星形细胞上调基因-1的研究进展

星形细胞上调基因-1(AEG-1)在多种恶性肿瘤中显著高表达,在肿瘤的发生、增殖、血管生成、抗凋亡、侵袭转移及抗药性等多方面发挥重要作用,还参与炎性反应和自然免疫过程。研究表明AEG-1与PI3K/Akt、NF-κB、Wnt/β-catenin等多种信号通路相关,同时参与RNA诱导沉默复合体介导的基因沉默。因此,AEG-1有望成为肿瘤靶向治疗的新靶点。     

胃癌组织中AEG-1、Cyclin D1的表达及其意义

目的 观察胃癌组织中星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)、Cyclin D1的表达,分析二者表达与胃癌侵袭、转移的关系.方法 应用免疫组化EnVision法检测110例胃癌组织中AEG-1和Cyclin D1的表达,并复习相关文献.结果 AEG-1在胃癌组织中的阳性率为69.1％,AEG-1表达与癌组织Lauren分型、淋巴结转移、浸润深度和pTNM分期密切相关(P＜0.05),与患者性别、年龄、发生部位和肿瘤大小无关(P ＞0.05);Cyclin D1在胃癌组织中的阳性率为57.3％,Cyclin D1表达与癌组织浸润深度、淋巴结转移和pTNM分期有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、发生部位、肿瘤大小和Lauren分型无关(P＞0.05).相关性分析显示,胃癌组织中AEG-1与Cyclin D1的表达呈正相关(P＜0.05).结论 AEG-1可能通过上调Cy-clin D1的表达而促进胃癌细胞的侵袭、转移.AEG-1可能作为胃癌治疗的一种潜在分子靶点.     

AEG-1表达下调对人宫颈癌细胞细胞周期和侵袭能力的影响及其机制

 目的：研究星形细胞上调基因1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在人宫颈鳞癌细胞和组织中的表达,探讨AEG-1表达下调对宫颈癌SiHa细胞细胞周期和侵袭能力的影响,并分析其可能的分子机制。方法：采用Western blotting检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、HeLa、SiHa和CaSki细胞中AEG-1蛋白的表达。将对照siRNA和AEG-1 siRNA分别转染SiHa细胞,利用Western blotting检测SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,采用Boyden小室检测细胞侵袭能力的变化,最后采用Western blotting检测cyclin D1、细胞周期素依赖性激酶 2（CDK2）和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果：宫颈鳞癌组织中AEG-1蛋白表达显著高于正常宫颈组织（P<0.05）,同时3株宫颈癌细胞中AEG-1蛋白表达均显著高于正常宫颈组织,其中SiHa细胞中AEG-1蛋白表达最高（P<0.05）。此外,AEG-1 siRNA能显著下调SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达（P<0.05）,其表达下调能明显促使SiHa细胞在G0/G1期的比例增加和降低其侵袭能力。Western blotting结果表明,AEG-1 siRNA组中cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组（P<0.05）。结论：AEG-1在宫颈癌中的高表达可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的细胞周期静止和侵袭能力降低可能与cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白表达下调密切相关。     

甲状腺乳头状癌中AEG-1、Livin的表达及临床意义

目的检测星形细胞上调基因-1 (astrocyte elecated gene-1,AEG-1)和凋亡抑制蛋白(Livin)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其相关性,为甲状腺乳头状癌提供新的诊断参考指标和治疗靶向位点。方法采用免疫组化SP法检测92例甲状腺乳头状癌组织、45例结节性甲状腺肿组织及60例同期手术的癌旁正常甲状腺组织中AEG-1和Livin的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。结果AEG-1与Livin在甲状腺乳头状癌组织中的阳性率显著高于结节性甲状腺肿与癌旁正常甲状腺组织(P 0. 05),但两者在结节性甲状腺肿组织与癌旁正常甲状腺组织中的表达,差异无显著性(P 0. 05)。AEG-1蛋白表达水平与患者肿瘤的临床分期、淋巴结转移、腺外侵犯均密切相关(P 0. 05);Livin蛋白表达水平与患者肿瘤的临床分期、淋巴结转移、TG-Ab值、TPO-Ab值有相关性(P 0. 05)。甲状腺乳头状癌组织中AEG-1与Livin蛋白表达水平呈显著的正相关(rs=0. 673,P 0. 001)。结论 AEG-1、Livin与甲状腺乳头状癌的侵袭和转移关系密切,在临床中联合检测两者将更有利于甲状腺乳头状癌的早期诊断和判断患者的预后,有望为靶向治疗提供新的靶点。     

AEG-1 基因在NSCLC 中的表达及其临床病理意义

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中星型胶质细胞上调基因1(AEG-1)的表达及其临床意义。方法:选取本院心胸外科手术切除治疗的83 例NSCLC 患者的术后癌组织标本及20 例癌旁组织标本进行研究,采用免疫组化染色法检测两组AEG-1 蛋白的表达水平,并分析AEG-1 蛋白与NSCLC 患者的临床病理学关系。结果:AEG-1 NSCLC 组织中的AEG-1 蛋白高表达46 例(55.42%)显著高于癌旁组织的2 例(10.00%)(P<0.05);NSCLC 组织中的AEG-1 蛋白高表达与患者的T分期、N 分期及发生远处转移具有显著的相关性(P<0.05),与患者年龄、性别、分化程度关系不显著(P>0.05)。AEG-1 高表达NSCLC 患者的中位生存时间15.0 个月显著低于AEG-1 低表达患者的19.0 个月(log-rank 2 =4.19,P<0.05)。结论:NSCLC组织中AEG-1 基因表达上调,并且与患者的临床分期及远处转移有关。     

子宫内膜癌中AEG-1的表达及临床意义

目的研究星形酸质细胞升高基因(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在子宫内膜癌组织中的表达及其与相关临床病理因素的关系。方法结合组织芯片和免疫组化技术检测45例子宫内膜癌组织中AEG-1蛋白表达情况。结果子宫内膜癌组织芯片中AEG-1蛋白表达阳性率为68.9%。AEG-1高表达与子宫内膜癌肿瘤肌层浸润深度和淋巴结转移呈明显正相关(P0.05)。结论 AEG-1在子宫内膜癌的进展中起着重要作用,可能成为评判子宫内膜癌预后的有效靶点。     

siRNA下调astrocyteelevatedgene-1对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的: 探讨siRNA下调astrocyte elevated gene-1( AEG-1 )表达对神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法: 用设计合成的AEG-1 siRNA转染神经母细胞瘤细胞株M17和SK-N-SH,采用荧光定量RT-PCR技术观察AEG-1 siRNA对 AEG-1 基因表达的影响;用MTT法和克隆形成实验观察AEG-1 siRNA对神经母细胞瘤细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测下调 AEG-1 表达对神经母细胞瘤细胞凋亡及细胞周期的影响。结果: 用AEG-1 siRNA转染人神经母细胞瘤细胞,RT-PCR结果证实AEG-1 siRNA能显著基因下调 AEG-1 表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01);MTT法和克隆形成实验结果证明下调 AEG-1 表达可显著抑制神经母细胞瘤细胞的增殖;流式细胞术检测结果表明下调 AEG-1 表达可促进神经母细胞瘤细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G₀/G₁期。结论: AEG-1 siRNA可下调基因在神经母细胞瘤细胞中表达,并抑制神经母细胞瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。     

大肠腺癌和腺瘤AEG-1基因的表达及意义

目的探讨AEG-1在大肠癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化的方法检测60例正常大肠粘膜、22例大肠腺瘤和60例大肠腺癌中AEG-1的表达。结果大肠腺癌和腺瘤中AEG-1的阳性率分别为91.7%和90.9%,明显高于正常大肠粘膜组织的23.3%,两者之间差异有统计学意义（P〈0.001）,其中大肠腺癌的中度阳性率和强阳性率分别为31.7%和60%,而大肠腺瘤分别为63.6%和27.3%,两者差异具有统计学意义（P=0.019）;对大肠腺癌中AEG-1表达与肿瘤临床病理特征做相关性分析,结果表明,AEG-1表达强度与肿瘤T、N分期显著正相关（P〈0.05）。结论 AEG-1在大肠癌和大肠腺瘤中表达增强,在大肠腺瘤恶变、大肠癌发生发展过程中发挥重要作用,可作为诊断大肠癌新的生物标记物。     

AEG-1、β-catenin和C-myc在原发性肝细胞癌中的临床特性与分析

目的 了解AEG-1、β-catenin和C-myc在原发性肝细胞癌中的临床特性并进行分析.方法 以40例原发性肝癌患者术后肝癌组织作为研究对象;采集肝癌患者的临床及病理学特征,采用免疫组织化学染色及Western Blot方法测定肝癌组织中的AEG-1、β-catenin及C-myc蛋白细胞表达水平及表达载量,分析其表达情况与患者临床及病理特征的关联性.结果 AEG-1在肝癌组织的高表达率为72.5％,以AOD值记分为0.80±0.07,Western Blot测出相对表达量为1.56±0.12;β-catenin蛋白在肝癌组织中高表达率为75.0％,以AOD值记为0.75±0.06,Western Blot测出相对表达量为1.23±0.11;C-myc的高表达率为62.5％,以AOD值记为0.69±0.06、Western Blot测出相对表达量为1.15 ±0.09.AEG-1、β-catenin和C-myc蛋白在肝癌组织中的表达与肿瘤TNM分期和肝癌组织病理分化程度有关(P＜0.05),差异有统计学意义;与患者的性别、年龄、肿瘤大小、HBsAg、术前AFP浓度均无明显相关(P＞0.05),差异无统计学意义.结论 AEG-1、β-catenin和C-myc有望成为评价原发性肝癌恶性程度的指导性指标,进而可以用于评估病程进展及预后;AEG-1、β-catenin和C-myc蛋白在原发性肝癌起病过程中的作用途径独立于AFP系统,为进一步研究原发性肝癌的发病机制提供了新的思路.     

mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨

目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。     

小鼠抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆抗体的制备及应用

目的制备并纯化具有高特异性的抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆抗体(mAb),并进行异硫氰酸荧光素(FITC)标记,鉴定标记的mAb与肿瘤细胞的结合能力。方法小鼠腹水诱生法制备并纯化抗AEG-1 mAb,Western blot法和免疫组织化学染色检测mAb的纯度及免疫活性。流式细胞术检测FITC标记mAb的标记效率,流式细胞术及免疫细胞化学染色检测FITC标记mAb与肿瘤细胞的结合能力。结果纯化得到了具有较高纯度的抗AEG-1 mAb,免疫活性良好;流式细胞术检测结果显示,FITC标记的mAb标记的肿瘤细胞表面荧光强度明显增加,标记率可达到90%以上;FITC标记的mAb可特异性识别并结合AEG-1阳性表达的肿瘤细胞,还能与小鼠体内注射的肿瘤细胞结合,在BALB/c小鼠血液中可检测出荧光染色阳性的肿瘤细胞。结论成功制备出小鼠抗AEG-1 mAb并进行了FITC标记,标记的mAb在体内外均可与肿瘤细胞特异性结合。     

微粒体谷胱甘肽S转移酶1过度表达促进肝癌发生发展

目的探讨微粒体谷胱甘肽S转移酶1(MGST1)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖、迁移和裸鼠成瘤中的作用。方法 Western blot检测人肝癌样品及肝癌细胞系中MGST1的表达;用慢病毒PLL3.7载体系统构建敲低MGST1的MHCC97H和HCCLM3细胞株及慢病毒p CDH载体系统构建过表达MGST1的SK-Hep-1细胞株后,用克隆形成实验检测细胞增殖能力;用Transwell实验检测细胞迁移能力;用皮下移植瘤实验检测MHCC97H细胞裸鼠成瘤能力。结果 71%(17/24)的肝癌组织中MGST1蛋白表达上调。敲低MGST1抑制MHCC97H和HCCLM3细胞的增殖、迁移能力(P0.05);过表达MGST1促进SK-Hep-1细胞增殖、迁移(P0.05);敲低MGST1的MHCC97H细胞裸鼠成瘤时间滞后(P0.01),肿瘤体积减小(P0.001),裸鼠生存期延长(P0.001)。结论 MGST1过度表达促进肝癌发生发展,是治疗肝癌的一个新靶点。     

肿瘤患者外周血中抑制性受体LAIR-1表达升高

目的:研究LAIR-1在肿瘤患者中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫应答中的作用.方法:应用夹心ELISA检测肿瘤患者血清中可溶型sLAIR-1的水平;应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察LAIR-1在患者PBMC中NK细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞和B细胞上的表达.结果:肿瘤患者血清sLAIR-1水平为(4.6±3.2) μg/ L,明显高于正常人血清sLAIR-1 水平(3.9±3.0) μg/L,P<0.05.NK细胞,CD4 T细胞及CD8 T细胞表达LAIR-1水平上调.肺癌患者CD4/CD8比值明显低于正常人,B细胞百分率明显高于正常人.NK细胞、CD4 T细胞CD8 T细胞中LAIR-1的表达阳性率高于对照组.结论:在肿瘤患者LAIR-1分子表达水平高于正常人.肿瘤患者抑制性受体LAIR-1 表达水平的上调可能与肿瘤的免疫逃逸有关.     

ZBP-89通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用

目的 探究ZBP-89(Zinc-binding protein-89)通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用.方法 构建ZBP-89过表达慢病毒载体(Len-ZBP-89)并进行慢病毒包装,微球体培养法富集肝癌干细胞,流式细胞术检测细胞中EpCAM、CD133的表达,CoCl2(HIF-1α激活剂)处理肝癌干细胞,RT-PCR检测细胞中ZBP-89、HIF-1α和Notch1mRNA表达,Western blot检测细胞中ZBP-89、HIF-1α、Notch1、CD44、CD133和EpCAM蛋白表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,光学显微镜观察特征性肿瘤球体的形成.结果 Len-ZBP-89慢病毒包装成功,病毒滴度为1.32×109 TU/mL;肝癌细胞PLC/PRF/5中ZBP-89 mRNA和蛋白表达水平下调,HIF-1α和Notch1 mRNA和蛋白表达水平上调;PLC/PRF/5细胞成功富集肝癌干细胞PLC/PRF/5.C,PLC/PRF/5.C中EpCAM、CD133的表达水平均上调;Len-ZBP-89可下调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,下调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量;CoCl2(HIF-1α激活剂)可上调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,上调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量(P＜0.05);CoCl2处理可逆转Len-ZBP-89对PLC/PRF/5.C干性的抑制作用.结论 过表达ZBP-89通过抑制HIF-1α/Notch1通路抑制肝癌干细胞干性.     

sPD-1封闭PD-L促进抗瘤免疫的机制研究

目的研究本室构建的可溶性PD-1（sPD-1）真核表达质粒pPD-1A的抑瘤机理.方法用转染了pPD-1A的BHK细胞分泌产物去封闭树突状细胞上的PD-1配体（PD-L）,并用MTT法检测树突状细胞（DC）对小鼠脾细胞的增殖激活作用.BALB/c小鼠接种H22肝癌细胞后次日开始接受质粒pPD-1A的注射.用RT-PCR法分析小鼠脾细胞的细胞因子和共刺激分子的mRNA表达水平,用流式细胞术测定肿瘤内T淋巴细胞的数量.结果在淋巴细胞活化的早期sPD-1对IL-10-DC激活淋巴细胞的作用有一定的促进,但作用并不十分显著（P＞0.05）.注射了质粒pPD-1A的小鼠产生了较强的抗瘤免疫反应,H22肝癌细胞的生长明显受到抑制（P＜0.01）.脾脏淋巴细胞的4-1BB、B7.1、IFN-γ和TNF-α表达均上调,以IFN-γ的增加最明显;OX40、IL-10表达下调.肿瘤内TIL数量明显增多（75.86%）.结论sPD-1通过对PD-L的封闭,不仅增加了肿瘤内部CD3＋T细胞的数量,而且可以调节细胞因子和共刺激分子的表达,从而促进抗瘤免疫.     

长链非编码RNA CCAT1对人宫颈癌XB1702细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA(lnc RNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对宫颈癌XB1702细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法通过电穿孔法分别将CCAT1 si RNA和重组表达载体pcD NA3.1-CCAT1转染人宫颈癌XB1702细胞后,G418筛选得到稳定转染细胞系,实验分为3组:CCAT1si RNA转染组、pc DNA3.1-CCAT1转染组和空白对照组。转染48 h后,RT-PCR检测细胞中CCAT1 lnc RNA表达水平;CCK8检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡影响;裸鼠移植瘤实验检测上调和下调RNA CCAT1表达联合X射线照射对宫颈癌的生长抑制作用。结果干扰XB1702细胞中CCAT1 lnc RNA表达后,XB1702细胞增殖被抑制,细胞凋亡率增加;裸鼠移植瘤平均体积明显小于对照组(正常XB1702细胞种植组)差异有统计学意义(P0.05);上调XB1702细胞中CCAT1lnc RNA表达后,XB1702细胞增殖能力明显增强,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.05),而上调组裸鼠皮下种植瘤平均体积较照射前无明显变化。结论下调CCAT1 mR NA表达能抑制人宫颈癌XB1702细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感性。     

过表达miR-107促进HT29细胞增殖和成瘤能力

目的探讨微小RNA107(miR-107)对结肠癌细胞增殖的影响。方法实时定量PCR检测miR-107在结肠癌组织及NCM460、HT29、HCT116、SW480、Colo205和Lo Vo结肠癌细胞系的水平;培养HT29结肠癌细胞,分别转染miR-107模拟物(miR-107 mimic)、miR-107抑制物(miR-107 inhibitor),过表达或抑制miR-107后,通过噻唑蓝(MTT)实验、平板克隆实验检测细胞的增殖能力,软琼脂克隆形成实验及裸鼠成瘤实验检测HT29细胞的成瘤能力,Wetern blot法检测miR-107对HT29细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平。结果 miR-107在结肠癌组织及多种结肠癌细胞中高表达。过表达miR-107增加HT29细胞的增殖能力及成瘤能力并上调细胞cyclin D1蛋白水平,抑制miR-107表达则可降低HT29细胞的增殖能力及成瘤能力。结论 miR-107在结肠癌组织及细胞中高表达,过表达的miR-107通过上调cyclin D1水平促进结肠癌细胞增殖及成瘤的作用。     

抑制IGF-1R可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖

Ⅰ型胰岛素样生长因子受体(type Ⅰ insulin-like growth factor receptor,IGF-IR)是细胞生长分化的重要调节因子,可介导丝裂信号、防御各种凋亡损伤,并为一些细胞类型转化所必需.IGF-1R在多种肿瘤包括神经母细胞瘤中被发现异常表达,并被认为是潜在的肿瘤治疗靶点.软琼脂克隆形成实验是体外检测细胞成瘤性的常规方法,可用于分离和纯化肿瘤细胞及抗肿瘤药物体外抑制肿瘤生长能力的评价,随着肿瘤干细胞研究的兴起,亦被用来检测具有干细胞性质的细胞.本实验拟构建非锚着依赖性细胞立体生长模型,使用IGF-1R抑制剂检测特异性抑制IGF-IR对细胞增殖和克隆形成的影响.     

AP-1信号转导通路与肿瘤

近年来,AP-1信号转导通路与肿瘤的研究取得了突破性进展.血清因子、TPA及许多癌基因均能活化AP-1,促使细胞增殖、转化和癌变.AP-1属多基因家族,其活性受多种不同水平的调控.AP-1的活化促使下游靶基因如MMPs、整合素、CD44和VEGF等表达,在肿瘤恶性演进过程中参与了细胞基质降解、粘附功能异常、转移瘤新生血管生成、肿瘤细胞运动能力的增强等各个环节.AP-1信号转导通路的活化与肿瘤的发生、发展密切相关.     

IL-17D 调控肺脏NK 细胞募集及黄芪的促进作用

目的:探讨IL-17D 调控肺脏NK 细胞的募集机制及中药黄芪的促进作用。方法:采用尾静脉注射B16 黑色素瘤细胞建立小鼠肺肿瘤转移模型,分别经IL-17D 或黄芪处理后,应用流式细胞术和RT-PCR 法检测各组小鼠肺脏IL-17D 表达状态及其NK 细胞含量的变化。结果:小鼠肺转移瘤模型中IL-17D 表达水平及其肺脏NK 细胞含量急剧下降,经IL-17D 处理后可明显上调肺脏NK 细胞含量、降低肺脏肿瘤克隆形成。同时,CXCL9、IL-15 等与NK 募集和功能相关的细胞因子表达明显上调。中药黄芪可促进肺脏IL-17D 表达水平,同时上调肺脏NK 细胞含量,抑制肺脏肿瘤克隆的形成。结论:IL-17D 可调控NK 细胞的肺脏募集;中药黄芪可通过上调IL-17D 的表达,从而增强NK 的肺脏募集能力,促进肺脏抗肿瘤免疫效应。