医院感染革兰阴性杆菌耐消毒剂基因研究

目的了解浙江湖州解放军第98医院临床分离的医院感染革兰阴性杆菌中,耐消毒剂基因qacE△1存在状况.方法采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法,分析147株革兰阴性杆菌(分别为鲍氏不动杆菌63株、铜绿假单胞菌30株、阴沟肠杆菌20株、嗜麦芽寡养单胞菌19株、黄杆菌属细菌15株)中qacE△1基因.结果147株革兰阴性杆菌qacE△1基因阳性96株,总阳性率为65.3%;阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌和黄杆菌属细菌qacE△1基因阳性株数分别为17(85.0%)、25(83.3%)、52(82.5%)、2(10.5%)、0.结论临床分离的医院感染革兰阴性杆菌中,耐消毒剂基因qacE△1携带率比较高,应引起我国医院消毒界的重视.     

基因芯片技术检测常见革兰阴性杆菌耐药基因的研究

目的设计一种耐药基因检测芯片,可并行检测临床常见的革兰阴性杆菌中较常见耐药基因。方法收集临床分离的70株革兰阴性杆菌:肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌,根据已知耐药基因序列设计并合成引物及探针,制备耐药基因检测芯片,进行杂交及扫描。结果耐药基因检测芯片除未检到IMP耐药基因外,其他耐药基因检测结果均与PCR检测结果一致。结论该研究设计的革兰阴性杆菌耐药基因检测芯片有较好的应用价值。     

多重耐药革兰阴性杆菌耐消毒剂基因qacE△1 sul1监测

目的了解某院临床常见革兰阴性(G-)杆菌多重耐药株耐消毒剂基因qacE△1 sul1的产生情况。方法收集临床分离的G-杆菌235株,包括155株多重耐药株和80株敏感株,采用聚合酶链反应（PCR）法检测qacE△1 sul1基因,并进行DNA测序。结果在50株产超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、27株产ESBLs肺炎克雷伯菌、50株多重耐药的铜绿假单胞菌和28株多重耐药的鲍曼不动杆菌中,检出qacE△1 sul1 株分别为37、24、46、28株,检出率分别为74.00％、88.89%、92.00%和100.00％,总的检出率为87.10％;在非产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌以及铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的敏感株（各20株）中,分别检出qacE△1 sul1株 16、7、5、13株,检出率分别为80.00％、35.00%、25.00%和65.00％,总的检出率为51.25％。结论该院G-杆菌多重耐药株耐消毒剂基因qacE△1 sul1的携带率较高,加强多重耐药菌对消毒剂耐药性的监测,对临床合理使用消毒剂具有重要意义。     

多药耐药革兰阴性杆菌qacE△1-sul1基因检测及临床意义

目的了解多药耐药革兰阴性杆菌耐qacE△1-sul1基因存在情况，并讨论其临床意义。方法自临床分离225株多药耐药革兰阴性杆菌，采用聚合酶链反应法检测qacE△1-sul1基因。结果225株革兰阴性杆菌qacE△1-sul1基因阳性120株，阳性率53．3％。结论临床分离的革兰阴性杆菌qacE△1-sul1基因携带率较高。     

多药耐药革兰阴性杆菌qacEA△1-sull基因检测及临床意义

目的 了解多药耐药革兰阴性杆菌耐qacEAl-sull基因存在情况,并讨论其临床意义.方法 自临床分离225株多药耐药革兰阴性杆菌,采用聚合酶链反应法检测qacE△l-sull基因.结果 225株革兰阴性杆菌qacEAl-sull基因阳性120株,阳性率53.3%.结论 临床分离的革兰阴性杆菌qacE△l-sull基因携带率较高.     

革兰阴性杆菌β-内酰胺类抗菌药物耐药机制研究进展

细菌在地球上生存已＞30亿年,擅长保护自身免受毒物的损害.细菌细胞壁是维持细菌细胞外形完整的结构,它能适应多样的环境变化,并与机体互相作用.本世纪新兴的6种威胁性的ESKAPE微生物:屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、不动杆菌属、铜绿假单胞菌和肠杆菌属,其中4种是革兰阴性杆菌,肺炎克雷伯菌、不动杆菌属、铜绿假单胞菌和肠杆菌属[1].铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌可对大部分甚至所有的目前临床使用的抗菌药物耐药[2].     

常见革兰阴性杆菌耐药性监测

目的了解呼吸科常见革兰阴性细菌分布和耐药趋势,为临床合理使用抗生素提供依据。方法对本院呼吸科2003-07~2004-12住院患者的痰及支纤镜灌洗液分离出的主要革兰阴性杆菌致病菌,采用法国VITEK-AMS细菌鉴定仪进行鉴定,并按美国临床实验标准委员会2000年判断标准用纸片扩散法进行药物敏感实验。结果共分离出484株革兰阴性杆菌,依次为大肠埃希菌32.4%、铜绿假单胞菌25.2%、肺炎克雷伯菌21.5%、鲍曼不动杆菌15.5%、阴沟肠杆菌5.4%,耐药性分析显示:13种抗生素中,前三位耐药率最低的分别为亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟。氨苄西林耐药率最高。结论细菌耐药问题仍是目前临床的严重问题,细菌耐药性监测是必要的。     

耐第三代头孢菌素革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶及耐药基因分析

目的了解革兰阴性杆菌对第三代头孢菌素耐药的分子机制。方法采用常规琼脂2倍稀释法测定11株(CR01-CR11)临床分离革兰阴性杆菌,对13种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,纸片扩散法检测耐药菌的ESBLs表型,通过PCR扩增检测其耐药基因。结果MIC结果表明,11株病原菌对几种常见的第三代头孢菌素具有明显的耐药性;表型确证实验表明,除CR07外,其余10株均为产ESBLs菌株;酶的水解底物轮廓实验表明,10株产ESBLs株菌所产生的β-内酰胺酶均能高效水解头孢哌酮和头孢孟多,而对头孢他啶水解活性较低。结论10株产ESBLs革兰阴性杆菌的酶活性、等电点及耐药基因在一定程度上揭示了病原菌产ESBLs与其耐药性之间的关系。     

革兰阴性杆菌抗生素耐药分析

目的了解我院革兰阴性杆菌的分布及耐药情况,为临床用药提供依据. 方法对我院2001年1月～2003年10月各科室送检的各类标本中培养分离出1 076株革兰阴性杆菌,采用了全自动微生物分析仪VITEK32及配套鉴定卡和测定卡进行了分析. 结果共分离出革兰阴性杆菌1 076株,主要以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌属多见,从总的耐药情况来看革兰阴性杆菌对亚胺培南耐药率最低. 结论医院革兰阴性杆菌耐药严重,要定期进行细菌耐药监测,合理使用抗生素.     

耐亚胺培南革兰阴性杆菌的变迁与临床分布

目的 调查耐亚胺培南革兰阴性杆菌的分离情况和临床分布.方法 收集2008年1月-2010年12月住院患者各种标本中分离出的病原菌,采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2全自动微生物分析系统进行鉴定和药物敏感试验,结果用WHONET 5.4软件进行分析.结果 3年内共分离出耐亚胺培南革兰阴性杆菌株906株,其中2008年185株,分离率为15.7％,非发酵菌占93.0％;2009年361株,分离率为18.0％,非发酵菌占73.4％;2010年360株,分离率为18.1％,非发酵菌占81.9％,非发酵菌主要见于鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄杆菌属、嗜麦芽寡养单胞菌等;肠杆菌科主要见于变形菌属、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、肠杆菌属.结论 医院分离的耐亚胺培南菌株中非发酵菌一直占较大比例,且2009年出现的耐亚胺培南肠杆菌科比2008年明显上升,但2010年有所下降.     

肺炎克雷伯菌对季铵盐消毒剂及复方新诺明耐药相关基因检测

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)季铵盐消毒剂及复方新诺明耐药相关基因存在状况。方法在2005年9月~2006年4月从住院患者中分离出25株肺炎克雷伯菌,采用PCR及序列分析的方法分析5种基因qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA12和dfrA17。结果25株肺炎克雷伯菌中,qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA12和dfrA17基因阳性株数分别为21(84.0%)、0、6(24.0%)、6(24.0%)和0;qacE△1-sul1阳性基因测序比对与已在美国核苷酸序列数据库(GenBank)中登录的qacE△1-sul1基因序列完全同源。结论临床分离的肺炎克雷伯菌中qacE△1-sul1基因阳性率很高,对复方新诺明耐药与菌株携带dfrA5、dfrA12和qacE△1-sul1基因有关。     

新型双子季铵盐(1,2-DBnQA)杀菌效果及影响因素的研究

[目的]了解新型双子季铵盐(1,2-DBnQA)(以下简称1,2-DBnQA)的杀菌效果。[方法]2010年,使用自制的1,2-DBnQA进行对枯草杆菌黑色变种芽孢、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的实验室载体定量杀菌观察,并试验小牛血清和pH值的变化对其杀菌率的影响。[结果]有效成分10 000 mg/L、5 000 mg/L的1,2-DBnQA对枯草杆菌黑色变种芽孢作用120 min的杀灭率分别为100.00%、99.46%;含有效成分100 mg/L作用5 min,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的杀灭率均为100.00%,含有效成分25 mg/L作用30 min时的杀灭率均为100.00%。溶液pH值为9.0时杀菌效果较好,pH值为5.0时杀菌效果有所下降。有效成分含量50 mg/L时对金葡菌作用5、10、20 min的杀灭率,菌液中小牛血清浓度为0.00%者均在99.92%~100.00%,浓度为25.00%者为99.84%~99.99%,浓度为50.00%者为96.28%~99.22%。使用有效成分100 mg/L的擦拭显微镜载物台5 min,细菌总数的平均杀灭率为96.16%。[结论]1,2-DBnQA对细菌芽孢和细菌繁殖体有较好的杀灭作用,其杀菌效果受有机物和pH值的影响。     

装饰材料挥发物吸入染毒对大鼠IL-4、IL-5含量及ICAM-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨挥发性有机化合物的吸入和呼吸道变态反应之间的关系，为评价装修后室内空气污染提供毒理学依据。[方法]用装饰材料挥发物对雄性SD大鼠静式吸入染毒30d，测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-4、IL-5)含量和肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达。[结果]在中浓度染毒组(甲醛浓度为0．81mg／m^3、总挥发性有机化合物(TVOC)浓度为84．88mg／m^3)，BALF中IL-4含量平均为12．95pg／ml，与对照组相比显著升高；在高浓度染毒组(甲醛浓度为1．50mg／m^3、TVOC浓度为299．03mg／m^3)，BALF中IL-4含量平均为13．23pg／ml，IL-5含量平均为23．21pg／ml，均显著高于对照组。中高浓度染毒组大鼠肺组织ICAM-1 mRAN表达显著增强，病理学检查发现肺组织中嗜酸性粒细胞浸润尤为明显。[结论]室内装修可能与呼吸道变态反应性疾病之间有一定联系。     

贵州省2009～2011年度新型H1N1流感病毒HA1基因序列分析

目的 建立并完善贵州省新型甲型H1N1流感病毒基因分析检测技术平台,了解2009～2010年度贵州省新型H1N1流感病毒HA1片段与WHO公布的流行株是否有发生变异.方法 收集10株新型H1N1流感病毒毒株,提取病毒核酸RNA,通过RT-PCR扩增HA1片断,用电泳观察PCR产物目的条带的大小,经过纯化、测序,用Biodeit、MEGA4相关软件进行序列比对,同源性及差异性分析,构建系统发育树.结果 与古典猪流感病毒株相比,贵州省2009年、2010年、2011年流感病毒株同源性分别为72.0％～74.6％、72.0％、67.8％～68.3％.与其他4株亚洲株H1N1流感病毒代表株相比,贵州省2009年、2010年、2011年流感病毒株同源性分别为92.3％～95.8％、91.5％～92.4％、89.8％～90.8％.2009年度组内同源性为93.2％～100％; 2010年组内高度同源,为100％; 2011年组内同源性为98.3％.贵州省流感毒株与中俄代表株A/Habarovak/01/2009 (H1N1)的HA1基因同属一个谱系,在同一个分支上,同时,与墨西哥第一株甲型H1N1流感A/Mexio City/001/2009 (H1N1)亲缘关系也较近,在同一个大分支上.结论 贵州省新型H1N1流感病毒代表株HA1基因与WHO公布的流行株在核苷酸水平有一定持续水平的变异.     

广元市甲型H1N1流感抗体水平调查

目的了解广元市人群甲型H1N1流感病毒感染水平,为评估疫情发展趋势提供信息支持。方法采集不同年龄段的城市和农村人口的血清用血凝抑制实验（HI）方法进行抗体检测,用统计学方法对抗体水平进行分析。结果 2010年共采集754份血清标本,其中甲型H1N1抗体阳性140份,阳性率18.6%,GMT1∶11。不同时间点、不同地区调查对象甲型H1N1抗体水平差异有统计学意义（P〈0.05）,不同性别、不同年龄组之间抗体水平差异无统计学意义（P〉0.05）。多因素logistic回归分析显示,甲型H1N1疫苗接种、调查时间和地区差异与HI抗体阳性呈显著性相关。结论广元市人群中18%以上具有甲型H1N1流感保护抗体,但抗体水平仍然较低,应进一步加强甲型H1N1流感疫苗的宣传和接种。     

HLA-DRB1基因多态性与陕西汉族妇女患中重度EM风险的相关性

目的 探讨HLA-DRB1基因多态性在陕西汉族中重度子宫内膜异位症(EM)人群中的分布及其与EM发病风险的关联性.方法 采用聚合酶链反应-直接测序技术(PCR-SBT),检测50例中重度EM患者和52例正常对照人群中HLA-DRB1的基因多态性分型,分析其基因型分布及其与中重度EM发病风险的相关性.结果 HLA-DRB1基因在EM组和对照组人群中均呈高度多态性分布;EM组人群中检测到22种HLA-DRB1基因型,其中基因型频率大于5%分别为HLA-DRB1*07:01(18%),DRB1*15:01(12%),DRB1*09:01(11%),DRB1*12:01(7%),DRB1*12:02(7%),DRB1*14:54(6%),DRB1*15:02(6%)和DRB1*14:05(5%).在对照组中人群中检测到24种HLA-DRB1基因型,其中基因型频率大于5%分别为HLA-DRB1*15:01(16.3%),DRB1*07:01(14.4%),DRB1*12:02(8.7%),DRB1*12:01(8.7%),DRB1*09:01(6.7%)和DRB1*04:05(5.8%).HLA-DRB1各基因型在EM组与对照组中的分布未见明显统计学差异.结论 HLA-DRB1基因多态性与陕西汉族中重度EM发病风险无明显关联.     

实时荧光定量PCR检测膀胱癌TWIST1基因启动子的甲基化状态

目的建立针对TWIST1基因启动子甲基化状态的荧光定量检测方法,进而评估其在膀胱癌临床研究的应用前景。方法应用实时荧光定量PCR方法检测南通地区50例确诊膀胱癌患者和25例非膀胱癌的健康对照者的尿液标本中TWIST1基因启动子的甲基化和非甲基化含量,对其甲基化率进行对比。结果正常人的TWIST1启动子的甲基化率为8.1%～17.3%,平均值为12.3%,膀胱癌患者的甲基化率为25.2%～48.3%,平均值为38.2%,膀胱癌患者的TWIST1基因启动子甲基化率有明显的增高(P<0.05)。结论 TWIST1基因启动子区在膀胱癌中异常甲基化,能够作为有效检测膀胱癌的基因。     

X线交叉互补基因1多态性与铅中毒易感性

目的探讨X线交叉互补基因1（XRCC1）A194W和A399Q多态性与铅中毒易感性关系，寻找铅中毒易感性生物学标志。方法采用病例一对照研究，收集122例确诊铅中毒病人作为病例组，142例健康人群作为对照组。应用PCR-限制性片段长度多态性（PCRRFLP）技术检测2组人群基因型，分析不同基因型对铅中毒易感性的影响。结果XRCC1 A194W和A399Q的野生型、杂合突变型和纯合突变型在病例组和对照组分布频率差异均有统计学意义（P均〈0．05）；XRCC1 A194W的杂合突变型（CT）、纯合突变型（TT）和突变型（CT＋TT）分别增加铅中毒易感性达2．03，2．59和2．12倍。XRCC1 A399Q的杂合突变型（GA）和突变型（GA＋AA）分别减少铅中毒易感性达0．37和0．52倍；纯合突变型（AA）与铅中毒的易感性无关。结论XRCC1 A194W和A399Q基因多态性与铅中毒易感性有关，可考虑作为铅中毒的重要易感性生物学标志。     

杭州地区急性呼吸道感染患儿人博卡病毒的检测及分析

目的了解杭州地区人博卡病毒(HBoV)的流行情况和基因变异情况。方法对杭州地区160例儿童急性呼吸道感染患者咽拭子样本进行HBoV检测,并对阳性样本进行常见呼吸道病毒的检测,最终选取HBoV单一阳性的HZ1株和HZ2株进行VP1基因扩增,将获得的序列上传Genbank并与其他国家和地区的8株HBoV的VP1基因进行序列比对和分析。结果杭州地区HBoV的检出率为6.9%(11/160),与其他常见呼吸道病毒的合并感染率达到45.5%(5/11),HZ1株和HZ2株与其他国家和地区的8株HBoV的VP1基因相似性达到99%以上。结论研究证明杭州地区急性呼吸道感染患儿中存在HBoV的感染,与其他呼吸道病毒有较高的合并感染,从分离到的HZ1株和HZ2株来看,杭州地区流行的是ST2基因型,其外壳蛋白VP1基因变异很小。