TNF-α对骨巨细胞瘤u-PA系统表达的调节及意义

目的探讨TNF-α对骨巨细胞瘤u-PA系统mRNA表达的调节及意义。方法骨巨细胞瘤原代培养及传代,加入外源性TNF-α,观察加入TNF-α前后细胞生长特性的变化,流式细胞分析仪检测细胞的增殖指数,RTPCR检测u-PA系统mRNA的表达。结果原代培养过程中可见到三种细胞:多核巨细胞(MGC)、巨噬细胞样单核细胞(MC)及纤维母细胞样单核细胞(FC),传代几次以后只有FC及MC;RT-PCR检测细胞中有u-PA、uPAR及PAI-1mRNA表达,加入TNF-α后mRNA的表达较加入前增高(P<0.05);流式细胞分析仪检测细胞的增殖指数(PI),加入TNF-α后PI值较加入前增高(P<0.05)。结论外源性TNF-α促进骨巨细胞瘤原代培养细胞u-PA系统mRNA的表达及细胞增殖。     

应用单抗GCF-5观察骨巨细胞瘤细胞成分

采用免疫细胞化学和免疫电镜方法,以我室制备的抗骨巨细胞瘤(GCT)肿瘤细胞的单克隆抗体GCF-5,对41例GCT及其它肿瘤细胞进行观察,结果表明:41例中的35例GCT标本与GCF-5结合呈阳性反应;除1例骨肉瘤细胞系(OS-732)细胞为阳性反应外,其它骨肿瘤均为阴性反应。经免疫金染色后电镜下,在阳性细胞表面可见金颗粒,证明GCF-5抗体是抗细胞表面抗原的单克隆抗体,GCF-5与GCT中部分基质细胞(STC)结合,除与一些双核细胞和核数少的多核巨细胞(MGC)结合外,与绝大多数的MGC不发生反应,但能与GCT体外培养、多次传代后的MGC发生反应。均支持本作者以前的观点,即GCT中的MGC与STC各自包含两种截然不同的细胞成分:肿瘤细胞和与肿瘤免疫有关的细胞,仅肿瘤细胞成分能在体外培养中生长、增殖。     

LY294002对胃癌MGC803细胞生长的影响

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶的特异性抑制剂(LY294002)对胃癌MGC803细胞生长的影响.方法 选用LY294002处理胃癌MGC803细胞后,利用细胞生长曲线、平皿克隆与流式细胞术观察细胞的生长情况,采用免疫细胞化学染色和Western blot检测AKT蛋白与p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白的表达.结果 LY294002处理后,MGC803细胞生长速度明显减慢,细胞克隆体积变小,数量减少;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例降低.LY294002处理后,MGC803细胞中磷酸化的AKT蛋白与Cyclin E蛋白表达降低,而磷酸化的p27Kip1蛋白表达升高.结论 LY294002抑制胃癌MGC803细胞生长速度,呈现出G1/S期细胞周期阻滞.     

ISCOM型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的 探讨免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞的作用.方法 将C57BL/6小鼠30只分为模型组、灭活的红白血病细胞(FBL-3)瘤苗组(灭活瘤苗组)和灭活的FBL-3细胞+ISCOM瘤苗组(ISCOM瘤苗组),小鼠注射FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,治疗4周后,分离小鼠腹腔巨噬细胞,观察不同组别的巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)、白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞杀伤活性和抗原呈递动能.结果 ISCOM瘤苗组小鼠腹腔巨噬细胞数量、巨噬细胞吞噬功能、IL-1、TNF-α、IL-2、T细胞增殖能力和NO高于模型组和灭活瘤苗组(P＜0.05),ISCOM瘤苗组巨噬细胞细胞杀伤活性显著高于模型组(P＜0.01).结论 ISCOM型瘤苗可以增加巨噬细胞的数量,增强巨噬细胞的吞噬作用及抗原呈递能力.     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞维甲酸相关孤核受体α表达的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达变化情况.方法 将胃癌SGC7901、MGC803细胞分为对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24 h后,胃癌SGC7901、MGC803细胞形态学发生明显改变;RORα在人胃癌SGC7901、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组比较表达显著上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,SGC7901、MGC803细胞中RORα的表达量[(1.09±0.01)与(0.97±0.01)]较对照组[(0.45±0.03)与(0.44±0.02)]显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.01);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、SGC7901细胞8、12、24 h后,RORα蛋白表达量较未处理组显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα表达有关.     

脊柱骨巨细胞瘤的病理研究

本文对7例脊柱原发性骨巨细胞瘤(GCT)进行了光镜(LM),组化和免疫组化研究,其中2例进行了电镜(EM)观察。LM和EM显示GCT由单个核细胞(MC)和多核巨细胞(MGC)组成。MC包括成纤维细胞(FB)、组织细胞(HC)、原始间叶细胞、中间型细胞、黄色瘤细胞和肌纤维母细胞(MFB),并见原始间叶细胞过渡为不同分化的FB和HC。MGC由MC融合而成,多数为HC型,少数为兼有FB和HC的混合型。我们认为GCT起源于原始间叶细胞;HC、FB和MFB属肿瘤性细胞,MGC属反应性细胞。     

茶碱和双丁酰-cAMP对巨噬细胞水解酶影响的细胞化学观察

本文通过细胞体外培养,细胞化学定量分析等方法,观察了茶碱和双丁酰-cAMP对C_(57)BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶、α-醋酸萘酚酯酶的作用和影响.卡介苗活化的巨噬细胞与固有巨噬细胞相比,其酸性磷酸酶、α-醋酸萘酚酯酶活性明显升高.卡介苗活化的巨噬细胞在茶碱或双丁酰-cAMP作用下。酸性磷酸酶、α-醋酸萘酚酯酶活性明显受到抑制.茶碱或双丁酰-cAMP对固有巨噬细胞的酸性磷酸酶、α-醋酸萘酚酯酶无抑制作用.     

多糖类药物作用的受体及信号转导机制的研究进展

β-葡聚糖通过补体3型受体(CR3)增强巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞的杀伤作用;多数多糖可通过Toll样受体4(TLR4)或TLR2激活和增强巨噬细胞的吞噬功能,或诱导巨噬细胞合成包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)在内的多种细胞因子;也有报道β-葡聚糖的主要受体是树突状细胞相关C型凝集素-1(dectin-1),而且介导了巨噬细胞的生物功能。     

清洁磨损钛微粒对巨噬细胞释放破骨性细胞因子的影响

目的:探讨人工关节磨损清洁钛微粒的大小及不同微粒-细胞比对巨噬细胞释放破骨性细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素(PGE2)的影响。方法:清洁钛微粒按直径大小分为(0.35±0.09),(1.5±0.38),(6.25±2.13)μm组,分别以微粒-细胞比1:1,10:1,100:1,500:1,1000:1与巨噬细胞联合培养,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液TNF-α、IL-1、IL-6、PGE2含量。结果:各组清洁钛微粒在微粒-细胞比10:1时,巨噬细胞释放TNF-α较对照组显著增高(P<0.05),500:1时释放TNF-α达到高峰,1000:1时分泌量下降。(0.35±0.09)μm清洁钛微粒组较(1.5±0.38)μm和(6.25±2.13)μm清洁钛微粒组,(1.50±0.38)μm清洁钛微粒组较(6.25±2.13)μm清洁钛微粒组,分别在微粒-细胞比10:1,100:1,500:1时,巨噬细胞释放更多TNF-α,具有统计学差异(P<0.05)。各组间IL-1、IL-6含量无显著性差异(P>0.05)。微粒-细胞比500:1,1000:1时,PGE2含量显著增高(P<0.01),巨噬细胞存活率显著下降(P<0.01)。结论:清洁磨损钛微粒大小及微粒-细胞比是决定磨损微粒生物细胞学反应的重要参量。磨损微粒越小,微粒-细胞比越高,生物细胞学毒性越大,能刺激巨噬细胞释放更多破骨性细胞因子TNF-α。清洁钛微粒本身并不能刺激巨噬细胞释放IL-1、IL-6、PGE2。     

体外培养骨巨细胞瘤的细胞DNA合成观察

<正> 骨巨细胞瘤(以下简称 GCT)是由梭形或圆形单核基质细胞及多核巨细胞(以下简称(MGC)构成的一种多细胞成份的半恶性肿瘤。因含有大量 MGC 而得名。我们在过去几年中,对此种肿瘤曾进行了病理学、超微结构、体外组织培养,组织化学、异种动物的接种以及体外培养细胞的定格显微摄影等方面的研究与观察。本文是上述研究工作的继续。采用 ~3H 胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入,利用放射自显影技术,观察 GCT 在体外培养中各种细胞成份的 DNA 合成情况。     

高糖刺激血管平滑肌细胞表达cbfα-1和OC的实验研究

目的 研究高糖在刺激大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)转分化过程中对相关骨基质蛋白如核心结合因子α-1(cbfα-1)和骨钙索(OC)表达的影响,并探讨高糖在诱导血管钙化发生过程中可能的作用机制.方法 原代培养VSMC,分为正常糖浓度组(5 mmol/L D-葡萄塘)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)和甘露醇组(5mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇),在不同时间点检测各组VSMC的钙沉积指标;茜素红染色了解各组VSMC钙化程度;实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测各组cbfα-1和OC的mRMA水平和蛋白表达变化;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性.免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平.结果 与正常糖浓度和甘露醇对照组相比较,高糖组VSMC钙沉积和钙化染色均明显增强,cbfα-1和OC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达下降(P<0.05),均呈时间依赖性.高糖刺激后VSMC的ALP的活性比对照组增加了近2倍.结论 高糖介导的平滑肌细胞钙化可能与高糖促进VSMC分泌骨基质蛋白cbfα-1和OC水平增加有关;高糖在促进VSMC钙化同时,使VSMC的α-SMA表达水平降低,促进其向成骨样细胞转分化.     

多肽ZLW调控日本血吸虫感染小鼠巨噬细胞极化改善肝纤维化

目的探究多肽ZLW对日本血吸虫感染小鼠巨噬细胞极化及肝纤维化的影响机制。 方法将24只BALB/c小鼠随机均分为对照组、模型组和ZLW组。模型组和ZLW组感染日本血吸虫尾蚴建立血吸虫肝纤维化模型。胶原纤维染色观察各组小鼠肝组织病理学改变；免疫组织化学染色观察肝脏巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)、CD68⁺巨噬细胞、CD206⁺巨噬细胞浸润情况；流式细胞术检测小鼠肝、脾细胞M2/M1变化；酶联免疫吸附试验法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。 结果与模型组比较,ZLW组小鼠肝脏中纤维结缔组织增生减少、损伤减轻,CD206⁺细胞、Arg1、M2/M1、IL-6降低,而CD68⁺细胞、iNOS、TNF-α水平升高。 结论ZLW调控日本血吸虫感染小鼠巨噬细胞极化而改善肝纤维化。     

巨噬细胞刺激人胃癌MGC803细胞生长与促血管生成活性的研究

目的:研究人白血病单核巨噬细胞THP-1对人胃低分化黏液腺癌MGC803细胞生长与促血管生成因子VEGF表达的影响.方法:通过流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,RT-PCR检测MGC803细胞VEGF表达情况.结果:免疫细胞化学分析发现,与对照组比较,处理组VEGF表达明显增强,其中以非直接联合培养组为最强;RT-PCR检测发现,MGC803细胞能表达VEGF mRNA 4种剪切体VEG F121、VEGF145、VEGF165、VEG189;各处理组4种剪切体表达均有增强,且都以非直接联合培养为最强.流式细胞仪检测处理组MGC803细胞S期细胞百分比均有增加,其中以非直接联合培养组最高.结论:THP-1细胞条件培养基处理、与THP-1细胞非直接联合培养能促进MGC803细胞的增殖活性及细胞周期G1-S期转变.MGC803细胞能表达VEGFmRNA的4种剪切体;THP-1细胞条件培养基处理、与THP-1细胞非直接联合培养能促进MGC803细胞VEGF表达.     

巨噬细胞促进MGC803细胞小鼠肾包膜下移植瘤的生长

目的：观察同种同基因小鼠单核巨噬细胞对胃癌MGC803细胞肾包膜下移植瘤生长的影响.方法：分离小鼠脾单核巨噬细胞,并制备其条件培养基,建立MGC803细胞肾包膜下移植瘤模型;于术后第1天两处理组小鼠分别腹腔注射同种同基因小鼠脾脏单核巨噬细胞（CELL组）和同种同基因小鼠脾脏单核巨噬细胞的24h条件培养基（CM组）,术后第6天处死小鼠,解剖显微镜下检测小鼠处理前后瘤体积的变化.结果：处理组瘤体体积增长较快,其中以CELL组体积增加最快,CM组、CELL组与对照组比较有显著意义;CM组与CELL组体积差别无显著性意义.结论：同种同基因小鼠脾脏单核巨噬细胞条件培养基及小鼠脾脏单核巨噬细胞腹腔注射能促进MGC803细胞昆明小鼠肾包膜下移植瘤的生长.     

稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定

目的 构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的cDNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORα cDNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pcDNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的cDNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORα mRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。     

补体因子H相关蛋白1促进巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α调控足细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨补体因子H相关蛋白1(CFHR1)通过巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)调控足细胞增殖和迁移的作用。方法:体外培养人单核巨噬细胞和人肾足细胞。巨噬细胞分为对照组和CFHR1干预组,分别进行牛血清白蛋白或CFHR1重组蛋白干预24 h, ELISA法测定上清液TNF-α水平。足细胞分为空白组、TNF-α干预组、对照上清液干预组、CFHR1上清液干预组、CFHR1上清液+TNF-α中和抗体干预组。CCK8法检测各组细胞增殖。Transwell法检测各组细胞迁移。Wb法检测各组细胞中相关蛋白变化。结果:巨噬细胞的CFHR1干预组上清液中TNF-α含量显著增加(P<0.05)。与空白组比较,TNF-α干预组、CFHR1上清液干预组的细胞增殖比率和迁移数量均显著降低(均P<0.05)。与CFHR1上清液干预组比较,CFHR1上清液+TNF-α中和抗体干预组的细胞增殖比率和迁移数量均显著提高(均P<0.05)。与空白组比较,TNF-α干预组、CFHR1上清液干预组的足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)、纤维状肌动蛋白(F-Actin)、...     

肿瘤坏死因子-α对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响,同时探讨核因子-κB(NF-κB)在TNF-α调控ABC A1表达中的作用。方法:THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞随机分为4组:对照组、TNF-α组、甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK,NF-κB的抑制剂)组、TPCK TNF-α组。运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot检测各组不同的时间点(0、6、12、24和48 h)ABCA1 mRNA和ABCA1蛋白的表达。结果:对照组和TPCK组ABCA1mRNA和蛋白表达均无明显变化;TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(P<0.05);TPCK TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低,但同TNF-α组比较,其下降程度有明显减轻(P<0.05)。结论:TNF-α可以通过活化NF-κB抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达。     

血管紧张素-(1-7)对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其机制研究

目的复制人脐静脉平滑肌细胞(HUSMCs)钙化模型,观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对HUSMCs钙沉积的影响,探索Ang-(1-7)延缓或抑制HUSMCs钙化的机制。方法采用β-甘油磷酸盐(β-GP)复制HUSMCs钙沉积模型,Ang-(1-7)干预后,对细胞进行Von Kossa染色及图像分析、检测碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞钙含量;检测细胞培养液中转化生长因子β1(TGFβ1)活性、骨钙素(OC)含量及细胞中核心结合因子1(Cbfα1)蛋白表达。结果 Ang-(1-7)可明显减轻钙化HUSMCs聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻(P<0.01),且10-5、10-7、10-9mol.L-1Ang-(1-7)与钙化组相比钙化细胞百分比、细胞钙含量和ALP活性均明显降低(P均<0.01),细胞TGFβ1分泌水平、Cbfα1表达、骨钙素含量均较钙化组降低(P均<0.01)。结论 Ang-(1-7)可减轻HUSMCs钙化程度,其作用机制与减弱TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1的表达有关。     

绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制

[目的]通过体外实验研究绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制。[方法]采用体外培养人THP-1巨噬细胞,以氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,用绞股蓝总皂苷进行干预。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)的变化,并利用RT-PCR方法检测CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达。[结果]与ox-LDL诱导组相比,绞股蓝总皂苷组(GPS组)巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少,同时CD36受体mRNA表达明显降低,而ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达明显升高。[结论]绞股蓝总皂苷可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,降低细胞内脂质积累,促进细胞内的脂质向细胞外转运,有利于防止泡沫细胞的形成及动脉粥样硬化的进程。该作用可能与绞股蓝总皂苷下调巨噬细胞CD36受体表达,上调巨噬细胞ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体表达从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取和促进...     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.