Kai1/CD82对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响

目的探讨肿瘤转移抑制基因Kai1/CD82对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响。方法以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kai1基因的重组腺病毒(rAd-Kai1)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kai1转染人喉癌Hep-2细胞株,以转染空病毒载体及未转染Kai1的喉癌细胞株为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Kai1对细胞增殖能力的影响,用RT-PCR技术对转染后的细胞进行检测。结果rAd-Kai1经扩增、纯化后,滴度可达6×1010PFU/ml,当病毒量为30 MOI时,Hep-2细胞的转染率可达90%以上。MTT实验显示转染空腺病毒组与未转染组比较,Hep-2细胞株体外增殖能力无统计学差异,转染Kai1组Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于未转染组(P<0.05),抑制率可达29%。结论肿瘤转移抑制基因Kai1/CD82对喉癌细胞株体外增殖能力具有抑制作用。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

Kai1对人喉癌Hep-2细胞株增殖及生长周期的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因Kail对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及生长周期的影响.方法:本研究以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kail基因的重组腺病毒(rAd-Kail)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kail转染人喉癌Hep-2细胞株,利用RT-PCR技术对转染效果进行检测,以未转染Kail的喉癌细胞株为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术测定转染组细胞株的增殖抑制率和细胞周期.结果:rAd-Kail经扩增、纯化后,滴度可达1010 PFU/ml,当病毒量为30MOI时,对Hep-2细胞的转染率达93%以上.MTT实验显示转染Kail的Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于对照组(P＜0.01),抑制率可达29%.流式细胞术显示与对照组比较,转染组G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,差异有显著性(P＜0.05 o结论:通过重组腺病毒介导,成功地将Kail基因转入喉癌Hep-2细胞株,Kail对喉癌细胞体外增殖能力具有抑制作用,其机制可能是将Hep-2细胞生长周期阻滞于G0/G1期,提示:Kail抑癌基因可能通过阻滞肿瘤细胞生长周期实现抑制肿瘤细胞增殖.     

靶向FAK的siRNA对喉癌细胞增殖及侵袭能力的抑制作用

目的 运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断喉癌Hep-2细胞株中FAK基因的表达,探讨FAK基因沉默后对Hep-2细胞株产生的影响.方法 针对FAK基因,构建2条干扰重组质粒FAK-pGenesil-CH1和FAK-pGen-esil-CH2,1条阴性对照重组质粒FAK-pGenesil-HK;在脂质体的介导下转染喉癌Hep-2细胞株,用RT-PCR和Westem blot分析FAK mRNA及蛋白的表达;MTT法、流式细胞技术及体外侵袭实验测定十扰重组质粒对Hep-2细胞株的增殖、侵袭能力的影响.结果 重组质粒能有效地阻断Hep-2细胞株中FAK基因在mRNA和蛋白水平上的表达(P<0.05);重组质粒转染Hep-2细胞后,细胞增殖抑制率分别为58.34%、52.78%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干扰组G0~G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少(P<0.05);FAK-pGenesil-CH1、FAK-pGenesil-CH2作用Hep-2细胞株48 h后,Hep-2细胞穿过Matrigel膜的个数分别为(56.0±6.7)、(51.0±5,1),与阴性对照组(152.0 ±9.4)、正常对照组(139.0 ±8.1)比较有统计学差异(P<0.05).结论 干扰重组质粒能有效地抑制转染Hep-2细胞株的FAK mRNA及蛋白的表达,并能抑制Hep-2细胞株的增殖及侵袭能力.     

稳定高表达ANO1对Hep-2细胞生物学性状的影响

［摘 要］目的：建立外源性ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,并观察其对 Hep-2 细胞生物学性状的影响。方法：设计引物,提取头颈鳞癌患者的临床标本DNA,并以其为模板行PCR,得到ANO1基因序列片段,将ANO1片段插入到PSG-5质粒,转染入Hep-2细胞株,将稳定高表达ANO1的Hep-2细胞株设为实验组,空白质粒转染的Hep-2细胞株设为对照组。并利用Western blotting法和免疫荧光实验检测已转染细胞,观察ANO1的表达情况。利用Boyden小室侵袭实验和黏附实验检测Hep-2细胞生物学性状的变化。结果：成功构建含ANO1片段的pSG-5质粒,Western blotting法检测结果显示,各组均出现目的条带,实验组的相对分子质量为100 000处条带明显较浓。间接免疫荧光实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞内显现出亮绿色荧光,而空白质粒转染的Hep-2细胞内仅有较暗、较浅的绿色荧光。Boyden小室侵袭实验和黏附实验结果显示,稳定高表达ANO1的Hep-2细胞穿膜细胞百分比和黏附细胞百分比均明显高于对照组,两组结果比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：成功建立了ANO1稳定高表达的Hep-2细胞株,稳定高表达ANO1提高了Hep-2细胞的迁移能力。     

硫链丝菌肽对人喉癌Hep-2细胞生长及FoxM1表达的影响

目的研究硫链丝菌肽(thiostrepton,TST)对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及FoxM1表达的影响。方法用MTT法测定TST作用于人喉癌Hep-2细胞48 h的增殖抑制率;通过流式细胞仪(FCM)检测不同浓度TST分别作用于Hep-2细胞48 h后对其细胞周期动力学的影响;采用免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blot检测Hep-2细胞中FoxM1mRNA及蛋白表达,以及不同浓度TST作用于Hep-2细胞48 h FoxM1蛋白表达的变化。结果不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于Hep-2细胞48 h后的增殖抑制率分别为5.27%、9.43%、20.25%、41.61%、67.96%、96.95%;浓度分别为2、3μmol/L的TST作用于Hep-2细胞48 h后,均使Hep-2细胞停滞于G1/G0期(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);同时将TST作用于Hep-2细胞48 h后,经免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blot均检测到FoxM1 mRNA及蛋白在Hep-2细胞中表达显著降低(P<0.05)。结论 TST对人喉癌Hep-2细胞株具有明显的增殖抑制作用,其可能机制是与降低肿瘤细胞中FoxM1蛋白表达有关。     

三氧化二砷对人喉癌细胞株增殖抑制作用的探讨

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)制剂对人喉癌细胞株(Hep-2)细胞的诱导分化机制,为喉癌治疗提供理论依据。方法:应用MTT染色法观察As2O3对Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期进程变化及凋亡率,相差显微镜观察细胞形态学改变,电子显微镜观察经不同浓度的As2O3作用后Hep-2细胞超微结构改变。结果:As2O3对Hep-2细胞的增殖抑制率成剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡率升高;相差显微镜下实验组细胞帖壁不佳,细胞圆缩,数目减少;电子显微镜下可见线粒体肿胀,有空泡、细胞核染色质趋边凝集,可见凋亡小体。结论:As2O3对Hep-2细胞有显著的增殖抑制作用,可阻止Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

人喉鳞癌放射抗拒细胞株与其亲本细胞增殖和侵袭能力的比较

目的比较人喉鳞癌放射抗拒细胞株Hep-2R与其亲本细胞株Hep-2的体外增殖、运动及侵袭能力。方法分别培养人喉鳞癌放射抗拒细胞株Hep-2R和Hep-2,通过克隆形成实验测定其增殖能力,Transwells小室法测定运动及侵袭能力。结果Hep-2和Hep-2R的克隆形成率分别为(20.75±1.29)%和(19.17±0.82)%,二者有显著性差异(P<0.05);运动力(6个镜下视野的穿膜细胞数)分别为(122.0±6.8)和(117.0±5.8),二者无显著性差异(P>0.05);侵袭力(6个镜下视野的穿膜细胞数)分别为(166.0±9.8)和(166.4±8.4),二者无显著性差异(P>0.05)。结论人喉鳞癌放射抗拒细胞株Hep-2R较其亲本细胞株Hep-2的体外增殖能力弱,而运动和侵袭能力无显著性差异。     

复方金钱草清热颗粒对柯萨奇病毒体外抑制作用的研究

目的：研究复方金钱草颗粒冲剂对柯萨奇B组病毒致人喉癌细胞（Hep-2）细胞病变是否有抑制作用。方法：①Hep-2细胞感染病毒的同时给药;②Hep-2感染病毒2h后再给药;③药物与病毒作用2h后再感染Hep2细胞。结果：复方金钱草清热颗粒对柯萨奇病毒段、B5致Hep-2细胞病变有抑制作用,同时对CBVs的抑制作用明显优于CBV3。结论：金钱草对柯萨奇病毒有体外抑制作用。     

Tumstatin治疗喉鳞癌的实验研究

目的 探讨肿瘤抑素(Tumstatin)对喉鳞癌细胞(Hep-2)的治疗作用.方法 用Hep-2细胞株进行传代培养,台盼蓝法观察Tumstatin和顺铂对不同培养时间细胞的生长抑制情况;MTT法检测不同浓度的Tumstatin对Hep-2细胞存活率的影响,光镜观察细胞形态的变化;电镜和3′-原位末端标记法(TUNEL)检测Hep-2细胞凋亡的发生和形态学改变.结果 ①随着药物对Hep-2细胞作用时间的延长,细胞生存率明显降低,存在时间依赖性;②MTT检测显示,Tumstatin对细胞的增殖的抑制效应具有剂量依赖性;③光镜观察发现,药物作用组细胞出现病变;④电镜和TUNEL染色证实,Tumstatin对Hep-2细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主.结论 Tumstatin可能通过促进细胞凋亡发挥抗肿瘤的作用.     

靛玉红对喉癌Hep-2细胞侵袭能力的影响及机制

目的探讨靛玉红甲肟（Indirubin-3＇-monoxime,IRO）对人喉癌Hep-2细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对Hep-2细胞增殖活性的影响。Boyden chamber实验计算各组穿膜的细胞数以比较靛玉红甲肟对细胞侵袭能力的变化。明胶酶谱检测不同浓度靛玉红甲肟处理喉癌Hep-2细胞后细胞MMP-9和MMP-2活性的变化。结果 MTT结果发现IRO对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性（P〈0.01）。Boydenchamber体外迁移和侵袭实验结果显示：靛玉红甲肟可以显著抑制人喉癌Hep-2细胞的侵袭能力（P〈0.05）。明胶酶谱检测发现以靛玉红甲肟处理24h后人喉癌Hep-2细胞MMP-9和MMP-2活性明显降低,不同浓度组间存在显著性差异。结论靛玉红甲肟具有抑制人喉癌Hep-2细胞株增殖和侵袭的作用,其作用机制与显著抑制MMP-9和MMP-2活性有关。     

罗勒多糖对顺铂等三种化疗药物抑瘤增效作用的实验研究

目的 :研究罗勒多糖与顺铂、盐酸吡柔比星和氟尿嘧啶三种化疗药物合用对不同组织来源的肿瘤细胞株的生长抑制作用,以期明确罗勒多糖对化疗药物抑瘤增效适用范围。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株、人喉癌Hep-2细胞株和人胃癌SGC-7901细胞株,采用MTT法测定罗勒多糖对顺铂、盐酸吡柔比星和氟尿嘧啶抑制上述肿瘤细胞生长的增效作用。结果:罗勒多糖联合顺铂、盐酸吡柔比星和氟尿嘧啶共同作用48 h可明显提高三种化疗药物对A549细胞、Hep-2细胞和SGC-7901细胞的生长抑制作用,且其作用具有一定的剂量依赖性。结论:罗勒多糖对多种化疗药物抑制不同组织来源的肿瘤细胞株的生长具有增效作用,提示罗勒多糖对化疗药物抑瘤增效具有广泛适用性。罗勒多糖是一种潜在的化疗增效药物,也可以作为化疗辅助的功能食品开发应用。     

RGD序列合成肽抑制喉癌细胞增殖的实验研究

目的 研究含RGD序列合成肽对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响,并对其可能机制进行初步探讨.方法 化学合成RGD肽,免疫荧光技术检测RGD肽与Hep-2细胞结合能力;MTF法检测不同浓度RGD肽对喉癌细胞增殖能力的影响;免疫细胞荧光技术检测RGD肽处理前后喉癌细胞整合素αv蛋白表达.结果 RGD肽与喉癌Hep-2细胞有特异性结合作用,经RGD肽处理后的喉癌细胞增殖能力显著降低,整合素αV表达明显降低.结论 作为整合素αv受体拮抗剂,RGD肽对喉癌细胞的增殖能力有明显的抑制作用,为喉肿瘤基因治疗方面提供一个新靶点.     

14种紫珠属植物醇提取物抑制磷酸二酯酶4活性初探

目的 研究14种紫珠属植物枝叶提取物对磷酸二酯酶4(PDE4)的抑制作用.方法 采用体积分数95％乙醇回流提取法提取药材,以标记液体闪烁计数法检测提取物对PDE4的D2亚型靶标(PDE4D2)的抑制活性.结果 测试体系的药物终质量浓度为0.2g/L时,毛叶老鸦糊、裸花紫珠对PDE4D2的抑制率分别为86.78％和85.76％,其他12种紫珠属植物的抑制率则均在90％以上,其中大叶紫珠的抑制率为98.63％.结论 紫珠属植物对PDE4靶标具有明显的体外抑制作用.     

两组鲍曼不动杆菌对Hep-2细胞黏附及致其凋亡情况的研究

目的研究全敏感与泛耐药两组鲍曼不动杆菌对Hep-2细胞黏附及致其凋亡情况的差异。方法选取20株全敏感和20株泛耐药鲍曼不动杆菌,调菌浓度为3×108CFU/ml,取0.5ml分别加入到Hep-2细胞株的单细胞层培养物中,放5%CO2培养箱分别培养2、8、12、16和20h,分别用于计算Hep-2细胞的细胞黏附率和细胞黏附指数,不同时间段细胞凋亡情况的分析。结果全敏感菌株对Hep-2细胞的黏附以分散广泛黏附为主,引起细胞株病变快且形态改变明显;泛耐药菌株对Hep-2细胞的黏附以局部黏附为主,易被细胞吞噬,致细胞株病变慢,诱导细胞凋亡时间较全敏感组菌株滞后。两组耐药性不同的菌株在对Hep-2细胞的平均细胞黏附率上存在显著性差异,但在平均细胞黏附指数上的差异无统计学意义。结论泛耐药鲍曼不动杆菌对Hep-2细胞表现出黏附能力和致细胞病变能力的减弱,或许是自身突变、外膜蛋白缺失及各种耐药基因插入的影响,但具体原因和机制有待进一步研究。     

氧化砷和顺铂对喉鳞癌细胞Hep-2的作用及其机制

目的 探讨氧化砷(arsenous oxide,As2O3)和顺铂(cisplatin,DDP)对喉鳞癌细胞(Hep-2)的作用及其机制。方法 用Hep-2细胞株进行传代培养,观察As2O3和DDP对不同培养时间细胞的生长抑制情况;MTT法检测不同浓度的As2O3和DDP对Hep-2细胞存活率的影响,并记录细胞形态的变化;电镜和3’—原位末端标记法(TUNEL)检测Hep-2细胞凋亡的发生和形态学改变。结果 ①随着药物对Hep-2细胞作用时间的延长,细胞生存率明显降低,存在时间依赖性。②MTT检测显示,As2O3和DDP对细胞增殖的抑制效应具有剂量依赖性。③光镜观察发现,药物作用组细胞出现病变。④电镜和TUNEL染色证实,As2O3和DDP对Hep-2细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主。结论 As2O3和DDP可能通过促进细胞凋亡发挥抗肿瘤的作用。     

下调53BP1基因表达对喉部鳞癌细胞放射增敏作用的研究

目的 利用RNA干扰技术下调喉部鳞癌Hep-2细胞株P53结合蛋白1基因（53BP1）的表达,观察其对肿瘤细胞周期及放疗敏感性的影响。方法 构建53BP1短发夹RNA（shRNA）重组质粒,然后转染Hep-2细胞株,构建稳定低表达53BP1的Hep-2细胞系,通过Western blot检测转染空载质粒的Hep-2细胞（NC）、野生型Hep-2细胞（未转染,Hep-2组）和稳定转染下调53BP1表达的Hep-2细胞组（P6组）细胞53BP1蛋白的表达水平,MTT法检测转染对细胞正常情况下增殖的影响,通过流式细胞术检测经放射线照射后的细胞周期分布,并采用克隆形成实验检测下调53BP1表达的Hep-2细胞系对放射的敏感性变化。结果 成功构建了稳定低表达53BP1的Hep-2细胞株P6,Western blot显示P6组Hep-2相较野生型Hep-2细胞中53BP1蛋白水平下降（P<0.05)。MTT结果示下调53BP1蛋白表达并未影响细胞正常的生长。P6组下调53BP1后,经不同剂量放射后G2/M期周期阻滞较NC组和野生型Hep-2细胞减弱（P<0.05）,周期阻滞比例随放射剂量增加而增加。在0、2、6、10 Gy剂量的照射后,P6组放射敏感参数（D0、N、Dq、SF2）均低于野生型Hep-2组和对照组（P<0.05)。结论 RNA干扰可下调53BP1表达的Hep-2细胞,减少G2/M周期阻滞,从而增强对放射的敏感性。     

长链非编码RNA MALAT-1基因的敲除抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖和迁移

目的探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的影响。方法使用实时聚合酶链反应（RTPCR） 以永生化鼻咽上皮（NPE）细胞株NP-69作为参照检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1 慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细 胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell 小室检测Hep-2 细胞的迁移。最后使用Matrigel 侵袭实验评估shmalat1 和 shCtrl慢病毒转染的Hep-2细胞的侵袭能力。结果使用qPCR检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,结果 发现与NP-69细胞相比,FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达显著增加。敲除MALAT1明显抑制Hep-2细胞增 殖。与MOCK和shCtrl 细胞相比,MALAT1-shRNA 慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加（P<0.01）。此外,细胞在G2/M期 的百分比下降（P<0.01）。下调MALAT1时,Hep-2细胞的侵袭和迁移都受到抑制。结论MALAT1在喉鳞状细胞癌高表达。敲 除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移起抑制作用。     

槲皮素对喉癌细胞Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用

目的研究槲皮素在体外对喉癌Hep-2细胞株的生长和凋亡的影响。方法应用MTT法、电镜和流式细胞术等方法对在体外经不同浓度槲皮素处理过的Hep-2细胞进行检测,观察细胞增殖和凋亡的改变。结果①槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Hep-2细胞的生长,作用72 h的半数抑制浓度(IC50)是52.48μmol/L,呈剂量依赖性关系。②PB能诱导Hep-2细胞凋亡,发生G1→S期阻滞。结论槲皮素可使喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,为槲皮素用于喉癌临床治疗提供了部分依据。      

睾酮对喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶活性的影响

目的研究睾酮对人喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对Hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48 h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性。结果10-8mol/L睾酮作用48 h,人喉癌细胞Hep-2细胞OD值由作用前的0.150±0.008增至0.281±0.010,其他实验浓度组均不能明显促进Hep-2细胞的分裂增殖。睾酮作用前后Hep-2细胞均强表达雄激素受体,表达率分别为95.73%和93.84%,差别无统计学意义。端粒酶表达率由睾酮作用前的52.35%增至89.21%,端粒酶强阳性细胞爬片由2张增至8张,差异有统计学意义。结论HEP-2细胞株为雄激素敏感型细胞,睾酮可能通过上调端粒酶的表达促进喉癌Hep-2细胞的分裂增殖,这对研究喉癌的激素疗法及开发端粒酶抑制剂有重要的意义。