抗抑郁药对新生大鼠海马细胞的保护作用

目的：研究不同种类的抗抑郁药对谷氨酸和过氧化氢所致新生大鼠海马细胞损伤的保护作用。方法：建立Glu对新生大鼠海马神经细胞的急、慢性损伤模型及H2O2对大鼠海马神经细胞的急性损伤模型。观察文拉法辛、度洛西汀、氟西汀、地西帕明和DOV对海马神经细胞是否有保护作用，并采用流式细胞仪测定细胞内钙浓度，初步探讨急性Glu损伤及各类抗抑郁药物的神经保护作用和细胞内钙超载的相关性。     

人参皂甙Rb1和Rg1对原代培养大鼠海马神经细胞的保护作用

用大鼠海马神经细胞原代培养的实验模型,观察了人参皂甙Rb1和Rg1对原代培养的大鼠海马神经细胞生长的影响。结果发现Rb1和Rg1可明显延长培养神经细胞的存活时间、降低神经细胞的死亡率,并对抗谷氨酸介导的神经毒性作用。实验证明其机制在于选择性抑制大剂量谷氨酸引起的钙离子浓度异常升高。     

脑缺血诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其相关蛋白Cpp32基因表达的初步研究

目的：探讨急性全缺脑血损伤后大鼠海马神经细胞凋亡及相关蛋白Cpp32的基因表达、分布。方法：运用DNA梯形电泳、免疫印迹，免疫组化分析了全脑缺血后海马神经细胞损伤、Cpp32蛋白含量变化及其分布，结果：15min急性全脑缺血复灌24h后，大鼠海马呈明显细胞凋亡特征，且天胱蛋白（Cpp32）基因被持续激活表达，尤其是锥体神经细胞表现最为明显。结论：急性全脑缺血能诱导海马神经细胞凋亡及Cpp32基因基因表达，其中锥体神经细胞表现最显。     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的　研究不同剂量果糖二磷酸锌 (ZnFDP)对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响。方法　采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞 ,在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP ,使之终浓度分别为 2 .5、12 .5、12 5 μg·ml-1,通过细胞形态学观察 ,神经元突起和胞体生长状况的定量比较 ,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)渗漏量的测定 ,分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响。结果　培养 36h后与对照组比 ,中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多 ,突起长度增加 ,胞体长径没有显著性变化 ;低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别 ;高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化。培养 3d、7d、10d ,中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组 ;培养 7d、10d ,中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组。结论　一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育。     

比较四种消化方法对神经干细胞传代增殖及活性的影响

目的：观察4种消化方法对体外培养的神经干细胞（N SC s）增殖及活性的影响。方法：原代培养新生大鼠海马N SC s,采用机械消化、0.25%单纯胰酶、0.25%胰酶＋0.02%EDTA和0.02%EDTA 4种不同消化方法对N SC s球进行传代培养,经四唑盐比色法（M TT法）法检测不同方法对N SC s活性及增殖能力的变化。结果：与机械消化相比,0.25%单纯胰酶组,0.25%胰酶＋EDTA组消化后的大鼠海马N SC s球长时间不聚集,细胞增殖停顿,而单纯EDTA组则明显提高了N SC s的增殖及活性,其余各组差异无统计学意义。结论：随培养时间延长,单纯0.02%EDTA组能够显著提高体外培养的大鼠海马N SC s的增殖水平及活力,且对细胞的后续损伤相对较小。     

新生大鼠海马和皮层神经元的原代培养及鉴定

目的建立一种条件简单易存活,适用于生理、药理学研究的原代神经元培养方法。方法应用新生(48 h以内)大鼠采用急性分离、胰酶消化的方法培养海马和皮层神经细胞,并结合膜片钳及RT-PCR技术鉴定所培养的神经元电压依赖性离子通道的表达情况。结果体外培养的神经细胞生长状态良好,免疫荧光染色鉴定结果表明该方法培养的神经元纯度可达90%以上;全细胞电压依赖性离子通道表达情况良好。结论应用该方法培养神经细胞操作简单并保持了良好的生理特性,可用于神经元生理特性考察及药理实验研究,是体外培养神经元较理想的方法。     

侧脑室注射rAAV-HIF-1α治疗阿尔茨海默病模型鼠的实验研究

目的观察侧脑室注射rAAV-HIF-1α对AD模型鼠HIF-1α蛋白含量及海马神经细胞凋亡率的影响。方法侧脑室注射Aβ25-35构建老年性痴呆大鼠模型,1周后侧脑室注射rAAV-HIF-1α,采用Western blot技术检测大鼠海马HIF-1α蛋白的表达,流式细胞术检测海马神经细胞凋亡百分率。结果 AD模型大鼠侧脑室注射rAAV-HIF-1α海马神经细胞HIF-1α蛋白表达显着升高(P<0.05),海马神经细胞凋亡百分率显着降低(P<0.05)。结论 rAAV-HIF-1α能够转染AD模型大鼠海马神经细胞持续稳定表达HIF-1α蛋白并抑制AD模型大鼠海马神经细胞凋亡。     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的 研究不同剂量果糖二磷酸锌（ZnFDP）对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响。方法 采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞，在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP，使之终浓度分别为2．5、12．5、125μg.ml^01，通过细胞形态学观察，神经元突起和胞体生长状况的定量比较，不同培养期细胞存在活数和培养液中乳酸脱氢酶（LDH）渗漏量的测定，分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响。结果 培养36h后与对照组比，中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多，突起长度增加，胞体长径没有显著性变化；低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别；高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化。培养3d、7d、10d，中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组；培养7d、10d，中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组。结论 一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育。     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的研究不同剂量果糖二磷酸锌(ZnFDP)对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响.方法采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞,在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP,使之终浓度分别为2.5、12.5、125μg*ml-1,通过细胞形态学观察,神经元突起和胞体生长状况的定量比较,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定,分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响.结果培养36h后与对照组比,中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多,突起长度增加,胞体长径没有显著性变化;低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别;高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化.培养3d、7d、10d,中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组;培养7d、10d,中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组.结论一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育.     

人参总皂苷联合淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马神经细胞凋亡的影响研究

目的：研究人参总皂苷联合淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠学习记忆、氧自由基及海马CA1区神经细胞凋亡的影响。方法：采用反复夹闭双侧颈总动脉再灌注同时腹腔注射硝普钠方法建立血管性痴呆大鼠模型,连续给药21d后,用八臂电迷宫法判断给药前后大鼠的学习和记忆能力,再进行脑组织SOD、MDA的测定和海马CA1区神经细胞凋亡检测。结果：与假手术组大鼠相比,模型大鼠电迷宫学习和记忆错误次数明显增加（P〈0.05）,大鼠造模前后连续灌胃给药21 d后,大鼠上述行为学指标得到明显改善（P〈0.05）,脑组织SOD活性提高（P〈0.05）和MDA含量降低（P〈0.01）,海马CA1区神经细胞凋亡数减少（P〈0.05）。结论：人参总皂苷联用淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍有显著的预防和治疗作用,可能与通过改善血管性痴呆大鼠大脑自由基代谢和海马CA1区神经细胞损伤有关,从而起到保护大脑的作用。     

大鼠海马神经元癫痫样放电模型的构建

目的探讨“无镁细胞外液”诱导体外培养大鼠海马神经元产生癫痫样放电的可行性,以期建立难治性癫痫离体细胞模型。方法选取24h内新生Wistar大鼠,分离海马神经元后进行原代培养,体外培养至第12天时,用“无镁细胞外液”处理3h,应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元的放电情况。结果在培养第12天时,神经元突起间彼此接触形成神经网络。在“无镁细胞外液”处理3h后神经元产生稳定的放电,恢复正常细胞培养液培养24h,神经元仍可检测到自发的“癫痫样放电”。结论体外培养第12天海马神经元,在“无钱细胞外液”处理后可形成稳定的自发性癫痫样放电,为今后在细胞分子水平研究癫痫发病机制提供了一种理想模型。     

Bone marrow mesenchymal stem cells-derived exosomes improve injury of hippocampal neurons in rats with depression by upregulating microRNA-26a expression

ObjectiveBone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs)-derived exosomes have been widely applied in disease therapies. However, the role of BMSCs-derived exosomes in depression remains obscure. This study aims to explore the mechanism of BMSCs-derived exosomal microRNA-26a (miR-26a) on hippocampal neuronal injury of depressed rats.MethodsBMSCs and their exosomes were obtained and identified. Rat models of depression were established by corticosterone injection, then injected with BMSCs-derived exosomes. The contents of superoxide dismutase (SOD), imalondialdehyde (MDA), lactate dehydrogenase (LDH), tumor necrosis factor α (TNF-α), and interleukin-1β (IL-1β) in rats’ serum, hippocampal tissues and neurons were determined. The expression of miR-26a in hippocampal tissues and neurons was detected by RT-qPCR. The injury models of rat hippocampal neurons were established to figure out the role of BMSCs-derived exosomes and miR-26a in neuron apoptosis and proliferation.ResultsIn hippocampal tissues of depressed rats, miR-26a was lowly expressed, and BMSCs-derived exosomes upregulated miR-26a expression. BMSCs-derived exosomes restrained apoptosis in hippocampal tissues of depressed rats. BMSCs-derived exosomes and upregulated miR-26a elevated SOD level, lessened MDA, LDH, TNF-α and IL-1β levels, boosted hippocampal neuron proliferation and suppressed apoptosis in depressed rats.ConclusionCollectively, our study reveals that miR-26a is lowly expressed in depressed rats, and BMSCs-derived exosomes improve hippocampal neuron injury of rat with depression by upregulating miR-26a.     

谷胱甘肽抗谷氨酸诱导海马神经元损伤钙超载机制研究

目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)对谷氨酸(G lu)诱导海马神经元死亡影响及其作用机制。方法选用新生Wistar大鼠原代培养海马神经元Glu细胞毒性损伤模型,采用台盼蓝活细胞拒染、培养液乳酸脱氢酶(LDH)测定及TUNEL细胞凋亡原位检测等方法比较GSH及GSSG预处理3d对Glu细胞毒性损伤的影响,同时利用激光扫描共聚焦显微镜观测细胞内Ca2 浓度的变化,并与MK-801比较。结果GSH及GSSG均可减少Glu诱导神经元死亡,轻度抑制Glu诱导的神经元Ca2 内流,但不及MK-801。结论谷胱甘肽对Glu细胞毒性神经损伤有保护作用,除与通常公认抗氧化作用有关外,抑制Glu诱导的神经元Ca2 内流亦为其保护机制之一。     

短时间吸入七氟醚对幼鼠海马神经元的影响

目的研究短时间吸入七氟醚对发育中大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 78只1个月龄SD大鼠按随机数字表法随机分为3组,空气对照组(Sa,26只),载气对照组(Sc,26只),3%七氟醚吸入2 h组(S2,26只),建立七氟醚吸入模型,吸入结束后12 h用旷场实验和T迷宫进行神经行为学测试,同时断头取海马组织,苏木素-伊红染色观察海马神经元形态学改变,用流式细胞仪检测凋亡,激光共聚焦显微镜测神经元细胞内游离钙离子浓度。结果 S2组海马凋亡神经元数目以及神经元内游离钙离子相对荧光像素值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但神经行为学检测无明显差别。结论七氟醚可诱导幼龄大鼠海马神经元凋亡,可能通过升高细胞内钙离子浓度而触发凋亡。但单次、短时间吸入(<2 h)七氟醚引起的神经元凋亡无明显神经行为学意义。     

七氟烷通过P~(70S6K)/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1mRNA表达

目的探讨七氟烷(Sevoflurane)诱导神经元血红素氧合酶-1(HO-1)基因表达的信号转导通路。方法将培养7d的新生大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、2%七氟烷组(S1组)、4%七氟烷组(S2组)和4%七氟烷+Rapamycin组(R组)。C组神经元按正常培养方法培养。S1组和S2组神经元分别给予2%或4%七氟烷处理60min后继续培养24h。R组在神经元给予4%七氟烷处理同时在培养液中加入Rapamycin使其终浓度为10nmol.L-1后同S2组处理。收集神经元进行HO-1mRNA和P70S6K、Nrf2、AP-1和HO-1蛋白表达的检测。结果S1组P70S6K和Nrf2蛋白表达增加(vsC组,P<0.01),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达增加(vsC组,P<0.01),AP-1蛋白表达变化不明显(vsC组,P>0.05)。S2组P70S6K和Nrf2蛋白表达增加(vsS1组,P<0.05),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达增加(vsS1组,P<0.05),AP-1蛋白表达变化不明显(vsS1组,P>0.05)。R组P70S6K和Nrf2蛋白表达减少(vsS2组,P<0.01),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达减少(vsS2组,P<0.01),AP-1蛋白表达变化不明显(vsS2组,P>0.05)。结论Sevoflurane通过P70S6K/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1mRNA表达。     

胍丁胺阻断培养大鼠海马神经元电压门控性钙通道

目的:通过观察胍丁胺对大鼠海马神经元电压门控性离子通道的影响来探讨其作用机制。方法:使用膜片箝全细胞记录技术,采用压力注射给药的方法,在培养的新生大鼠海马神经元上观察胍丁胺对其电压门控性钠、钾、钙离子通道的作用。结果:胍丁胺(500 μmol/L)对钠、钾通道(快速失敏钾通道I_A和延迟整流钾通道I_K)没有显著的作用。胍丁胺能抑制钙电流,其抑制作用随浓度增加而加强。在胍丁胺浓度为0.1,0.5,1.5,10.0,50.0和100 μmol/L时,其对电压门控性钙电流的抑制率分别为(21±4)％,(35±6)％ ,(49±6)％,(67±4)％,(69±6)％,(86±8)％和(87±9)％,IC_(50)为1.2±0.4 μmol/L。双因素方差分析显示,细胞膜不同箝制电压水平和不同浓度胍丁胺对钙电流的抑制效应之间存在着明显的交互作用。结论:胍丁胺以浓度依赖性和电压依赖性方式,可逆性地抑制海马神经元电压门控性钙通道,对钙通道的阻断作用可能是胍丁胺产生生理和药理学作用的机制之一。     

他克林对培养大鼠海马神经元延迟整流钾电流和瞬间外向钾电流的影响

目的研究他克林对培养大鼠海马神经元上延迟整流钾电流(I_K)和瞬间外向钾电流(I_A)的影响。方法 大鼠海马神经元原代培养,全细胞膜片钳记录培养大鼠海马神经元上电压依赖性外向钾电流和瞬间外向钾电流变化。结果他克林明显抑制海马神经元延迟整流钾电流和瞬间外向钾电流,呈浓度依赖性,对延迟整流钾电流的敏感性高于瞬间外向钾电流。30 μmol·L^-1他克林显著影响I_K和I_A稳态激活曲线,使所有电流的V_1/2左移。结论他克林明显抑制延迟整流钾电流和瞬间外向钾电流,对延迟整流钾电流的敏感性高于瞬间外向钾电流。     

异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法:培养7～10d海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250μmol/L)预处理后24h后,制备缺氧4h后复氧24h模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siR-NA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果:在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

大鼠脑挫裂伤后神经细胞凋亡相关因素研究

目的 从脑挫裂伤发生后血清一氧化氮、内皮素改变与海马区神经细胞凋亡之间的相关性入手,研究创伤性脑损伤后继发性颅脑损伤的分子生物学机制。方法 按照改良Feeney自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左项叶脑挫裂伤模型,采用硝酸还原酶法、酶联免疫吸附法、原位细胞凋亡检测技术分别对脑挫裂伤后共十个时相点的各指标进行检测,所得数据均以SAS(6.12)统计软件包进行配对t检验及多元线性相关分析。结果 血清一氧化氮、内皮素及海马区神经细胞凋亡分别在脑挫裂伤后不同时相升高,随后下降,前两者彼 此之间以及前两者与后者间均表现为正相关。结论大鼠脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素的变化之间以及此两者与神经细胞凋亡之间存在着特定关系,前两者相互影响、相互作用进而导致了神经细胞凋亡。