新生的可能机制.方法 分别以4.25%葡萄糖(高糖组)、4.25%甘露醇(甘露醇组)和800 μmol/L葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)(MGO组)对体外培养的HUVECs进行干预,设立空白对照组.以MTT比色法测定的D(490 nm)比较各组HUVECs干预后12、24、48 h时点的细胞增殖情况;分别采用Real-Time PCR技术、ELISA法和Western blotting法检测各组HUVECs中Ang2和Tie2 mRNA表达、细胞培养上清液中Ang2分泌量及HUVECs中Tie2蛋白的表达.结果 高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs干预后12 h时点的D(490 nm)均明显高于空白对照组(P＜0.05),干预后24 b时点的D(490 nm)则显著低于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组比较,高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs中Ang2 mRNA表达均明显上调,高糖组和甘露醇组细胞培养上清液中Ang2分泌量均显著增加(P＜0.05),MGO组细胞培养上清液中Ang2分泌量则明显减少(P＜0.05).高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs中Tie2 mRNA和蛋白表达均显著低于空白对照组(P＜0.05).结论 透析液中的高浓度葡萄糖可能通过刺激内皮细胞增殖和上调Ang2表达而促进腹膜血管新生;葡萄糖具有独立于其高渗透压之外的促血管新生作用.     

Tie-2在人脐静脉内皮细胞中的表达及意义

目的 探讨酪氨酸激酶受体-2(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidemal growth factor homology domains,Tie-2)基因在人脐静脉内皮细胞株ECV304中的表达,为进一步研究Tie-2在肿瘤血管生成中的作用提供实验基础.方法 传代人脐静脉内皮细胞进行培养和形态学观察,采用免疫组化(SABC法、DAB显色)对人脐静脉内皮细胞株ECV304中的Tie-2基因的蛋白表达情况进行检测.结果 相差显微镜下,培养的活细胞具有单层"卵石样"排列的典型特征,SABC法检测到Tie-2蛋白在人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞膜、细胞浆和核膜中均呈深棕色颗粒.结论 Tie-2在ECV304细胞株中呈强阳性表达.     

Tie2在人脐静脉内皮细胞中的表达及意义﹡

[摘要] 目的 探讨酪氨酸激酶受体-2(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains,Tie-2)基因在人脐静脉内皮细胞株ECV304中的表达,为进一步研究Tie-2在肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。方法 传代人脐静脉内皮细胞进行培养和形态学观察,采用免疫组化(SABC法、DAB显色)对人脐静脉内皮细胞株ECV304中的Tie-2基因的蛋白表达情况进行检测。 结果 相差显微镜下,培养的活细胞具有单层"卵石样"排列的典型特征,SABC法检测到Tie-2蛋白在人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞膜、细胞浆和核膜中均呈深棕色颗粒。 结论 Tie-2在ECV304细胞株中呈强阳性表达.     

高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中血管生成素2及酪氨酸激酶受体表达的研究

目的研究高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中血管生成素2(Ang-2)及酪氨酸激酶(Tie-2)受体表达。方法高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。将30只小鼠分为2组:正常组;高氧组。视网膜切片HE染色,计数各组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数,并加以比较。于鼠龄17d取各组小鼠视网膜及前增生的血管膜,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量测定Ang-2及Tie-2受体mRNA的表达。结果吸入高氧鼠每只眼均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞,发生率为100%。高氧组Ang-2及Tie-2受体mRNA表达分别为对照组的3.7倍(P<0.05)、4.1倍(P<0.05)。结论血管抑素能有效抑制高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成,但并不影响VEGF的合成和分泌,其抗血管新生作用可能为抑制VEGF功能发挥。     

三羟异黄酮对脐静脉内皮细胞ECV304增殖影响与VEGFR的关系

目的探讨三羟异黄酮(genistein)抗肿瘤血管生成的机制.方法通过绘制生长曲线和流式细胞仪检测三羟异黄酮和血管内皮生长因子(vaScular endothelial growth factor,VEGF)对脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,应用免疫沉淀和激酶活性分析方法检测ECV304细胞血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growthfactor receptor,VEGFR)磷酸化水平和蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性.结果VEGF单独处理能使ECV304细胞增殖,VEGFR磷酸化水平和PTK活性升高,而三羟异黄酮单独处理能抑制ECV304细胞生长,细胞周期主要被阻止在G2/M期,并出现细胞凋亡现象,VEGFR磷酸化水平和PTK活性降低(P＜0.01),三羟异黄酮和VEGF同时处理时,细胞周期主要仍被阻止在G2/M期,但凋亡率下降,VEGFR磷酸化水平和PTK活性与VEGF单独处理组相比降低.结论三羟异黄酮能下调ECV304细胞VEGFR的磷酸化水平及PTK活性,从而阻断胞外生长刺激信号向胞内转导的级联反应,阻遏血管内皮细胞生长,抑制肿瘤血管生成.     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。     

芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的影响

目的研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附分子表达的影响。方法采用血清药理学方法,制备芎芍胶囊含药血清体干预体外培养的HUVEC,MTT实验检测其对HUVEC增殖的影响,采用RT-PCR和ELISA法测定HUVEC黏附分子VCAM-1、ICAM-1、ICAM-3、E选择素的表达水平。结果芎芍胶囊含药血清的低、中、高剂量组细胞的OD值明显高于空白血清组,同时含药血清组VCAM-1、ICAM-1、E选择素的表达和分泌水平也显著提高,而ICAM-3则无明显变化。结论芎芍胶囊对黏附分子(VCAM-1、ICAM-1、E选择素)的表达有调节作用,可能是其促血管新生的重要作用机制之一。     

Delta样分子4/Notch信号途径对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的 特异性阻断Delta样分子4(Dll)4/Notch信号途径,观察其对细胞生物学行为的影响.方法 将自行构建的含短发夹样结构介导RNA干扰(RNAi)抑制Dll4基因表达的重组腺相关病毒(rAAV)载体(rAAV-Dll4-shRNA)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以空病毒载体rAAV感染[HUVEC(-)组]及未转染细胞HUVEC(HUVEC组)为对照.半定量逆转录(RT)-PCR,Western印迹分别检测HUVEC细胞Dll4 mRNA和蛋白的改变;流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率,采用基质胶三维培养系统观测HUVEC体外血管形成能力的变化.结果 HUVEC(+)组和对照组[HUVEC组、HUVEC(-)组]Dll4 mRNA表达与内对照GAPDH的比值分别为0.636±0.082、0.972±0.022和0.948±0.046(P=0.024),Dll4蛋白表达与内对照B-肌动蛋白的比值分别为0.632±0.052、2.016±0.048和1.946±0.066(P=0.033).rAAV-Dll4-shRNA转染HUVEC后,HUVEC(+)组及HUVEC组增殖指数分别为(39.9±2.2)%、(25.7±4.5)%(P=0.036).HUVEC在基质胶中形成小管样结构72 h时HUVEC(+)组与对照组[HUVEC组、HUVEC(-)组]细胞长度分别为(12.5±0.5,8.7±7.7,8.5±3.0,P=0.028).结论 Dll4/Notch信号途径对HUVEC生长、增殖、小管样结构形成能力发挥负性调控作用,特异性阻断Dll4/Notch信号途径将为进一步深入研究肿瘤新生血管生成、分化、成熟过程中提供新的思路和方法.     

Tie2--一种新的酪氨酸激酶受体对肿瘤血管形成的影响

目的　研究一种新的酪氨酸激酶受体Tie2对肿瘤血管形成的影响。方法　采用Fischer大鼠 38只 ,分为实验组和对照组。分别用ExTek·6His液和对照液处理大鼠背部皮肤窗室内移植生长的肿瘤。①应用免疫组化技术观察Tie2在肿瘤血管中的表达。②于移植后第 5、7、10d分别测量肿瘤的生长体积。结果　①免疫组化显示Tie2的表达在肿瘤移植后 5d出现在血管周围 ,并渗入到肿瘤移植物内。②实验组肿瘤生长体积比对照组减少 75 %。结论　Tie2参与了肿瘤的血管形成。     

VEGF、Ang-2在腹膜透析大鼠腹膜组织中的表达

目的实验通过建立尿毒症大鼠模型并予长期腹膜透析,观察其腹膜血管新生及结构变化。方法sD雄性大鼠50只,随机分为C组（对照组）、尿毒症生理盐水组（NS组）及尿毒症腹透液组（PD组）。C组不予干预,NS组每日予20rnl生理盐水腹腔灌注,PD组每日子20ml 4．25％百特腹透液灌注,持续6周后观察各组大鼠腹膜结构变化。结果实验表明PD组相对另两组新生血管数显著增多,Ns组新生血管数较C组增多（P均〈0．05）。免疫组化示血管内皮生长因子及血管生成素2阳性细胞数PD组相对其他两组明显增加,NS组较C组亦有增加（P均〈0．05）。lit-PCR示PD组VEGF和Ang-2mRNA表达较Ns组和C组明显上调,而NS组高于C组（P均〈0．05）。结论尿毒症本身以及非生物相容性腹透液均会诱发腹膜血管新生,最终导致腹膜超滤衰竭。     

高糖对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶及细胞周期的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖作用于脐静脉内皮细胞后,对脐静脉血管内皮细胞系的基质金属蛋白酶(MMP-2)表达、超微结构及细胞周期的影响,为阐明高血糖在糖尿病血管病变、糖尿病视网膜病变的早期发病中作用与机制提供依据.方法:在高浓度葡萄糖条件下培养人脐静脉内皮细胞,采用RT-PCR、Western-blot法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)mRNA和蛋白表达情况、电镜观察超微结构及流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:高浓度葡萄糖可使内皮细胞MMP-2表达增加、细胞增生活跃,细胞出现肿胀,体积增大,细胞质溶解、核溶解,异染色质边集,内质网扩张,出现固缩线粒体、环形线粒体,髓样结构等改变.结论:高糖诱导的MMP-2mRNA和蛋白表达增加,可能在糖尿病视网膜病变的早期发病中起重要作用.     

Ang1、Ang2及Tie2在脐静脉内皮细胞的体外三维培养中的表达及意义

目的 探讨促血管生成素1、2及其受体(Ang1、Ang2及Tie2)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外三维培养的血管生成中的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测10例体内HVUECs、体外二维培养的HVUECs和三维培养的血管样结构中Ang1、Ang2及Tie2的mRNA表达水平.结果 体外三维培养的血管样结构中Ang2、Tie2的mRNA表达水平均高于体内HVUECs和体外二维培养的HVUECs,差异有显著性(P<0.05);各组中Ang1的mRNA表达水平相比差异无显著性(P>0.05).结论 Ang/Tie2体系在体外血管生成中可能起重要的作用.     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

透出液中白介素6和血管生成素受体Tie-2水平与腹膜溶质高转运的关系

目的 探讨腹膜透析(腹透)患者透出液中白介素6(IL-6)和血管生成素受体Tie-2水平与腹膜高通透性的关系.方法 将60例稳定的持续性非卧床性腹膜透析(CAPD)患者,根据腹膜平衡试验中4h透出液肌酐与血浆肌酐的比值(D/Pcr)分为L/A组(D/Pcr ＜0.65,n=39)和H/A组(D/Pcr≥0.65,n=21).采用ELISA法检测两组患者透出液中IL-6和Tie-2的质量浓度,分析IL-6和Tie-2水平与D/Pcr的相关性.结果 H/A组患者透出液中IL-6和Tie-2的质量浓度分别为(21.71±8.88)pg/mL和(1.23±0 43) ng/mL,均显著高于L/A组患者的(13.94±5.43) pg/mL和(0.95±0.43) ng/mL(P＜ 0.05).单因素相关分析结果显示:透出液中IL-6和Tie-2水平均与D/Pcr呈正相关(r=0.366,P =0.004;r =0.402,P =0.001);多元逐步回归分析结果显示:透出液中IL-6和Tie-2水平是影响D/Pcr的独立危险因素(β=0.007,P=0.026;β=0.162,P=0.006).结论 腹膜高转运的CAPD患者存在较明显的腹腔局部炎症和血管新生.透出液中IL-6和Tie-2水平是影响腹膜通透性的独立危险因素,提示腹腔局部炎症和血管新生与腹膜通透性的改变有关.     

血管生成素-2及其受体Tie2在食管鳞癌中的表达及与血管生成关系的研究

目的 探讨血管生成素-2(angiopoietin-2)及其受体Tie2在食管鳞癌组织中的表达规律及其在肿瘤组织发生、发展以及血管生成中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P染色法检测39例食管鳞癌组织中Ang-2、Tie2及CD34的蛋白表达,根据CD34染色结果计数微血管密度(microvessel density,MVD).结果 Ang-2及其受体Tie2的蛋白表达定位于肿瘤细胞或血管内皮细胞质及胞膜,呈异质性分布;39例食管癌中Ang-2和Tie2阳性表达率均为74.36%;且均与食管癌的分化程度、淋巴结转移密切的关系(P＜0.05);Ang-2及Tie2蛋白阳性表达者的MVD分别为(42.14±5.19)和(42.31±5.06),显著高于相应的食管癌组织Ang-2和Tie2阴性病例(MVD分别为33.7±3.34和33.2±2.35)(P＜0.01).结论 Ang-2/Tie2在食管鳞癌发生、演进过程中起着重要作用,并与肿瘤血管生成关系密切.     

左旋肉碱对高糖条件下人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白分泌的影响

目的：探讨左旋肉碱对高糖条件下体外培养人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白（FN）分泌的影响。方法：以不同浓度左旋肉碱作用体外培养人腹膜间皮细胞，MTT法测定细胞增殖，Annexin V-FITC／PI双标记法检测细胞凋亡，ELISA法检测培养液中FN浓度。结果：不同浓度左旋肉碱作用24h后，0．1％左旋肉碱组细胞增殖活性显著升高（P〈0．05），作用72h后0．5％及1．0％左旋肉碱组细胞增殖活性明显降低（P〈0．05）。作用48及72h后0．05％及0．1％左旋肉碱组细胞凋亡率降低。作用24h后0．05％左旋肉碱组培养液中FN浓度升高（P〈0．05），作用72h后左旋肉碱组培养液中FN浓度均下降（P〈0．01）。结论：高糖条件下一定浓度的左旋肉碱可以促进人腹膜间皮细胞增殖、减少其凋亡。     

氯沙坦对高糖培养的人系膜细胞血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:探讨氯沙坦对高糖培养的系膜细胞产生活性氧和血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:体外培养人系膜细胞,用高糖、氯沙坦干预不同时间后,应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力,丙二醛(MDA)的水平。用RT鄄PCR法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。结果:与正常对照组相比,高糖组SOD、CAT的活力明显降低,而MDA含量明显升高,VEGFmRNA表达升高。与高糖组相比,高糖加氯沙坦组的SOD、CAT的活力升高,MDA水平下降,VEGFmRNA表达上调。结论:氯沙坦能抑制高糖所致细胞活性氧的产生和VEGF的表达,从而抑制细胞通透性升高,降低蛋白尿,发挥其肾保护作用。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的探讨高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法体外培养兔视网膜Müller细胞，采用免疫细胞化学方法半定量检测不同浓度葡萄糖对视网膜Müller细胞表达VEGF的影响。结果高糖可以明显增加Müller细胞VEGF的表达，且具有一定的浓度依赖性。结论高糖促进体外培养兔视网膜Müller细胞VEGF的表达，提示高血糖作为糖尿病视网膜病变（DR）的始动因素，其可能机制之一为诱导Müller细胞VEGF的表达。