血管紧张素Ⅱ刺激心衰患者外周血单个核细胞分泌TNF-α和NO

目的：检测充血性心力衰竭（CHF）患者血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、一氧化氮（NO）的变化，以及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、缬沙坦对培养的正常人和CHF患者单核细胞（PBMC）分泌TNF-α、NO的影响,探讨CHF时肾素血管紧张素系统与细胞因子的联系以及缬沙坦治疗CHF的细胞因子机制。方法： 取16例Ⅲ-Ⅳ级的CHF患者静脉血，检测血清TNF-α、NO含量；分离PBMC,置24孔培养板中，分别加入AngⅡ，使其终浓度分别为0、0.01、0.1、1 μmol/L，另外一孔加入0.1 μmol/L的AngⅡ和0.1 μmol/L的缬沙坦，经24 h孵化后，检测培养上清中TNF-α、NO。结果： CHF患者血清TNF-α、NO水平显着高于对照组（P<0.01），心功能Ⅳ级组显著高于心功能Ⅲ级（P<0.01）。不同病因CHF患者之间TNF-α、NO含量无显著差异（P＞0.05）。 AngⅡ对正常人和CHF患者PBMC分泌TNF-α、NO均有促进作用，缬沙坦抑制AngⅡ诱导的PBMC分泌TNF-α、NO。 结论: AngⅡ促进PBMC产生TNF-α、NO，提示肾素-血管紧张素系统与TNF-α、NO存在一定的联系，缬沙坦可能通过抑制TNF-α、NO的产生在CHF的治疗中发挥作用。     

氯化镧对大鼠生长素分泌调节影响的体外研究

目的：研究氯化湖（LaCl3）对大鼠生长素分泌调节轴的影响。方法：采用荧光法检测离体脑片培育液中单胺类神经递质含量;用放射免疫法测垂体脑片育液中生长素（GH）含量。结果：①0．01mmol／LLaCl3垂体组育液中GH含量明显高于对照组（P＜0．05）;而1mmol／LLaCl3垂体组有液中GH含量明显低于对照组（P＜0．05）。②0.01mmol／LLaCl3下丘脑＋垂体组,其有液中GH含量则明显高于对照组（P＜0．01）和同剂量的单纯垂体组（P＜0．01）;但1mmol／L下丘脑＋垂体组育液中GH含量与对照组比较无显著差异（P＞0．05）。③0．01mmol／LLaCl3下丘脑组有液中NE含量明显高于对照组（P＜0．01）,5－HT明显低于对照组（P＜0.05）。④1mmol／L下丘脑组有液中NE和DA含量明显少于对照组（P＜0．01和0．05）,而5－HT含量则明显高于对照组（P＜0．001）。结论：低剂量氯化调可通过下丘脑和腺垂体双重作用促进GH分泌。     

心力衰竭患者T淋巴细胞亚群和IL-6表达的变化

 目的：探讨充血性心力衰竭（CHF）患者T淋巴细胞亚群和白细胞介素-6（IL-6)表达的变化。方法：选择纽约心脏病学会（NYHA）心功能Ⅱ~Ⅳ级的CHF患者48例作为观察组，30例健康查体者作为对照组。用流式细胞仪测定全血T细胞亚群数目，并应用酶联免疫吸附法测定血清和外周血单个核细胞（PBMC）培养上清IL-6含量。结果：CHF 患者CD3、CD4和CD4/CD8显著降低(P<0.05,或P<0.01)，并与CHF程度呈负相关(r=-0.976、-0.826、-0.881;均P<0.01)；CHF患者CD8、血清、PBMC培养上清和IL-2刺激后上清中IL-6均显著高于对照组(均P<0.01)，并与CHF程度呈正相关（r=0.890、0.988、0.984、0.982;均P<0.01）。结论：T细胞亚群数目异常和IL-6表达增加，可能是CHF患者免疫功能异常的机制之一。     

DENV2感染外周血单个核细胞增加TNF-α基因启动子区域CpG位点的甲基化水平

 目的：检测正常人外周血单个核细胞（PBMC）感染2型登革病毒（DENV2）后肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因启动子区域CpG位点的甲基化水平。
方法：采用亚硫酸氢盐测序PCR法检测DNA甲基化水平。结果：TNF-α基因启动子区域为-294 bp到+58 bp,覆盖11个散在CpG位点;PCR反应后取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析显示,扩增序列大小与理论预测相符合;PBMC感染DENV2 0 h和6 h 在11个甲基化位点中有2个处于甲基化状态,感染12 h有6个甲基化位点甲基化。0 h、6 h和12 h的平均甲基化率分别为103%、121%和255%,且0 h和12 h及6 h和12 h的甲基化率差异有统计学意义。结论：PBMC感染DENV2后会引起TNF-α基因启动子区域的甲基化水平增加。     

慢性充血性心力衰竭患者血清白三烯B4变化的临床研究

目的探讨充血性心力衰竭（CHF）患者血清白三烯B4（LTB4）水平与心功能的关系。方法对82例CHF患者按纽约心脏病学会心功能分级标准分为Ⅱ-Ⅳ级组，根据超声心动图检查结果，将人选者分为左心室正常组（左心室舒张末期容积≤55mm）和左心室增大组（左心室舒张末期容积≥55mm），用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清LTB4含量，并与20例健康体检者进行对照。结果CHF组患者血清LTB。含量明显高于正常对照组（P〈0．01），心功能Ⅲ、Ⅳ级的血清含量均高于Ⅱ级（P〈0．01），左室增大组较左室正常组LTB4血清含量显著升高（P〈0．01），LTB4的血清含量与CHF患者的严重程度及心脏左室增大均呈正相关（P〈0．01）。结论LTB4是心功能受损的敏感指标，可以作为CHF相关的非创伤性指标之一。     

肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨

目的　探讨肌肽对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）引起脑微血管内皮细胞（HBMEC）凋亡的保护作用及机制。 方法　用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧（ROS）含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。 结果　与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低（P>0.05）,早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加（P<0.05）。与LPS组相比,LPS+肌肽组（10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L）凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低（P<0.05）。 结论　肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。     

动脉粥样硬化性脑梗死患者血浆抗凝血酶Ⅲ的变化及其机制

 目的：探讨抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）在动脉粥样硬化性脑梗死患者中的变化及其机制。方法：采用发色底物法检测55例动脉粥样硬化性脑梗死患者血浆中AT-Ⅲ活性,并与神经系统损伤程度、一般生化项目进行相关性分析;应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平;酶免疫法（EIA）测定患者血浆中免疫复合物的含量;流式细胞术检测外周血单核细胞数量及表型,并与正常组55例体检者进行对照。采用ELISA法分析免疫复合物刺激外周血单核细胞后TNF-α和IL-6分泌的变化;Western blotting法观察TNF-α和IL-6对人脑血管内皮细胞AT-Ⅲ表达的影响。结果：动脉粥样硬化性脑梗死患者血浆中AT-Ⅲ活性明显降低（P<005）,且与神经系统功能损伤程度呈负相关（P<005）,与收缩压、舒张压、空腹血糖、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸呈负相关,与高密度脂蛋白呈正相关（P<005）;同时,患者血浆中TNF-α和IL-6水平明显升高（P<001）,伴随免疫复合物含量增多（P<001）;流式细胞术分析发现,患者外周血CD14+CD16+和CD14+CD32+单核细胞数量无明显变化（P>005）,而CD14+CD64+单核细胞数量显著增多（P<005）。经免疫复合物刺激后,外周血单核细胞TNF-α和IL-6分泌明显升高（P<001）,而TNF-α或IL-6与人脑血管内皮细胞共孵育后,均可下调其AT-Ⅲ蛋白表达水平（P<005或P<001）。结论：AT-Ⅲ在动脉粥样硬化性脑梗死患者血浆中明显降低,是脑梗死发病的危险因素之一,且与病情严重程度相关,其可能的机制是免疫复合物通过CD14+CD64+单核细胞介导促炎细胞因子的产生。升高AT-Ⅲ活性对缺血脑组织具有保护作用。     

胺碘酮治疗器质性心脏病并恶性室性心律失常的疗效观察

目的 观察胺碘酮治疗器质性心脏病并恶性室性心律失常的近期疗效。方法 对收入CCU符合入选条件的68例器质性心脏病并恶性室性心律失常患者随机分为2组。治疗组36例：部分病例采用胺碘酮转复；其余采用电转复，成功后用胺碘酮维持窦性心律（窦律）。对照组32例：应用利多卡因转复及维持窦律，将两组转复及维持窦律结果进行比较。结果 治疗组总有效率77．8％（28／36），明显高于对照组56．25％（18／32），P〈0．05，部分利多卡因无效患者用胺碘酮仍有效。结论 胺碘酮是治疗恶性室性心律失常最有效药物之一，其临床疗效优于利多卡因。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞INF-α和IL-8表达的检测及临床意义

目的检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞α干扰素（IFN—α）的诱导表达及白细胞介素8（IL-8）表达,评价慢性乙肝患者外周血单个核细胞（PBMC）细胞免疫功能。方法PolyIC体外刺激正常对照组和慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvirus,HBV）感染组病人PBMC,取培养上清液利用病毒保护试验测定IFN—α2b治疗前后病人PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时在IFN—α2b治疗前后,RT-PCR检测慢性乙肝患者不同干扰素应答组病人PBMCIL-8表达的变化。结果治疗前应答组病人（n=13）和无应答组病人（n=27）PBMC分泌的干扰素生物学活性显著低于正常对照组（n=20）（P〈0．01;P〈0．01）。应答组病人PBMC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,1个月时已显著高于无应答组病人（P〈0．01）;无应答组病人PBMC分泌的干扰素活性始终处于低下水平。治疗前,应答组病人和无应答组病人PBMCIL-8mRNA水平都显著高于正常对照组（均为P〈0．01）;治疗后,应答组病人IL-8水平随治疗时间延长而降低,1个月时已显著低于无应答组病人（P〈0．01）,无应答组病人IL8水平始终处于较高水平。结论慢性HBV感染病人的细胞免疫功能受损,不能正常表达IFN-α但应答组病人经干扰素治疗后IFN—α表达能力逐渐恢复。慢性乙肝患者PBMCIL-8表达与肝脏炎症活动有关。慢性乙肝患者PBMCIFN—α活性检测结果也许可以作为干扰素治疗预后的判断指标。     

红杉醇对2型糖尿病大鼠肝脏炎症损伤的保护作用

 目的：观察红杉醇对2型糖尿病大鼠肝脏炎症损伤的保护作用及其机制。方法：制备高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠肝脏炎症损伤模型。取造模成功大鼠35只,每天灌服不同剂量红杉醇（12.5、25和50 mg/kg）1次,连续6周。末次给药后取血,测空腹血糖、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和白蛋白（ALB）;取肝脏称湿重,计算肝脏指数,测定肝组织C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量,real-time PCR检测肝脏TNF-α mRNA含量,HE染色观察病理变化。结果：模型组大鼠红杉醇治疗6周后,空腹血糖显著下降;肝功能改善,血清ALT和AST活性明显降低,ALB含量明显增加;CRP含量明显减少;肝组织中TNF-α mRNA和TNF-α、IL-6含量明显降低;肝脏指数下降,光镜下可见肝细胞病理改变（水肿、点状或灶状坏死及炎症细胞浸润）均有不同程度的改善。结论：红杉醇对2型糖尿病肝脏炎症损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制TNF-α和IL-6有关。     

充血性心力衰竭患者血清白介素-10水平变化及意义

目的通过检测充血性心力衰竭（CHF）患者血清白介素-10（IL-10）水平，探讨其与CHF的关系及临床意义。方法采用双抗体夹心法测定30例CHF息者治疗前后及25例健康人血清IL-10水平。结果CHF患者血清IL-10水平显著高于时照组（P〈0．01），随CHF加重，IL-10水平升高越明显（心功能Ⅱ级与对照组比较差异不显著P〉0．05，Ⅲ级及Ⅳ级与对照组比较P〈0.01）：心衰好转后明显下降（P〈0．01）。结论 IL-10可能参与了CHF的发生和发展，其在临床方面的意义有待于进一步探讨。     

原发性肝癌患者手术治疗前后检测可溶性白细胞介素2受体和肿瘤坏死因子的临床意义

应用双抗体酶联夹心法和放射免疫分析法检测了30名正常人和33例原发性肝癌患者血清中sIL-2R和TNF含量。结果表明：原发性肝癌患者手术前sIL－2R、TNF非常显著地高于正常人（P＜0．001，P＜0．01）；术后2周，血清中sIL－2R与正常人比较有差异（P＜0．01），而TNF则无差异（P＞0．05）。AFP含量高低与sIL－2R和TNF含量无关（r＝0．3826，0．3725；P＞0．05）。     

慢性充血性心力衰竭患者血清TNF-α、IL-6 RIA的临床意义

目的：研究慢性充血性心力衰竭（chronic congestive heart failure,CHF）患者血清中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）放射免疫分析（radioimmunoassay,RIA）的价值。方法：用放射免疫分析测定176例CHF患者和30例健康人血清TNF-α、IL-6水平。比较分析CHF患者与正常人以及不同心功能程度的CHF患者之间TNF—α、IL-6水平的变化。结果：CHF患者血清TNF—α、IL-6水平明显高于正常对照组（P〈0．05）,且均随着心衰程度的加重而增高,呈高度正相关。不同程度心衰患者之间TNF—α、IL-6水平均有明显差异（P〈0．01）。结论：CHF患者存在免疫激活和心肌炎症反应,心衰程度越重,炎症反应也越明显。放射免疫分析测定TNF—α、IL-6时CHF病程及治疗疗效、预后判断具有重要的价值。     

胺碘酮治疗阵发性快速房颤80例临床分析

目的探讨胺碘酮静脉用药治疗阵发性快速房颠（房颠）的临床效果及安全性。方法将78例房颠患者随机分为两组，两组在原有的心脏病治疗基础上，治疗组（80例）加用胺碘酮静脉用药，对照组（38例）加用西地兰静脉注射。观察两组患者用药2h内快速性房颠转复窦性心律及心室率控制的疗效。结果治疗组总有效率（90．00％）明显高于对照组（73．68％），P〈0.05；治疗组用药后显效（转复窦性心律）率（62．50％）高于对照组（31．58％），P〈0．01；不良反应轻微。结论胺碘酮静脉用药转复窦性心律及控制心室率效果良好，不良反应轻，持续时间短，但应在严密的心电血压监测下进行。     

老年支气管哮喘患者治疗前后血清TNF-α和血浆VIP检测的临床意义

目的：探讨老年支气管哮喘患者治疗前后血清TNF-α和血浆VIP测定的临床意义。方法：应用放射免疫分析对38例老年支气管哮喘患者进行治疗前后血清TNF-α和血浆VIP含量的测定，并与35名正常人作比较。结果：老年支气管哮喘患者在治疗前血清TNF-α水平非常显著地高于正常人组（P〈0．01），而VIP水平则显著地低于正常人组（P〈0．01）。患者经治疗2周后，与正常人比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：检测老年支气管哮喘患者血清TNF-α和血浆VIP水平的变化对临床观察预后有重要的临床价值。     

慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量和IL-12对其PBMC产生Th1/Th2类细胞因子影响的相关性研究

目的：研究慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量对IL－12诱导其PBMC产生Th1/Th2类细胞因子协同效应的影响。方法：分离50例慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞，分别与PHA（100μg/ml）、HBcAg（1μg/ml）、HBeAg（1μg/ml）单独或联合IL－12（10ng/ml）体外培养48h，ELISA法检测培养上清液细胞因子IL－2、IFN－γ、IL－10。荧光定量PCR检测患者血清DNA含量，并分成HBVBDNA小于10^3拷贝／ml、1063-10^5拷贝／ml、1065-10^7拷贝／ml、大于10^7拷贝/ml4组。结果：以HBVDAN小于10^3拷贝／ml组做对照组，比较发现无论抗原（PHA、HBcAg、HBeAg）单独诱导还是联合IL－12共同诱导，随着血清HBVDNA含量的增高，PBMC产生IL－2和IFN-γ水平逐渐降低，产生IL－5和IL－10水平逐渐升高，并且IL－12对PBMC产生IFN－γ的增殖效应逐渐减弱，特别是血清HBVDNA大于10^7拷贝／ml患者几乎无明显增殖效应。结论：高水平血清HBVDNA含量对IL－12诱导慢性乙型肝炎PBMC产生IFN－γ协同效应有抑制作用。     

慢性肾病患者血清HA和血浆VEGF检测的临床意义

目的：探讨了慢性肾病患者血清透明质酸（HA）和血浆血管内皮生长因子（VEGF）水平。方法：应用放免法和酶联双抗体法测定38例慢性肾病患者血清HA和血浆VEGF的含量,并以35名正常人作比较。结果：慢性肾病患者血清HA和血浆VEGF含量显著地高于正常人组（P〈0．01）,经治疗6个月后与正常人比较仍有差异（P〈0．05）。结论：慢性肾病的发生、发展与HA和VEGF水平密切相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血白细胞介素15的研究

目的：检测系统性红斑狼疮（SLE）患者血清白细胞介素15（IL-15）水平及外周血单个核细胞（PBMC）IL-15mRNA表达，并进一步分析其临床意义。方法：IL-15检测采用ELISA方法；PBMCIL-15mRNA表达采用原位杂交法检测。结果：①SLE组患者血清IL-15水平显著高于正常对照组（P〈0．01），活动期SLE患者血清IL-15水平显著高于缓解期患者（P〈0．05）。②发生临床肾损害者IL-15水平明显高于无肾损害者（P〈0．05），出现血清抗dsDNA抗体阳性、低补体C3血症、高IgG血症者血清IL-15水平均分别显著高于无上述表现者。③SLE患者PBMCIL-15mRNA表达量明显高于正常对照组（P〈0．05），活动期SLE显著高于缓解期（P〈0．05）。④SLE患者PBMC培养上清IgG、IgM和抗dsDNA抗体浓度均显著高于正常对照组；SLE患者PBMCIL-15mRNA表达量与细胞培养上清的IgG及抗dsDNA抗体滴度均呈正相关关系（分别为r=0．645和r=0．715，P〈0．05），而与IgM．无相关关系（r=0．451，P〉0．05）。⑤SEE患者PBMCIL-15mRNA表达量与血清IL-15水平呈正相关关系（r=0．726，P〈0．05）。结论：SLE患者存在外周血IL-15蛋白和基因表达异常，且与其分泌免疫球蛋白和自身抗体有关，提示IL-15可能参与SLE的病理生理过程。     

急性丙型病毒性肝炎患者颗粒溶素在外周血中表达增高

目的 研究急性丙型病毒性肝炎患者外周血颗粒溶素（granulysin, GNLY）的表达水平及其临床意义。方法 收集30例急性丙型病毒性肝炎患者和30例体检健康者的全血和血清,分别行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测外周血单核淋巴细胞（PBMC）中GNLYmRNA的表达水平,酶联免疫吸附法（ELISA）法测血清中GNLY蛋白含量,并检测丙肝患者AST、ALT水平。结果 急性丙型病毒性肝炎患者组PBMC中GNLYmRNA表达水平（7.71±1.44）高于体检健康者（0.83±0.17）（P<0.01）;血清GNLY平均浓度(20.16 ± 6.03 ) ng/mL也高于体检健康者(9.94 ± 2.99)ng/mL (P<0.01)。PBMC中GNLYmRNA表达水平与血清HCV RNA表达水平呈负相关（r=﹣0.869,P<0.01）;血清GNLY含量与肝功能指标ALT呈正相关（r=0.522,P<0.01）,与AST呈正相关（r=0.661,P<0.01）。结论 急性丙型病毒性肝炎患者PBMC中GNLYmRNA表达和血清中GNLY蛋白含量显著高于健康人群,其表达水平的变化有助于了解患者机体细胞免疫状态,监测病情。     

胰淀素对人胰岛β细胞凋亡的影响及其分子机制的初步研究

目的：初步探讨胰淀素（amylin）对人胰岛β细胞凋亡的影响及其分子机制。方法： 分离培养人胰岛细胞，免疫组化鉴定β细胞后分为对照组（培养液中含56 mmol/L葡萄糖）、胰淀素组（培养液中含10μmol/L胰淀素+56 mmol/L葡萄糖）及氨基胍组（培养液中含10 μmol/L胰淀素+05 mmol/L氨基胍+56 mmol/L葡萄糖），于37 ℃、5%CO2 培养24 h后做胰岛素释放实验，测定培养液上清胰岛素、一氧化氮（NO2-/NO3-）、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。原位末端核苷酸标记法（TUNEL）和胰岛素免疫组化双染色法及ELISA检测胰岛β细胞凋亡， RT-PCR检测胰岛细胞p53和bcl-2 mRNA表达水平。结果：胰淀素组胰岛β细胞凋亡小体富计系数（217±021）、β细胞凋亡百分数（13%）、NO2-/NO3-（2013±173）μmol/L和p53 mRNA表达水平（034±004）显著高于氨基胍组和对照组(P<001)，而胰岛素（334±131）mU·L-1/1×106 cells、GSH［（56±08） mg/L］和bcl-2 mRNA（007±001）表达水平则显著低于氨基胍组和对照组(P<005)。结论： 胰淀素可诱导人胰岛β细胞凋亡，其机制可能与胰岛β细胞抗氧化能力降低引起p53高表达有关。