多重聚合酶链反应快速鉴别葡萄球菌及mecA基因检测

目的：建立快速鉴定葡萄球菌及检测mecA基因的多重聚合酶链反应（PCR）诊断方法。方法：以葡萄球菌16SrRNA、金黄色葡萄球菌的nuc基因以及耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因合成3对引物，采用多重PCR扩增法，快速鉴定葡萄球菌，同时判断MRS菌株。结果：107株葡萄球菌的16SrRNA基因扩增片段全部为阳性．与常规鉴定结果符合率为100％；nuc基因阳性48株。阴性59株，与金黄色葡萄球菌核酸酶试验一致；以PBP2a乳胶凝集试验结果为金标准，苯唑西林（含2％NaClMHA）及头孢西丁纸片扩散法的敏感性为98．7％和100％，特异性分别为75．0％和82．1％：PCR扩增法的敏感性和特异性均为100％。结论：多重PCR法能快速准确地从临床分离菌株中鉴别葡萄球菌，并可同步对mecA基因进行准确检测。     

3种鉴定耐甲氧西林葡萄球菌方法的比较

目的比较琼脂稀释、纸片及基因检测法鉴定甲氧西林耐药葡萄球菌的方法。方法按2004年美国临床实验室标准化委员会推荐的头孢西丁纸片扩散(K-B)法、琼脂二倍稀释(MIC)法,从中筛选出表型耐甲氧西林葡萄球菌(MRS),再将受试的葡萄球菌进行多重聚合酶链反应的体外扩增检测mecA基因。结果从临床分离的180株葡萄球菌中,mecA基因阳性葡萄球菌98株,其中金黄色葡萄球菌(SA)mecA基因阳性26株,阳性率为36.1%;凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)mecA基因阳性72株,阳性率为66.7%,mecA阳性的MRS只对万古霉素、替考拉宁敏感。结论mecA基因的PCR检测能够尽早准确诊断,便于及时治疗MRS造成的感染。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的比较

目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检测方法进行比较.方法 分别用mecA基因PCR扩增法、PBP2a胶乳凝集试验法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林纸片扩散法对临床分离的135株金黄色葡萄球菌进行榆测.结果 mecA基因PCR扩增法显示阳性79株,阴性56株;PBP2a胶乳凝集试验法的敏感性和特异性分别为96.2%和100.0%;头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性分别为94.9%和96.4%;苯唑西林纸片扩散法的敏感性和特异性分别为94.9%和62.5%.结论 PBP2a胶乳凝集试验法和头抱西丁纸片扩散法与mecA基因PCR扩增法的检测结果高度一致;苯唑西林纸片扩散法特异性低,不再适用于MRSA的检测.     

耐甲氧西林金葡菌的头孢西丁检测法与耐药性分析

目的评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的效果．了解MRSA的耐药状况。方法用头孢西丁及苯唑西林纸片扩散法、mecA基因聚合酶链反应（PCR）检测MRSA．并以mecA基因PCR法为参考方法与头孢西丁及苯唑西林纸片扩散法检测MRSA进行比较分析。按CLSI（原NCCLS）规定的标准测定MRSA对青霉素等10种抗生素的耐药率（KB法）。结果95株金葡菌（SA）中mecA基因阳性株42株。头孢西丁纸片法筛选出40株MRSA，其中39株mecA基因阳性，方法特异性为97．5％，灵敏度92．9％；苯唑西林纸片法筛选出44株MRSA，其中36株mecA基因阳性．方法特异性为81．8％．灵敏度85．7％。MRSA对青霉素、苯唑西林100％耐药，对万古霉素全部敏感．对红霉素、头孢唑林、克林霉素、氨苄西林／舒巴坦、头孢呋辛、左氧氟沙星、奈替米星呈不同程度耐药。结论头孢西丁纸片扩散法检测MRSA特异性和灵敏度优于苯唑西林纸片扩散法。MRSA具有多重耐药性．须加强其对抗生素的耐药性监测。     

苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法现行耐药折点判断凝固酶阴性葡萄球菌甲氧西林耐药性的评价

目的 评价苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法现行耐药折点在判断凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）甲氧西林耐药性中的准确性。方法 苯唑西林（1μg）和头孢西丁（30μg）纸片扩散法测定149株临床分离的CNS对甲氧西林的耐药性，量取两种纸片的抑菌环直径。对苯唑西林组分别以≤14mm、≤15mm、≤16mm、≤17mm（CLSI／NCCLS2004标准）为耐药折点，对头孢西丁组分别以≤21mm、22mm、≤23mm、≤24mm（CLSI／NCCLS2004年标准）为耐药折点，与mecA基因检测结果比较，评价两种纸片扩散法在各折点对耐甲氧西林CNS判断的敏感性和特异性。结果 与mecA基因检测结果比较，苯唑西林纸片扩散法在不同的耐药折点判断耐甲氧西林表皮葡萄球菌的敏感性分别为52．3％、75．0％、90．9％、100％，特异性都为100％，判断耐甲氧西林非表皮葡萄球菌CNS的敏感性分别为66．7％、79．0％、90．1％、97．5％，特异性分别为100％、100％、100％、94．4％；头孢西丁纸片扩散法在不同耐药折点判断耐甲氧西林表皮葡萄球菌的敏感性分别为45．5％、70．1％、90．9％、100％，特异性都为100％，判断耐甲氧西林非表皮葡萄球菌CNS的敏感性分别为83．6％、91．8％、97．3％、100％，特异性都为100％。结论 苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林CNS的现行耐药折点标准在判断表皮葡萄球菌和非表皮葡萄球菌CNS的甲氧西林耐药性中都有很高的敏感性和特异性，适用于CNS对甲氧西林耐药性的判断。对于非表皮葡萄球菌CNS，头孢西丁纸片扩散法较苯唑西林纸片扩散法结果更可靠。     

临床分离葡萄球菌耐药性和用药对策

目的了解葡萄球菌在临床感染中的情况及其对抗生素的耐药性,为抗生素的合理应用提供依据。方法采用苯唑西林纸片法(KB法)和自动化仪器法VITEK-32AMS系统GPI卡鉴定葡萄球菌,GPS-107卡鉴测耐苯唑西林的葡萄球菌(MRS)和β-内酰胺酶以及葡萄球菌的耐药谱。结果230株葡萄球菌中有72株金黄色葡萄球菌,其中耐苯唑西林(MRSA)的占73.6%,56株表皮葡萄球菌,其中耐苯唑西林(MRSE)的占66.07%,其它的102株凝固酶阴性的葡萄球菌中耐苯唑西林的占65.68%。其余的为对苯唑西林敏感的(MSS)菌株。结论临床分离的葡萄球菌中耐苯唑西林的葡萄球菌MRS占很大的比例,且对其它抗生素的敏感性明显低于对苯唑西林敏感的葡萄球菌。耐苯唑西林的葡萄球菌对万古霉素敏感性最高,利福平、呋喃妥因、复方磺胺甲口恶唑次之。     

不同方法用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率比较

目的比较分析三种临床常用检测方法对金黄色葡萄球菌(MRS)的检出率。方法同时采用普通M-H平板,1μ犂/片苯唑西林药敏纸片扩散法,含4%NaCl的M-H平板、1μ犂/ml苯唑西林药敏纸片扩散法及含4%NaCl的M-H平板、6μ犂/ml苯唑西林琼脂筛选法对临床51株葡萄球菌(凝固酶阳性13株、凝固酶阴性38株)进行检测,比较三种方法对MRS的检出率。结果三种方法对51株葡萄球菌的检出率分别为72.55%、70.59%和50.98%。普通M-H平板药敏纸片扩散法和含4%NaCl的M-H平板药敏纸片扩散法MRS检出率无显著性意义(P>0.05),两种纸片扩散法与琼脂筛选法在MRS检出率差异具有显著性意义(P<0.05)。结论纸片扩散法对在MRS检出率明显高于作为MRS检测推荐方法的琼脂平板筛选法。     

41株金黄色葡萄球菌耐药性分析及PVL基因检测

目的了解临床分离金葡菌对常用抗生素的耐药性和杀白细胞毒素(PVL)基因携带情况。方法采用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),K-B法检测临床分离的41株金葡菌对常用抗生素的敏感性,PCR法检测mecA基因和PVL基因携带情况。结果 41株金葡菌中MRSA占51.2%,MRSA对克林霉素、红霉素、氨基糖苷类和喹诺酮类耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),MRSA和MSSA对复方新诺明敏感率分别为90.5%和95%,未发现对万古霉素、替考拉林和利奈唑胺耐药株。21株MRSA mecA基因均阳性,41株金葡菌中共检出2株携带PVL基因,MRSA与MSSA各占1株,均分离自骨科病房。结论该院临床分离MRSA耐药率高,应规范临床用药,加强MRSA耐药性监测,加强PVL基因的检测,防止此类菌株的播散。     

79株临床分离MRSA的SCCmec基因分型及耐药性分析

目的:了解天津某医院临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药状况及葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)类型.方法:应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测mecA基因,多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型.应用微量肉汤法及K-B纸片扩散法测试MRSA对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、环丙沙星、莫西沙星、头孢唑林、氯霉素、林可霉素、庆大霉素、头孢曲松、红霉素、利福平、盐酸四环素、万古霉素、替考拉宁、复方磺胺甲恶唑、利奈唑胺、替加环素18种抗生素药物敏感性.大环内酯、林可霉素、链阳霉素B类抗生素诱导耐药的检测采用克林霉素-红霉素双纸片诱导试验(D试验).结果:SCCmec分型显示79株受试MRSA均为SCCmecⅢ型菌株.79株MRSA临床株对包括苯唑西林在内的多种抗生素耐药,对氯霉素、复方磺胺甲嗯唑耐药率相对较低,分别为3.80%、10.13%,对糖肽类抗生素和利奈唑胺、替加环素均敏感.7株红霉素耐药、林可霉素敏感MRSA D试验阳性.结论:天津某医院临床分离MRSA SCCmec基因型均为Ⅲ型,且具有多重耐药的特征,红霉素耐药、林可霉素敏感株存在诱导耐药现象.     

耐甲氧西林葡萄球菌检测及耐药性分析

由于葡萄球菌的异质性和多重耐药,加之临床使用抗生素不合理和滥用,葡萄球菌的耐药株越来越多。耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）由于携带了mecA耐药基因,不仅对β-内酰胺类抗生素耐药,而且对氨基糖苷类等抗生素耐药,是目前临床引起医院感染的难以控制的病原菌。准确检测是控制脉S感染的关键,为了解我院葡萄球菌耐药情况,为临床治疗葡萄球菌引起的医院感染提供客观依据,本文对我院临床标本分离的116株葡萄球菌进行了鉴定和药物敏感试验。现将鉴定和药物敏感试验结果总结如下。     

医院葡萄球菌感染的临床分析

目的了解我院葡萄球菌感染的临床分布及其耐药情况,指导临床合理应用抗生素,控制医院感染。方法药敏试验采用K-B纸片扩散法,同时进行耐苯唑西林葡萄球菌检测,并结合临床资料进行分析。结果 2006年6月至2009年5月共分离出葡萄球菌262株,其中金黄色葡萄球菌87株（33.1%）,占第一位;表皮葡萄球菌76株（29.0%）占第二位;其他如中间葡萄球菌、溶血葡萄球菌、腐生葡萄球菌等均占有一定比例。262株葡萄球菌中共检出耐苯唑西林葡萄球菌（MRS）185株占70.7%,苯唑西林敏感葡萄球菌（MSS）77株。MSS对青霉素和红霉素的耐药率高,分别为81.0%～84.4%和57.7%-61.9%。MRS对万古霉素、头孢西丁、替考拉宁、利福平、呋喃妥因等敏感性高,对其余多种抗生素耐药。结论临床分离菌中的葡萄球菌日益增多,加强葡萄球菌耐药性检测,对于正确合理选用抗菌药和控制葡萄球菌耐药性产生十分重要。     

夫西地酸对耐甲氧西林葡萄球菌的体外抗菌活性研究

目的:了解夫西地酸对多重耐药的耐甲氧西林葡萄球菌临床分离株的体外抗菌活性。方法:采用血浆凝固酶、金黄色葡萄球菌单克隆抗体及Vitek-32型仪进行菌株鉴定,纸片琼脂扩散(K-B)法进行药物敏感性试验,头孢西丁纸片法检测耐甲氧西林葡萄球菌。结果:97株金黄色葡萄球菌中,检测到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)56株,占57.7%;119株凝固酶阴性葡萄球菌中,检测到耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)77株,占64.7%。全部菌株均对万古霉素敏感,MRSA及MRCNS对夫西地酸的耐药率分别为1.8%和7.8%,耐甲氧西林葡萄球菌对其它抗菌药物的耐药率在25%～100%之间。结论:夫西地酸对耐甲氧西林葡萄球菌有较强的体外抗菌活性。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验室诊断方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是携带mecA基因的金黄色葡萄球菌或苯唑西林最小抑菌浓度(MIC)≥4 mg/L的金黄色葡萄球菌。大部分MRSA菌株携带mecA基因,但少数MRSA不携带mecA基因,存在其他的耐药机制,如青     

2005年我院细菌耐药性监测结果

本文对我院2005年临床分离的病原菌及药敏结果进行回顾分析,报告如下。1材料和方法1·1菌株来源2005年1~12月,临床送检标本中分离出的细菌,不统计重复株。1·2菌株鉴定及药敏试验细菌分离鉴定按卫生部临检中心颁布的《全国临床检验操作规程》第三版进行。药敏试验采用纸片扩散法。耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测采用苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法,结果判定根据CLIS-NCCLS(2005年)的判断标准。产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测采用双纸片协同试验和纸片确证试验。1·3药敏质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿…     

重症监护病房葡萄球菌耐药性监测

目的了解重症病房葡萄球菌耐药性现状,以指导临床医生正确选择抗生素。方法采用PNOENIX100全自动细菌分析仪鉴定,药敏采用纸片法(K-B法)对苯唑西林葡萄球选用头孢西丁做鉴定。结果128株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌为主占44.5%,其次为溶血葡萄球菌占22.0%,表皮葡萄球菌占16.5%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测率为76.5%。耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检测率为79.2%。在182株葡萄球菌中红霉素、苯唑西林、环丙沙星耐药率分别为83.5%,82.9%,64.8%。本实验中未发现万古霉素,替考拉宁耐药的葡萄球菌。结论在重症(ICU)病房中MRSA和MRCNS检测率不断升高,其对抗菌药物有多重耐药。临床应重视耐药菌的检测,有效地控制医院感染发生与流行。     

耐甲氧西林表皮葡萄球菌发生率及耐药性检测

目的 了解临床分离表皮葡萄球菌中耐甲氧西林菌株(MRSE)发生率及其耐药情况.方法 对128株表皮葡萄球菌进行头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林株,琼脂稀释法进行药敏试验.结果 128株表皮葡萄球菌中,MRSE检出率为79.7%.MRSE对多种抗菌药物耐药,对万古霉索、替考拉宁敏感,耐药率为0;除青霉素类、大环内酯类和糖肽类以外,MRSE对其他抗菌药物的耐药率均高于甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE).结论 MRSE发生率高,耐多药,未发现糖肽类耐药株.     

革兰阳性球菌临床分布与耐药性分析

目的 分析临床分离的革兰阳性球菌的感染情况和耐药特征,为临床用药提供依据.方法 收集山西省眼科医院2009年3月至2011年5月我院患者眼部标本分离培养、药物敏感试验.结果 共分离出革兰阳性球菌531株.其中金黄色葡萄球菌6株(1.13％),表皮葡萄球菌488株(91.90％),缓慢葡萄球菌18株(3.39％),科氏葡萄球菌科氏亚种3株(0.56％),哥伦比亚肠球菌9株(1.69％),链球菌属7株(1.32％).耐苯唑西林葡萄球菌(MRS)检出344株,检出率为70.51％.葡萄球菌属对多数抗菌药耐药严重,但未发现对万古霉素、利奈唑胺、喹努普汀/达福普汀、替考拉宁耐药耐药的菌株.对488株表皮葡萄球菌进行耐药情况检测,耐药株数分别为:氨苄西林/舒巴坦342株(70.08％);苯唑西林342株(70.08％);复方新诺明351株(71.93％);红霉素390株(79.92％);环丙沙星270株(55.33％);克林霉素396株(81.15％);利福平39株(7.99％);莫西沙星15株(3.07％);哌拉西林/他唑巴坦342株(70.08％);青霉素G 487株(99.79％);庆大霉素159株(32.58％);四环素102株(20.90％).结论 耐苯唑西林葡萄球菌有很高发生率,大部分为凝固酶阴性的葡萄球菌,对大部分常用抗菌药耐药率很高.应加强院内感染控制,防止耐药菌株的产生.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PFGE分型研究

目的:检测不同医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)优势菌株是否相同。方法:用常规方法对从天津医科大学第二医院及武汉同济医院临床标本中分离的金黄色葡萄球菌进行鉴定,采用头孢西丁纸片扩散法及mecA基因检测筛选出MRSA。采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分型,以了解不同地区两家医院的优势菌株是否相同。结果:共分离出金黄色葡萄球菌127株,MRSA83株,其中天津56株,武汉27株。天津56株MRSA临床株PFGE分型为15型27个亚型,以A1型为主;武汉27株MRSA临床株PFGE分型为6型12个亚型,以A2、A4型为主。结论:2家医院MRSA优势菌株并不相同,尚未发现MRSA流行菌株。     

527株耐甲氧西林葡萄球菌的耐药性监测

目的:了解本地区2003～2005年耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的检出率并进行耐药性监测,为临床用药提供参考。方法:采用法国生物梅里埃ATB Expression细菌鉴定药敏仪进行细菌鉴定和药敏试验;同时用K-B纸片扩散法检测苯唑西林的耐药性。结果:MRS的检出率有逐年增高的趋势:2003年为45.3%,2004年为50.3%,2005年为56.3%;耐药率较低的前5位抗菌药及其耐药率分别为:去甲万古霉素(0)、替考拉宁(0.6%)、利福平(7.7%)、米诺环素(8.2%)、复方磺胺甲噁唑(28.7%)。结论:临床医生应根据细菌培养结果合理、规范使用抗菌药,同时要加强对糖肽类抗菌药的耐药性监测。     

重症监护病房葡萄球菌耐药性监测

目的了解重症病房葡萄球菌耐药性现状,以指导临床医生正确选择抗生素.方法采用Pnoenix100全自动细菌分析仪鉴定,药敏采用纸片法(K-B法)对苯唑西林葡萄球选用头孢西丁做鉴定.结果128株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌为主占44.5%,其次为溶血葡萄球菌占22.0%,表皮葡萄球菌占16.5%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测率为76.5%.耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检测率为79.2%.在182株葡萄球菌中红霉素、苯唑西林、环丙沙星耐药率分别为83.5%,82.9%,64.8%.本实验中未发现万古霉素,替考拉宁耐药的葡萄球菌.结论在重症(ICU)病房中MRSA和MRCNS检测率不断升高,其对抗菌药物有多重耐药.临床应重视耐药菌的检测,有效地控制医院感染发生与流行.