三氧化二砷联合氟尿嘧啶抗人结肠癌Lovo细胞作用及其机制的研究

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)与氟尿嘧啶(5 FU)联合应用对人结肠腺癌细胞株Lovo的影响及其作用机制。方法:经不同浓度的As2O3 和(或)5- FU处理Lovo细胞后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应;AO/EB荧光染色、DNA电泳、电镜和流式细胞术观察细胞凋亡和形态学及细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化。结果:与As2O3 或5 -FU单药作用相比,As2O3 与5- FU联合应用可显著增强人结肠癌细胞增殖抑制作用和诱导结肠癌细胞凋亡作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1 期细胞比例上升,癌细胞bcl- 2基因表达明显下降, bax和Fas基因表达显著增强。结论:As2O3与5 -FU联合应用具有显著协同抗大肠癌作用,其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

目的：应用体外培养的肝癌细胞株(SMMC-7721)观察砷剂(As2O3)的凋亡诱导作用。方法：采用MTT法检测As2O3对肝癌细胞增殖的影响，DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。结果：As2O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量-时效关系；As2O3可使肝癌细胞周期改变，与浓度有关，与作用时间未见明显关系；As2O3诱导肝癌细胞发生凋亡，并与浓度、时间有关。结论：As2O3能抑制肝癌细胞增殖，改变肝癌细胞周期，诱导肝癌细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人鼻咽癌细胞株(CNEl)增殖及诱导凋亡的作用。方法：以不同浓度的As2O3处理CNEl，用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况，细胞染色方法现察细胞凋亡的形态，原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞的DNA含量。结果：As2O3明显抑制人鼻咽癌细胞株CNEl细胞的增殖，其抑瘸作用优于颇铂(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)。As2O3作用于细胞后，可见典型凋亡细胞的形态学改变：细胞核固缩，染色质凝集，核碎裂，凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。结论：As2O3可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNEl的生长和促进细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

目的 :应用体外培养的肝癌细胞株 (SMMC 772 1)观察砷剂 (As2 O3)的凋亡诱导作用。方法 :采用MTT法检测As2 O3对肝癌细胞增殖的影响 ,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2 O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。结果 :As2 O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量 -时效关系 ;As2 O3可使肝癌细胞周期改变 ,与浓度有关 ,与作用时间未见明显关系 ;As2 O3诱导肝癌细胞发生凋亡 ,并与浓度、时间有关。结论 :As2 O3能抑制肝癌细胞增殖 ,改变肝癌细胞周期 ,诱导肝癌细胞凋亡     

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶抗裸鼠人结肠癌移植瘤的作用及其机制的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）对裸鼠人结肠癌移植瘤的抗肿瘤作用、作用机制以及药物毒性.方法建立裸鼠人结肠癌模型,随机分为生理盐水组、As2O3组、5-FU组和As2O3联合5-FU组,腹腔分别注射生理盐水、As2O3、5-FU和As2O3 ＋5-FU,观察各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对体内标本行光镜、电镜、原位末端标记（TUNEL）、免疫组化和血常规检测.结果与单药作用相比,As2O3联合5-FU可显著抑制结肠癌移植瘤的增长,CDI值〈1,并显著增强诱导瘤细胞凋亡作用、调控凋亡相关基因（Bcl-2、Bax、Fas和FasL）表达.联合用药并未增加裸鼠肝、肾和造血系统的毒性.结论 As2O3与5-FU联合应用对结肠癌移植瘤有协同抗肿瘤作用,其机制可能与增强诱导癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因表达有关;同时联合用药对于荷瘤裸鼠的肝、肾和造血系统无明显毒性.     

三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )体外抑制人鼻咽癌细胞株 (CNE1)增殖及诱导凋亡的作用。方法 :以不同浓度的As2 O3 处理CNE1,用四甲基噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖情况 ,细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量。结果 :As2 O3 明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖 ,其抑瘤作用优于顺铂 (DDP)和 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)。As2 O3 作用于细胞后 ,可见典型凋亡细胞的形态学改变 :细胞核固缩 ,染色质凝集 ,核碎裂 ,凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。结论 :As2 O3 可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长和促进细胞凋亡的作用     

三氧化二砷对人膀胱癌细胞BIU-87作用的体外研究

目的观察三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的作用,并探讨其作用机制.方法采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同时间对BIU-87细胞的生长抑制率,同时流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用72 h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、Bcl-2的表达.结果As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长,具有浓度、时间依赖性特点.Fas、Bcl-2的表达分别与浓度增加呈正、负相关,P<0.05,且二者随浓度增高呈负相关,P<0.05.结论As2O3可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制与凋亡有关.     

三氧化二砷诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人移行细胞膀胱癌细胞株T24细胞凋亡的作用。方法用MTT法、TUNEL法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导T24细胞凋亡的作用。结果As2O3可有效地抑制T24细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条带。TUNEL法呈阳性结果。透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。对照组均未见上述变化。对凋亡相关基因Bcl-2免疫组化染色发现其表达下调,同时凋亡主要效应分子Caspase 3被激活。结论As2O3可有效诱导膀胱癌细胞凋亡,通过下调Bcl-2基因表达是其作用机制之一。     

三氧化二砷对人白血病细胞株NB4和K562及MOLt4的增殖、周期及凋亡的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人白血病细胞株NB4、K562、MOLt4的增殖，周期及凋亡的影响。方法：采用台盼蓝拒染法计数活细胞数．并计算细胞生长率；细胞涂片经Wright-Giemsa染色，光镜下观察细胞的形态；流式细胞仪解析细胞周期。结果：1)As2O3能够抑制NB4、K562、MOLt4细胞的增殖。2)4μmol/L As2O3能够使K562细胞发生M期阻滞。但NB4、MOLt4细胞未见明显改变。3)2、4μmol/L的As2O3处理NB4、MOLt4和K562细胞48h．NB4、MOLt4细胞株的凋亡细胞明显增多。但是．K561细胞未见明显改变。结论：As2O3不但对NB4细胞具有抑制增殖．诱导细胞凋亡的作用．而且对非，t(15：17)的K562、MOLt4细胞也具有抑制增殖的作用．同时诱导MOLt4细胞凋亡．使K562细胞发生M期阻滞。     

单用TAM及联合应用5-FU对结肠癌细胞株生长抑制作用及增殖凋亡的影响

目的：探讨他莫昔芬(tamoxifen，TAM)单独或联合5-FU化疗对结肠癌细胞株生长抑制作用及凋亡的影响。方法：应用MTT法，比较单纯应用TAM和TAM与5-FU联合对SW480、HT29细胞株生长抑制作用，通过药物量-效关系曲线，观察TAM有无化疗增敏作用，同时检测PCNA和AI，探讨TAM联合5-FU对增殖、凋亡的影响。结果：单独应用TAM对SW480、HT29细胞株无生长抑制作用；TAM联合5-FU在一定浓度时可抑制SW480和HT29细胞的生长，提高对5-FU的敏感性，起到化疗增敏作用。通过对PCNA和AI2个指标的检测，随着浓度的增加和时间的延长，TAM联合5-FU抑制细胞的增殖和促进细胞的凋亡均呈上升趋势。结论：一定浓度的TAM能增加入结肠癌细胞株SW480、HT29对化疗药物5-FU的敏感性，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。     

吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响

目的　观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,及其对 cyclin E蛋白的影响。方法　采用 MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌 Hep G2细胞增殖的影响 ;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对 Hep G2细胞周期分布的影响 ,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡的作用 ;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对Hep G2细胞周期调控蛋白 cyclin E的影响。结果　吲哚美辛可抑制肝癌 Hep G2细胞的增殖 ,诱导其凋亡 ,改变细胞周期分布 ,使 G0 /G1 期细胞比例增高 ,S期比例降低 ,同时还可使 cyclin E蛋白表达下降。上述作用具有剂量和时间依赖性 (P<0 .0 5 )。结论　吲哚美辛可诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,改变细胞周期分布 ,影响细胞周期调控蛋白表达 ,从而抑制细胞增殖。     

三氧化二砷对鼻咽癌放疗增敏作用及其机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）注射液对鼻咽癌放疗增敏作用与肿瘤血管生成素表达的关系。方法：将74例鼻咽癌患者随机分为单纯放疗组（放疗组）和As2O3放射增敏组（增敏组）,观察两组患者鼻咽肿瘤消退情况。每个病例在治疗前及放疗20Gy后24h各取材1次。免疫组化SP法检测血管生成素1（Ang-1）和血管生成素2（Ang-2）蛋白表达。结果：放疗40Gy时增敏组和放疗组的鼻咽肿瘤消退率分别为43．6％（17／39）和20．0％（7／35）,Х^2=4．684,P=0．003。增敏组Ang-1和Ang-2蛋白在放射治疗剂量20Gy时均表达下调,z分别为-2．147和-2．985,P值分别为0．032和0．003。在40Gy肿瘤消退组,Ang-2蛋白下调,z=-02．183,P=0．029。结论：As2O3注射液对鼻咽癌患者放射治疗具有增敏作用,其增敏机制可能与Ang-1和Ang-2蛋白抑制肿瘤血管形成有关。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡的研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas、Bcl-2和p53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖，P=0．004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示，G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高，P=0．005；Fas蛋白表达明显上调，P=0．002；Bcl-2蛋白表达下调，P=0．00～0；p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562/ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

自分泌一氧化氮在氟尿嘧啶诱导人肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的 :观察肝细胞Bel74 0 2自分泌一氧化氮 (NO)在 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)诱导人肝癌细胞凋亡过程中的作用 ,进一步揭示 5 FU的作用机理 ,同时寻找提高 5 FU的临床疗效的辅剂。方法 :人肝癌细胞Bel74 0 2按常规条件培养于含 10 %小牛血清的无L 精氨酸 (L Arg)的DMEM (dulbecco’smodifiedeagle’smedium)培养液中。在 5 FU作用下 ,采用免疫组化法观察诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达情况 ,并在其底物L Arg存在的前提下 ,采用酶法测定硝酸盐 /亚硝酸盐 ,反映NO的生成 ,并证明其作用。用电镜观察凋亡细胞的形态 ,流式细胞仪进行凋亡细胞的定量。用L Arg的竞争性拮抗剂L NAME(Nω nitro l argininemethylester)对研究结果进行验证。应用病理彩色图文分析系统对免疫组化结果进行光密度定量分析。采用方差分析和t检验进行统计学分析。结果 :在 5 FU的作用下 ,iNOS表达增强 ,5 FU组 (0 1687± 0 0 1968) ,对照组 (0 10 4 9± 0 0 12 66) ,P <0 0 5 ,在其底物L Arg存在的前提下 ,内源性NO的浓度为 (73 0± 10 2 ) μmol/L(P <0 0 5 ) ,有显著性提高 ;人肝癌Bel74 0 2细胞株的凋亡率显著性增高为 (17 85± 0 78) % ,细胞坏死率和残渣率显著减少分别为 (32 99± 0 83) %、(3 18± 1 0 1) %。L NAME     

蜘蛛毒素对食管癌细胞株作用机制的初步研究

目的探讨雷氏大疣蛛毒素对人食管癌细胞株作用机制。方法采用不同浓度的雷氏大疣蛛毒素处理食管癌细胞株TE-1，经MTT法测定蜘蛛毒素对人食管癌细胞株TE-1增殖的影响，透射电镜观察细胞形态变化，流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布，免疫组化法与ELISA法检测经蜘蛛毒素作用食管癌细胞株TE-1的VEGF表达情况。结果雷氏大疣蛛毒素能够抑制人食管癌细胞株TE-1的增殖，形态学观察到凋亡现象，流式细胞仪检测显示蜘蛛毒素作用后凋亡峰明显，出现G2／M期阻滞，对VEGF表达有抑制作用。结论雷氏大疣蛛毒素可抑制食管癌细胞株TE-1的增殖和VEGF表达，诱导凋亡，有可能是一种具有抗肿瘤作用的天然药物，其抗肿瘤作用的机制有待进一步研究。     

氟尿嘧啶对人结肠癌细胞凋亡及Rb蛋白表达的影响

目的：探讨氟尿啶啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｉｌ,５－Ｆｕ）诱导体外人结肠癌细胞株（ＨＬＣ／Ｓ）细胞凋亡与Ｒｂ蛋白表达之间的影响。方法：应用ＭＴＴ比色法和琼脂培养克姓形成法检测５－Ｆｕ对ＨＩＣ／Ｓ细胞增殖抑制作用;采用ＤＮＡ断片法和未端标记法（ＴＵＮＥＬ）观测５－Ｆｕ对ＨＩＣ／Ｓ细胞凋亡的诱导效应。使用Ｓ－Ｐ免疫组化技术对ＨＩＣ／Ｓ细胞Ｒｂ蛋白表达状态进行再证实并用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法对Ｈ