细胞周期素D_1反义寡核苷酸对胃癌细胞株BGC-823的作用

目的 :通过基因反义封闭技术体外抑制细胞周期素D1 (cyclinD1 )的表达 ,并对胃癌细胞增殖的影响。方法 :以胃腺癌BGC 82 3细胞株为研究对象 ,采用硫代修饰的cyclinD1 反义寡脱氧核苷酸 (ASODN)处理BGC 82 3细胞后 ,观察cyclinD1 ASODN对BGC 82 3细胞基因表达及体外增殖活性的影响。结果 :MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制BGC 82 3细胞增殖 ,抑制作用在 48小时最强。RT PCR检测结果cyclinD1 mRNA减少。免疫组化S P法结果cyclinD1 蛋白表达明显降低。结论 :使用人工合成的cyclinD1 ASODN可以特异性的抑制胃腺癌BGC 82 3细胞株cyclinD1 的表达 ,从而调控细胞周期 ,抑制细胞增殖     

人胃腺癌BGC-823细胞株周期素D1的表达

[目的]探讨反义核酸对周期素D1的表达及对胃癌细胞增殖的影响。[方法]应用免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜，观察了人胃腺癌BGC-823细胞株反义核酸处理前后周期素D1的表达。[结果]反义核酸处理组周期素D1的表达较空白对照组明显降低。[结论]反义核酸抑制周期素D1的表达并抑制胃癌细胞的增殖。     

cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞生长和G1期调控的影响

目的：研究cyclin D1反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞SGC7901和HS746T的生长、细胞周期和G1期调控的影响。方法：采用脂质体Lipofect AMINE2000包裹硫代修饰的cyclin D1 ASODN转染细胞，观察量效曲线和生长曲线，应用RT-PCR检测cyclin D1 mRNA的表达，流式细胞仪检测细胞周期，并用免疫组织化学技术检测胃癌细胞中cyclin D1、p21、p27、pRb蛋白的表达。结果：cyclln D1 ASODN对胃癌细胞产生剂量依赖性的抑制效应，0．2μmol/L cyclin D1 ASODN转染24h能显著抑制胃癌细胞生长，cyclin D1 mRNA表达分别是对照组的26．3％(SGC7901)和17．3％(HS746T)，G0／G1期比例明显增加，并使2种细胞中cyclin D1、pRb表达降低，p21表达升高，在HS746T中p27表达下降，但在SGC7901中p27表达无改变。结论：cyclin D1反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞的生长，降低cyclin D1 mRNA表达水平，并能影响细胞周期及其调控的表达。     

肝肠-钙黏连蛋白过表达对胃癌细胞BGC-823增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨肝肠-钙黏连蛋白(liver-intestine cadherin,CDH17)过表达对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:采用脂质体转染法建立CDH17基因过表达的BGC-823细胞株;分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测转染重组表达载体pcDNA3.1(-)/CDH17后,BGC-823细胞中CDH17mRNA和蛋白的表达水平。MTT法检测CDH17基因过表达对BGC-823细胞增殖的影响;体外侵袭实验及划痕实验检测CDH17基因过表达对BGC-823细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:RFQ-PCR及蛋白质印迹法检测结果显示,转染重组表达载体pcDNA3.1(-)/CDH17的BGC-823细胞中CDH17mRNA及蛋白均过表达;CDH17过表达能明显提高BGC-823细胞的增殖、侵袭及迁移能力(P<0.05)。结论:CDH17基因在BGC-823细胞中过表达能提高胃腺癌的增殖、侵袭及迁移能力,并促进胃腺癌的发生及发展。     

沉默I2PP2A基因对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨siRNA沉默I2PP2A基因表达对人胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法 脂质体转染法将靶向I2PP2A的短发夹状RNA（short hairpin RNA, shRNA）转染BGC-823细胞;Real-time RT-PCR和Western blot观察转染后胃癌BGC-823细胞I2PP2A mRNA和蛋白表达的变化;WST-1法和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化;最后采用蛋白质印迹分析法检测三组胃癌细胞中cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结果 转染I2PP2A siRNA后胃癌BGC-823细胞的I2PP2A mRNA及蛋白表达明显受抑制;I2PP2AmRNA和蛋白表达下调抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结论 I2PP2A表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1和MMP-9表达下调密切相关,I2PP2A可能成为胃癌治疗的新靶点之一。     

PCNA反义寡核苷酸抑制食管鳞癌细胞株T.Tn体外增殖活性的实验研究

背景与目的：增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen,PCNA)在食管鳞癌患者中的高表达提示患者的预后不良。本研究拟通过基因反义封闭技术体外抑制PCNA的表达,以达到抑制肿瘤细胞恶性增殖的目的。方法：以食管鳞癌T.Tn细胞株为研究对象,采用硫代磷酸修饰的PCNA反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN),通过脂质体导入T.Tn细胞后,观察PCNA ASODN对T.Tn细胞癌基因表达及体外增殖活性的影响。结果：相关显微镜下观察到T.Tn细胞转染ASODN后细胞体积变小,皱缩变形的细胞较对照组明显减少。MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制T.Tn细胞的增殖,抑制作用在24h最强,0．2μmol/L ASODN对细胞的抑制率为63．3％,时间延长抑制作用逐渐减弱。^3H-TdR掺入实验表明ASODN能有效地抑制T.Tn细胞的DNA合成。免疫组化SABC法染色提示转染ASODN后T.Tn细胞mRNA的翻译受到抑制,PCNA蛋白表达水平明显降低。FCM检测发现G0－G1期细胞含量由对照组的53．65％增至72．34％,而G2－M和S期细胞则分别从15．51％、30．84％降到9．87％、17．79％。表明PCNA ASODN转染导致PCNA促进细胞增殖的功能降低,抑制处于C0期的细胞进入S期。结论：使用人工合成的PCNA ASODN可以特异虱地抑制食管鳞癌T.Tn细胞株PCNA蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制细胞增殖。     

电离辐射对胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：研究电离辐射对体外胃腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响。方法：~（60）Coγ射线单次照射胃腺癌BGC-823细胞,照射剂量分别为0、2、4 Gy,利用MTT和克隆形成率实验检测各剂量组BGC-823的增殖能力;同时利用Annexin-V/PI双染法检测各剂量组BGC-823细胞的凋亡;用PI单染测定各剂量组BGC-823的细胞周期。结果：与0 Gy组相比,2、4Gy 60Coγ射线照射可显著抑制胃腺癌BGC-823细胞的增殖（P〈0.05）,诱导BGC-823细胞在照射后依次出现S期和G2/M期阻滞。4Gy 60Coγ射线照射后48h,凋亡细胞比例显著高于对照组（P〈0.05）。结论：60Coγ射线照射可抑制胃腺癌细胞BGC-823增殖、诱导胃癌细胞出现周期阻滞和细胞凋亡。     

新城疫病毒感染体外诱导胃癌细胞热休克蛋白70的表达及意义

目的：观察NDV在体外抗胃癌细胞活性，研究NDV感染诱导胃癌细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达及其意义。方法：应用倒置显微镜观察细胞形态，MTT法测细胞生长抑制状况，血凝试验检测：NDV在细胞中的增殖状况，免疫组化染色观察细胞中HSP70表达情况，流式细胞术检测胃癌细胞HSP70的表达。结果：NDV在体外可使BGC-823胃癌细胞形成明显的细胞病变效应及生长抑制作用，且这种抑制作用与肿瘤细胞被NDV感染后HSP70表达增加呈正相关。结论：NDV的抗BGC-823胃癌细胞活性显著，其杀伤机制之一为通过感染而诱导BGC-823产生过多的HSP70。     

反义MUC2体外抑制胃癌细胞侵袭活性的研究

目的：探讨应用反义脱氧寡核苷酸（ASODN）体外抑制粘蛋白MUC2对人胃癌细胞株SGC7901侵袭活性的影响。方法：采用人工合成MUC2ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入胃癌细胞株SGC7901中,应用免疫组化及Boyden小室体外侵袭实验比较转染前后癌细胞侵袭能力的改变。结果：转染MUC2ASODN后,癌细胞穿膜细胞相对百分率较处理前明显下降;免疫组化S-P法染色提示转染MUC2ASODN后,SGC7901细胞的组织蛋白酶D及基质金属蛋白酶2表达水平明显降低。结论：使用人工合成MUC2ASODN能有效抑制胃癌细胞侵袭能力。     

miR-421在胃癌中的表达及对BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨miR-421在胃癌细胞中的表达水平及对BGC-823胃癌细胞增殖的作用。方法利用PCR方法分析miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中的表达水平,并通过RNA转染技术将miR-421 mimics与miR-421 inhibitors转染BGC-823胃癌细胞;通过CKK-8试剂盒检测转染后BGC-823细胞的增殖情况。结果 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均表达增强（P〈0.05）;miR-421 mimics转染BGC-823后,癌细胞增殖能力增强（P〈0.05）,而miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞则增殖力受到明显抑制（P〈0.05）。结论 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均过表达,而miR-421可能直接或间接参与调控BGC-823胃癌细胞的增殖。