3H-TdR掺入法测定TGFβ1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1(TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制。方法人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,3H-TdR掺入法测定细胞放射性强度。结果 0.1、1.0、5.0、10.0浓度的TGF-β1作用后活细胞数增加,细胞3H-TdR摄入量增加。100.0浓度的TGF-β1对人眼眶成纤维细胞作用相反。结论 TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,TGF-β1的促成纤维细胞的增殖作用是PVR的诱发因素。     

TGF-β1体外对人眼眶成纤维细胞3H-Pro掺入的影响

目的:观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)3H-Pro掺入的影响。方法:体外培养人OF,用0.1,1.0,5.0,10.0,100.0μg/LTGF-β1对细胞进行处理,用3H-Pro掺入法测定细胞放射性强度来判断细胞胶原合成。结果:用0.1,1.0,5.0,10.0μg/L TGF-β1作用后OF3H-Pro掺入量增加。100.0μg/L TGF-β1对OF作用相反。结论:TGF-β对人OF合成胶原有双相调节性。     

TGF-β1对小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、7d)对体外培养的小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果TGFβ1能明显促进小鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,在质量浓度为10ng/mL时作用最明显。FCM结果显示,TGFβ1作用后,巩膜成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比显著升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论TGFβ1可以促进体外培养的巩膜成纤维细胞增殖和DNA合成,它的表达下调可能在近视发生过程中发挥重要作用。     

罗格列酮对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖及转化生长因子β1分泌的影响

目的 观察罗格列酮对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)增殖及转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响.方法 对照实验研究.体外培养HTFs,分别采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色(MTT)法及划线法,对培养细胞分别加入10、20、50、100、250、300、400及500 ms/L的罗格列酮,研究不同浓度的罗格列酮对体外培养的HTFs增殖及移行的影响,同时采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同浓度的罗格列酮对细胞TGF-β1分泌量的影响,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,研究不同浓度罗格列酮对TGF-β1 mRNA表达的影响.不同浓度罗格列酮对HTFs增殖活力、TGF-β1分泌及TGF-β1 mRNA合成的影响,采用单因素方差分析(ANOVA);不同浓度罗格列酬对细胞移行数量的影响,采用单因素多水平设计定量资料的方差分析;相邻药物浓度组间吸光度(A)值和细胞移行数量比较,采用q检验.结果 当罗格列酮浓度为20 ms/L时,MTT法测定的A值为0.29±0.02,ELISA法测定的A值为267.48±20.31,RT-PCR测定的A值为0.55±0.02,与对照组(MTT法测定的A值为0.33±0.01,ELISA法测定的A值为323.48±13.69,RT-PCR法测定的A值为0.69±O.02)相比,能明显抑制HTFs的增殖和移行,并明显下调TGF-β1的分泌和TGF-β1mRNA的表达,差异有统计学意义(F=178.293,86.404,176.102;P＜0.01);随着罗格列酮浓度的增高,抑制作用相应增强,相邻药物浓度间A值差异均有统计学意义(q值介于3.00～10.36之间,P＜0.05).结论 罗格列酮能明显抑制HTFs增殖和移行,其作用与其抑制TGF-β1的分泌有关.     

环孢素A对人Tenon''''s囊成纤维细胞增殖及TGF-β1分泌的影响

目的 观察环孢素A(CsA)对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞(HTFs)增殖及其转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响。方法 以体外培养的人HTFs为实验对象，分别加入0．00l～10μg／mL CsA作用48h，细胞计数观察CsA对细胞增殖的影响。收集0．00l～5μg／mL CsA处理后细胞培养上清液，采用ELISA方法检测细胞TGF-β1的分泌量。光镜及透射电镜观察细胞的结构变化。结果 CsA在.1～10μg/mL范围内以质量浓度依赖方式抑制人HTFs的增殖，IC50为0．55μg／mL，并在0．01～5μg／mL范围内刺激细胞TGF-β1的分泌。CsA作用后细胞形态学改变的主要特征为胞浆内大量空泡形成。结论 一定质量浓度的CsA可能通过直接的细胞损伤作用在促进TGF-β1分泌的同时仍显著抑制人HTFs的增殖。     

TGF-β1对Tenon''''s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对Tenon's囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法用MTT法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响.结果GF-β1能够剂量依赖性地促进Tenon's囊成纤维细胞增殖(P＜0.05);TGF-β1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mL TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05).结论GF-β1能够促进Tenon's囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制.     

视网膜下液对培养的人眼视网膜色素上皮细胞和成纤维细胞增殖作用的影响

目的：了解不同程度增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的视网膜下液（SRF）对视网膜色素上皮细胞（RPE）、成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：用溴标法和MTT法测定不同程度PVR的SRF对RPE和FB增殖的促进作用。结果：几乎所有的SRF都具有促进细胞增殖的作用,用1：10比例稀释,PVR程度为PVR＜C1,PVRC1,PVR＞C13组。SRF作用24h后RPE的增殖率分别为对照组的128.5％,139.8％,156.8％,FB的增殖率分别为对照组的126.3％,143.1％及172.3％。结论：SRF液促进细胞增殖的作用随着PVR程度的加重而增强。     

K115对TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的 探讨K115对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制.方法 人Tenon囊成纤维细胞取自于河北省人民医院眼科行青光眼手术的患者.采用CCK-8实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,筛选出TGF-β1对细胞增殖最佳作用浓度为5.0 μg·L-1,最佳...     

EW-7197对TGF-β1诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及机制

目的：探讨ALK5抑制剂EW-7197对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响及其机制。

方法：采用MTS法检测细胞增殖率,并摸索EW-7197最佳的作用浓度和作用时间。之后将细胞分为3个组,分别为正常对照组、TGF-β1诱导组和TGF-β1+EW-7197处理组,采用Transwell小室观察各组细胞迁移情况,采用Western blot检测各组细胞Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。

结果：MTS结果显示,不同处理条件的EW-7197以6.0μmol/L作用24h的细胞增殖率最低(均P<0.01)。Transwell小室实验结果显示,TGF-β1诱导组的细胞迁移数量为228.0±17.0个/视野,明显高于正常对照组(149.0±15.0个/视野)和TGF-β1+EW-7197处理组(46.0±8.0个/视野)(均P<0.01)。Western blot检测结果显示,TGF-β1诱导组细胞中Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3相对表达量高于正常对照组和TGF-β1+EW-7197处理组(均P<0.001)。

结论：EW-7197能够通过TGF-β/Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖和迁移。     

孔源性视网膜脱离视网膜下液中CTGF和TGF-β1的质量浓度测定

目的测定结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)在视网膜下液(SRF)中的质量浓度,并观察其对增生性玻璃体视网膜病变(PVR)形成的影响。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定33例孔源性视网膜脱离患者SRF中的CTGF和TGF-β1的质量浓度。结果孔源性视网膜脱离患者SRF中含有CTGF和TGF-β1;其质量浓度随患者眼部病情的加重而增加;CTGF和TGF-β1质量浓度在SRF中呈正相关关系。结论CTGF和TGF-β1在PVR的发生发展过程中起了一定的作用,且CTGF质量浓度的增加可能是TGF-β1质量浓度增加的一种后续反应。     

SB431542和TGF-β1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响

目的　探讨转化生长因子-β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和ＳＢ４３１５４２（ＴＧＦ-β１受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（ｔｈｙｒｏｉｄ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ,ＴＡＯ）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）及结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）基因表达的影响,为ＴＡＯ眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法　实验分为３组。第１组:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ,ＲＴ-ＰＣＲ）检测不同浓度ＴＧＦ-β１（０μｇ?Ｌ－１、１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴ-ＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第２组:采用ＲＴ-ＰＣＲ检测１０μｇ?Ｌ－１ＴＧＦ-β１在不同的时间点（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第３组（分为４小组处理）:眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２刺激眼眶成纤维细胞、１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１ 单独刺激眼眶成纤维细胞、３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２联合１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１刺激眼眶成纤维细胞（ＳＢ４３１５４２预先刺激眼眶成纤维细胞１ｈ,然后再加入ＴＧＦ-β１）,采用ＲＴ-ＰＣＲ检测α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达。结果　ＴＧＦ-β１在一定的浓度范围内（１～１０μｇ?Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着浓度增加ｍＲＮＡ表达增加,各浓度组（１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）与空白对照组（０μｇ?Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＴＧＦ-β１在一定的时间范围内（０～２４ｈ）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着时间延长ｍＲＮＡ表达增加,各时间组（３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）与０ｈ相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β１诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ在２４ｈ达到峰值,而ＣＴＧＦｍＲＮＡ在１２ｈ即可达到峰值。ＳＢ４３１５４２对眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达均有抑制作用。结论　一定范围内,ＴＧＦ-β１以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达,ＳＢ４３１５４２可抑制其表达。     

白细胞介素-1及其抑制剂对眼眶成纤维细胞增殖和合成透明质酸作用的研究

目的：观察白细胞介素1(IL-1)及白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)对甲状腺相关眼病(TAO)病人及正常人眼眶成纤维细胞(OFs)增殖及合成透明质酸(HA)的作用。方法：取5例TAO病人眼眶组织与眼外肌进行OFs培养，另取4例无眼部病变的意外死亡者眼眶组织与眼外肌进行OFs培养作为对照。分别在其中加人不同浓度的IL-1、IL-1Ra，用MTT法及放射免疫法观察它们对OFs增殖及分泌HA的作用；然后用不同浓度的IL-1Ra与IL-1共同孵育，观察OFs的增殖及HA合成的变化。结果：IL-1在5U／ml浓度以上时均能明显刺激OFs的增殖和HA的合成，当IL-1浓度为500U／ml时对TAO病人OFs的刺激作用强于对正常人OFs.IL-1Ra单独使用时对OFs的增殖及HA合成均没有显著性影响。当IL-1Ra(5、50ng／m1)与IL-1(500U／m1)联合孵育时，能阻断IL-1对OFs的刺激作用。结论：IL-1能刺激TAO病人与正常人OFs的增殖和HA的合成，而IL-1Ra能阻断其刺激作用，因此IL-lRa可能是TAO治疗中的一个新途径。     

舒拉明对碱性成纤维细胞生长因子促进人视网膜色素上皮细胞增殖作用拮抗效应的研究

目的探讨舒拉明抗增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的作用及机制。方法采用体外培养的人眼视网膜色素上皮(RPE)细胞,总共10组。其中5个对照组的培养基中分别加入终浓度为1、10、100、500ng/ml的bFGF和3125μg/ml的舒拉明。实验组4组,培养基中除加入3125μg/ml的舒拉明外,还分别加入终浓度为1、10、100和500ng/ml的bFGF。另设1组空白组。培养48h后,采用MTT法,酶联免疫检测仪测定各孔吸光度(A)值,计算细胞的增殖率。采用析因分析比较bFGF和舒拉明的交互效应和单独效应。结果各组细胞生长无明显的形态学差异。舒拉明与bFGF存在拮抗性交互效应(F=673,P<001)。对照组比较空白组,全部bFGF组A值都增加,最大A值为bFGF的10ng/ml浓度组;舒拉明组则降低;实验组中,各组A值较bFGF对照组都下降,最大A值左移对应bFGF的100ng/ml浓度组。结论舒拉明能够拮抗bFGF促RPE细胞增殖的作用,其抑制RPE细胞增殖并进一步防治PVR的机制至少包括拮抗了生长因子的生物学效应。     

TGF-β1对甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞外基质基因表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者眼外肌来源成纤维细胞(orbital fi-broblasts,OF)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)主要成分金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)、胶原Ⅰ(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)、胶原Ⅲ(collagen typeⅢ,COL-Ⅲ)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)基因表达水平的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察10μg·L-1TGF-β1刺激OF后不同时间点(0h、3h、6h、12h、24h、48h)及不同浓度TGF-β1(1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1)刺激OF24h后TIMP-1、COL-I、COL-Ⅲ及FN mRNA表达的变化。结果 10μg·L-1TGF-β1刺激OF的时间效应:TIMP-1mRNA在3h和6h分别为对照组的1.50倍和2.46倍(P<0.01);COL-ⅠmRNA在24h和48h分别为对照组的5.49、3.69倍(P<0.01);COL-ⅢmRNA在24h和48h分别为对照组的2.14、1.63倍(P<0.01);FN mRNA在12h和24h后分别为对照组的2.45、1.53倍(P<0.01)。不同浓度TGF-β1刺激OF24h后剂量效应:与空白对照组相比,TIMP-1mRNA在5μg·L-1和10μg·L-1时分别为空白对照组的1.79、1.46倍(P<0.01);COL-ⅠmRNA在1μg·L-1和10μg·L-1分别空白对照组的1.94、3.29倍(P<0.01);COL-ⅢmRNA在5μg·L-1和10μg·L-1分别空白对照组的1.52、3.28倍(P<0.01);FN mRNA在1μg·L-1和10μg·L-1分别为空白对照组的1.30、2.45倍(P<0.01)。结论 TGF-β1以剂量和时间依赖的方式刺激OF表达TIMP-1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及FN mRNA,TGF-β1可能在TAO眼外肌纤维化机制中发挥了重要的作用。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

转化生长因子β与增生性玻璃体视网膜病变的关系

增生性玻璃体视网膜病变 (proliferativevitreo retinopathy ,PVR)在临床上具有反复发生 ,难以控制的特点。视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞是PVR最重要的细胞成分 ,功能十分复杂 ,许多生长因子在PVR发生发展过程中的影响皆与病理状态下RPE细胞的功能异常有关。我们从RPE细胞入手 ,重点对转化生长因子 β与PVR的关系作一综述 ,从一个侧面揭示PVR形成机制和发展方向 ,以期对PVR的生物性治疗起一些提示作用。     

TGF-β1诱导CD90+和CD90-眼眶成纤维细胞亚群肌成纤维细胞转化的研究

目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90 和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90 和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白α-SMA的表达情况。结果在TGF-β1的作用下,48 h后部分CD90 细胞开始出现α-SMA弱表达,4 d后大部分细胞呈阳性。CD90-细胞不表达α-SMA。结论CD90 与CD90-眼眶成纤维细胞具有不同的功能,CD90 细胞群具有转化为MFB的潜能,与眼外肌纤维化和细胞外基质积聚有关;CD90-成纤维细胞不能转化为MFB。     

转化生长因子-β1对人Tenon囊成纤维细胞表型转化的作用

目的探讨转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对人Tenon囊成纤维细胞(humansubconjunctivalTenon’scapsulefibroblast,HTCF)表型转化的作用。方法人白内障手术中取结膜下Tenon囊组织块培养成纤维细胞。用第5~9代细胞,以不同浓度TGF-β1(0μg·L-1,2μg·L-1,5μg·L-1,10μg·L-1,20μg·L-1)、不同时间(24h、48h、72h)诱导成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞。用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型。结果体外用TGF-β1诱导HTCF,在0~10μg·L-1内,TGF-β1呈剂量依赖性增加平滑肌肌动蛋白在蛋白水平的表达,至20μg·L-1时表达迅速下降;10μg·L-1TGF-β1诱导48h后其平滑肌肌动蛋白的表达与24h、72h相比,差异有显著性(P<0.01,n=6)。结论一定浓度和剂量的TGF-β1能显著诱导HTCF表型转化为肌成纤维细胞,在人Tenon囊组织局部组织损伤修复及瘢痕形成中具有重要作用。     

转化生长因子-β在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是孔源性视网膜脱离手术失败的主要原因,其发病机制尚未完全明了。综述了转化生长因子13．(TGF—β1)的生物学特性以及它在PVR发展中的作用。探讨TGF—β1与PVR形成的关系。TGF—β在PVR的形成过程中参与了细胞的增殖、膜的收缩。TGF—β是加速PVR形成的重要生长因子之一。将来也许可以用TGF—β的拮抗剂来预防和治疗PVR。