磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对生长激素介导的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨生长激素（GH）对心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其作用机制。方法以不同浓度的重组人生长激素（rhGH）（100、200、500、1 000 ng/ml）和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）抑制剂LY294002（10μmol/L）单独或同时作用CFs 48 h后,采用MTT法检测细胞增殖,Wertern Blot检测PI3K/Akt信号途径中Akt和磷酸化Akt（p-Akt）的蛋白水平的变化。结果 rhGH呈浓度依赖性的促进CFs的增殖;rhGH增加p-Akt的蛋白水平;LY294002可阻断rhGH诱导的CFs的增殖。结论生长激素可通过激活PI3K/Akt信号通路促进心肌成纤维细胞的增殖。     

磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系

目的分析磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系。方法选取2018年2月至2019年4月商丘市第一人民医院收治的54例胃癌患者,检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平,对比p-PI3K、p-Akt在胃癌及癌旁组织中的表达情况和不同病理特征胃癌组织中的阳性表达率。结果 p-PI3K胃癌组织阳性表达率[81.48%(44/54)]高于癌旁组织[22.22%(12/54)](P<0.05)。p-Akt胃癌组织阳性表达率[75.93%(41/54)]高于癌旁组织[20.37%(11/54)](P<0.05)。低分化、有淋巴结转移的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移的胃癌组织(均P<0.05);低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃癌组织(均P<0.05)。结论 p-PI3K、p-Akt胃癌组织阳性表达率高,p-PI3K、p-Akt表达情况与分化程度、疾病分期、淋巴结转移密切相关,PI3K/Akt信号通路可能为临床药物治疗提供新靶点。     

微RNA-126介导磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号与肿瘤关系的新进展

磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2(PIK3R2)是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的家庭成员之一,通过PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路参与血管的形成、维护以及改造的调控,是组织器官正常发育、损伤以及肿瘤发生的一个重要的基因调控靶目标。不同类型的肿瘤,微RNA(miRNA)126介导的PIK3R2调控水平及趋势存在差异,可能与肿瘤的发生存在联系,是肿瘤研究中有前景的调控靶目标之一。     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2信号通路抑制剂对乳腺癌细胞缺氧诱导因子-2α表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2(MEK/ERK1/2)信号通路抑制剂对缺氧诱导的乳腺癌MCF-7细胞中缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达的影响.方法 乳腺癌MCF-7细胞常规培养24 h后,分为常氧组、缺氧组、缺氧+低剂量LY294002组...     

骨形成蛋白4诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用机制

目的探讨骨形成蛋白4(BMP4)诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用机制。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,使细胞同步化。实验分2部分,第1部分取同步化的心肌细胞,加50μg·L-1BMP4 60μL进行干预,分别在干预后0、1、4、8、12、24 h检测磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)蛋白的表达;第2部分将同步化的心肌细胞随机分为对照组、BMP4组、BMP4+LY294002组及BMP4+3MA组。对照组细胞应用体积分数1%胎牛血清培养基培养;BMP4组细胞应用含50μg·L-1BMP4的体积分数1%胎牛血清培养基培养;BMP4+LY294002组细胞先应用25μmol·L-1的LY294002预处理120 min,再以含50μg·L-1BMP4的体积分数1%胎牛血清培养基培养;BMP4+3MA组细胞先应用10 mmol·L-1的自噬抑制剂3MA预处理120 min,再以含50μg·L-1BMP4的体积分数1%胎牛血清培养基培养。各组细胞给予BMP4 48 h后采用Image J软件测量细胞表面积。二喹啉甲酸法检测各组心肌细胞内蛋白含量。采用Western blot检测各组细胞给予BMP4 1 h后磷酸化磷脂酰肌醇3(P-PI3K)、P-Akt及自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达,给予BMP4 48 h后检测脑钠肽(BNP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 BMP4作用心肌细胞0、1、4、8、12、24 h后P-Akt蛋白相对表达量分别为0.56±0.02、0.92±0.12、0.42±0.10、0.63±0.11、0.64±0.23、0.29±0.08,BMP4作用大鼠心肌细胞1 h后P-Akt蛋白相对表达量均高于其他时间点(P<0.05)。BMP4组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量高于对照组(P<0.01);BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA组大鼠心肌细胞表面积大于对照组(P<0.01),BMP4+3MA组与对照组大鼠心肌细胞总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+LY294002、BMP4+3MA组H9c2大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量均低于BMP4组(P<0.05);BMP4+LY294002组与BMP4+3MA组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。BMP4组、BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平高于对照组,BMP4+LY294002组心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平低于对照组(P<0.01);BMP4、BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平呈逐渐降低趋势,3组大鼠心肌细胞内P-PI3K蛋白表达水平两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。BMP4、BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平高于对照组(P<0.01),BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平低于BMP4组(P<0.05);BMP4+3MA组与BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内P-Akt、LC3蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。BMP4组大鼠心肌细胞内α-SMA蛋白表达水平高于对照组(P<0.01),BMP4+3MA、BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞内α-SMA蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内α-SMA蛋白表达水平低于BMP4组(P<0.05);BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内α-SMA蛋白表达水平高于BMP4+LY294002组(P<0.05)。BMP4、BMP4+3MA组大鼠心肌细胞内BNP蛋白表达水平高于对照组(P<0.01);BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞内BNP蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA、BMP4+LY294002组大鼠心肌细胞内BNP蛋白表达水平低于BMP4组(P>0.05)。结论 BMP4可能通过激活PI3K-Akt通路增加自噬活性,从而诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大。     

磷脂酰肌醇-3-激酶信号通路调控炎症介质表达机制的研究进展

炎症性疾病是临床多发常见疾病,如病原体感染引起的感染性疾病,非病原体感染引发的自身免疫性疾病,以及一些肿瘤的流行病学也与长期慢性炎症持续状态关系密切。抗炎与促炎是感染及非感染性炎症性疾病的两个对立面,两者调节的平衡与否推进着疾病的进展,最终影响疾病的结局。因此,研究疾病的促炎与抗炎平衡及其调节机制可为临床疾病的发病机制理清思路,指导疾病的诊断、治疗。     

槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞自噬及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路的影响

目的观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞活力、凋亡、自噬及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法体外培养PC-3细胞,采用CCK-8法检测PC-3细胞活力,TUNEL染色检测PC-3细胞凋亡,吖啶橙染色观察PC-3细胞自噬小泡,GFP-LC3质粒转染分析观察PC-3细胞自噬小体,Western blot分析检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(LC3)、Beclin-1和PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果槲皮素以浓度-时间依赖性的方式抑制PC-3细胞活力,并诱导细胞凋亡;能够增加PC-3细胞自噬小泡和自噬小体的数量;能够升高PC-3细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达,同时降低磷酸化-PI3K、磷酸化-Akt和磷酸化-mTOR的表达。结论槲皮素可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导PC-3细胞发生自噬。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

抵抗素通过酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3信号通路诱导心肌细胞肥厚的分子机制研究

目的探讨酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在抵抗素诱导H9C2心肌细胞肥厚中的作用及其可能分子机制。方法取生长同步化的H9C2心肌细胞随机分为对照组、抵抗素组、抵抗素+Ag490组和Ag490组。对照组细胞用低血清培养基培养;抵抗素组细胞用含浓度为50μg·L~(-1)抵抗素的低血清培养基培养;抵抗素+Ag490组细胞先用含100μmol Ag490低血清培养基培养,然后用含抵抗素浓度50μg·L~(-1)的低血清培养基继续培养;Ag490组细胞先用含100μmol Ag490低血清培养基培养,然后低血清培养;各组细胞均培养48 h(第1部分实验)或3 h(第2部分实验)。应用Image J软件测心肌细胞面积像素;二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白含量;采用Western blot检测各组心肌细胞磷酸化酪氨酸激酶(P-JAK2)、磷酸化信号转导子和转录激活子3(P-STAT3)、α肌动蛋白(α-SMA)和C-MYC蛋白相对表达量。结果抵抗素组心肌细胞表面积像素和单细胞蛋白含量均大于对照组、抵抗素+Ag490组和Ag490组(P<0.05);抵抗素+Ag490组心肌细胞表面积像素和单细胞蛋白含量大于对照组和Ag490组(P<0.05);对照组和Ag490组心肌细胞表面积像素及单细胞蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素组心肌细胞α-SMA蛋白表达量较对照组、抵抗素+Ag490组、Ag490组均显著增加(P<0.05);其余各组心肌细胞α-SMA蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。抵抗素组心肌细胞C-MYC蛋白表达量较对照组、抵抗素+Ag490组、Ag490组均显著增加(P<0.05);抵抗素+Ag490组心肌细胞C-MYC蛋白表达量较对照组增加(P<0.05);其余各组心肌细胞C-MYC蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素组心肌细胞PJAK2、P-STAT3蛋白表达量较对照组、抵抗素+Ag490组、Ag490组显著增加(P<0.05);其余各组心肌细胞P-JAK2、P-STAT3蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素可诱导H9C2心肌细胞肥厚;JAK2/STAT3信号通路的激活在抵抗素诱导大鼠心肌肥大过程中发挥作用。     

Notch信号通路经ROCK2对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨Notch信号通路经ROCK2对大鼠心肌细胞缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞的凋亡影响。方法选择SD大鼠乳鼠180只,分为6组,检测Hes1的表达、心肌细胞活力、心肌细胞乳酸脱氢酶释放情况、心肌细胞凋亡情况以及NICD、Bcl2、Caspase3以及Hes1表达水平。结果 SI/R组OD值相比对照组明显下降(P0.05);Jagged1+SI/R组与SI/R组、对照组对比,存在明显差异(P0.05);Jagged+DAPT+SI/R组OD值与Jagged1+SI/R组对比,存在明显差异(P0.05);Jagged1组、DAPT组OD值与对照组对比,均未见显著差异(P0.05)。SI/R组、Jagged1+SI/R组、Jagged+DAPT+SI/R组的LDH释放率、细胞凋亡率相比对照组均有明显上升(P0.05);SI/R组、Jagged1+SI/R组、Jagged+DAPT+SI/R组经处理后的Notch1、Hes1、Bcl2均有显著下降,而Caspase3表达显著上升(P0.05)。结论 Notch信号通路在心肌缺血/再灌注的过程中发挥着重要调控作用,对诱导H9c2心肌细胞凋亡具有重要影响,且激活Notch信号通路能起到抗缺血/再灌注损伤的效果。     

PI3K/Akt-NO信号通路在Ang Ⅳ诱导大鼠心肌肥大中的作用

目的研究PI3K/Akt-NO信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度AngⅣ对心肌细胞的作用,并观察PI3K阻断剂LY294002和NO合成酶(NOS)抑制剂L-NAME对AngⅣ作用的影响;利用Real-time PCR和Western blot方法检测mR-NA及蛋白水平的表达;硝酸还原法和ELISA法分别检测NO和内皮型NOS(eNOS)含量。结果 AngⅣ浓度依赖地(0.01、0.1及1nmol/L)诱导心肌细胞肥大;使Akt mRNA和蛋白表达明显降低,eNOS mRNA表达以及细胞培养液中eNOS的含量减少,NO的释放下降(P<0.05);LY294002和L-NAME均使AngⅣ的作用加强(P<0.05)。结论 AngⅣ诱导的心肌肥大作用至少部分地与PI3K/Akt-NO信号通路被抑制有关。     

白藜芦醇通过调控NLRP3/caspase-1信号通路抑制H2O2诱导的心肌纤维化

目的 探讨白藜芦醇(RES)通过抑制体外过氧化氢(H2 O2)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)氧化应激而降低心肌纤维化及其与NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)信号通路的关系.方法 从SD乳鼠取心脏进行原代CFs培养,分为对照组,H2 O2(10μmol/L)组、H2 O2(10μmol/L)+RES(5μmol/L)组.采用免疫荧光鉴定CFs,CCK-8法检测CFs存活率,聚合酶链反应检测CFs白细胞介素-1(IL-1)、caspase-1、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)基因表达,Western blot法检测CFs NLRP3、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达.结果 波形蛋白呈阳性表达,证明提取细胞为CFs;与对照组比较,H2 O2(10μmol/L)组CFs存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);H2 O2(10μmol/L)组IL-1、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ基因表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);NLRP3、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与H2 O2(10μmol/L)组比较,H2 O2(10μmol/L)+RES(5μmol/L)组CFs存活率升高;IL-1、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ基因表达明显降低差异均有统计学意义(P<0.05);NLRP3、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RES可能通过抑制炎症从而有效缓解氧化应激损伤引起的心肌纤维化.     

氯化镉诱导大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡的作用机制

目的：研究不同浓度氯化镉（CdCl₂）引起大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡及机制。方法：将培养的大鼠心肌细胞H9c2分为阴性对照组和镉处理组,阴性对照组为DMEM培养液,镉处理组分别暴露于 5﹑10﹑30﹑50和80 μmol•L^-1 CdCl₂ 作用6、12和24 h,采用MTT法检测细胞存活率;Annexin Ⅴ-FITC/ propidium iodide (PI)流式细胞技术(FCM)、丫啶橙（AO）/ 溴化乙啶（EB）双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果：镉处理组细胞存活率随着剂量的加大及时间延长明显下降,与阴性对照比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）;CdCl₂可引起H9c2细胞凋亡,各剂量组凋亡率明显高于阴性对照组（P<0.001）,各剂量组之间凋亡率差异无显著性（P>0.05）;AO/EB 染色镜下可见H9c2细胞呈典型早期凋亡形态学改变。结论：H9c2 细胞对CdCl₂的作用较敏感,低剂量﹑短时间作用即可引起细胞凋亡,但 H9c2 细胞对CdCl₂有一定耐受性。     

氯化镉对大鼠心肌H9c2细胞DNA损伤的作用机制

目的：研究氯化镉（CdCl2）在体外对大鼠心肌细胞DNA的损伤作用,探讨CdCl2心肌毒性作用机制。方法：以0、5、10、30、50和80 μmol?L-1 CdCl2作用于大鼠心肌H9c2细胞,采用单细胞凝胶电泳法（SCGE）检测作用6、12及24 h的DNA损伤,Western blotting法检测CdCl2作用24 h对聚ADP-核糖聚合酶（PARP）的影响,免疫细胞化学法检测细胞色素C（Cyt-C）和凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达变化的情况。结果：随CdCl2 浓度的增大和作用
时间延长,作用12、24 h后,10、30、50和80  μmol/L剂量组大鼠心肌细胞DNA损伤程度明显,组间比较差异有统计学意义（P< 0.05或P< 0.001）。作用24 h后,30、50和80  μmol?L-1剂量组可见明显PARP裂解89 000片段。Cyt-C和AIF蛋白的表达也随着CdCl2浓度的加大而显著增高,组间比较差异有统计学意义（P< 0.05或P< 0.001）。结论：CdCl2对大鼠心肌细胞的毒性作用机制可能与诱导DNA损伤,影响PARP、Cyt-C和AIF蛋白表达有关,且具有一定的剂量依赖关系。     

蒽环类药物心肌损害的体外实验

目的研究蒽环类化疗药物对心肌细胞的损害作用。方法体外传代培养H9c2乳鼠心肌细胞株,细胞传代第3天加入蒽环类药物柔红霉素(DNR)共培养,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)浓度,以反映心肌细胞膜损害程度;采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测心肌细胞生长抑制率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。结果①DNR1组、DNR2组、DNR3组的H9c2细胞生长抑制率分别为(24.93±1.52)%、(17.15±2.03)%和(13.48±2.26)%,3组间差异有统计学意义(P<0.01)。②DNR1、DNR2、DNR3组H9c2细胞上清液的LDH浓度分别为(77.00±6.24)、(64.3±10.50)和(5 7.67±7.24)U,均显著高于空白对照组的(37.00±6.56)U(P值均<0.01)。③DNR1、DNR2、DNR3组的H9c2细胞凋亡率分别为(15.47±2.46)%、(9.82±2.08)%和(9.43±1.63)%,均显著高于空白对照组的(4.49±2.96)%(P值均<0.05)。结论DNR能抑制心肌细胞生长,促进凋亡,同时具有对心肌细胞膜的损害作用。     

miR-1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬的影响

目的 探讨miR-1对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法H9c2细胞随机分为4组。正常组使用普通培养基培养,未转染;诱导组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,未转染;miR-1 NC组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 NC;miR-1 inhibitor组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 inhibitor。在加入葡萄糖诱导前48 h,使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行转染。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测H9c2细胞和高糖诱导的H9c2细胞中miR-1表达水平;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖活性;蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组H9c2细胞中Beclin1、p65、PI3K蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平;生物信息学预测和双萤光素酶验证miR-1和PI3K的靶向关系。结果与正常组相比,诱导组的H9c2细胞中,miR-1表达水平显著升高（P<0.05）,PI3K蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与正常组相比,诱导组H9c2细胞Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,自噬小体增多,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05）;与诱导组和miR-1 NC组相比,miR-1 inhibitor组H9c2细胞miR-1水平、Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低,自噬小体减少,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）;miR-1和PI3K间存在靶向关系。结论在高糖诱导的H9c2细胞中,miR-1表达水平升高,抑制miR-1,可通过靶向激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬。